实践四、维生素B12的含量测定
实践四、维生素B12的含量测定
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三、实验原理
结构特点：含钴的卟啉类化合物 临床用途：控制恶性贫血 性状：红色晶体物质
在361nm有最大吸收。 可以采用紫外分光光度法测 定含量。
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三、ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ验原理
吸光系数法
1、配制待测溶液，计算配制浓度的百分浓度Cx；
2、以溶剂作为空白参比，测定待测溶液的吸光度Ax；
3
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数据处理
E = 1% 1cm（样）
Ax Cxl
=
Ax 0.0025 1
%
EE1111cc%%mm（ （样 标） ）100%=
E1% 1cm（样） 207
=
Ax
100%
0.0025 207
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3、计算待测溶液的吸收系数
E = 1% 1cm（样品）
Ax Cx
4、计算含量
w%
E1% 1cm（样品）
E1% 1cm（标准）
已知E11c%m（标）=207
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四、实践步骤
• 1、维生素B12样品溶液的配制：
准备0.5mg/ml 注射液
取5.00ml
定容至100ml
C样
0.5mg/ml 5.00ml 100.00ml
=0.0025g/100ml
• 2、以纯化水为参比，测定样品溶液的吸光度
• 3、计算样品含量
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四、实践步骤
• 3、计算样品含量
E = 1% 1cm（样）
Ax Cxl
=
Ax 0.0025 1
%
EE1111cc%%mm（ （样 标） ）100%=
维生素B12含量的测定(实训案例)
维生素B12含量的测定（实训案例）以维生素B12注射液中B12含量的测定为例介绍紫外分光光度法测定维生素B12含量的方法。
2.1.紫外分光光度法的测定原理维生素B12在紫外区278nm、361nm与550nm波长处有最大吸收。
在361nm 波长处的吸收峰干扰因素少，通常以361nm作为测定波长，测定待测溶液的吸光度，用吸光度计算含量。
2.2仪器与试剂752N型紫外－可见分光光度计，10mL容量瓶，5mL吸量管；0.1g/L维生素B12水溶液，维生素B12注射液(市售品)。
3．维生素B12注射液含量测定步骤准确吸取0.50mL维生素B12注射液于10mL容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度线，摇匀，得到样品稀释液。
然后将样品稀释液置于1cm石英比色皿中，以蒸馏水作为空白，在361nm波长条件下测定吸光度，按C63H88CoN14O14P的吸收系数为207计算维生素B12标示量的百分含量。
4.结果记录与计算4.1数据记录将所测数据填入下表。
6-2数据记录表4.2.结果计算注射液含量按下式计算。
样品中的维生素B12计算公式：式中 V---样品中维生素B12的含量，mg/mLB12A-----待测溶液的吸光度；-----比色皿的矫正值（吸光度）；AD-----供试样品的稀释倍数；注射液的标示量)，mg/mLW-----样品质量(VB12---吸收系数为207五、注意事项1. 测定过程需避光操作。
2. 在每次测定前，首先应做吸收池配套性试验。
即将同样厚度的4个比色皿都装相同溶液，在所选波长处测定各比色皿的透光率，其最大误差∆T应不大于0.5%。
3. 维生素B12在pH小于3或大于8的强酸或碱性溶液中极易分解，在pH值4.5～5.0弱酸条件下相对稳定，测定时可用乙酸-乙酸钠缓冲溶液调节。
4. 为使比色皿中测定溶液与原溶液的浓度一致，需用原溶液荡洗比色皿2~3次。
5. 比色皿内所盛溶液以超过皿高的2/3为宜。
过满溶液可能溢出，使仪器受损。
分子荧光法测定维生素B12含量实验报告
分子荧光法测定维生素B12含量实验报告【实验项目】分子荧光法定量测定维生素B2的含量【实验目的】1.掌握标准曲线法定量分析维生素B2的基本原理。
2.了解荧光分光光度计的基本原理、结构及性能，掌握其基本操作。
【实验原理】荧光是光致发光。
任何荧光物质都具有激发光谱和发射光谱，发射波长总是大于激发波长。
荧光激发光谱是通过测定荧光体的发光通量随波长变化而获得的光谱，反映不同波长激发光引起荧光的相对效率。
荧光发射光谱是当荧光物质在固定的激发光源照射后所产生的分子荧光，是荧光强度对发射波长的关系曲线，表示在所发射的荧光中各种波长相对强度。
由于各种不同的荧光物质有它们各自特定的荧光发射波长，可用它来鉴定荧光物质。
有些发荧光的物质其荧光强度与物质的浓度成正比，故可用荧光分光光度法测定其含量。
维生素B2溶液在430~440nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535nm 附近。
维生素B2在pH=6~7的溶液中荧光强度最大，而且其荧光强度与维生素B2溶液浓度呈线性关系，因此可以用荧光光谱法测维生素B2的含量。
维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为另一物质一光黄素，光黄素也是一个能发荧光的物质，其荧光比维生素B2的荧光强得多，故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。
在稀溶液中，荧光强度F与物质的浓度C有以下关系：F=2.303ΦT0Ebc当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系：F=Kc【仪器与试剂】1.仪器：荧光分光光度计（型号：F2500HITA[H));1cm石英比色皿l:50mL容量瓶2.试剂：维生素B2标准溶液(10.0μg/mL)(已加乙酸)》【实验内容与步骤】1.系列标准溶液和待测溶液的配制取维生素B2(10.0μg/mL)标准溶液1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL 分别置于50mL的容量瓶中，标定，摇匀。
取2.00mL待测溶液于50mL的容量瓶中，标定，摇匀。
维生素B12含量测定
B12多少？如果每1ml标示量为1mg，则计 算标示量％
精选ppt课件
紫外分光光度法 12
PHARMACEUTICAL COLLEGE
一、实验目的：
• 1、掌握Uvmini-1240型的使用方法。
• 2、掌握维生素B12注射液的紫外分光光度 法鉴别及含量测定。
• 3、掌握吸收系数法定量测定的计算公式。
• 4、熟悉绘制吸收曲线的一般方法。
精选ppt课件
紫外分光光度法 5
PHARMACEUTICAL COLLEGE
• 按吸收系数法定量计算： C样品（μg/ml）=A361×48.31
见P92
C=ECL
A样品 B12含量= ———— × 100%
A对照
精选ppt课件
取对照品测 A3紫61外做分对光光照度法 11
PHARMACEUTICAL COLLEGE
•
六、思考题
• 如果取注射液水2ml稀释30倍，在361nm处
做光谱图（粗扫描），在278nm，361nm，550nm处 有吸收峰。
• 2、精测：在以上278nm，361nm，550nm波长分别 ±1 范围内测定吸光度（每转换一次波长以水做空白） 记录各最大吸收值。
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紫外分光光度法 8
仪器的使用方法
开机：打开电源，仪器初始化，约3min完成，然后预热 大约0.5h。 方法菜单：
精选ppt课件
紫外分光光度法 3
PHARMACEUTICAL COLLEGE
• 维生素B12是含钴的有机药物； • 为深红色结晶，又称为红色维生素B12或
氰钴胺； • 是唯一含有主要矿物质的维生素。 • 分子量：1355.38 • 分子式：C63H88CoN14O14P
维生素b12ph值测定实验报告
维生素B12 pH值测定实验报告摘要维生素B12是一种重要的水溶性维生素，对人体的健康发挥着重要的作用。
本实验旨在通过测定不同pH下维生素B12的吸收光谱，探究其在不同环境条件下的稳定性和溶解度。
实验结果表明，维生素B12在酸性环境下溶解度较低，而在中性环境下溶解度较高。
同时，维生素B12在酸性环境下也更容易分解，失去活性。
因此，为了充分利用维生素B12的营养价值，应注意维生素B12的储存和烹饪条件。
1. 引言维生素B12，也被称为腺苷胺钴胺素，是一种含有金属钴的复合物，是人体必需的一种维生素。
维生素B12在人体内参与DNA合成、红细胞形成和神经系统的正常运作等重要生理过程。
由于人体无法自主合成维生素B12，因此需要通过食物摄取来满足身体的需求。
然而，维生素B12容易受到环境因素的影响，如pH值的改变会影响其溶解度和稳定性。
2. 实验材料和方法2.1 实验材料•维生素B12标准品•pH调节缓冲溶液（酸性、中性和碱性）•高纯度水•紫外可见分光光度计•量筒和移液管等实验仪器2.2 实验方法1.准备不同pH值的缓冲溶液，并调节至所需的pH值。
2.取不同pH值的缓冲溶液各10 mL，加入维生素B12标准品1 mL，制备维生素B12的不同浓度溶液。
3.使用紫外可见分光光度计，分别在不同波长下测量不同pH值下的维生素B12溶液的吸光度，并记录数据。
4.根据标准曲线，计算不同pH值下维生素B12的浓度。
5.分析不同pH值下的维生素B12溶解度和稳定性。
3. 实验结果3.1 不同pH值下的维生素B12溶解度根据实验数据计算得出不同pH值下的维生素B12浓度，如下表所示：pH值维生素B12浓度 (mg/L)2 5.214 11.857 26.4510 13.36从表中可以看出，在pH值为2的酸性环境下，维生素B12的溶解度较低，为5.21 mg/L。
而在pH值为7的中性环境下，维生素B12的溶解度较高，为26.45 mg/L。
维生素B12注射液含量测定
《维生素B12注射液含量测定》项目教学设计方案《维生素B12注射液含量测定》项目教学案例：维生素B12注射液含量测定一项目任务：维生素B12注射液含量测定1 适用专业：中专药剂、检验专业2 适用岗位： QC人员3 学习时间：2课时二教学设计的指导思想在基础化学相关章节的学习中，学生已掌握了溶液的浓度及其计算、紫外-可见分光光度法、注射液含量计算等理论知识，具备了一定的实验操作技能，掌握了配制一定浓度的溶液、使用紫外-可见分光光度计测定溶液的吸收值等实验方法。
但是他们对化学知识在职业岗位中的意义及应用方法缺乏正确的认识。
我们选择该课题作为载体，通过项目教学法，培养学生将知识和技能与实际工作联系起来的思维习惯，以提高他们综合运用化学知识与技能完成实际工作的能力。
采用以具体工作任务引领的项目教学,以职场实际操作为依据,满足相应职业资格要求，使学生在校期间就能掌握今后检验工作的方法、程序及要领，毕业后到企业工作能尽快进入岗位角色。
三项目教学目标：根据学以致用的现代化学教育理念，职业教育以能力为本位、促进学生综合职业能力和发展能力的形成的改革方向，结合一线技能型人才的培养目标以及本课程的特点和优势，特制订以下目标。
1.知识与技能目标：1）学会查阅所需检验药品的质量标准；2）按照操作规程准确地配制一定浓度的溶液；3）能够熟练地使用紫外-可见分光光度计测定物质溶液的浓度并进行含量测定的结果计算；2.过程与方法目标：1）注重对学生专业实作技能的培养，培养学生严谨、规范的操作；2）能运用理论知识解释操作过程；3）使学生掌握工作思路与方法，培养学生观察、动手、发现和解决问题的能力以及独立与协作工作的能力；3.情感与价值观目标：1)学会自觉地以医药行业标准规范自己的工作行为；2)培养学生认真负责的工作态度，科学、严谨的的工作作风，树立质量第一的原则；四教学重点和难点项目教学中以项目贯穿整个教学过程，因此项目是整个教学过程的主线，是能力形成的载体，是学生实践活动的对象，学生通过项目获得知识，提高技能，因此项目的选取与确定是关键。
紫外可见分光光度计维生素B12含量测定
a
1
一、实 验 目 的
1、了解紫外吸收光谱在有机结构 分析的应用。
2、学习有机物的定量分析方法。
a
2
二、实验原理
比耳定律 当入射光的波长、液层厚度和溶液的温度
固定时, 溶液的吸光度与溶液的浓度成正比。
朗伯特定律 当入射光的波长、溶液的浓度及温度一
定时,溶液的吸光度与液层的厚度成正比。
2、 绘制标准曲线：用1cm 石英比色皿，以空白为参比，在波 长200～600nm 内测定标准溶液316nm处的吸光度A，绘制 标准曲线。
3、 测定未知液：取未知液5.00mL 置于50.00mL 容量瓶中，用 水稀释至刻度；用1cm 石英比色皿，测定316nm处吸光度A ，以空白为参比。
4、 计算未知液的含量（mg·mL-1）。
a
17
八、思考题：
• 为什么同浓度溶液，每次测量后读数会发生细微变化？ • 紫外分光光度法与可见分光光度法有些什么区别？
a
18
与原子吸收光度仪不同，在 紫外 可见分光光度计中，单色器通常置于 吸收池的前面！
(可防止强光照射引起吸收池中一 些物质的分解)
a
8
单色器： 是分光光度计的关键部件，主要任务是将光源发来的混
合光分解为单色光，并提供所需波长的光。
a
9
3、吸收池 (Cell ， Container) ：
用于盛放样品。可用石英或玻璃两 种材料制作，前者适于紫外区和可见光 区；后者只适于可见光区。有些透明有 机玻璃亦可用作吸收池。
a
10
4、检测器： 硒光电池 光电二极管 光电倍增管
a
11
四、实验仪器与试剂
04-维生素B12注射液检验+05-药用辅料苯甲酸钠的质量分析
预习：实验八、戊巴比妥的鉴别及含
量测定
实验九、维生素AD胶丸中维生
素A的含量测定
实验四 维生素B12注射液检验
一、实验目的
掌握维生素B12注射液的紫外分光光度法鉴别及
含量测定
掌握吸收系数法定量测定的计算公式。
二、实验原理
维生素B12分子结构中有共轭体系，具有紫外 吸收，故可采用紫外分光光度法鉴别和测定含量。
三、实验内容：
（一）定性鉴别：
1、供试液配制：本品针剂1支（0.5mg :1ml）+水→ 25ml 2、比色测定：278nm，361nm，550nm处测定A值 规定：A361/A278 = 1.70~1.88，A361/A550 = 3.15~3.45
掌握双相滴定法测定苯甲酸钠含量的基本原理
掌握双相滴定法的基本操作和实验技巧
二、实验原理
苯甲酸钠水溶液呈碱性，若直接用盐酸滴定液滴定，则滴 定过程中析出的苯甲酸不溶于水，且会使滴定终点的pH突跃 不明显，影响滴定终点的正确判断。因此，采用双相滴定法测 定含量。在水相中加入与水不相混溶的有机溶剂乙醚，则滴定 过程产生的苯甲酸不断萃取入乙醚层中，减少苯甲酸在水中的 浓度，使滴定反应进行完全，终点清晰。
（二）含量测定：
1、吸收系数法： 2、标准曲线法： A A供
A361 A 361 稀释倍数 25 E 100 207 100 标示量% 100% 100% C标示量 0.0005
精密量取VB12贮备液(0.1mg/ml）1.0ml
4.0ml 10ml 40μg/ml C供 C H2O为空白，361nm处测得吸光度A。C为横坐标，A为纵坐标绘制标准曲 线，得C供。
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数据处理
E
1% 1cm （样）
Ax Ax = = Cx l 0.0025 1
100%= E
1% 1cm （样）
%
E
E
1% 1cm （样） 1% 1cm （标）
207
Ax = 100% 0.0025 207
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• 2、以纯化水为参比，测定样品溶液的吸光度 • 3、计算样品含量
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四、实践步骤
• 3、计算样品含量
E
1% 1cm （样）
Ax Ax = = Cx l 0.0025 1
100%= E
1% 1cm （样）
%
E
ELeabharlann 1% 1cm （样） 1% 1cm （标）
207
Ax = 100% 0.0025 207
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三、实验原理
结构特点：含钴的卟啉类化合物 临床用途：控制恶性贫血 性状：红色晶体物质
在361nm有最大吸收。 可以采用紫外分光光度法测 定含量。
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三、实验原理
吸光系数法
1、配制待测溶液，计算配制浓度的百分浓度Cx；
2、以溶剂作为空白参比，测定待测溶液的吸光度Ax； 3、计算待测溶液的吸收系数 4、计算含量
E
1% 1cm （样品）
Ax = Cx
w%
1% E1cm （样品） 1% E1cm （标准）
1% 已知E1cm =207 （标）
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四、实践步骤
• 1、维生素B12样品溶液的配制：
准备0.5mg/ml 注射液 取5.00ml 定容至100ml
0.5mg/ml 5.00ml C样 100.00ml =0.0025g/100ml
实践四 维生素B12的含量测定
任课教师：甘淋玲
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一、实验目的
• 1、掌握紫外-可见分光光度计的使用方 法； • 2、熟悉用吸光系数法进行样品溶液的含 量分析。
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二、实验内容
• 1、配制维生素B12样品溶液；
• 2、利用紫外-可见分光光度计测定样品
溶液吸光度值A。 • 3、用吸光系数法计算维生素B12注射液的 含量。
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注意事项
• 1、维生素B12有不同的规格，稀释倍数根
据实际含量来定。
• 2、移取溶液时注意移液管的润洗。
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数据记录
实践记录
样品名称 所用仪器 型号 样品溶液配 制过程 测定序号 1 吸光度A 吸光度 平均值 结果：含量= 检验日期 检测波长
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