绿花椰菜片剂中莱菔硫烷含量测定及对急性酒精性肝损伤的保护作用

浙江大学学报（农业与生命科学版）　３９（２）：１９７～２０２，２０１３　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ａｇｒｉｃ．　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ．　ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｊｏｕｒｎａｌｓ．ｚｊｕ．ｅｄｕ．ｃｎ／ａｇｒ　Ｅ—ｍａｉｌ：ｚｄｘｂｎｓｂ＠ｚｊｕ．ｅｄｕ．ｃｎ　ＤＯＩ：１０．３７８５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８—９２０９．２０１２．１１．６１３　

绿花椰菜片剂中莱菔硫烷含量测定及对急性酒精性肝损伤的保护作用　李宝龙　，田思聪　，谭洁。，李冰　，陈镜羽　，单毓娟　（１．黑龙江中医药大学药物安全性评价中心，哈尔滨１５００４０；２．哈尔滨工业大学食品科学与工程学院，哈尔滨１５００９０　３杭州市第一人民医院，杭州３１００００）　

摘要　采用高效液相色谱法测定绿花椰菜水提物中莱菔硫烷的含量；以Ｃ５７ＢＬ／６小鼠建立急性酒精性肝损伤模　型，用苏木精一伊红染色法（ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ—ｅｏｓｉｎ　ｓｔａｉｎｉｎｇ，ＨＥ）检测莱菔硫烷对小鼠肝脏病理学的影响；采用半自动　生化分析仪测定莱菔硫烷对肝脏丙氨酸氨基转移酶（ａｌａｎｉｎｅ　ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＡＩ　Ｔ）、天门冬氨酸氨基转移酶　（ａｓｐａｒｔａｔｅ　ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＡＳＴ）和碱性磷酸酶（ａｌｋａｌｉｎｅ　ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＬＰ）活性的影响，以探讨绿花椰菜中的　活性成分莱菔硫烷对急性酒精性肝损伤的保护作用．结果表明：绿花椰菜水提物中菜菔硫烷的含量为１．２６　ｍｇ／　片；莱菔硫烷各剂量组均可明显降低酒精所致的肝质量增加，肝／体比值较酒精模型组明显下降（Ｐ＜０．０１）；莱菔　硫烷各剂量组均能减轻酒精对肝脏的病理学损伤，其中，高剂量莱菔硫烷组（８０　ｍｇ／ｋｇ）的作用尤为明显；莱菔硫　烷能明显抑制酒精对肝脏ＡＬＴ、ＡＳＴ和ＡＬＰ等特征性酶的诱导作用，其中４Ｏ和８０　ｍｇ／ｋｇ中、高剂量莱菔硫烷　的保护作用更明显．说明莱菔硫烷能保护酒精对肝脏的损伤．　

关键词　莱菔硫烷；肝损伤　中图分类号　Ｒ　１５１．２　酒精；保护作用；绿花椰菜提取物　文献标志码Ａ　

Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｕｌｆｏｒａｐｈａｎｅ　ｆｒｏｍ　ｂｒｏｃｃｏｌｉ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｔａｂｌｅｔｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｒｏｌｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｃｕｔｅ　ｌｉｖｅｒ　ｉｎｊｕｒｙ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｅｔｈａｎｏ１．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ａｇｒｉｃ．＆Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ．），　２Ｏ１３，３９（２）：１９７－２０２　

ＩＡ　Ｂａｏｌｏｎｇ　，ＴＩＡＮ　Ｓｉｃｏｎｇ。，ＴＡＮ　Ｊｉｅ。，ＩＡ　Ｂｉｎｇ　，ＣＨＥＮ　Ｊｉｎｇｙｕ　，ＳＨＡＮ　Ｙｕｊｕａｎ。　（１．Ｃｅｎｔｅｒ　ｏｆ　Ｄｒｕｇ　Ｓａｆｅｔｙ　Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ＨｅｉｌｏｎｇＪｉａｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｙ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｈａｒｂｉｎ　１５００４０，Ｃｈｉｎａ　２．Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｉｎ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｔ１｛Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｈａｒｂｉｎ　１５００９０，Ｃｈｉｎａ　３　Ｆｉｒｓｔ　Ｐｅｏｐｌｅ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏＪ　Ｈａｎｇｚｈｏｕ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ　３　１　００００，Ｃｈｉｎａ）　

Ｓｕｍｍａｒｙ　Ｓｕｌｆｏｒａｐｈａｎｅ（ＳＦＮ）ｉｓ　ａｎ　ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ（ＩＴＣ）ｗｈｉｃｈ　ｅｘｉｓｔｓ　ａｓ　ａ　ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ　ｏｆ　ｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅ（ＧＳ）ｉｎ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｃｒｕｃｉｆｅｒｏｕｓ　ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ　ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ　ｉｎ　ｂｒｏｃｃｏｌｉ．Ｓｕｌｆｏｒａｐｈａｎｅ　ｈａｓ　ｂｅｅｎ　ｒｅｇａｒｄｅｄ　ａｓ　ａ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｏｆ　ａｎｔｉ　ｃａｎｃｅｒ　ａｇｅｎｔ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｆｒｏｍ　ｄｉｅｔ，ｍｏｓｔｌｙ　ｂｅｃａｕｓｅ　ｏｆ　ｉｔｓ　ｐｏｗｅｒｆｕｌ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｈａｓｅ　ＩＩ　ｅｎｚｙｍｅｓ，ａｎｄ　ｉｔ　ｉｓ　ａｌｓｏ　ａｃｔｅｄ　ａｓ　ａｎ　ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ　ｏｆ　ｉｎｊｕｒｙ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　１ｉｐｏｐｏ１ｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ（ＬＰＳ）ａｎｄ　ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ（ＨＣＹ）．Ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｎｔ　ｓｔｕｄｙ　ａｉｍｓ　ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｗｈｅｔｈｅｒ　ｂｒｏｃｃｏｌｉ　ｅｘｔｒａｃｔ，ｒｉｃｈ　ｉｎ　ｓｕｌｆｏｒａｐｈａｎｅ，ｃａｎ　ｐｒｏｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ａｃｕｔｅ　ｌｉｖｅｒ　ｉｎｊ　ｕｒｙ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｉｎ　ｍｉｃｅ　ｏｒ　ｎｏｔ．　Ｔｈｅ　ｑｕａｎｔｉｔｙ　ｏｆ　ｓｕｌｆｏｒａｐｈａｎｅ　ｉｎ　ｂｒｏｃｃｏｌｉ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　

基金项目：海外及港澳学者研究基金资助项目（８１１２８０ｌ１）　通信作者（ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ）：单毓娟，Ｅ—ｍａｉｌ：ｙｕｊｕａｎ７２＠１６３　ｃｏｍ　收稿日期（Ｒｅｃｅｉｖｅｄ）：２０１２—１１　０６；接受日期（Ａｃｃｅｐｔｅｄ）：２０１２—１２—１　９；网络出版日期（Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　ｏｎｌｉｎｅ）：２０１３　０３—１５　ＵＲＩ　：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ　ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３３．１２４７．Ｓ　２０１３０３１５　１３５０　０１０　ｈｔｍｌ　浙江大学学报（农业与生命科学版）　第３　９卷　（ＨＰＬＣ）．Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ—ｅｏｓｉｎ（ＨＥ）ｓｔａｉｎｉｎｇ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎ　Ｃ５７ＢＬ／６　ｍｉｃｅ　ｍｏｄｅｌ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ａｃｕｔｅ　ｌｉｖｅｒ　ｉｎｊｕｒｙ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｅｔｈａｎｏ１．Ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ａｌａｎｉｎｅ　ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＡＬＴ），ａｓｐａｒｔａｔｅ　ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＡＳＴ）ａｎｄ　ａｌｋａｌｉｎｅ　ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ（ＡＩ　Ｐ）ｉｎ　ｓｅｒｕｍ　ｏｆ　ｍｉｃｅ　ｗｅｒｅ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｓｅｍｉ—ａｕｔｏｍａｔｉｃ　ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎａｌｙｚｅｒ．　Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｑｕａｎｔｉｔｙ　ｏｆ　ｓｕｌｆｏｒａｐｈａｎｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｂｒｏｃｃｏｌｉ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｗａｓ　１．２６　ｍｇ／ｔａｂｌｅｔ．Ｌｉｖｅｒ　ｍａｓｓｅｓ　ｉｎ　ａｌｌ　ｓｕｌｆｏｒａｐｈａｎｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｗｈｉｃｈ　ｗｅｒｅ　ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ　ａｓ　ｔｈｅ　ｓｈａｒｐｌｙ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｌｉｖｅｒ　ｍａｓｓ／ｂｏｄｙ　ｍａｓｓ．Ｔｈｅ　ｓｅｒｉｏｕｓｌｙ　ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｅｖｉｄｅｎｃｅ　ｗａｓ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｉｎ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｇｒｏｕｐ，ｗｈｉｌｅ　ｌｅｓｓ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｗｅｒｅ　ｓｅｅｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｕｌｆｏｒａｐｈａｎｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｇｒｏｕｐｓ．Ｓｕｌｆｏｒａｐｈａｎｅ　ｃｏｕｌｄ　ｄｒａｍａｔｉｃａｌｌｙ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ＡＬＴ，ＡＳＴ　ａｎｄ　ＡＬＰ　ｉｎ　ｓｅｒｕｍ　ｏｆ　ｍｉｃｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｅｔｈａｎｏｌ，ｗｉｔｈ　ｍｏｒｅ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｏｄｅｒａｔｅ（４０　ｍｇ／ｋｇ）ａｎｄ　ｈｉｇｈ—ｄｏｓｅ（８０　ｍｇ／ｋｇ）ｇｒｏｕｐｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．　Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ａｂｏｖｅ　ｉｎｄｉｃａｔｅｓ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｓｕｌｆｏｒａｐｈａｎｅ　ｆｒｏｍ　ｂｒｏｃｃｏｌｉ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｔａｂｌｅｔｓ　ｉｓ　ａｂｌｅ　ｔｏ　ｐｒｏｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ｌｉｖｅｒ　ｉｎｊ　ｕｒｙ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｅｔｈａｎｏ１．　

Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　ｓｕｌｆｏｒａｐｈａｎｅ；ｌｉｖｅｒ　ｉｎｊ　ｕｒｙ；ｅｔｈａｎｏｌ；ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔ；ｂｒｏｃｃｏｌｉ　ｅｘｔｒａｃｔ　酒精性肝病（ａｌｃｏｈｏｌｉｃ　ｌｉｖｅｒ　ｄｉｓｅａｓｅ，ＡＬＤ）是　由于长期大量饮酒所致的肝脏疾病，其发病率和严　重性仅次于病毒性肝炎ｌ】］．ＡＬＤ严重者还会引发其　他疾病，如高脂血症、动脉粥样硬化等＿２］，饮酒导致　的肝损伤已成为威胁人类健康的主要公共卫生问题　之一．目前，酒精性肝损伤的发病机制并不十分明　确，除乙醇、乙醛等代谢产物直接造成的肝细胞损伤　之外，氧化性损伤　、内质网应激　、炎症嘲及脂肪　细胞因子失衡＿６　都是其发病的重要影响因素．　莱菔硫烷（ｓｕｌｆｏｒａｐｈａｎｅ，ＳＦＮ）是以前体物萝　卜苷（ｇ１ｕｃｏｒａｐｈｅｎｉｎ）形式广泛存在于多种十字花科　蔬菜（尤其富含于绿花椰菜中）的一种异硫氰酸盐　（ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ，ＩＴＣ）ＥＴ］．莱菔硫烷具有多种生物　学效应，包括诱导ＩＩ相解毒酶＿８］、抑制Ｉ代谢酶及　ＤＮＡ加合物的形成　９　、诱导细胞周期阻滞和细胞　凋亡＿１　］、抑制组蛋白去乙酰化［１　、抑制肿瘤细胞　转移Ｅ１４３等，被认为是很有发展前景的癌症预防剂．　本课题组前期研究发现，莱菔硫烷能显著抑制脂多　糖（１ｉｐｏｐｏ１ｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ）诱导的血管内皮细胞　损伤，该作用与抑制炎症因子环氧化酶２　（ｃｙｃｌｏｘｙｇｅｎａｓｅ　２，ＣＯＸ－２）、诱导型一氧化氮合酶　（ｉｎｄｕｃｅｄ　ｎｉｔｒｉｃ　ｏｘｉｄｅ　ｓｙｎｔｈａｓｅ，ＩＮＯＳ）表达　，同　时还与抑制血管内皮细胞黏附因子密切相关；深入　的机制研究证实，莱菔硫烷能以免疫调节相关通路　ＴＬＲ４（ｔｏｌｌ—ｌｉｋｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ）一ＭｙＤ８８依赖方式调控上　述因子的表达口　．此外，我们的前期工作已经证实，　莱菔硫烷还能抑制同型半胱氨酸（ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ，　ＨＣＹ）对肝细胞的氧化性损伤，其中内质网应激途　径在其中发挥着关键调控作用（未发表）．鉴于氧化　应激损伤和内质网应激在酒精性肝损伤发病中的作　用，以及莱菔硫烷在这些方面的保护作用，推测莱菔　硫烷很可能在拮抗酒精造成的肝损伤中发挥着重要　作用．基于此，本文采用高效液相色谱法测定绿花　椰菜水提物中莱菔硫烷的含量；以Ｃ５７ＢＬ／６小鼠建　立急性酒精性肝损伤模型，用苏木精一伊红染色法　（ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ—ｅｏｓｉｎ　ｓｔａｉｎｉｎｇ，ＨＥ）检测莱菔硫烷对　小鼠肝脏病理学的影响；并采用半自动生化分析仪　测定莱菔硫烷对肝脏丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨　酸氨基转移酶和碱性磷酸酶活性的影响，旨在探讨　绿花椰菜中的活性成分——莱菔硫烷对急性酒精性　肝损伤的保护作用，为开发食源性肝损伤保护剂提　供研究基础．