抗菌水泥抗菌性能的检测方法

抗菌水泥抗菌性能的检测方法

自20世纪90年代我国开始研究无机抗菌材料以来，无机抗菌材料以其具有的耐热性好、抗菌范围广、有效抗菌期长、毒性低、不易产生耐药性、安全性能高等特点，被广泛地应用于家用电器、纤维与纺织品、日用品、卫生用品、食品包装、装饰材料、建筑材料等行业中心。进入新世纪，抗菌建筑材料在公共卫生消毒，预防疾病扩散、保护公共卫生安全方面发挥了越来越熏要作用，逐渐成为抗菌应用的主流11，其中抗菌水泥的研制也应运而生，成为抗菌建筑材料的新型产品。抗菌水泥是在普通水泥中加入无机抗菌剂而制备的具有抗菌功能的建筑材料，被广泛地应用于建筑物的抹而砂浆，以及共用污水槽、公共走廊、下水道”。

抗菌材料的抗菌性能一般体现在该材料的抗菌剂有广谱抗菌性、要有较强的抗菌性及较高的抗菌率、抗菌效果希望有持续性和长久性等等。国内外对抗菌材料及其制品的抗菌性能进行严格限定，有相关的抗菌材料的抗菌性能的检测标准出台，如抗菌塑料制品、抗菌陶瓷制品、抗菌纺织品等，这些方法中主要从抗细菌及抗霉菌检测方法，尤其是抗细菌的检测方法更为成熟。而今，我国还没有制定相关的抗菌水泥及其制品的抗菌标准和检测方法标准因此，探索抗菌性水泥抗菌性能的检测方法，包括对检测方法设计的准确性与科学性的把握，对整个抗菌水泥及其产品的研制和开发起着最要的作用。本文参照有关的抗菌剂及抗菌制品扰菌性能的枪测标准，及最近发布的有关塑料制品及纺织品相关的国际标准，首次针对抗菌水泥的抗菌性能的检测方法进行探讨，并把检测方法的操作过程具体详尽地记录下来，拟为抗菌水泥的抗菌性能选择一个比较合理、准确的测试方法，给后来研究者提供参考。

1实验方法

1.1材料

1.1.1检测样品

黑水泥航菌样）l块，白水泥庄白样）l块，规格一样，霞量4 0 9，厚度a s cm，直径2 0cm。

LL2试验菌

大肠杆菌(Escherichia coli)

L 1.3试剂

营养肉汤干燥培养基旷；NaCI、NaiHR)4、NdH2 F04；琼脂粉。

LL4实验设备

恒温培养箱，恒温水浴振荡器，高压蒸汽消毒器，电子天平，超净工作台，旋涡振荡器，酸度计。

LL5试验准备

(1)待检样品准备

将黑白水泥各I块分别装在三角瓶里，塞上瓶塞，同时备带塞子的空三角瓶1个，于103 kPa灭菌20 min。

(2)试验菌液准备

将新鲜的大肠杆菌斜面菌苔，移接到装有营养肉汤培养基的三角瓶里，于37℃士l℃，155 r/min下摇床培养过夜钧14h-16 h）。

(3)培养基及溶液的配置

营养肉汤培养基：营养肉汤干燥培养基按配方加入一定比例的蒸馏水；

营养肉汤琼脂培养基：营养肉汤培养基中加入L5%琼脂粉；

1/500营养肉汤培养基：将营养肉汤培养基稀释500倍：

磷酸缓冲液：溶液A：Q 2 rDolfL Nth HP04；溶液B:Q 2 molfL NaH2 P04。（72mL A+28mL B）混合+5 gNaCI+IOOO mL燕馏水；

生理盐水：Q 85%NaCI溶液；

以上培养基及溶液均在103 kPa灭菌锅灭菌15 min。

12步骤与方法

L21抗菌定量试验方法

浸泡法：取一定量的试验菌液，以十倍稀释的方法稀释成浓度适合的试验菌液，加入到装有待检水泥的三角瓶里，浸泡一定时间，使水泥与试验菌液充分接触。三角瓶放置于恒温培养箱(37℃士l℃)。每隔一段时间检测菌液的浓度，计算出该抗菌水泥的抗菌率。

操作步骤：

A、调配试验菌液：将新鲜的试验菌液，用1/500营养肉汤培养基，以十倍稀释法，调节成浓度为(1.0Ⅺ05 -1.0xio'5) cfu/mL 的试验菌液。

B、分装试验菌液：将调配好的试验菌液250 ml分别分装在装有阴性对照样、空白对照样及抗菌样的三角瓶里。

C、将三角瓶放置恒温培养箱（37℃士l℃），分别在l min（0接触时间），3h、6h、9h、12 h取样，枪测菌液的浓度。

L22试验菌液中活菌数的测定

平板计数法：是将试验菌液经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，一个单菌落应代表试验菌液中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍教和取样量即可换算出待测菌液中的含菌数(单位：cfu/mL)。

平板计数法的具体操作：以无菌操作，将试验菌液作十倍稀释：用l mL吸管，吸取试验菌液lmL，注入盛有9 mL无菌生理盐水的试管中，充分混匀，成iiof~释液；另取一支l mL吸管吸取上述稀释液l mL，注入另一盛有9 mL无菌生理盐水的试管中，充分混匀，成l 100稀释液；再取一支l mL无菌吸管按上述操作即可获得1 000稀释液。如此每递增稀释度一次，换用1支l mL无菌吸管。选择2-3个适宜的稀释度，在分别作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管吸取l mL该菌液至无菌培养皿中，每个稀释度作2个培养m。然后将融化后冷却至45℃左右的营养肉汤琼脂培养基到入培养JuL中，每IIJL约15 mL，使培养基与菌液混合均匀。待培养JIIL凝固成平板’将平板倒置，于恒温培养箱(37℃士l℃)培养48 h，取出，计算菌落数，乘以稀释倍数，求出每毫升试验菌液所含菌落数，即菌液浓度。

2 结果与讨论

Z1检测方法的原理

抗菌(anti-m iclobial)：是一个泛指名词，抗菌水泥抗菌性能检测方法的初步探讨抗菌，包括灭菌、杀菌、消毒、抑菌、防霉、防腐等。抑菌：防止或抑制微生物生长繁殖的作用叫做抑菌。杀菌：杀死微生物营养体和繁殖体的作用叫做杀菌。狭义抗菌，抑菌和杀菌作用的总和为抗菌。

抗菌试验的方法可归纳为定量检测方法和定性检测方法量累。定性试验方法只可测试出是否具有抗菌性能，而不能判断抗菌效果的强弱，即不能准确测定出抗菌率。而定量检测方法不仅能观察待检样品是否具有抗菌性能，还可以得出具体的抗菌率数值。

本研究采用定量检测方法，通过将待检测样品与试验菌液充分接触，对“0’接触时间的试验菌液浓度和接触一定时间后的试验菌液浓度的测定，计算出检测样品上试验菌液浓度的较少百分率，可评价抗菌样品的抗菌性能，用抗菌率表示，公式：抗菌率只(%)=（A一引从xioo。A-“O’接触时间的试验菌液浓度；B-接触一定时间后的试验菌液浓度。

每次试验同时做阴性对照样、空白对照样及抗菌样，每个样做3个平行。

试验结果必须满足以一F要求，否则试验无效：

(1)阴性对照样的时间叫收活菌数值均不小于

L O X106 cfu/mL;

(2)空白对照样的实际回收活菌数值均不小于

L 0 xi05 cfu/mL;

(3)扰菌样实际回收活菌数的对数值与空白对照样的实际回收活菌数的对数值之差均大于L5。

2 2抗菌试验结果

待检样品在同等作用条件下体现了不同的抗菌性能。从阴性对照样体现了在没有任何试样干扰的情况下，试验菌液浓度的变化，体现菌种生长繁殖细胞数增长的一个自然变化规律；而空白对照样体现了没有抗菌性能的水泥制片作用下，试验菌液浓度的一个变化规律作为该试验结果是否有效的一个判断依据；抗菌样是抗菌水泥样品作用下，试验菌液浓度的一个变化规律：试验菌液浓随着时间推移而降低，试验菌液浓度减少百分率(Rp样品抗菌率)在不断增大，3h为96 85%;6 h为99 95%，9h以后为100%。且试验满足设定的三个要求，试验结果有效。该抗菌水泥的抗菌性能较好，抗菌率大于99%，为强抗菌水泥。

3结论

本实验初步对抗菌水泥的抗菌性能测试进行探讨，根据产品用途，采用了无机抗菌剂抗菌性能测试新方法—曼泡法。该方法可以让菌种均匀分散,菌水泥较充分地接触菌液，又能同时满足菌种生长所需的湿度，避免了在测试过程中因水分不足而导致了菌种自然死亡的问题，减少了测试误差。在这过程中．我们也认识到测试操作过程中存在的一些不稳定因素会影响到测试的结果。比如：试验菌的活性，试验菌液的浓度，试验菌液的量，肉汤培养基的浓度，作平板琼脂培养基的用量，而产品本身抗菌性能的持久性也是一个不稳定的因素，等等。因此在试验的过程中同时做两三个平行样，是减少技术上误差的是最常用的操作手法。