微生物检测作业指导书
一．目的：为确保产品质量得到控制，依据GB15979及《消毒技术规范》规范制定微生物检测方法。
二．范围：适用于原料、包材、产品微生物检测（细菌/霉菌和真菌总数）。
三．职责：由研发部/实验室负责执行实施。
四．内容
4.1检测前准备：
4.1.1将检测用的试管、刻度吸管等洗净后置于干燥箱内干燥后备用。
4.1.2将使用过的培养皿连同培养基煮沸15-30分钟后，用清洁液洗净晾干备用。
4.1.3 0.9%生理盐水配制：准确称取9g氯化钠，加入1000ml去离子水。
4.1.4 中和剂配方
1) 磷酸盐缓冲液（PBS，0.03mol/L，pH7.2）无水磷酸氢二钠 2.84g磷酸二氢钾 1.36g 蒸馏水加至 1000ml
将各成分加入到1000ml 蒸馏水中，待完全溶解后，调 pH 至7.2～7.4，于121℃压力蒸气灭菌20min备用。
2) 硫代硫酸钠中和剂（0.1%） pH7.2-7.40.03mol/L磷酸盐缓冲液 100 ml硫代硫酸钠0.1g于121℃
压力蒸气灭菌15min备用。
3) 0.3%（W/V）吐温80和0.3%卵磷脂 pH7.2-7.40.03mol/L磷酸盐缓冲液 100 ml吐温80 0.3g+0.3g卵磷脂于
121℃压力蒸气灭菌15min备用。
4) 0.3%甘氨酸 pH7.2-7.40.03mol/L磷酸盐缓冲液 100 ml甘氨酸 0.3g于121℃压力蒸气灭菌15min备用。
5) 对于复方或特殊消毒剂的中和剂，根据厂家提供的资料选用合适的中和剂或用以下中和剂:
4.2灭菌：
4.2.1干热灭菌法(160℃-170℃，2小时):适用于培养皿、取样用称量瓶、刻度吸管的灭菌。
4.2.2湿热灭菌法(121℃，0.1Mpa，15-30min)：适用于培养基溶液、生理盐水、培养皿
、吸管、取样棉球等的灭菌。
4.3原料、产品微生物检测：
4.3.1抽样
a固体样品
用消毒取样器于同一个批次三个大包装（三个以上员工的产品）中至少随机抽取90g或抽取12个最小销售包。
公共场所现场检测采样作业指导书
公共场所现场检测采样作业指导书1目的规范公共场所现场检测采样的方法，保证现场仪器检测和微生物采样工作顺利进行。
2适用范围适用于公卫科公共场所现场仪器检测和微生物采样。
3引用标准《公共场所卫生标准检验方法》GB/T.1～.30-2000《公共场所卫生检测技术规范》GB/T-职责4.1现场检测人员按规范进行仪器检测和微生物采样，做好检测及采样记录，并按时送检。
4.2复核人员对检测结果进行复查审核、签名。
4.3现场检测负责人将资料归档。
5工作程序5.1检测前的准备工作5.1.1采样前应根据公共场所的经营范围和规模，制定检测方案。
检测方案应包括以下内容：单位名称、联系电话、地址、检测项目、空气质量检测点数目、公共用具样本量、样品采集方法、现场采样操作的质量控制、样品保存和运送等。
5.1.2检测采样前应对现场检测人员进行培训，熟悉仪器性能及适用范围，能正确使用检测仪器。
5.1.3在工作开展前，应对检测仪器状态进行检查，确认正常后方可使用。
出发前检查所带的仪器电源和性能是否正常，采样工具是否齐全。
5.2现场检测5.2.1现场检测至少2人，并持有效采（抽）样员证，由被检单位人员陪同进行检测。
5.2.2检测点的选择5.2.2.1空气质量（包括物理因素）的检测点（以下简称检测点）应选择公共场所人群经常活动，且停留时间较长的地点，且不能影响人群的正常活动。
5.2.2.2检测点应考虑现场的平面布局和立体布局。
通常情况下应按平面布局检测出三个数据，取其平均值。
5.2.2.3检测点应避开人流通风道和通风口，并距离墙壁0.5-1m远，高度0.8-1.2m。
5.2.2.4确定检测点时可用交叉布点，斜线布点或梅花样布点的方法。
5.2.3检测点数目进行空气质量检测时，应按照公共场所不同性质、规模大小、人群经常停留场所分别设置数量不等的检测点。
5.2.3.1旅店业表1旅店业客房采样客房间数采样点数(个)采样高度(米)≤100客房数5～10%>100客房数1～5%0.8～1.20.8～1.2物体表面细菌总数、大肠菌群、霉菌、酵母菌项目检测项目空气细菌总数、温度、湿度（三星级及以空气检测上需检测）、风速、二氧化碳、一氧化碳、项目甲醛、可吸入颗粒物、照度、噪声（A）、新风量。
初始污染菌检测作业指导书
文件编号版本初始污染菌检测作业指导书1. 目的：通过生物实验方法，检测未灭菌产品的微生物污染数量。
2. 主要设备：3. 试剂：pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液大豆酪蛋白琼脂沙氏葡萄糖琼脂4. 试验前准备：试验前配制需要的培养基﹑pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液并灭菌，准备灭菌的培养皿和三角瓶等。
5. 试验步骤：5.1. 样品数量:：同一批号产品5件。
5.2. 浸提液制备：5.2.1 浸提介质为pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液。
5.2.2 已提前30 min开启净化工作台。
使用前用75%乙醇消毒净化工作台的内表面。
5.2.3 用75%乙醇消毒受检样品的外包装。
5.2.4 本操作以无菌操作方式在净化工作台内进行。
打开样品的内包装，取出样品，用己灭菌的剪刀剪切样品为3 ~5cm的小段（包括样品Hub段），放入己灭菌的150ml的带盖三角瓶内。
加入20ml已灭菌的pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，盖好瓶塞。
5.2.5 依据上述方法，完成所有样品的处理。
5.2.6 提前30~60min开启超声波清洗机，设定温度为37℃。
如需快速达到设定温度，可用温水注入超声波清洗机内。
确认达到设定温度后，将上述完成的三角瓶放入超声波清洗器内（注意：不得打开瓶塞，否则弃之！），启动超声波发生器，振荡样品10min，取出擦干三角瓶外表面。
5.2.7 再将上述盛有样品的三角瓶置于混匀器振荡1min。
此液体即为样品浸提液。
此液体浸提液制取后1h内使用。
5.3. 使用75%乙醇消毒上述制备的浸提液的三角瓶外表面，并将其转入超净工作台内。
5.4. 使用无菌吸管，吸取2ml浸提液，移入已灭菌的空培养皿内。
每一份浸提液制备２份平行的培养皿。
将灭菌完毕，已冷至约45~50℃（水浴锅保温）的大豆酪蛋白琼脂和沙氏葡萄糖琼脂培养基逐一加入上述培养皿内，每种培养基分别倾注2个平行的培养皿。
每一培养皿加入约15~20ml的培养基，盖上培养皿外盖。
放置于净化工作台内表面，轻轻摇动使溶液与培养基充分混合。
108-室间质量评估(EQA)---检验科作业指导书
部门：微生物室
收到质控 品日期
建议检测 日期
截止日期
年 组织单位ห้องสมุดไป่ตู้
检验科科室间质评记录
表格编号：
质评类别
第几次质评 主任签收
结果发出 结果存底 日期 日期
质量负责人
备注
检验科微生物学室间质评比对分析报告表
检验科作业指导书
检验科作业指导书
室间质量评估 （EQA）程序
文件编号：
版本： 生效日期： 页码： 第3页共 3 页
检验科作业指导书
检验科作业指导书
室间质量评估 （EQA）程序
文件编号：
版本： 生效日期： 页码： 第2页共 3 页
5 室间质控回报结果的分析总结 5.1 当质控结果由卫生部或广东省临床检验中心室间质评室反馈于实验室时，有一份评估报告和 一份参与总结报告，而后者列出了评估实验室成绩的评分标准；全科人员通过阅读结果报告，进行自 我学习与总结分析，以达不断提高微生物检验技能目的。 5.2 每次质评活动的回报评估报告均需由科主任助理填写《 检验科微生物学室间质评比对分析报 告表》，交科主任审阅签名，并进行归档。 5.3 当质评回报结果评估报告是合格满意的，则让所有组员传阅其中的总结报告，学习其中的标 本处理原则与菌株鉴定药敏方法。 5.4 当质评回报结果评估报告是有不合格项目，先由操作者本人作分析总结查找失控原因，由主任 助理调查之后提出整改与改进措施，报科主任审核，必要时科主任组织全科人员进行学习，详细措施 解释记录在《 检验科微生物学室间质评比对分析报告表》中。寻找失控原因方法如下： 5.4.1 与保存的原始数据进行核对，排除填写错误。 5.4.2 检查室间质控标本检测当天的仪器校准是否通过、室内质控是否在控。 5.4.3 检查室间质评标本的溶解是否正确，培养结果与涂片结果是否一致。 5.4.4 检查质控标本检测当时试剂质量是否稳定。 5.4.5 室间质评标本发放单位是否存在的内部质量问题。 5.4.4 重新检测保存的间质评标本，寻找引起不合格的原因。 6 室间质评菌株的保存 室间质评菌株生化反应比较典型，且经过参考实验室验证,应尽量将菌株保留，作为以后示教或质 控菌株用。 7 质量记录 《 检验科微生物学室间质评比对分析报告表》 《 检验科室间质评记录表》
临床微生物标本采集作业指导书
临床微生物标本采集作业指导书一、引言本文档旨在提供临床微生物标本采集作业的指导，以确保标本采集的质量和准确性。
本指导书适用于医疗机构的相关工作人员，包括医生、护士和实验室技术人员等。
二、目的准确的微生物标本采集是诊断和治疗感染病例的重要环节。
本指导书的目的是提供清晰的指导，确保标本的采集过程符合规范，以减少错误和污染的风险，从而提高诊断的准确性。
三、采集前准备在进行微生物标本采集之前，需要做好以下准备工作：1.了解标本类型和采集方法：不同类型的标本需要采集不同的方法，例如血液标本、尿液标本和呼吸道标本等。
在采集前要了解每种标本的采集方法和要求。
2.准备采集工具和材料：根据标本类型和采集方法，准备好相应的工具和材料，例如采血针、尿液收集容器和标本袋等。
3.按照消毒和无菌要求准备采集区域：在采集前要确保采集区域干净、消毒和无菌。
根据需要，可以使用消毒剂和无菌覆盖物等。
四、标本采集步骤4.1 血液标本采集血液标本采集是常见的微生物标本采集方法之一。
下面是血液标本采集的步骤：1.确定采集部位：通常选择患者的上臂静脉作为采集部位。
2.消毒：用75%乙醇消毒采集部位，采用无菌棉球擦拭。
3.选择合适的采血针：根据患者的年龄和采血需要选择合适的采血针。
4.采集血液：在消毒后，用采血针穿刺患者的静脉，收集所需的血液量。
5.采集完毕后，用无菌棉球和胶布固定针头，然后将血液转移到标本管中。
6.标本管标记：在标本管上正确标记患者的信息和采集时间等。
4.2 尿液标本采集尿液标本采集常用于泌尿系统感染的诊断。
以下是尿液标本采集的步骤：1.洗手：采集前要洗手并戴好一次性手套。
2.选择合适的容器：选择容量合适的尿液收集容器。
3.女性患者：清洁外阴部，将尿液收集容器放置在外阴，以接收尿液。
4.男性患者：将尿液收集容器放置在清洁的阴茎上方，以接收尿液。
5.患者采集尿液：患者尽量采集中段尿，避免采集到开始或结束的尿液。
6.收集完毕后将尿液收集容器密封，标记患者的信息和采集时间等。
涂抹检测作业指导书
食品生产涂抹验证试验规范1目的涂抹试验为确定表面洁净度的检验方法，其方便，可操作性强，且能够反应出监控点的表面洁净程度。
生产过程中品管部对生产现场卫生状况进行监控，定期开展微生物涂抹验证，并根据检验结果对现场卫生进行管控。
为保证对涂抹试验检验结果准确，统一操作方法，提高检验人员的技术操作性，特制定本试验规范。
2 适用范围本试验规范适用于食品生产线微生物控制及验证计划。
3 规范性引用标准GB 4789.1-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验总则》。
GB/T 4789.3-2003《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》。
GB 4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》。
4 材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：(1)装有10ml无菌生理盐水的取样管，生理盐水：称取8.5ｇ氯化钠溶于1000mL蒸馏水中；分别向取样管中移取10ml生理盐水，包扎后，121℃高压灭菌15min。
注意：为避免污染，经灭菌后的待用无菌取样管，进入车间后方可在取样现场拆除包扎。
(2) 25cm2涂抹纸或一次性无菌棉签。
(3)装有75%（V/V）消毒酒精的喷壶。
5 涂抹操作步骤具体操作步骤如下：(1)进入车间先经过消毒池消毒；(2)在洗手池洗手消毒；(3)涂抹前用装有75%（V/V）酒精的喷壶对手部进行消毒；(4)涂抹：a. 工具、器具、包材涂抹用消毒镊子取25cm2湿润灭菌涂抹纸，贴（或涂）于被涂抹物表面，使之充分接触，贴完50cm2后，立即放入装有50mL灭菌生理盐水的涂抹瓶中，盖好瓶塞，使涂抹纸与盐水充分混合并做好标识送检；如未配备涂抹纸情况下，使用一次性无菌棉签在取样管中浸湿无菌生理盐水后在选定涂抹区域（25cm2）来回均匀覆盖涂擦2次，然后剪去或折断手接触部分（如使用剪刀剪断，剪刀刀口面需用消毒脱脂棉进行消毒处理；采用折断法，将棉签整体1/2插入取样管，用手捏住棉签尾部向下小心折断，注意小心棉签弹出），将棉签部分放入含有10ml无菌生理盐水的取样管内做好标识送检。
新版商业无菌检验的测定作业指导书
作业指导书O P E R A T I N G I N S T R U C T I O N S食品微生物检验商业无菌检验编号：XZJY073-00-2019版本：第一版第0次修改编制：审核：批准：实施日期：2019.01.01一、编制目的为规范单位对食品微生物学检验商业无菌检验的方法，编制本指导书。
二、适用范围本作业指导书适用于食品商业无菌检验的基本要求、操作程序和结果判定。
本指导书适用于食品商业无菌检验。
三、编制依据GB 4789.26-2013《食品安全国家标准食品微生物学检验商业无菌检验》四、设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：a) 冰箱：2 ℃～5 ℃；b)恒温培养箱：30 ℃±1 ℃；36 ℃±1 ℃；55 ℃±1 ℃；c)恒温水浴箱：55 ℃±1 ℃d)均质器及无菌均质袋、均质杯或乳钵e)电位pH计（精确度pH0.05单位）f)显微镜：10倍～100倍；g)开罐器和罐头打孔器h)电子秤或台式天平i)超净工作台或百级洁净实验室。
五、培养基和试剂5.1无菌生理盐水5.2结晶紫染色液 5.3二甲苯。
5.4含4％碘的乙醇溶液：4 g 碘溶于100 mL 的70%乙醇溶液。
六、检验程序商业无菌检验程序见图1.作业指导书文 件 编 号： XZJY073-00-2019 版本号/修订状态： 一/第0次修改 食品微生物商业无菌检验页码/总页数： 2/6实 施 日 期： 2019.01.01作业指导书文 件 编 号： XZJY073-00-2019七、操作步骤7.1样品准备去除表面标签，在包装容器表面用防水的油性记号笔做好标记，并记录容器、编号、产品性状、泄漏情况、是否有小孔或锈蚀、压痕、膨胀及其他异常情况。
7.2称重1 kg及以下的包装物精确到1 g，1 kg以上的包装物精确到2 g，10 kg以上的包装物精确到10 g，并记录。
011-菌种使用管理程序---检验科作业指导书
检验科作业指导书
菌种使用管理程序
文件编号：
版本： 生效日期： 页码： 第1页共 7 页
1 目的 制定菌种管理程序的目的是保证菌种合理、有效的使用和保存，保证实验室和社会的生物安全。 2 菌种的类型及用途 2.1 质控菌株的作用及其来源 质控菌株主要包括标准菌株(购买于国家菌种保存中心)和室间质评标本分离株（广东省临检中心 和卫生部临检中心）；标准菌株均为 ATCC 菌株，主要用于药物敏感试验和菌株鉴定试剂方面的室内质 控，如 MicroScan Walkaway40 微生物鉴定及药敏分析仪检测板、API 试剂条、Ｋ－Ｂ法药敏试验等的 质控。室内质量控制主要菌株的一览表见表 1-11-1。
1.API 20C 的质控
流感嗜血杆菌
ATCC10211
1.API NH 的质控 2.HTM 平板质控
2.2 临床分离株
日常工作中的临床分离株，可按需要进行留取菌种保存，主要应用于流行病学调查和实验科研等。
3 菌种的保存方法
3.1 平板 4℃保存法
此法只适合短期保存菌种，可用于每周转种的质控参考菌株的保存，方法是将要用的菌株转种于
表 1-11-1 室内质量控制主要菌株的一览表
菌种名称
菌种代码
菌种用途
肺炎链球菌 流感嗜血杆菌 淋病奈瑟菌 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌
大肠埃希菌
ATCC49619 ATCC49247 ATCC49226 ATCC29213 ATCC25923
ATCC25922
1.血平板培养基质控 2.链球菌药敏质控(K-B 法) 3.OP 试验质 控 1.巧克力平板培养基质控 2.流感嗜血杆菌 K-B 法药敏试验质 控 3.X,X+V,V 因子试验质控 1.淋球菌平板培养基质控 2.淋球菌 K-B 法药敏试验质控. 3.GC 平板的质控 1.PC20 板质控(包括鉴定与微量肉汤稀释法药敏试验) 2.B 内 酰胺酶试验阳性质控 3. 触酶试验阳性质控 1.葡萄球菌 K-B 法药敏试验质控 2.革兰氏染液质控 3.葡萄球 菌乳胶凝集试剂阳性质控 4.血平板/伊红美兰/营养琼脂平板 培养基质控 5.API20Strap 的质控 1.NUC33/NC31 板质控(包括鉴定与微量肉汤稀释法药敏) 2.革 兰氏/抗酸染液质控 3. 伊红美兰/营养琼脂平板培养基质控 4.氧化酶试剂阴性质控 5.ESBL 试验阴性株质控 6.API20E 的 质控
医院微生物室生殖系统标本的处理作业指导书
医院微生物室生殖系统标本的处理作业指导书
1、生殖系统标本培养的主要病原菌
革兰阳性菌革兰阴性菌
葡萄球菌淋病奈瑟菌
肠球菌大肠埃希菌
化脓性链球菌拟杆菌
厌氧链球菌铜绿假单胞菌
结核分枝杆菌变形杆菌
2、标本收集：阴道、子宫颈及前列腺等分泌物应由临床医师采集，收集于无菌试管内送检。
3、涂片检查：
3.1、一般细菌、淋病奈瑟菌和杜克雷嗜血杆菌：革兰染色镜检作初步报告。
3.2、结核杆菌：抗酸染色镜检后作初步报告。
4、检验过程：
4.1、用棉拭子划完第一区后，用接种环继续分区划线，35℃普通培养箱孵育18～24小时，如有要求培养淋球菌和真菌则加种专用培养基。
4.2、流程：
标本。
沉降菌检验作业指导书
文件名称沉降菌检验作业指导书页码第 1 页共 2 页生效日期2017年5月1日1目的指导化验员对沉降菌的取样、检验、质量判定，保证客观地评价环境卫生，规范管理车间和无菌室环境。
2适用范围适用于化验员对无菌室，车间内包装区、冷却区生产环境空气中的菌落总数的测定。
3定义：沉降菌：用本作业指导书提及的方法收集到的空气中活微生物粒子。
4职责化验员负责沉降菌收集、检测、结果报告。
5内容5.1采样频率：5.1.1车间长期停产后，恢复生产前进行一次检测；5.1.2正常生产每个月至少两次对无菌室和车间沉降菌进行检测；5.1.3沉降菌检测不合格要求整改后，或产品微生物检测不合格分析原因时。
5.1.4空气净化系统维修后；5.2采样：5.2.1准备：化验员将配制好的平板计数琼脂、孟加拉红培养基和90mm平皿经121℃ 15min灭菌后，将冷却至45-50℃的琼脂倾注到无菌平皿中，待琼脂凝固后，置冰箱冷藏备用。
5.2.2采样：采样地点应根据活动区域选择，按采样点布置图取点（如下）。
室内面积≤30㎡时，取三点；室内面积≥50㎡时，取五点及以上。
关键设备或关键活动区域可增加点位。
采样点位置离地0.8m～1.5m，离墙1m。
在所选点位，将平板计数琼脂培养皿开盖暴露15min，立即盖好送回化验室检测。
车间采样应设置对照组：培养皿在携带过程与车间采样时均不打开皿盖。
5.3检测：采样取回后立即置于恒温箱培养。
菌落总数：36℃±1℃，48h±1h。
，霉菌：28℃±1℃，5d。
5.4结果判定：标准：菌落总数≤10cfu/皿，霉菌≤5cfu/皿，检验结果应做记录。
6相关文件7记录《环境微生物检测记录》F-QA-026 两年。
涂抹检验作业指导书
1目的
指导化验员对生产人员手部、衣物和与食品接触的设备、工具表面的微生物取样、检验、质量判定，保证客观地评价生产卫生，规范管理车间环境。
2适用范围
适用于化验员对生产人员手部、衣物和与食品接触的设备、工具表面的菌落总数和大肠菌群测定。
3定义：无
4职责
化验员负责涂抹采样、检测、结果报告。
5内容
5.1采样频率：
5.1.1每个月至少两次检测
5.1.2检测不合格要求整改后，或产品微生物检测不合格分析原因时检测
5.1.3停产开始生产时检测
5.2采样：
5.2.1准备：化验员配置10mL生理盐水试管和用纸包裹完好的棉签，经121℃15min灭菌后，
备用。
5.2.2采样：打开生理盐水试管胶塞，用酒精灯灼烧胶塞和试管口，用手捏住棉签上前端，
将棉签底端放入生理盐水中，完全浸湿后拿出。
1）手部：要求被检人员五指并拢，用浸湿的棉签在手指曲面，从指尖、指沟处到手腕来回涂抹。
2）衣物、工器具：用浸湿的棉签在表面横向纵向来回涂抹约25cm2，注意涂抹死角部位。
3）将涂抹后的棉签折断，废弃检验员手持端，另一端放入生理盐水试管中并将胶塞盖紧，详细标记取样点和取样时间。
5.3检测：采样取回后按微生物检测作业指导书操作。
5.4结果判定：
标准：人员手部：菌落总数≤300cfu/只手，大肠杆菌≤10cfu/只手；衣物、工器具表面：菌落总数≤1000cfu/25cm2，大肠杆菌≤10cfu/25cm2，检验结果应做记录。
6相关文件:无
7记录
《环境微生物检测记录》F-QA-026 两年。