采用HPLC_CZE_LC_MS_省略_牛血清去蛋白注射液的特征图谱分析_任丽萍
超高效液相色谱-串联质谱法结合固相萃取净化测定牛奶中阿苯达唑及其主要代谢物残留量
超高效液相色谱-串联质谱法结合固相萃取净化测定牛奶中阿苯达唑及其主要代谢物残留量贺习文，雷浩，赵雪宁，马川，高勤叶，李易轩（陕西秦云农产品检验检测股份有限公司，渭南 714000）中图分类号：TS252.1 文献标识码：A 文章编号：1004-4264（2022）01-0047-05DOI: 10.19305/ki.11-3009/s.2022.01.013开放科学(资源服务)标识码(OSID)微信扫描二维码听独家语音介绍与作者在线交流摘 要：本研究基于超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）结合固相萃取净化技术，建立了阿苯达唑（ABZ）、阿苯达唑砜（ABZSN）、阿苯达唑亚砜（ABZSX）的定量分析方法，用以监控牛奶及其制品的质量安全。
牛奶样品经过1%乙酸乙腈溶液提取后，提取液经氮气吹干，用碳酸盐缓冲溶液溶解后，使用C18固相萃取柱净化。
将净化液注入超高效液相色谱系统，经C18反向色谱柱分离，以可加热电喷雾离子源（H-ESI）正离子扫描模式下多反应监测（MRM），以浓度和峰面积外标法定量。
结果表明，3种目标化合物的线性关系良好，相关系数（R2）≥0.9987，检出限（LOD）为0.5μg/kg，定量限（LOQ）为2μg/kg，回收率在90.8%~101.2%之间，日内及日间变异系数均≤2.14%。
本研究填补了牛奶中ABZ及其代谢物检测方法的空白，实现了牛奶中3种目标化合物的准确定量分析，为牛奶及其制品的质量监测提供了理论和技术支撑。
关键词：超高效液相色谱-串联质谱；阿苯达唑及其代谢物；牛奶；固相萃取技术阿苯达唑（ABZ）是一种咪唑衍生物类广谱驱虫药物，可用于驱除蛔虫、蛲虫、绦虫、鞭虫、钩虫、粪圆线虫等，凭借“高效低毒”的药理性成为最主要的驱肠道线虫药物，在全世界范围内被广泛使用[1,2]。
ABZ在人和动物体内通过肝粒酶转化成阿苯达唑砜（ABZSN）和阿苯达唑亚砜（ABZSX）。
ABZSN为主要杀虫成分，可对肠道线虫选择性及不可逆性地抑制寄生虫肠壁细胞胞浆微管系统的聚合，阻断其对多种营养和葡萄糖的摄取吸收，导致虫体内源性糖原耗竭，并抑制延胡索酸还原酶系统，阻止三磷酸腺苷的产生，致使虫体无法生存和繁殖[3~5]。
高效液相色谱—串联质谱法测定牛肉中的十种磺胺类药物残留
Ｋｅ ｒ ｓ ｓ ｌ ｈ ｎ ｍｉ ｅ ；ｅ ｉ ｕ ｌ ｕ ｄ ｃ ｒ ｍａ ｏ ｒ ｐ ｙ—ｔ ｎ ｅ ｍａ ｓ ｓ ｅ ｔ ｍｅ ｅ ； ｅ ｆ ｙ ｗｏ ｄ ： ｕｐ ｏ ａ ｄ ｓ ｒ ｓｄ ｅ； ｑ ｉ ｈ ｏ ｔｇ ａ ｈ ｉ ａ ｄ ｍ ｓ ｐ ｃｒ ｏ ｔｒ ｂ ｅ
粮油 品 技 第１ 卷２１年 第６ 食 科 ９ ０ １ 期
质量控制
高效液 相色谱一 串联质谱法 测定牛 肉中的十种磺 胺类药物残 留
倪永付 ， 王勇 ， 朱莉萍 ， 闰秋 成
（ 济宁出入境检验检疫局技 术中心， 山东 济宁 ２２０ ） ７０ ０
摘 要： 用高效 液相 色谱一 串联 质谱 法 （ Ｃ Ｍ ／ ） Ｌ ／ Ｓ ＭＳ 测定 牛 肉 中残 留的 十种 磺 胺 类 药物 。结 果表
磺 胺 类 药 物 （ｕ ｏａ ｉｅ，Ａ ） 一 类 含有 对 ｓｌｎｍｄｓＳ Ｓ 是 ｆ 氨基苯磺酰胺结 构药物 的总称… ， 具有抗 菌、 抗虫
UPLC-MS
效研究[７－８],而胆酸及其衍生物检测方法主要以动物胆汁和中成药为研究对象,通常有H P L CＧE L S D法[９]㊁H P L CＧC A D法[１０]和H P L CＧM S/M S法[１１].H P L CＧE L S D法专属性强,H P L CＧC A D法定量准确,适用于样品中高含量胆酸定量检测,但色谱法灵敏度低,易出现假阳性问题,不能实现痕量检测.文献[１２]报道了液质联用法测定鸡蛋中的药物残留,却未见鸡蛋中胆酸及其衍生物残留的相关研究.药物残留的前处理方式有液液萃取㊁固相萃取和Q u E C h E R S法等[１３－１５],通过式固相萃取是一种新型样品净化方式,已被广泛应用于食品基质.研究拟以鸡蛋为研究对象,以胆酸(C A)㊁去氧胆酸(D C A)和去氢胆酸(D H C A)为目标物,样品经甲醇提取后,采用P R i M E H L B净化,以建立U P L CＧM S/M S法检测鸡蛋中的胆酸及其衍生物的方法,以期为鸡蛋中胆酸及其衍生物的快速筛查和确证提供依据.１㊀材料与方法１．１㊀材料对照品C A(C A S:８１Ｇ２５Ｇ４)㊁D C A(C A S:８３Ｇ４４Ｇ２)和D H C A(C A S:８３Ｇ４４Ｇ２):含量均＞９８％,上海安谱科学仪器有限公司;P r i M E H L B固相萃取柱:６０m g/３m L,美国W a t e r s 公司;甲醇㊁乙腈㊁甲酸:色谱纯,上海安谱科学仪器有限公司;氨水:分析纯,国药集团化学试剂有限公司;水为超纯水.１．２㊀仪器与设备超高效液相色谱 串联质谱联用仪:V a n q u i s h U P L CＧT S Q Q u a n t i s型,配H E S I,美国T h e r m oS c i e n t i f i c 公司;分析天平:S E C U R A２２５DＧ１C N型,精度为０．０１m g,德国S a r t o r i u s公司;分析天平:M E２０４E型,精度为０．１m g,瑞士M e t t l e r T o l e d o公司;高速冷冻离心机:J X NＧ２６型,美国B e c k m a nC o u l t e r 公司;平行浓缩仪:M６４型,北京莱伯泰科仪器股份有限公司.１．３㊀方法１．３．１㊀标准溶液配制㊀分别精密称取C A㊁D C A和D H C A约１０m g,甲醇溶解并定容至１０m L,混匀,配制成质量浓度为１．０m g/m L的标准储备液,用２０％甲醇 ０．１％氨水溶液(体积分数)稀释为标准系列溶液.１．３．２㊀样品前处理㊀鸡蛋均质后,精密称取２g(精确至０．１m g)至５０m L离心管中,加入１０m L甲醇,振荡提取１５m i n,１００００r/m i n离心３m i n,重复提取１次,合并上清液.取３m L上清液过P r i M E H L B固相萃取柱,取２m L上清液４５ħ氮吹至近干,残渣用１．０m L体积分数为２０％甲醇 ０．１％氨水溶液复溶,过０．２２μm微孔滤膜,供U P L CＧM S/M S测定.１．３．３㊀液相色谱条件及质谱条件优化㊀选取C８和C１８色谱柱(５０mmˑ２．１mm,３．０μm),比较不同色谱柱的分离效果;对比研究不同流动相体系对目标化合物的分离度和响应度,并研究目标化合物的溶剂效应,梯度洗脱程序:０~０．５m i n,８０％A;０．５~１．０m i n,８０％~１０％A;１．０~４．０m i n,１０％A;４．０~４．１m i n,１０％~０％A;４．１~７．０m i n,９０％A;柱温３０ħ;流速０．２m L/m i n;进样体积５μL.在可加热电喷雾离子源(H E S I)下,喷雾电压２５００V;离子传输管温度３５０ħ;鞘气压４．５８L/m i n;辅助气压７．９７L/m i n,反吹气１．５L/m i n,通过标准物质优化胆酸类药物质谱参数.１．３．４㊀方法学研究㊀采用标准添加法,在空白鸡蛋基质中添加适量浓度的胆酸及其衍生物混合标准溶液,经前处理后测定,以胆酸及其衍生物峰面积信噪比S/Nȡ３的最低浓度为检出限,峰面积信噪比S/Nȡ１０的浓度为定量限.在空白鸡蛋中添加３个不同浓度的胆酸及其衍生物混合标准溶液进行回收率试验,每个浓度进行３个样品平行试验,重复３次,计算批间R S D.１．３．５㊀样品测定㊀应用试验建立的方法对市售３０批次鸡蛋样品进行胆酸类药物及其衍生物检测.２㊀结果与分析２．１㊀色谱条件优化选取T h e r m o H y p e r s i l G O L D C８(１００mmˑ２．１mm,３μm)和T h e r m o H y p e r s i l G O L D C１８(１００mmˑ２．１mm,３μm)比较２种不同类型色谱柱对胆酸及其衍生物的响应值和分离效果的影响.结果表明,在以水 甲醇为流动相,梯度洗脱的条件下,C８色谱柱保留能力较C１８色谱柱的弱,T h e r m o H y p e r s i lG O L DC８(１００mmˑ２．１mm,３μm)色谱柱的分离度较差,而T h e r m oH y p e r s i l G O L DC１８(１００mmˑ２．１mm,３μm)色谱柱的峰形较好,分离度高,响应度高,能够实现快速高效检测目的,因此选择T h e r m o H y p e r s i l G O L D C１８(１００mmˑ２．１mm,３μm)色谱柱.当甲醇为有机流动相时,响应度约为乙腈的２倍,因此选择甲醇为有机流动相.当无机流动相为０．１％氨水溶液时,胆酸化合物的响应度约为甲醇 ０．１％甲酸水溶液的１０倍,当无机流动相中氨水浓度逐步增加时,胆酸化合物的响应度逐步减低,因此选择的最佳流动相为甲醇 ０．１％氨水溶液(体积分数)为流动相.试验还比较了甲醇㊁５０％甲醇水溶液 ０．１％氨水溶液(体积分数)㊁２０％甲醇水溶液 ０．１％氨水溶液(体积分数)溶解混合标准溶液的溶剂效应.结果表明,以甲醇为９３|V o l．３９,N o．１２周艳华等:U P L CＧM S/M S检测鸡蛋中胆酸及衍生物溶剂的D H C A出现２个色谱峰,以５０％甲醇 ０．１％氨水溶液(体积分数)为溶剂的C A出现严重拖尾峰,因此选择２０％甲醇 ０．１％氨水溶液(体积分数)为溶剂溶解标准品和复溶溶剂.２．２㊀质谱条件优化分别将１．０μg/m L的C A㊁D C A㊁D H C A标准品溶液经过流动泵直接输入质谱仪,通过相对分子质量进行S I M扫描,切换正负离子扫描模式扫描,结果表明C A㊁D C A和D H C A在E S I－模式下具有最高响应的[MＧH]－准分子离子峰.C A具有类固醇结构,具有１个羧基和３个羟基,D C A和D H C A是由羟基去氢离子或去氧离子形成,在E S I－模式下C A㊁D C A㊁D H C A侧链的羧基脱氢电离为RＧC O O－.分别确定C A㊁D C A㊁D H C A母离子的m/z为４０７．４５,３９１．４５,４０１．３５,通过S R M优化扫描,确定碰撞电压和透镜电压等质谱参数,在最优质谱参数条件下S R M扫描得到多个子离子,选择响应最强的２个子离子作为定量定性依据,得到了优化后的质谱条件.胆酸及其衍生物的质谱检测参数见表１,在最优色谱条件和质谱条件下,胆酸类及其衍生物标准溶液定量离子色谱图如图１所示.表１㊀胆酸类药物质谱参数T a b l e１㊀M S p a r a m e t e r s o f c h o l i c a c i da n a l y t e s 化合物定性离子对定量离子对碰撞电压/e V透镜电压/V C A４０７．４５＞３４３．３７５４０７．４５＞３４３．３７５３３．２２１９１４０７．４５＞２８９．２９２３８．２８１９１D C A３９１．４５＞３４５．３７５３９１．４５＞３４５．３７５３３．０１１８１３９１．４５＞３４３．３７５３８．５７１８１D H C A４０１．３５＞３３１．３２１４０１．３５＞３３１．３２１２３．０４１５９４０１．３５＞２４９．２３８２９．８５１５９图１胆酸类药物及衍生物定量离子质量色谱图F i g u r e１㊀Q u a n t i t a t i v e i o n c h r o m a t o g r a mo f c h o l i c a c i da n a l y t e s２．３㊀前处理条件优化选择乙腈㊁甲醇㊁１％甲酸 乙腈(体积分数)㊁０．１％氨水 乙腈(体积分数)㊁甲醇 乙腈(V甲醇ʒV乙腈为１ʒ１)作为提取剂,比较提取效果.结果表明,上述提取剂提取D H C A时,回收率均符合要求.当以乙腈㊁１％甲酸 乙腈(体积分数)㊁０．１％氨水 乙腈(体积分数)作为提取剂时,C A和D C A回收率ɤ３０％;当以甲醇 乙腈(V甲醇ʒV乙腈为１ʒ１)为提取剂时,C A和D C A回收率ɤ５０％;当以甲醇为提取剂时,C A和D C A回收率符合要求,因此选择甲醇为鸡蛋中胆酸及衍生物的提取剂.鸡蛋基质复杂,含有丰富的蛋白质和脂肪,净化处理可有效提高其检测准确度.试验选用P R i M E H L B固相萃取柱净化提取液,净化后溶液透明清澈,氮吹后无明显干物质,表明除杂明显,净化效果明显.P R i M E H L B固相萃取柱可去除鸡蛋提取液中９５％以上的蛋白和磷脂等基质干扰物,相比传统H L B固相萃取柱,P R i M E H L B固相萃取柱无需活化㊁平衡㊁淋洗等步骤,净化时间由５０m i n缩短至５m i n,大大提高了检验效率.复溶溶剂选择２０％甲醇 ０．１％氨水溶液(体积分数),可有效减少溶剂效应,且不会溶解脂类物质,有效减少了基质干扰.２．４㊀方法学研究２．４．１㊀线性范围㊀分别精密量取混合标准使用液,用２０％甲醇 ０．１％氨水溶液(体积分数)稀释成质量浓度分别为１,２,５,１０,２０,５０n g/m L的混合标准工作液,以特征定量离子质量色谱峰面积为纵坐标,标准溶液质量浓度为横坐标,绘制标准曲线.由表２可知,C A㊁D C A和D H C A在质量浓度为０．２~５００．０n g/m L范围内线性关系良好,R２＞０．９９９.２．４．２㊀检出限和定量限㊀采用标准添加法,在空白鸡蛋基质中添加适量浓度的胆酸及其衍生物混合标准溶液,经前处理后测定,以胆酸及其衍生物峰面积信噪比S/Nȡ３的最低浓度为检出限,峰面积信噪比S/Nȡ１０表２㊀胆酸类药物线性方程及相关系数T a b l e２㊀L i n e a r e q u a t i o na n d c o r r e l a t i o n c o e f f i c i e n to f c h o l i c a c i da n a l y t e s化合物线性范围/(n g m L－１)回归方程R２C A０．２~５００．０Y＝２３９１．５５X－４９０９．９４０．９９９７D C A０．２~５００．０Y＝５２２６．４８X－１２３４３．６０．９９９７D H C A０．２~５００．０Y＝５４７１．２３X－１４２２６．２０．９９９６０４安全与检测S A F E T Y&I N S P E C T I O N总第２６６期|２０２３年１２月|的浓度为定量限.结果表明,C A ㊁D C A 和D H C A 的检出限为１．０μg /k g ,定量限为３．３μg /k g.２．４．３㊀精密度和准确度㊀在空白鸡蛋中添加３个不同浓度的胆酸及其衍生物混合标准溶液进行回收率试验,计算R S D ,结果见表３.由表３可知,C A 为１~１０μg /k g 浓度范围内回收率为９３．７％~９９．１％,R S D 在３．５％~９．２％;D C A 在１~１０μg /k g 浓度范围内回收率为９５．４％~１０２．５％,R S D 为３．４％~６．６％;D H C A 在１~１０μg /k g 浓度范围内回收率为９５．７％~９８．５％,R S D 为１．８％~３．７％;加标回收率和R S D 均符合中国兽药残留检测技术规范要求.表３㊀不同浓度胆酸类药物加标回收率和精密度T a b l e ３㊀A v e r a ge r e c o v e r i e s a n d p r e c i s i o n s of c h o l i c a c i da n a l yt e s (n ＝６)化合物１．０μg /k g回收率/％R S D /％３．０μg /k g回收率/％R S D /％１０．０μg /k g回收率/％R S D /％C A９３．７９．２９８．５６．２９９．１３．５D C A９５．４４．８９７．３６．６１０２．５３．４D H C A９５．７３．７９５．８１．８９８．５２．７２．４．４㊀实际样品测定㊀应用试验建立的方法对市售的３０批次鸡蛋样品进行胆酸类药物及其衍生物的检测,结果表明:鸡蛋中未检出D C A 和D H C A ,２８批次样品中均检出C A ,１５批次样品中C A 含量＜１０．０μg /k g ,最低含量为１．０６μg /k g ,１３批次样品中C A 含量＞１０．０μg /k g ,最高含量为１２８μg /k g.３㊀结论研究建立了U P L C ＧM S /M S 同时测定鸡蛋中胆酸及其衍生物的检测分析方法,该方法前处理简单高效,灵敏度和准确度高,可为鸡蛋中胆酸㊁去氧胆酸和去氢胆酸提供定量定性方法.研究将胆酸及其衍生物的检测范围扩展至鸡蛋基质,通过检测发现不同鸡蛋中胆酸含量存在较大差异,高含量胆酸鸡蛋中胆酸来源是内源性还是饲料添加后残留仍需进一步研究.参考文献[1]JOYCE S A,MACSHARRY J,CASEY P G,et al.Regulation ofhost weight gain and lipid metabolism by bacterial bile acid modification in the gut[J].Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of 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u ,F u ji a n ３５０００８,C h i n a )摘要:目的:设计一种基于计算机视觉技术结合深度学习模型的新方法检测八角粉的掺假情况.方法:采集不同掺假比例八角粉的原始图像,利用预处理和数据增强技术获得图像集合.随后构建S q u e e z e N e t 深度学习模型,并与支持向量机(s u p p o r t v e c t o rm a c h i n e ,S VM )㊁K Ｇ邻近学习(K Ｇn e a r e s t n e i g h b o rl e a r n i n g,K N N )㊁随机森林(r a n d o mf o r e s t ,R F )㊁梯度提升树(g r a d i e n t b o o s t i n g tr e e ,G B T )和多层感知器(m u l t i l a y e r p e r c e p t r o n ,M L P )５种机器学习模型进行比较.结果:５种机器学习模型的最高准确度仅为６６．３７％,而S q u e e z e N e t 模型的准确度为９９．４２％.结论:深度学习分类模型性能相较于传统机器学习分类模型更为优越,识别效果良好且样品无需预处理.关键词:八角;掺伪鉴别;深度学习;视觉技术;S q u e e z e N e t 模型A b s t r a c t :O b je c t i v e :T h i s s t u d y a i m s t o d e s i g n a n o v e l a p p r o a c h ,u t i l i z i n g c o m p u t e r v i s i o n c o m b i n i n g w i t hd e e p l e a r n i n g ,f o r r a pi d d e t e r m i n a t i o nt h ea d u l t e r a t i o ni ns t a ra n i s e p o w d e r ．M e t h o d s :C o l l e c t e d t h eo r i g i n a l i m a g e so fs t a ra n i s e p o w d e rw i t hv a r y i n ga d u l t e r a t i o n r a t i o s ．E m p l o y i n g p r e p r o c e s s i n g a n d d a t a e n h a n c e m e n t t e c h n i q u e s ,a n i m a g e d a t a s e t w a s c u r a t e d ．S ub s e q u e n t l y ,a S q u e e z e N e t m o d e l w a sc o n s t r u c t ed a n d c o m p a re dw i t hf i v e m a c h i n e l e a r n i ng m o d e l s ,i n c l u d i n g S u p p o r t V e c t o rM a chi n e (S VM ),K ＧN e a r e s tN e i g h b o rL e a r n i n g (K N N ),R a n d o m F o r e s t (R F ),G r a d i e n t B o o s t i n g T r e e (G B T ),a n d M u l t i l a y e rP e r c e p t r o n (M L P )．R e s u l t s :T h e h i g h e s ta c c u r a c ya c h i e v e db y t h e f i v em ac h i n e l e a r n i n g m ode l sw a so n l y ６６．３７％,w h i l e t h ea c c u r a c y of t h eS q u e e z e N e t m o d e lw a s９９．４２％．T h e r e s u l t ss h o w e dt h a tS q u e e z e N e t m o d e l w a s b e t t e rt h a nt h e s e m a c h i n e l e a r n i ng m o d e l si ni d e n t i f y i n g th ea d u l t e r a t i o ni ns t a r a n i s e p o w d e r ．C o n c l u s i o n :T h e p r o p o s e dd e t e c t i o n m e t h o db a s e d o n c o m p u t e r v i s i o n c o m b i n i n g w i t h S qu e e z e N e t m o d e l c a n e f f e c t i v e l y i d e n t i f y t h ea d u l t e r a t i o ni ns t a ra n i s e p o w d e r ．T h i s m e t h o d i s e a s y t o o p e r a t e ,a n d p r o v i d e s a n o v e l t e c h n i qu e f o r t h e r a pi dd e t e c t i o no f f o o d a d u l t e r a t i o n ．K e yw o r d s :s t a ra n i s e p o w d e r ;a d u l t e r a t i o ni d e n t i f i c a t i o n ;d e e p l e a r n i n g ;v i s u a l t e c h n o l o g y ;S qu e e z e N e tm o d e l 八角属于五味子科,其果实呈八角星状,盛产于越南东部和中国西南部,被用于多种烹饪过程以改善食材风味.八角所含的莽草酸具有良好的抗病毒作用,是生产抗甲型和乙型流感药物奥司他韦的重要前体物质[１－２].此外,八角还拥有多种具备生物活性的化合物,具有抗菌㊁抗氧化㊁杀虫㊁消炎和祛痰等功效[３－４].目前,针对八角果实掺假的问题已有研究报道,如V e r m a a k 等[５]采用短波红外高光谱成像技术结合化学计量学方法,识别中国八角中含有神经毒性化合物的日本八角,获取了９２０~２５１４n m 范围光谱建立偏最小二乘判别分析(p a r t i a l l e a s ts q u a r e sd i s c r i m i n a n ta n a l y s i s ,P L S ＧD A )模型,该模型对日本八角和中国八角的识别率分别达到９８．４２％和９７．８５％,表明短波红外高光谱成像可有效识别八角果实质量;Z h a n g 等[６]开发了一种基于DN A 条形码方式检测八角等多种香辛料掺假,通过对比纯样品与检测物的I T S ２和p s b A Ｇt r n H 序列的差异性可有效鉴别八角及多种香辛料掺假;S h e n 等[７]通过电离与轨道阱高分辨率质谱检测八角果实和凉茶饮品掺假,该方法无需预处理任何样品即可于短时间内检测八角果实和凉茶饮品中存在的茴香苷,并可检测掺假率低于１％的凉茶２４F O O D &MA C H I N E R Y 第３９卷第１２期总第２６６期|２０２３年１２月|作者简介:胡水英(１９８０ ),女,河南牧业经济学院讲师,硕士.E Ｇm a i l :p i n ga n s h u n l i ３１３６＠１６３．c o m 收稿日期:２０２３Ｇ０３Ｇ１７㊀㊀改回日期:２０２３Ｇ０９Ｇ２６D O I :１０．１３６５２/j ．s p j x ．１００３．５７８８．２０２３．６００５９[文章编号]１００３Ｇ５７８８(２０２３)１２Ｇ００６５Ｇ０５网络直播营销中的食品安全监管问题与治理F o o d s a f e t y m a n a g e m e n t i no n l i n e l i v eb r o a d c a s tm a r k e t i n g胡水英HUS h u i y i n g(河南牧业经济学院工商管理学院,河南郑州㊀４５００００)(C o l l e g e o f B u s i n e s sA d m i n i s t r a t i o no f H e n a nU n i v e r s i t y o f A n i m a lH u s b a n d r ya n dE c o n o m i c s ,Z h e n gz h o u ,H e n a n ４５００００,C h i n a )摘要:采用文献调研㊁案例分析等方法总结了当前网络直播营销市场的发展现状,指出了直播营销市场存在的食品安全问题,分析了直播电商中的食品安全事故案例.针对这些问题,提出应加强直播内容审核㊁加大监管力度㊁疏通消费者投诉渠道和加速相关立法进程等专项治理策略;对网络营销中自制食品可采取孵化器的形式予以辅导㊁支持和投资,促使其向正规化生产转化.关键词:网络直播;电商;食品安全;自制食品;孵化器A b s t r a c t :L i t e r a t u r er e s e a r c h a n d c a s e a n a l ys i s w e r e u s e d t o s u mm a r i z e t h e d e v e l o p m e n t s t a t u s o f o n l i n e l i v e s t r e a m i n g m a r k e t i n g m a r k e t ,a n a l y z et h ec a s e so f f o o ds a f e t y a c c i d e n t s i n l i v e s t r e a m i n g e Ｇc o mm e r c e ,a n d s u mm a r i z e t h e f o o d s a f e t y p r o b l e m si n c u r r e n tl i v e s t r e a m i n g eＧc o mm e r c e ．G o v e r n a n c e s t r a t e g i e sw e r e p r o p o s e d ,s u c h a s s t r e n g t h e n i n gt h e r e v i e wo f l i v e c o n t e n t ,s t r e n g t h e n i n g s u p e r v i s i o n ,u n b l o c k i n g c o n s u m e r c o m p l a i n t c h a n n e l s a n d a c c e l e r a t i n g r e l e v a n t l e g i s l a t i v e p r o c e s s e s ．F o r t h e p r o b l e mo f h o m e m a d e f o o d i nn e t w o r km a r k e t i n g,i t c a n b e c o u n s e l e d ,s u p p o r t e d a n d i n v e s t e d i n t h e f o r mo f a n i n c u b a t o r t o p r o m o t e i t s t r a n s f o r m a t i o n t o f o r m a l p r o d u c t i o n ．K e yw o r d s :w e b c a s t i n g ;e Ｇc o mm e r c e ;f o o d s a f e t y ;h o m e m a d e f o o d ;i n c u b a t o r网络直播营销是一种新兴电子商务模式,其在当前较为成熟的移动互联网技术和自媒体社交环境的支撑下正处于高速发展中.网络直播营销是指一些知名网络主播依靠自身粉丝流量在直播平台售卖商品,将自身流量转化为营销的行为.直播营销具有时间短,内容趣味性强,促销折扣力度大,营销收益变现快等诸多优点[１],深受商家和消费者喜爱,吸引了庞大的用户群体,商业资源不断涌入直播营销市场.中国的直播营销兴起于２０１６年,并在２０１６ ２０２２年经历了 野蛮 式增长.据调查[２],２０２０年中国网络直播电商消费市场规模达到９６１０亿元,预期２０２２年市场规模进一步上升至１５０００亿元左右;２０２１年中国直播电商相关企业注册量为２１７９１家,同比增长２２８．１％,同年中国在线直播用户规模达６．３５亿人,同比增长８．２％,如此庞大且增长迅速的市场规模极为有效地推动了中国经济的发展.但 野蛮 增长的市场势必会带来很多负面问题,如直播过程的虚假宣传问题㊁食品安全问题㊁商品质量问题㊁售后纠纷问题等,当前很多学者也针对这些问题进行了研究,如直播电商中的商品虚假宣传治理[３－４]㊁直播流量造假规制[５－６]㊁假冒伪劣商品治理[７－８]㊁消费者权益保障[９－１０]等.朱辉等[１１－１２]研究了网络直播营销中的食品安全监管难题,提出建立监管责任制度㊁监管与预防并举㊁加强执法强度㊁施行常态化抽检㊁建立信用评价机制㊁发挥群众监督效率等策略.费威等[１３]使用数学模型分析了网络直播食品营销过程中不同品牌商和不同主播之间的契合度,分析如何搭配才能使合作效益最大化.史彦泽等[１４]分析了网络直播营销过程中的消费者购买意愿的影响因素.徐博等[１５－１７]则是对网络直播营销过程中的虚假宣传问题和刑法问题进行了针对性的研究.由此可见,当前的研究问题在于:①大多以电商全品类为研究对象,而对网络直播营销中的食品安全问题的关注较少;②研究集中于消费者的行为和购买意愿㊁存在的问题以及政府监管策略,但网络食品安全涉及整个产业链,仅依靠政府监管是不够的.文章将研究如何融合政府㊁平台㊁商家㊁消费者等各主体进行共同治理.１㊀网络直播营销存在的食品安全问题１．１㊀夸大食品功效和虚假宣传现象明显当前网络直播营销中存在较多的食品虚假宣传问５６F O O D &MA C H I N E R Y 第３９卷第１２期总第２６６期|２０２３年１２月|。
去锌牛胰岛素的制备和鉴定
- - 胰岛素是于 $’!$ 年 由 G.57/5A 和 G$27 发 现 的 一 种 多 肽， 主要功能是用来调节血糖的生理浓 度［ $ ］。由于胰 岛 素 在 治 疗 糖 尿 病 上 有 着 重 要 的 药 用价值， 因此科学家们对它的生物、 化学和结构性质 做了大量的研究
［!］
子从胰岛素中去除， 并且能够很好地分离。
［+， ’］
， 但是
相对于其他不经配 合 的 柱 色 谱 而 言， 此法虽然耗时 较短， 但是 在 操 作 过 程 中 需 要 较 高 的 >J 值 （大约 $"/ % ） ， 而胰岛素在较高的 >J 下容易降 解 备方法。 - - 本文采用了一种非常简便的去除胰岛素中锌离 子的方法。通过使用乙二胺四乙 酸 （ -:,; ） 二钠盐 和凝胶色谱， 能够很 容 易 地 将 锌 离 子 和 其 他 金 属 离
表 # " 凝胶色谱制备得到的各馏分中的锌离子浓度 样品 胰岛素馏分 !"#$ 馏分 苯酚馏分 质量浓度 * （ ! < * &’ ） & 9 ’’. & 9 &)) / ’" & 9 &’! 溶液体积 * &’ ( 9 (* ) 9 !" ’" 9 &" 锌质量 * !< & 9 "! * 9 $) & 9 ’* 锌含量 * > "9 ) +! 9 $ !9 & 图 ! " 去锌胰岛素 （ 图 # 中 * 馏分） 的 "’(&)’ 谱图 两种带电物 质：- ( ［ 胰 岛 素・! =1 - ・! . - ］ ；- $ ［ 胰 岛 素・ ! =1 - ・. - ］ 9
奶牛乳腺上皮细胞系的建立
左右时，少量成纤维细胞开始从组织块周围出现，10d 左右时乳腺上皮细胞开始从组织块周 围生长，单层细胞融合至培养底壁的 90%左右，吸出原有培养液，根据上皮细胞与成纤维 细胞对胰蛋白酶消化敏感性不同，在混合生长的原代或传代细胞培养物中，经过 0.25%胰蛋 白酶的 D-Hanks 液，37℃消化，在倒置显微镜下观察，待成纤维细胞细胞质回缩，细胞间 隙增大，脱离瓶壁时，加培养液终止消化，将酶液倾出，离心后得到的大部分是成纤维细胞。 3~5 次选择传代，弃掉组织块，可得到纯化的乳腺上皮细胞。
奶牛乳腺上皮细胞系的建立
陈建晖，佟慧丽，高学军﹡，李庆章
东北农业大学动物医学院，哈尔滨（150030）
E-mail：chenjianhui_2005@
摘 要：奶牛乳腺上皮细胞系的建立可为转基因动物生产、提高泌乳量提供良好的动物体外 模型。本研究采用组织块接种法，成功地培养了奶牛乳腺上皮细胞。通过对细胞接种存活率、 群体倍增时间、生长曲线、形态学等生物学性状的检测，建立并鉴定了正常培养的奶牛乳腺 上皮细胞系，细胞传至 20 代以上时仍保持旺盛的增殖活力。此外，本研究探讨了胰岛素、 催乳素及孕酮对奶牛乳腺上皮细胞酪蛋白和乳糖分泌能力的影响。 关键词：奶牛；乳腺上皮细胞；细胞系 中图分类号：Q2
检测样品的处理和酪蛋白的一样，HPLC 的检测条件：紫外检测波长，195nm；流动相， 5%的乙腈，流速，恒流 0.6ml/min；进样体积，10µl，其他操作同酪蛋白一样。分别以浓度 为 1mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml 的乳糖标准品进行 HPLC，以乳糖浓度 为横坐标，峰面积为纵坐标作乳糖标准曲线。细胞样品与乳糖标准品采用完全相同的 HPLC 检测条件。
重组蛋白质药物HPLC肽图分析
重组蛋白质药物HPLC肽图分析
重组蛋白质药物是通过生物技术手段，尤其是基因重组技术生产的蛋白质药物。
这类药物具有高度特异性和活性，能够对目标分子产生精确的药理作用。
由于它们是基于生物过程制备的，因此其纯度、稳定性和结构完整性是关键的质量属性。
为确保这些药物的安全性和疗效，对其进行精确、可靠的分析和质量控制是至关重要的。
肽图分析也称肽图指纹分析，是一种标准的蛋白质研究方法，其在蛋白类药物分析中极为重要。
通过肽图分析，明晰酶解后肽段具体分布情况，这对于蛋白类药物的深入研究也具有重要意义。
此外，肽图分析非常适合验证序列和识别序列变异，如点突变。
HPLC肽图分析是一种用于分析和表征重组蛋白质药物的关键技术。
它利用高效液
相色谱（HPLC）来分离蛋白质的肽段，从而为我们提供有关蛋白质的氨基酸序列、修饰和结构的重要信息。
通过肽图分析，可以确保蛋白质药物在生产过程中的一致性和稳定性，同时也有助于确认产品是否受到污染或降解。
生物制品表征HPLC肽图分析示意图。
百泰派克生物科技（BTP），采用CNAS和ISO9001双重认证质量控制体系管理实验室，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务。
我们基于公司自有的高效
液相色谱仪和液质联用仪，建立了HPLC肽图和HPLC质量肽图分析平台，可以为您提供直接的HPLC肽图/HPLC质量肽图分析服务和完整的方法学建立&验证&转让服务。
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百泰派克生物科技重组蛋白质药物表征内容。
液相色谱_串联质谱法测定牛奶中5种多肽类抗生素_刘佳佳
5． 35
5． 70
15． 05
20． 34
去簇电压 Declustering
potential （ V） 146 146
120 120
115 115
152 152
180 180
碰撞能量 Collision energy
（ eV）
21 17
17 16
17 15
62 40
25 30
图 1 5 种多肽类抗生素的二级质谱图 Fig． 1 Product ion spectra of five peptides antibiotics
a． 维吉尼霉素（ Virginiamycin） ； b． 杆菌肽 A（ Bacitracin A） ； c． 万古霉素（ Vancomycin） ； d． 粘菌素 A（ Colistin A） ； e． 粘菌素 B （ Colistin B） 。
关键词 液相色谱-串联质谱； 牛奶； 多肽； 残留
1引言
多肽类抗生素是由不同类型的氨基酸缩合而成的小分子肽类，主要用于促进动物生长及治疗畜禽 疾病。目前，多肽类抗生素被广泛用于家禽、猪、牛等饲料添加剂和兽药［1 ～ 3］。常用的多肽类抗生素包 括粘杆菌素、杆菌肽、维吉尼霉素及万古霉素等［4，5］。然而，随着多肽类抗生素的广泛使用，滥用及不遵 守休药期等现象时有发生。药物将可能通过食物链的传递进入人体，危害人体健康。如果长期暴露，还 会增加细菌的抗药性［6］，具有潜在的健康风险和生态风险。
［M + nH］n + 离子作为母离子进入二级质谱后发生断裂或重排等反应产生不同碎片离子。如图 1a 所示，［M + H］+ 作为维吉尼霉素的母离子产生有显著丰度的 m / z 337． 2 及 355． 0 离子碎片，其中 m / z 337． 2 丰度最高，作为定量离子。［M + 2H］2 + 作为杆菌肽 A 的母离子产生有显著丰度的 m / z 199． 2， 253． 4，356． 2 等子离子，选择丰度最大的 m / z 356． 2 作为定量离子。其断裂的机理如图 1b 所示。与之
重组蛋白药物C末端不同长度氨基酸序列的质谱分析_李萍
★论著★重组蛋白药物C末端不同长度氨基酸序列的质谱分析*李萍，赵永强，薛燕，刘锋，刘炳玉，何昆，王红霞（国家生物医学分析中心，北京100850）摘要目的：基于本实验室已建立的溴化氰裂解蛋白质C末端方法结合优化后的质谱检测技术，对C末端长度分别为2 37个氨基酸，相对分子质量在200 5000的8个重组蛋白药物进行检测。
方法：（1）针对重组蛋白药物的不同状态（SDS－PAGE、干粉或溶液）分别进行C末端胶内或溶液裂解；（2）质谱检测，正离子方式，雾化气为氮气，碰撞气体为氩气。
源温80ħ，锥孔电压50V，MCP检测器电压为2.15kV。
结果：8个重组蛋白药物的C末端全部成功检测出，且基本为基峰。
结论：建立的重组蛋白药物C末端测序联用方法应用于实际药物的检测具有很高的实用价值和学术意义。
关键词：溴化氰裂解；ESI－MS/MS质谱技术；C末端测序中图分类号：R917文献标识码：A文章编号：0254－1793（2011）06－1003－05Mass spectrometry analysis of recombinant protein drugswith C－terminal amino acid sequence of different lengths*LI Ping，ZHAO Yong－qiang，XUE Yan，LIU Feng，LIU Bing－yu，HE Kun，WANG Hong－xia（National Center of Biomedical Analysis，Beijing100850，China）Abstract Objective：Based on the method established by cyanogen bromide cleavage of proteins C－terminal com-bined with the optimized mass spectrometry in our laboratory，detection of C－terminal lengths of2to37amino acids，relative molecular mass200－5000of the8recombinant protein drugs．Methods：（1）For different states of recombinant protein drugs（SDS－PAGE，dry powder or solution）to C terminal cleavage in gel or solution，respec-tively．（2）Mass spectrometry detection，positive ion mode，atomization gas was nitrogen，collision gas was argon，source temperature80ħ，cone voltage50V，MCP detector voltage of2.15kV．Results：All of C－terminal of the8 recombinant protein drugs successfully detected as the base peak．Conclusions：The established C－terminal se-quencing method of the recombinant protein was applied to the actual drugs testing，have high practical value and academic significance．Key words：cyanogen bromide cleavage；ESI－MS/MS technique；C－terminal sequenceing随着基因工程和重组蛋白药物工程的发展，越来越多的重组蛋白药物不断研发并走向市场。
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conten t and b iolog ical activ ity betw een dep rotein ized calf serum in jec t ion and dep rotein ized calf b lood in jection( 小牛血去蛋白注射液与
摘要 目的: 考察国产小牛血去蛋白注射液及小牛血清 去蛋白提 取物注 射液中 的小分 子肽并 与进口 小牛血清 去蛋白 提取物
注射液进行比较, 从而为进一步修订该药品的国家标准提供依据。方法: 分别采用反相高效液相色谱 ( RP - H PLC )、毛细管区
带电泳 ( CZE) 、液质联用 ( LC /M S)对国内外公司的小牛血及小牛 血清去蛋白提取物 注射液的 特征图谱进 行研究。结果: 国内
Study on specific chrom atogram of deproteinized calf blood injection and deproteinized calf serum injection
REN L i- ping1, YU W ei- jun2, L IAO H ai- m ing1, XU K ang- sen1
小牛血及小牛血清去蛋白提取物注射液是将新 生几个月以内的小牛血及小牛血清, 用膜过滤技术 制成相对分子质量小于 6000的去蛋白血液提取物。 该去蛋白质血液提取物含 70% 无机物质, 如电解质 和微量的必需元素; 以及 30% 有机物质, 如寡糖、核 酸衍生物、氨基酸、低分子多肽、糖脂类及糖和类脂 代谢的中间产物等。该注射液通过促进细胞对葡萄 糖的摄取和利用 ( 不依赖于胰岛素 ) 增加细胞对氧 的摄入和利用, 从而使三磷酸腺苷 ( AT P) 生成增加, 使细胞能量提高, 在机能缺陷、代谢受抑制的情况下 和能量需求增加时, 在细胞水平促进细胞能量代谢、 改善细胞功能, 从而使血流供应增加 [ 1] 。
( 1 N at iona l Ins titu te for th e C ontro l of Pharm aceut ical and B iological P roducts, Bei jing 0, Ch ina; 2 College of C hem istry and Chem ical Eng ineering, D onghu aU n ivers ity, Shangha,i 201620 Ch in a)
2 10
药 物分析杂志 Ch in J Pharm Ana l 2009, 29( 2)
- M 10A vp; 岛津 LC /M S2010A 型 单级 四极杆 质谱 仪, LC /M S So lution3 20操 作软件。毛细管 区带电 泳系统: B eckm an P /ACE 5000 型, B eckm an P /ACE station 操作 软件 。
多肽类化合物广泛存在于自然界中, 其中对具 有一定生物学活性的多肽的研究, 一直是药物开发 的一个主 要方向 [ 2] 。本文对 小牛血及小牛 血清去 蛋白提取物注射液中的多种组分进行了研究, 分别 采用反相高效液相、毛细管区带电泳以及液质联用 法对国内不同企业的样品以及进口药品爱维治进行 比较研究, 为修订该品种的国家标准提供试验依据。 1 仪器与试剂
L 于液相色谱仪中, 按 2 1 项下条件分析, 记录 H PLC特征色谱图。爱维治与国内 5家产品的结果 比较见图 1。由图 1 可以看出, 各公司的产品所含 组分基本相同; 爱维治的液相色谱图中有的组分含 量较国内产品要高; 国内产品 A、C 的特征图谱与爱 维治的最为一致。此外, 我们通过对比爱维治和国 内产品 C 的特征图谱可以发现, 国内产品 C 中组分 X和 Y 的含量较高。 2 5 质谱图分析 利用 LC /M S技术, 可以对液相 色谱分离后得到的色谱峰进行质谱 定性分析 [ 3, 4 ] 。
Abstract Ob jective: T o investiga te the qualities of deproteinized calf blood in ject ion and deproteinized calf serum in ject ion, and to com pare them w ith actoveg in so as to prov ide the basic inform ation for the nat iona l spec ification. M ethod: Sam p le products w ere analyzed by RP - H PLC, CZE, and LC /M S. R esu lts: D ifferent products con tain dif ferent kinds of ingred ients in sam ple tes.t To com pare w ith actoveg in, local products have less k ind of ing redients. D ifferent products vary w ith each other in conten.t Conclusion: These m ethods are suitable for the quality contro l o f the drug. K ey w ord s: deprote in ized ca lf blood injection; deproteinized ca lf serum injection; CZE; LC /M S
CZE 的条件包括缓冲液种类、缓冲液 pH、毛细 管柱、运行电压等 [ 5, 6] 。本实验取 pH 2 5, 运行电压 18 kV的条件下各组分获得良好的分离度。爱维治 与国内 5家产品的 CZE 特征图谱结果比较见图 4。 从中可以看出, 爱维治所含的组分比国内产品要多, 且含量也较高; 国内产品 A 的特征图谱与爱维治最 为接近, 这与 HPLC 特征图谱比较结果一致。 3 讨论 3 1 小牛血和小牛血清去蛋白提取物注射液作为 多组分的生化注射剂, 除了一些常规的质控项目外, 应该研究更合适的方法来控制产品的主要成分。本 试验在国内率 先应用 H PLC、CZE 技术对 国内外 6 家产品进行了特征图谱对比研究, 并使用质谱技术 对 LC 组分进行了分析, 得到了初 步的相对分子质 量信息。 3 2 考虑到产品中各组分的分离度和 H PLC 仪较
产品含有的组分种类少于进口 产品, 不同产品的组分含量有差别。结论: 本文所用 的方法可 用于小牛血 及小牛血清 去蛋白注
射液的质量对比及控 制。
关键词: 小牛血去蛋白提取物注射液; 小牛血清去蛋白提取物注射液; 毛细管区带电 泳; 液质联用
中图分类号: R 917
文献标识码: A
文章编号: 0254- 1793( 2009) 02- 0209- 03
药 物分析杂志 Ch in J Pharm Ana l 2009, 29( 2)
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采用 HPLC、CZE、LC /M S法对国内外小牛血及 小牛血清去蛋白注射液的特征图谱分析
任丽萍 1, 虞惟俊 2, 廖海明1, 徐康森1
( 1 中国药品生物制品检定所, 北京 100050; 2 东华大学化工学院, 上海 201620)
对爱维治和 5 个国内产品进行 LC /M S分析。图 3 - A~ G分别表示经过液相色谱分离后的组分 1~ 7 的准分子离子峰, 其质 荷比 ( m /z ) 分别 为 475 45,
362 3, 453 45, 566 50, 679 50, 792 65, 510 30。在 H PLC 指纹图谱中 国内产品 C 较爱 维治高的 组分 X、Y 因未能离子化所以未能得到准分子离子峰。 2 6 CZE 指纹图谱分析
CZE仪的普及度, H PLC 指纹图谱较 CZE 指纹图谱 更适用于国家标准。 3 3 本试验发现, 国内产品 A 在 HPLC 和 CZE 特 征图谱都与爱维治最为一致。结合呼吸活性试验结 果, 除国内产品 A 活性较高 外, 与国内其余产品相 比, 所测的 3批爱维治样品均具有较高活性, 且批间 活性较稳定, 这与特征图谱分析结果也是一致的。 3 4 小牛血及小牛血清提取物注射液组分分离及 所含组分的结构确证是当前一大难题, 有待进一步 研究。
L- 1磷酸二氢钠水溶液 ( pH 2 5 ); 熔凝石英毛细 管柱 75 m 57 cm, 有效长度 50 cm。每次进样前 依次用 0 1 m o l L- 1氢氧化钠溶液、电极缓冲液清 洗毛细管 5 m in; 3 447 kPa 进样 5 s, 进样完毕后再 进 5 s电极缓冲液; 运行电压 18 kV; 检 测波长 214 nm; 柱温 25 。 2 4 HPLC 特征图谱分析 样品过滤后分别进样 5
爱维治 3批, 国内 5家同类产品各 1批 (国内其 中 1家为小牛血清去蛋白提取物注射液 ) 。乙腈为 色谱纯, 磷酸二氢钠、磷酸、氢氧化钠均为分析纯, 试 验用水为二次蒸馏水。 2 方法与结果 2 1 色谱条件 色谱柱: 岛津 V P - OD S C18 ( 200
mm 4 6 mm, 5 m ); 流动相 A: 水 - 乙腈 ( 93 7) , 流动相 B: 乙腈 - 水 ( 4 1); 二元梯度 洗脱 ( 0 ~ 40 m in, 流动相 B的浓度 0 100% ; 40~ 50 m in, 流动相 B的浓度 100% 100% ; 50~ 51 m in, 流动相 B 的浓 度 100% 0; 51~ 65 m in, 流动相 B 的浓度 0 0) ; 检测波长 214 nm; 流速为 0 3 mL m in- 1; 柱温 38
药 物分析杂志 Ch in J Pharm Ana l 2009, 29( 2)
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