武警总医院戒烟门诊开诊

l
胶 体金
检 测试 剂 盒 (胶 体 金 法 )
：
以
柠檬
用固体斜培养基 微 需 氧 (5％
)37 C 培养
0
，
溶液 在 磁 力 搅 拌 下 缓 缓 加 入 尿 素 酶
，
酸 三 钠 还 原 法 制 备 胶 体 金 溶 液 组 装胶 体
72
小 时收集菌
pbs
加 入 牛 血 清 白蛋 白增 加 胶 体
，
金 免 疫 层 析 快 速 诊 断试 纸 条
、
。
厌 氧培养罐 A n a e r
。
-
标记 好 的免 疫 胶 体 金 纯 化 处 理 的 目
的 是 除 去 其 中未 标 记 的 蛋 白 质 未 充分 标
、
P a c k R e c ta
’
n
gu la r Ja
r
当 比 例 组 合 后 均 匀 浸 于 玻璃 纤 维 素 膜 室
，
实 验方 法 ：① 玻 璃 器 皿 的 清 洁 ：制 备
胶 幽 门螺杆菌尿 素酶抗体检测 试 剂盒 的 生产 【 体 金 法 )
后 使 用 划 膜仪 均 匀 喷 于 同样 大小 的 玻璃
，
结
果
白月 辉
02 8000
纤 维 素 膜 制成 金 标 垫
。
保存液稀 释胶 体
，
胶 体 金 颗 粒 制 备 ：我们 实验 所 用 柠檬 酸 还 原法 制 备 的 胶体 金 溶 液 呈 亮 红 色 金
．
0
．
1m
o
l ／L
的碳酸钾 溶 液 调 节 胶 体 金 溶 液
5 9
． ～
社
。
，
19 9 7
：
322
．
的 pH 至
6 2
．
，
取
5
个 洁净 锥 形 瓶 分
装胶体 金 溶 液
释后 ( 由 2
～
。
将 待 标 记 蛋 白质 逐 级 稀
另设 对 照 管 ) 各 取 等
，
1 0 斗g
一
体 积顺 序加 人
，
系列 装 有 胶 体 金 的 锥 形
， ，
。
⑦全 菌
0
10 ％
胶 体 金 标 记 复合物 的制 备 与 纯 化 ：将
Ig G 抗
体 的 幽 门 螺 杆 菌尿 素 酶 抗 体
。
超声 粉 碎 抗 原 的 制 备
C O： 8 5 ％ N 2
、
…
：
幽 门螺 杆 菌 采
：
、
胶 体金 溶 液
(2 m
g ／m 1 )
pH
值调 至
8 0 200
．
，
m
5 30
n m
：
~ 。
⑤胶 体 金 标
以
处
OD
值
，
4 C
避 光保存
保存液作对照测 ⑥金标
。
垫 的 制 备 ：纯 化 的 胶 体 金 不 同 程 度 稀 释
中国社 区医师
医 学专 业
2 0 10
年 2 月上 期 ( 第 1 2 卷 总 第 2 2 0 期 ) 1 1 1
为 血 清 学诊 断 阴 性 ；出现
，
条红 色 ( 样品
。
为 血 清 学诊 断 阳 性
。
H p y lo
．
r
抗原室温融化后
，
，
1 5 0 0 0 r ／分
，
和 对 照 ) 沉 淀 线 为 血 清学 诊 断 阳性 讨 论
关键 词
do i
02
．
幽 门螺杆菌
39 69 ／ j
．
胶 体金
10 0 7
—
心 10 分 取 上 清 2 m g ／m l 用 划 膜 仪 d i s
瓶 中 混匀 ； 胶 体 金 复合 物 的纯 化 ：超 速 ④
离心 法 纯 化 免 疫 胶 体 金 复 合 物
15 0 0 0 r p
m
。
先以
，
离心
60
分(4
~
C
) 弃上 清 用保
，
存液悬 起较 疏 松 的 红 色沉 积 物 ；即 为初 步
纯 化 的 免疫 胶 体 金 复 合 物
记蛋 白质 的 检 定
4 C
~
密封 保 存
⑨样 品
、
于 电 镜 流 式 细 胞 仪 免 疫 印 迹 蛋 白染
柠檬 酸 三 钠 牛 血 清 白蛋 白 聚 乙 二 醇 以
上试剂均 为分析纯
o
。
垫 的处 理 ：选 择 适 当 的 封 闭 试 剂 表 面 活 性 剂 和 ( 或 ) 非离 子 型 去 污 剂单 独 或 以 适
色 体外 诊 断 制剂 的 制造等 领 域
350
，
90 Hz
次数 为
~
，
受检 血
超 声 粉 碎 呈 均 匀 细 颗 粒 状 ；4 C
，
临 床 血 清标本
H py lo r
．
抗 体 I g G 检测
清 中抗
l
清抗 体
Is G 胶
，
体 金 法 中 出现
1 5 0 0 0 r ／分
离心
60
分 收 集 上 清 ；上 清 测
，
一
结 果 ：受检 血 清 中抗
，
浸 有胶 体金 标 记 复合 物 的金 标 垫 ； 而整 个 试
色最 终变为亮 红 色 颜 色稳 定 后 继 续加 热
，
纸条贴附于 双 面胶 白色塑 料背板 临 床血 清 标 本 条样 品 区
观 察终 止
15 H
．
。
3
分钟 室 温 冷 却 补 充 失 水 至 原 体 积
， ，
。
p yl
o r
抗 体 I gG 检
以此
。
结 果 ：用 柠
。
体
。
H p y lo f i
．
菌体 用 小 体 积
80
—
悬浮 冰
，
金 溶 液 的 稳 定 性 金 颗粒 表 面 会 吸 附有 牛
血 清 白蛋 白
。
檬 酸 还 原 法 制 备 的 胶 体 金 溶 液 呈 亮红 色 试 纸 条 检 测 临 床 血 清标 本
Hp 血
。
浴 条件 下 超 声 粉碎频 率
x
．
：1
0
．
is
s n
．
6 14
2 0 10
．
pe
n s e r
线形 包 被 于 硝 酸 纤 维 素 膜 的 观 察
，
，
】6 4
结 果 的测 试 反 应 区 定 义 为 检 测 带 ( T )
距 离 检 测带 5 m
m
胶 体金 标 记 技 术 是 以 胶 体 金 作 为 示 踪标 志 物或 显 色剂 应 用 于 抗 原 抗 体 反 应
。
根 据胶 体 金 颗 粒 大 小 不
，
MQ 超纯
位 ( 吸 水滤纸 ：吸收检 测 样 品 中多 余 液体 )
，
同和 所标 记 蛋 白质 的 特性 不 同 选 择 并 调
整 离心 转速 和 离 心 时 间 可 以 达 到 纯 化 目的
。
一
水 冲洗 晾干 备 用
取
2％
，
。
② 胶 体 金 颗粒 的 制备 ：
Hp
血 清 抗 体 I gG 胶
，
条 红 色( 对 照 ) 沉 淀 线 为 血 清 学诊 断 阴
，
蛋 白浓 度 后 分 装 于
，
4 C
~
保存
。
⑧
离
．
体金 法 中 出 现
1
条红 色 ( 对 照 ) 沉淀线
2
性 ；出现 2 条 红 色 ( 样 品 和 对 照 ) 沉 淀 线
H pylo f i
．
配 体 固 相 硝 酸 纤 维 素膜 的 制 备 ：
，
内蒙 古 通 辽 职 业 学 院 药 学 院
目的
：
金 标记 S P A 复 合 物 原 液 至 工 作 浓 度 按
比例 均 匀 浸 于 玻 璃 纤 维 素 膜
一
，
20 ℃
冻
颗 粒 大小 基 本
一
致 分布 均匀 圆形
，
，
。
摘
i py lo f
要
建立
一
种快速检 测抗
方法
，
H．
存 冷 冻真 空 干 燥 后 密 封 保 存
5m l
，
中段为 实验反应 区 ( 硝酸纤 维 素膜 ：包括判
般的
氯金 酸溶液
，
加
10 0 0
m
l
超纯
读结果 的检测 带 T 和 指 示试 纸 条 质量 的质
控带
C ) 下段 为样 品 区 ( 玻璃 纤维 素膜 ：接
，
如 有 需 要 可 将 上 述 初 步纯 化
10 ％
一
水 加热沸腾后 取
17 5
．
，
远 的 质控 带 ( C ) 用 d i s
Ig G
．
材 料 与方 法
pe
、 、
n s e r
线形 包 被 正 常兔
2
( 2 新 型 免疫 标 记 技术 现 在 已 成 功 用
， 、 、
、
实 验 材 料 ：幽 门螺 杆 菌 菌种 氯 金 酸
、 、 ，
37 ℃
干燥
小时
，
20
参考 文 献
1
③ 免 疫 胶 体金 复 合 物 的制备 ： 目测 法 确 定
胶体 金 与 待 标 记 蛋 白 质 用 量 比 例 用
，
测 ：取 消 化 门诊就 诊 的临 床 血 清 加 于 试 纸
，
陈敏章 胡伏莲 周 殿 元 等 幽 门 螺杆 菌感
， ，
，
．
分 左 右 开 始 观 察结 果
，
分
染 的 基 础 与 临床 北 京 ： 中 国 科学 技 术 出 版
，
温 干 燥备 用
。
⑩试 纸 条 组 装 ：根 据 功 能 不
记 的胶 体 金 以 及 在 标 记 过 程 中 可 能 形 成
胶体 金 的所 用 容 器 均 应 反 复 清洗 并 硅 化
处 理 玻璃 容 器 的 内表 面 最 后 用
，
同可 将试纸 条分为 四 个部分 ：上 段 为手 持部
的各 种 聚 合 物
1％
柠檬酸三 钠
免疫胶 体金 用
步纯化
30 ％
蔗糖 或 甘 油 溶
一
m
l
一
次性 迅 速 加入 煮 沸 的 氯 金 酸 溶
触待检测样 品 ) 在 中下 段 之 间 ( C 区 ) 放 置
，
液做 密 度 梯 度 离 心 或 用 凝 胶 过 滤 法 进
。
液 中 继 续加 热 至 溶 液 由淡 黄色转 为 蓝 黑