异丙酚预处理对HK-2细胞缺氧复氧损伤后水通道蛋白-1表达的影响
异丙酚后处理对大鼠脑外伤后AQP-4表达及神经元凋亡的影响
异丙酚后处理对大鼠脑外伤后AQP-4表达及神经元凋亡的影响谭海玲;宋建防;冀翔宇;周赞宫【期刊名称】《青岛大学医学院学报》【年(卷),期】2017(53)3【摘要】目的观察异丙酚对大鼠脑外伤后水通道蛋白-4(AQP-4)表达及神经元凋亡的影响,探讨异丙酚减轻脑外伤的作用机制。
方法健康雄性Wistar大鼠150只,随机分为对照组和异丙酚组,每组75只大鼠。
按Feeney方法建立自由落体脑损伤大鼠模型,异丙酚组大鼠致伤后1h后经尾静脉注入10g/L异丙酚10 mg/kg后,以微量泵按30mg/(kg·h)持续输注异丙酚2h。
对照组致伤后1h经尾静脉注射同体积生理盐水后,以微量泵持续输注同体积生理盐水2h。
两组分别在伤后6、12、24、48和72h随机各处死5只大鼠,应用干湿质量法测定大鼠大脑半球含水量。
剩余的50只大鼠在每个时间点随机抽取10只大鼠经心脏灌注后取脑组织制作石蜡切片,苏木精-伊红(HE)染色观察脑组织损伤情况及周边区神经元形态变化,采用TUNEL法检测脑组织中凋亡神经元数以及AQP-4阳性细胞数。
结果异丙酚组各时间点脑含水量较对照组明显下降(F=4.12~6.25,P<0.05)。
对照组大鼠脑组织切片HE染色显示,创伤区可以见到细胞间以及血管周围间隙增大,伴有神经胶质细胞和神经元崩解、坏死;在损伤相邻区域的神经元细胞体和血管内皮细胞肿胀,局部可见到红细胞渗出和炎性细胞聚集。
异丙酚组相应区域上述病理学改变明显减轻,与对照组比较,坏死及凋亡细胞明显减少。
异丙酚组相应时间点AQP-4阳性细胞数及凋亡神经元数与对照组比较,明显减少(F=4.02~9.56,P<0.05),其中AQP-4阳性细胞数伤后12、24h时减少更为明显(P<0.05),凋亡神经元伤后24、48h减少最为明显(P<0.05)。
结论异丙酚可减少大鼠脑外伤后AQP-4的表达及神经元的凋亡,减轻脑损伤。
异丙酚对过氧化氢导致PC12细胞损伤的影响及机制
异丙酚对过氧化氢导致PC12细胞损伤的影响及机制赵亮;乔海灵;刘胜群【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2011(51)35【摘要】目的探讨异丙酚对过氧化氢( H2 O2)导致的PC12细胞损伤的影响及机制.方法以H2 O2损伤PC12细胞作为氧化应激细胞损伤模型,加入10 μmol/L 的异丙酚,采用MTT法分析细胞存活率,Hoechst33258染色检测细胞核形态变化,罗丹明123染色检测细胞线粒体膜电位变化,双氯荧光黄乙酸乙酯(DCF-DA)染色检测细胞内活性氧(ROS)的含量,免疫印迹法检测pAkt蛋白表达；在此基础上,探讨异丙酚保护作用机制时再加入LY294002,分别检测细胞上述指标及pAkt的表达.结果 H2 O2可致PC12细胞存活率下降,凋亡增加,异丙酚(10 μmol/L)可使PC12细胞的存活率增加,凋亡率降低；异丙酚可抑制H2 O2导致ROS和膜电位变化；增加Akt磷酸化水平；PI3K抑制剂LY294002可拮抗异丙酚的保护作用,使细胞存活率降低、ROS生成增加、膜电位下降.结论异丙酚可减轻H2 O2导致的PC12细胞损伤,这一作用是通过激活PI3K/Akt通路实现的.【总页数】3页(P41-43)【作者】赵亮;乔海灵;刘胜群【作者单位】郑州大学临床药理研究所,郑州450000;河南省人民医院;郑州大学临床药理研究所,郑州450000;河南省人民医院【正文语种】中文【中图分类】R971【相关文献】1.清心开窍方含药脑脊液对过氧化氢所致PC12细胞损伤的保护机制研究 [J], 崔志慧;胡海燕;陈翔;王文花2.L-肌肽对过氧化氢诱导PC12细胞损伤的保护机制 [J], 董晓丽;刘京升;金戈;明海霞;李海龙3.松果菊苷对过氧化氢损伤的PC12细胞的保护作用及机制研究 [J], 匡荣;孙意国;邓同乐;郑筱祥4.茶多酚对过氧化氢损伤PC12细胞活性氧簇的影响 [J], 邓凤君;肖凌;杨吟宇;李新才5.DHF对过氧化氢损伤PC12细胞的保护作用及机制 [J], 庞秀萍;孔繁慧;宋妤;卢畅;蒋一鸣;韩晓华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
异丙酚抑制内质网应激减轻脂多糖诱导人肝细胞损伤的机制研究
异丙酚抑制内质网应激减轻脂多糖诱导人肝细胞损伤的机制研究宋云飞作者单位：辽宁中医药大学附属医院药学部，辽宁沈阳110032摘要：目的探讨异丙酚（PPF ）对脂多糖（LPS ）诱导人正常肝细胞L -02损伤的保护作用。
方法用不同浓度的LPS 来制备人肝细胞损伤模型，将人正常肝细胞L -02按随机数字表法分为五组：正常组、LPS 组、LPS+25、50µmol/L PPF 组以及LPS+4mmol/L 4-苯基丁酸（PBA ）组。
四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT 法）检测L -02细胞的存活率，酶联免疫吸附测定（ELISA ）测定各组细胞上清中丙氨酸氨基转移酶（ALT ）和天冬氨酸氨基转移酶（AST ）的活性。
实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qRT -PCR ）检测各组细胞中炎性因子白细胞介素（IL ）-1β、IL -6和肿瘤坏死因子α（TNF -α）mRNA 的表达；蛋白质印迹法（Western blotting ）检测各组细胞中核因子-κB （NF -κB ）p65、NF -κB 、p -肌醇依赖酶1α（IRE1α）、IRE1α和激活转录因子6（ATF -6）蛋白的表达。
结果用不同浓度的LPS 处理的人肝细胞存活能力显著降低，且LPS 致人肝细胞损伤的最佳造模条件为20mg/L 孵育24h 。
与正常组比较，LPS 组的人肝细胞存活能力显著降低，细胞数量减少且核固缩；细胞上清中ALT 和AST 的释放量分别增加［（69.17±5.51）mg/L 和（50.23±5.81）mg/L 比（19.78±1.79）mg/L 和（9.79±0.96）mg/L ，P <0.05］；IL -1β、IL -6和TNF -αmRNA 表达显著升高；NF -κB p65表达量明显增强，且内质网应激相关蛋白p -IRE1α/IRE1α和ATF -6的表达显著增高［（2.24±0.28）和（2.55±0.16）比（1.00±0.17）和（1.00±0.26），P <0.05］。
右美托咪定通过SIRT3去乙酰化TFAM对HK-2细胞缺血再灌注损伤的影响
右美托咪定通过SIRT3去乙酰化TFAM对HK-2细胞缺血再灌注损伤的影响胡晨;刘玉丽【期刊名称】《医学理论与实践》【年(卷),期】2024(37)1【摘要】目的:探讨右美托咪定(Dex)通过沉默信息调节因子2相关酶3(SIRT3)去乙酰化线粒体转录因子A(TFAM)对肾小管上皮细胞(HK-2)缺血再灌注损伤(IRI)的影响。
方法:人HK-2细胞株分为对照组、缺血再灌注(I/R)组、Dex组、SIRT3抑制剂(3-TYP)组及Dex+3-TYP组。
除对照组外,其余各组均制备I/R模型,Dex组、3-TYP组及Dex+3-TYP组分别在I/R制备前分别给予Dex、3-TYP及Dex+3-TYP处理;I/R组及对照组在建模前加入等量生理盐水处理。
观察各组细胞培养24h、48h的活性,检测细胞炎症因子[白介素细胞6(IL-6)、IL-8、IL-10]水平。
提取线粒体,检测活性氧(ROS)、线粒体膜电位(MMP)、线粒体通透性转换孔(mPTP)开放程度及线粒体DNA(mtDNA)数量。
免疫共沉淀(Co-IP)验证SIRT3与TFAM是否相互作用。
结果:I/R模型建立后,IL-6、IL-8、ROS水平及TFAM乙酰化水平均升高,细胞活力(24/48h的OD值)、IL-10、MMP、mPTP、mtDNA水平及SIRT3表达均下降(P<0.05);I/R模型经3-TYP干预后上述变化加重(P<0.05);Dex干预I/R模型后,细胞活力增加,IL-10、MMP、mPTP、mtDNA水平及SIRT3表达均升高,IL-6、IL-8、ROS水平及TFAM乙酰化水平均下降(P<0.05);3-TYP与Dex共干预后Dex作用减弱(P<0.05);Co-IP验证结果显示SIRT3与TFAM均被沉淀,二者存在相互作用。
结论:SIRT3去乙酰化TFAM参与Dex减轻HK-2细胞缺血再灌注损伤的过程。
23KDALR对高糖作用下的HK-2细胞脂肪酸β氧化相关因子表达的影响演示课件
通过实时荧光定量PCR和 Western blot技术检测各 组细胞中脂肪酸β氧化关键 酶（如CPT1、ACOX1等） 的mRNA和蛋白表达水平 。
检测各组细胞的葡萄糖消 耗、脂肪酸氧化速率、细 胞内脂肪酸含量等指标， 评估细胞功能状态。
对实验数据进行统计分析 ，比较各组之间的差异， 并探讨23KDALR表达与脂 肪酸β氧化相关因子表达及 细胞功能之间的关系。
抑制炎症反应
23KDALR能够抑制高糖诱导的HK-2细胞炎症反应，减轻 炎症对细胞的损伤作用。
03
脂肪酸β氧化相关因子表达分析
脂肪酸β氧化相关因子的种类和功能
01
CPT1
将长链脂肪酸从胞质转运至线粒 体进行β氧化。
02
03
ACOX1
HADH
催化脂肪酸进行β氧化的第一步 反应，生成烯脂酰CoA。
参与脂肪酸β氧化的最后一步反 应，将3-羟基脂酰CoA裂解为乙 酰CoA和少两个碳原子的脂酰 CoA。
05
结论与展望
研究结论总结
要点一
23KDALR对高糖作用下的HK-2 细胞脂肪酸β氧化相…
通过本研究发现，在高糖环境下，23KDALR能够显著影响 HK-2细胞中脂肪酸β氧化相关因子的表达，包括PPARα、 CPT1A等关键因子的表达水平。
要点二
23KDALR通过调节脂肪酸β氧化 相关因子表达改善高糖…
高糖对脂肪酸β氧化相关因子表达的影响
抑制CPT1和ACOX1的表达
高糖环境下，CPT1和ACOX1的mRNA和蛋白表达水平受到抑制，长链脂肪酸转运至线粒体的过程受阻，导致脂 肪酸β氧化减少。
促进HADH的表达
高糖环境下，HADH的mRNA和蛋白表达水平上调，促进3-羟基脂酰CoA的裂解，加速脂肪酸的β氧化过程。然 而，由于高糖对CPT1和ACOX1的抑制作用更强，总体上高糖仍会抑制脂肪酸的β氧化过程。
异丙酚对家兔全脑缺血再灌流损伤时血浆ET-1、MDA及SOD变化的影响
异丙酚对家兔全脑缺血再灌流损伤时血浆ET-1、MDA及SOD变化的影响曹波儿;朱雪琴;黄建平【期刊名称】《全科医学临床与教育》【年(卷),期】2009(7)4【摘要】目的观察并探讨异丙酚对家兔全脑缺血再灌流(I/R)损伤的保护作用及其机制.方法 24只家兔随机分为假手术组、I/R组和异丙酚组,每组8只.分别在缺血前15min(I0)及再灌流30min(R1)、2h(R2)和4h(R3)取颈内静脉血,测定血浆内皮素-1(ET-1)、丙二醛(MDA)和过氧化物歧化酶(SOD)的含量,实验结束取皮层HE染色,光镜观察,并测量神经元核截面积.结果 I/R组及异丙酚组ET-1均升高,以I/R组更甚,R3时两组值与假手术组比较,差异均有统计学意义(t分别=3.52、2.81,P均＜0.05),异丙酚组与I/R组比较,差异也有统计学意义(t=3.15,P＜0.05);I/R组各点MDA较假手术组相应值明显升高,差异均有统计学意史(t分别=3.35、3.27、3.36,P均＜0.05);异丙酚组MDA无明显变化,但与I/R纽相应时点比较,差异均有统计学意义(t分别=2.16、2.51、2.55,P均(0.05);异丙酚组SOD比假手术组降低,但与I/R组比较同期明显增加,差异有统计学意义(t分别=2.75、2.53、2.21,P均＜0.05).异丙酚组核截面积比I/R组明显增加[(189.7±19.06)μm2 vs(105.63±16.21)μm2];光镜下异丙酚组皮层轻度水肿、部分尼氏体溶解消失;而I/R 组皮层水肿明显,大量神经元坏死.结论异丙酚不仅增强机体抗氧化能力,而且还能抑制ET-1的合成和释放,阻断氧自由基和ET-1之间的恶性循环,从而保护脑I/R损伤.【总页数】4页(P367-369,封2)【作者】曹波儿;朱雪琴;黄建平【作者单位】315020,浙江宁波,宁波大学医学院附属医院麻醉科;315020,浙江宁波,宁波大学医学院附属医院麻醉科;315020,浙江宁波,宁波大学医学院附属医院麻醉科【正文语种】中文【中图分类】R9【相关文献】1.葛根素对脑缺血再灌注家兔血浆MDA、SOD含量的影响 [J], 毛庆军;张军华;夏瑞2.益气活血解毒汤对实验性动脉粥样硬化家兔血脂、NO、ET-1、MDA及 SOD的影响 [J], 褚福永;胡业彬3.脑缺血再灌流过程中沙土鼠脑组织和血浆SOD、 MDA含量的变化 [J], 赵秀梅;刘育英;姜澜4.次声作用后血浆NO、ET-1、SOD、MDA水平的变化 [J], 裴兆辉;陈景藻;朱妙章;裴建明;刘朝晖;谭永霞5.兰索拉唑对胃溃疡患者血浆MDA、SOD、NO及ET-1表达的影响 [J], 刘东莲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
缺氧诱导因子-1在缺氧预处理心肌保护中的作用及其机制研究
缺氧诱导因子-1在缺氧预处理心肌保护中的作用及其机制研究刘秀华;武旭东;蔡莉蓉;刘凤英【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2004(020)003【摘要】目的:研究缺氧诱导因子-1(HIF-1)在缺氧预处理(HPC)心肌细胞保护中的作用及其机制.方法:在培养的SD乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)模型上,观察HPC 对于24 h后心肌细胞H/R损伤的影响,以MTT法测定心肌细胞存活率,试剂盒测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性.制备心肌细胞蛋白提取物,以磷酸化的细胞外信号调节激酶(ERK1/2)抗体测定HPC后不同时间ERK1/2活性,以聚丙烯酰胺电泳迁移实验观察HIF-1α磷酸化,并观察蛋白磷酸酶激动剂BDM和ERKs的上游激酶(MEK1/2)抑制剂PD98059对于HPC诱导的HIF-1α磷酸化以及心肌细胞保护作用的影响.结果:HPC可以提高心肌细胞H/R后存活率、减少LDH漏出,并激活ERK1/2,使HIF-1α发生磷酸化;蛋白磷酸酶激动剂BDM和ERKs的上游激酶MEK 抑制剂PD98059可以消除HPC诱导的HIF-1α磷酸化和心肌细胞保护作用.结论:HPC可以提高乳鼠心肌细胞对于H/R的耐受性,其机制涉及ERKs介导的HIF-1α磷酸化.【总页数】4页(P343-346)【作者】刘秀华;武旭东;蔡莉蓉;刘凤英【作者单位】解放军总医院,病理生理学研究室,北京,100853;解放军总医院,南八科,北京,100853;解放军总医院,病理生理学研究室,北京,100853;解放军总医院,病理生理学研究室,北京,100853【正文语种】中文【中图分类】R541.4【相关文献】1.缺氧预处理在心肌保护中的作用机制 [J], 黄杰;郑宏2.缺氧诱导因子-2α在小鼠DSS结肠炎中的作用及其机制研究 [J], 张顺;杜涛;蒋小华;宋纯3.大鼠离体心脏模型中雷帕霉素调节HIf1α干预缺氧预处理心肌保护作用的机制[J], 伊利亚尔·买买提力;俞瑾;郭海;郑宏4.缺氧诱导因子在胃癌中的作用及机制研究进展 [J], 赵乙锾;徐洪雨5.缺氧诱导因子-1α在缺氧预处理预防心肌细胞损伤中的作用 [J], 徐菲菲;刘秀华;蔡莉蓉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
NaH交换器1在窒息后血清诱导HK2细胞损伤中作用机制的研究
四、胡黄连提取物对急性肾缺血再灌注大鼠肾功能的影响。
1.按预定时间留取血、尿标本,用东芝全自动生化分析仪直接检测血、尿肌酐,并结合尿量计算内生肌酐清除率(Ccr)。
3.甘油诱导大鼠急性肾损伤时肾组织.E-cadherin、β-catenin分布异常并且表达减少,肾小管上皮细胞极性丧失,上皮细胞损伤并脱落至管腔,肾小管阻塞加重,在急性肾损伤的发生及发展中发挥重要作用。
4.苦碟子注射液可通过下调肾小管上皮细胞ICAM-1和P-selectin的表达,上调E-cadherin、β-catenin表达,减轻肾组织损伤,改善肾功能,从而对甘油诱导的急性肾损伤起到明显的肾脏保护作用。
2.急性肾损伤动物模型的建立:实验前禁水24小时,体重减轻10%的大鼠给予50%甘油生理盐水10ml/kg,双后肢肌肉注射;
3.取材:各组大鼠采用乙醚麻醉,腹部正中切开,于下腔静脉采血,以备检测血肌酐、尿素氮、肌酸激酶;之后摘除双肾,纵行剖开,置于
4℃4%多聚甲醛液中固定。4观察指标及方法:使用全自动生化仪检测生化指标;用光学显微镜观察肾组织形态学改变;应用免疫组化和图像分析检测肾组织中P-selectin、ICAM-1、E-cadherin、β-catenin的表达。
2.按预定时间收集肾组织标本,分别用2.5%戊二醛磷酸盐缓冲液和10%中性甲醛固定液固定,常规制组织切片,光镜和电镜下观察肾组织形态学变化,并根据Paller氏法评定小管间质评分。
结论::
1.大鼠肌肉注射甘油后肾组织结构和功能发生明显变化,表现为血肌酐、尿素氮、肌酸激酶升高,肾小球淤血,肾小管上皮细胞肿胀、脱落及坏死,并有管型形成,说明甘油肌注可引起急性肾损伤,这种损伤可用于模拟横纹肌溶解引起的急性肾损伤。
异丙酚麻醉对肝缺血再灌注患者脂质过氧化损伤的保护作用
异丙酚麻醉对肝缺血再灌注患者脂质过氧化损伤的保护作用舒理鸿【期刊名称】《海峡药学》【年(卷),期】2011(23)3【摘要】目的观察异丙酚麻醉对肝缺血再灌注患者脂质过氧化损伤的保护作用.方法选择择期行肝叶切除的手术患者56例,随机分成异丙酚组和对照组,每组均为28例.异丙酚组加用异丙酚4~6mg/(ks·h)微泵持续静脉输注至关腹,对照组以同样方法输注等量生理盐水.两组患者分别在术前(T1)、肝门阻断末(T2)、术后第一天(T3)和术后第三天(T4)抽取静脉血,测定肝功能包括谷丙转氨酶(ALT)和谷革转氨酶(AST)及血浆超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平.结果肝门阻断末和术后第一天两组患者血浆ALT和AST水平含量明显增加,但异丙酚组增加幅度均明显低于对照组,且术后第三天两组患者血浆ALT和AST水平均恢复至求前水平.肝门阻断末和术后第一天两组患者血浆MDA水平均较术前明显增加,血浆SOD水平均较术前明显下降,且异丙酚组增加或下降的幅度明显低于对照组,且术后第三天两组患者血浆SOD和MDA水平均恢复至术前水平.结论肝缺血再灌注可引起患者脂质过氧化反应损伤,而异丙酚对肝缺血再灌注患者的脂质过氧化损伤具有保护作用.【总页数】3页(P97-99)【作者】舒理鸿【作者单位】浙江省东阳市中医院麻醉科,东阳322100【正文语种】中文【中图分类】R969.4【相关文献】1.异丙酚预处理对肝缺血再灌注损伤的保护作用 [J], 刘洪珍;杨承祥;王汉兵;欧伟明;刘永峰;徐颖华2.异丙酚预处理对大鼠肝缺血再灌注细胞因子的影响及肺损伤的保护作用 [J], 咸云淑;姜春玲;郑利民;林影芯;王金兰3.异丙酚麻醉对围手术期肝缺血再灌注损伤患者肝功能与细胞因子的影响 [J], 陈康卫4.比较异丙酚预处理及后处理对肝缺血再灌注损伤保护作用水 [J], 刘洪珍;文先杰;杨承祥;赖晓红5.肝缺血再灌注脂质过氧化损伤及维生素C的保护作用 [J], 王万铁;林丽娜;徐正介;李东;王宗敏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
LncRNA Mirt2通过调控MKP-1JNK通路保护心肌细胞避免缺氧复氧损伤
第50卷第1期第50页2021年2月 华中科技大学学报(医学版)A c t aM e dU n i vS c iT e c h n o lH u a z h o n gV o l .50 N o .1 P .50F e b . 2021*广东省医学科研基金资助项目(N o .A 2020163)申 健,男,1985年生,医学博士,副主任医师,E -m a i l :a l b e r t e n@163.c o mL n c R N A M i r t 2通过调控MK P -1/J N K 通路保护心肌细胞避免缺氧复氧损伤*申 健, 李梦豪, 邓焕堂, 李志明, 何丽珍, 张 宇, 罗艳芳, 谢雄伟, 刘锦光广东省惠州市中心人民医院心血管内科,惠州 516001摘要:目的 探讨L n c R N A M i r t 2在心肌细胞H 9C 2缺氧复氧损伤过程中的作用及其机制㊂方法 检测L n c R N AM i r t 2在急性心肌损伤患者血液中的水平㊂建立H 9C 2心肌细胞缺氧复氧模型,检测L n c R N A M i r t 2在H 9C 2缺氧复氧模型中的表达㊂采用脂质体转染法将L n c R N A M i r t 2m i m i c s 和阴性对照转染入H 9C 2细胞中,qR T -P C R 验证转染效率㊂实验分为对照组㊁缺氧复氧组㊁过表达对照组和M i r t 2过表达组㊂W e s t e r nb l o t 分析I L -1β和IL -6的蛋白表达;E I L -S A 分析I L -1β和I L -6浓度变化;C C K -8分析细胞活力,C a s p a s e -3相对活性检测,T U N E L 染色分析细胞凋亡;W e s t e r n b l o t 分析核糖聚合酶(P A R P )㊁剪切的核糖聚合酶(C l e a v e dP A R P )㊁C a s p a s e -3前体(P r o -C a s p a s e -3)㊁C a s p a s e -3剪切体(C l e a v e dC a s p a s e -3)㊁丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MK P -1)㊁c -J u n 氨基末端激酶(t -J N K )㊁磷酸化c -J u n 氨基末端激酶(p -J N K ),t -c -J u n ,磷酸化c -J u n 蛋白(p-c -J u n )的蛋白表达㊂结果 M i r t 2在急性心肌损伤患者血液中表达下调,同时在H 9C 2缺氧2h 复氧12h 细胞中表达下调㊂在H 9C 2细胞缺氧复氧模型中:与对照组相比,M i r t 2过表达组炎性因子I L -1β和IL -6的表达显著降低;C C K -8实验和凋亡实验检测结果表明,与过表达对照组相比,M i r t 2过表达组细胞活力增强,凋亡数减少;W e s t e r n b l o t 结果表明,与过表达对照组相比,过表达M i r t 2减少C l e a v e dP A R P /C l e a v e dC a s p a s e -3的表达,p -J N K ㊁p -c -J u n 的表达并增加了MK P -1的蛋白表达㊂结论 M i r t 2在缺氧复氧诱导的H 9C 2心肌细胞损伤过程中发挥保护作用,其作用机制可能是通过激活MK P -1/J N K 通路㊂关键词:M i r t 2; H 9C 2心肌细胞; 缺氧复氧; MK P -1/J N K 通路中图分类号:R 543.31 D O I :10.3870/j.i s s n .1672-0741.2021.01.009L n c R N A M i r t 2P r o t e c t sC a r d i o m y o c y t e s f r o m H y p o x i a -r e o x y g e n a t i o n I n d u c e d I n j u r yt h r o u g h MK P -1/J N KS i g n a l i n g P a t h w a yS h e n J i a n ,L iM e n g h a o ,D e n g H u a n t a n ge t a l D e p a r t m e n t of C a r d i o v a s c u l a rM e d i c i n e ,H u i z h o uM u n i c i p a l C e n t r a lH o s p i t a l o f G u a ng d o n g P r o v i n c e ,H u i zh o u 516001,C hi n a A b s t r a c t O b je c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e r o l eo fL n c R N A M i r t 2i nt h e p r o c e s so fh y p o x i c r e o x y g e n a t i o n i n j u r y i nc a r d i o -m y o c y t e sH 9C 2a n d i t sm e c h a n i s m .M e t h o d s T h e e x p r e s s i o n of l n c R N A M i r t 2i n a c u t e c a r d i a cm y o c a r d i a l i n j u r y c e l l sw a s a n a -l y z e d .Ah y p o x i a -r e o x yg e n a t i o nm o d e l o fH 9C 2c a r d i o m y o c y t e sw a se s t a b l i sh e dt od e t e c t t h ee x pr e s s i o no fL n c R N A M i r t 2i n t h eH 9C 2h y p o x i a -r e o x y g e n a t i o nm o d e l .L n c R N A M i r t 2m i m i c s a n dn e g a t i v e c o n t r o l (N C )w e r e t r a n s f e c t e d i n t o H 9C 2c e l l sb yl i p o s o m e t r a n s f e c t i o nm e t h o d .q R T -P C Rw a s p e r f o r m e d t o v e r i f y t h e t r a n s f e c t i o n e f f i c i e n c y.T h e c e l l sw e r e d i v i d e d i n t o c o n t r o l ,h y p o x i c r e o x y g e n a t i o n ,o v e r e x p r e s s i o n c o n t r o l a n d M i r t 2o v e r e x p r e s s i o n g r o u p s .W e s t e r nb l o t t i n g a n a l y z e d I L -1βan d I L -6p r o -t e i ne x p r e s s i o n .E I L S Aa n a l y z e d I L -1βan d I L -6c o n c e n t r a t i o n c h a n g e s .C e l l v i a b i l i t y w a s a s s e s s e db y C C K -8,C a s p a s e -3r e l a t i v e a c t i v i t y w a s a n a l y z e d ,a n d c e l l a p o p t o s i s e v a l u a t e db y T U N E Ls t a i n i n g .W e s t e r nb l o t a n a l y s i sw a s p e r f o r m e d t o a n a l yz eP A R P ,c l e a v e dP A R P ,P r o -C a s p a s e -3,C l e a v eC a s p a s e -3,MK P -1,a n d t -J N K ,p -J N K ,t -c -J u n ,p -c -J u n p r o t e i ne x pr e s s i o n .R e s u l t s M i r t 2w a sd o w n -r e g u l a t e d i n t h e b l o o d o f p a t i e n t sw i t h a c u t em y o c a r d i a l i n j u r y a n d c o n c u r r e n t l y i nH 9C 2c e l l sw i t hh y po x i a 2h /r e o x -y g e n a t i o n12h .I n t h eh y p o x i a /r e o x y g e n a t i o nm o d e l o fH 9C 2c e l l s ,t h e e x p r e s s i o no f i n f l a m m a t o r y f a c t o r s I L -1βan d I L -6w a s s i g n i f i c a n t l y r e d u c e d i n t h eM i r t 2o v e r e x p r e s s i o n g r o u p c o m p a r e dw i t h t h e c o n t r o l g r o u p .C C K -8a s s a y a n da p o p t o s i s a s s a y r e -s u l t s s h o w e d t h a t t h e c e l l v i a b i l i t y w a s e n h a n c e da n d t h en u m b e r o f a p o p t o s i sw a s r e d u c e d i n t h eM i r r t 2o v e r e x p r e s s i o n g r o u pc o m p a r e dw i t h t h e c o n t r o l g r o u p .W e s t e r nb l o t t i n g r e s u l t s i nd i c a te dt h a t ,c o m p a r e d w i t ht h ec o n t r o l g r o u p ,o v e r e x pr e s s i o no f M i r t 2d e c r e a s e d t h ee x p r e s s i o no fC l e a v e dP A R P /C l e a v e dC a s p a s e -3,p -J N K ,p -c -J u na n di n c r e a s e dt h e p r o t e i ne x pr e s s i o no f MK P -1c o m p a r e dw i t h t h e c o n t r o l g r o u p .C o n c l u s i o n M i r t 2p l a y s a p r o t e c t i v e r o l e i n h y p o x i a -r e o x y ge n a t i o n -i n d u c e dH 9C 2c a r -d i o m y o c y t e i n j u r y ,a n d i t sm e c h a n i s mof a c t i o nm a y b e r e l a t e dw i t ha c t i v a t i o no f t h eMK P -1/J N K p a t h w a y.K e y wo r d s M i r t 2; H 9C 2; h y p o x i a r e o x y g e n a t i o n ; MK P -1/J N Ks i g n a l i n gp a t h w a y 急性心肌梗死是全球范围内最常见的心血管危重症之一,其发病后出现心肌缺血/再灌注(i s c h e -m i a /r e pe rf u s i o n ,I /R )损伤[1-2]㊂心肌缺血/再灌注损伤是一个非常复杂的病理生理过程,可导致严重的急性和慢性心肌损伤[3]㊂心肌缺血再灌注过程中,除了细胞坏死外,细胞凋亡也是导致细胞死亡的另一个重要原因[4]㊂此外,还证实了该过程中会出现炎症反应[4-5]㊂因此,减少细胞凋亡和炎症反应可能对探究缺血/再灌注损伤的分子机制,寻找预防心肌缺血/再灌注损伤的治疗方法具有重要意义㊂长链非编码R N A(l o n g n o n-c o d i n g R N A,L n-c R N A)是一类竞争性的内源性R N A,由于缺乏完整的开放读码框架而缺乏蛋白质编码功能㊂研究证实L n c R N A在急性心肌梗死患者中存在差异表达[6-8]㊂L n c R N A心肌梗死相关转录因子2(m y o-c a r d i a l i n f a r c t i o n-a s s o c i a t e dt r a n s c r i p t2,M i r t2)是一种新发现的L n c R N A,其抗炎活性已在现有研究中得到证实[9]㊂研究结果显示M i r t2可抑制脂多糖(L P S)诱导的炎症通路激活,并在巨噬细胞极化反应中作为一个重要的调节因子出现[10]㊂c-J u n氨基末端活化蛋白激酶(J u nk i n a s ee n z y m e,J N K)及丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MA Pk i n a s e p h o s p h a-t a s e,MK P-1)在大鼠心肌细胞炎症损伤中发挥重要作用[11-12]㊂然而,M i r t2在心肌细胞缺血再灌注中的作用及与MK P-1/J N K信号通路的关系目前仍不清楚㊂本研究通过构建H9C2心肌细胞缺氧复氧模型来模拟心肌细胞缺血再灌注损伤,采用脂质体转染技术过表达M i r t2,探究其对心肌细胞炎症因子表达和细胞凋亡的影响,进一步探讨M i r t2在心肌缺血再灌注中的作用及其机制,为临床预防和治疗心肌损伤提供新的策略㊂1材料与方法1.1实验材料与试剂大鼠心肌细胞H9C2购于中国科学院上海细胞库㊂培养液(D M E M)㊁胎牛血清(F B S)㊁无糖培养液㊁缓冲液(P B S)㊁链霉素/青霉素双抗购于美国G i b c o公司㊂1.2临床样本收集广东省惠州市中心人民医院急性心肌梗死患者和正常人血液样本各10例,分析L n c R N A M i r t2在急性心肌损伤患者血液中的表达水平变化㊂1.3实验分组H9C2心肌细胞分组4组:对照组;缺氧复氧组,缺氧2h,复氧12h;过表达对照组,缺氧复氧的细胞转染M i r t2过表达对照载体;M i r t2过表达组,缺氧复氧的细胞转染M i r t2过表达载体㊂1.4细胞培养将购买的H9C2细胞复苏,接种于25c m2细胞培养瓶中,加入含10%F B S的D M E M培养液㊂置于37ħ细胞培养箱中培养,隔天换新的培养液㊂细胞密度达到90%时,用胰酶消化液将H9C2细胞消化下来,进行传代培养㊂取对数生长期的细胞进行后续实验㊂1.5细胞转染采用脂质体转染法将L n c R N A M i r t2m i m i c s 和阴性对照(过表达对照载体)转染入H9C2细胞中㊂1.6q R T-P C R检测L n c R N A M i r t2的表达及转染效率收集血液和细胞样本㊂采用T r i z o l提取血液和细胞中的R N A㊂根据逆转录试剂盒的说明书操作步骤进行逆转录合成c D N A㊂采用以下程序:在50ħ下进行反转录2m i n,在94ħ下初始变性2 m i n,然后45次循环,温度为95ħ,持续15s,55ħ持续1m i n,72ħ持续5s㊂采用S Y B R混合试剂盒,用l i g h t c y c l e r2.0(R o c h e)进行q R T-P C R检测㊂1.7C C K-8法检测细胞活力分组处理后,将细胞培养于96孔板中,加入10μLC C K-8试剂在每个孔中与培养液混合,37ħ下反应1h,酶标仪检测450n m处的吸光度值㊂1.8C a s p a s e-3活性检测将细胞接种于24孔板中,根据C a s p a s e-3活性分析试剂盒说明书进行实验操作,检测各组细胞中C a s p a s e-3活性的变化㊂1.9T U N E L染色法分析细胞凋亡将细胞接种在6孔板中,培养12h后,加P B S 清洗2次,根据T U N E L检测细胞凋亡操作步骤,分析细胞凋亡情况㊂1.10W e s t e r nb l o t检测蛋白表达用含蛋白酶抑制剂的R I P A裂解缓冲液提取细胞总蛋白㊂采用B C A试剂盒测定上述提取蛋白的浓度㊂随后,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(S D S-P A G E)分离不同分子量的蛋白质,并将其转移到聚偏氟乙烯(P V D F)膜上㊂用脱脂奶封膜过夜㊂孵育一抗P A R P㊁C l e a v e d P A R P㊁p r o-C a s p a s e-3㊁C l e a v eC a s p a s e-3㊁I L-1β㊁I L-6㊁MK P-1㊁t-J N K㊁p-J N K㊁t-c-J u n㊁p-c-J u n(均购自A b c a m公司)及G A P D H,4ħ冰箱过夜㊂取出后,室温下,用二抗孵育1h㊂洗膜后,加化学发光试剂,显影㊂采用I m a g e J软件进行蛋白定量分析㊂1.11酶联免疫吸附(e n z y m e l i n k e d i m m u n o s o r b e n t aa s s a y,E L I S A)实验将细胞接种在24孔板中,收集细胞培养上清进行分析㊂采用酶联免疫吸附试剂盒检测I L-1β和㊃15㊃申健等.L n c R N A M i r t2通过调控MK P-1/J N K通路保护心肌细胞避免缺氧复氧损伤I L -6的浓度,按照产品操作说明进行㊂1.12 统计学分析上述实验结果采用S P S S 19.0统计软件进行处理,计量资料以 x ʃs 表示㊂计量资料组间均数比较采用t 检验和方差分析(A N O V A )及T u k e y 事后检验,以P <0.05为差异有统计学意义㊂2 结果2.1 M i r t 2在急性心肌损伤患者中的表达水平qR T -P C R 结果显示,M i r t 2在急性心肌损伤患者血液样本中的表达下调,与正常健康对照相比,M i r t 2表达水平显著降低(P <0.05,图1)㊂2.2 M i r t 2在缺氧复氧心肌细胞中的表达及转染验证qR T -P C R 结果表明,M i r t 2在缺氧复氧后H 9C 2细胞中的表达下调,与对照组相比,M i r t 2的表达水平显著降低(P <0.05,图2A );与过表达对照组相比,M i r t 2过表达组的M i r t 2水平显著升高(P <0.05,图2B )㊂以上结果证实M i r t 2在缺氧复氧心肌细胞中表达减少,过表达M i r t 2效率明显㊂图1 M i r t 2在急性心肌损伤患者中的表达(n =10)F i g.1E x p r e s s i o n o fM i r t 2i n p a t i e n t sw i t h a c u t em y o c a r d i a l i n j u -r y(n =10)A :M i r t 2在缺氧复氧后表达下调;B :M i r t 2过表达组M i r t 2水平显著高于过表达对照组图2 M i r t 2在缺氧复氧心肌细胞中的表达及转染验证F i g.2M i r t 2e x p r e s s i o na n d t r a n s f e c t i o nv a l i d a t i o n i nh y p o x i a -r e o x y g e n a t i o n -i n d u c e d c a r d i o m y o c y t e s 2.3 过表达M i r t 2对缺氧复氧心肌细胞炎性因子的影响W e s t e r nb l o t 检测结果显示,H 9C 2心肌细胞在缺氧复氧条件下,I L -1β和I L -6的蛋白表达显著增加,与过表达对照组相比,M i r t 2过表达可以显著减少炎性因子I L -1β和IL -6的蛋白表达(均P <0.05,图3A )㊂E L I S A 检测结果显示,H 9C 2心肌细胞缺氧复氧条件下,I L -1β和I L -6的释放显著增加(均P <0.05),与过表达对照组相比,M i r t 2过表达可以显著减少炎性因子I L -1β和I L -6的释放(均P <0.05,图3B )㊂以上结果表明在缺氧复氧心肌细胞中过表达M i r t 2可以保护细胞,减轻炎性反应㊂A :W e s t e r nb l o t ;B :E L I S A 实验;1:对照组;2:缺氧复氧组;3:过表达对照组;4:M i r t 2过表达组;与对照组比较,*P <0.05;与过表达对照组比较,#P <0.05图3 M i r t 2过表达对缺氧复氧心肌细胞炎性因子的影响F i g.3E f f e c t s o fM i r t 2o v e r e x p r e s s i o no n i n f l a m m a t o r y f a c t o r s i nh y p o x i a -r e o x y g e n a t i o n -i n d u c e d c a r d i o m y o c y t e s ㊃25㊃华中科技大学学报(医学版) 2021年2月第50卷第1期2.4 过表达M i r t 2对缺氧复氧心肌细胞活力和凋亡的影响C C K -8检测结果表明,与对照组相比,H 9C 2心肌细胞缺氧复氧后细胞活力显著降低;与过表达对照组相比,M i r t 2过表达可以增加细胞的活力(均P <0.05,图4A )㊂C a s p a s e -3试剂盒检测结果显示,与对照组相比,H 9C 2心肌细胞缺氧复氧后细胞中C a s pa s e -3的活性显著增加;与过表达对照组相比,M i r t 2过表达组细胞中C a s pa s e -3的活性显著降低(均P <0.05,图4B )㊂T U N E L 染色结果显示,与对照组相比,缺氧复氧组心肌细胞凋亡数量增加;与过表达对照组相比,M i r t 2过表达组的心肌细胞凋亡数量显著减少(均P <0.05,图4C ㊁4D )㊂这些结果表明过表达M i r t 2可以提高心肌细胞活力,保护心肌细胞避免缺氧复氧损伤㊂A :心肌细胞活力;B :C a s pa s e -3活性;C ㊁D :心肌细胞凋亡;1:对照组;2:缺氧复氧组;3:过表达对照组;4:M i r t 2过表达组;与对照组比较,*P <0.05;与过表达对照组比较,#P <0.05图4 M i r t 2过表达对缺氧复氧心肌细胞活力和凋亡的影响F i g.4E f f e c t o fM i r t 2o v e r e x p r e s s i o no n t h e v i a b i l i t y a n d a p o p t o s i s o f h y p o x i a -r e o x y g e n a t i o n -i n d u c e d c a r d i o m y o c y t e s 2.5 过表达M i r t 2对缺氧复氧心肌细胞凋亡蛋白表达的影响W e s t e r nb l o t 蛋白检测结果显示,与对照组相比,H 9C 2心肌细胞缺氧复氧后细胞中C l e a v e dP A R P 和C l e a v e dC a s pa s e -3的蛋白显著增加,与过表达对照组相比,过表达M i r t 2减少了C l e a v e dP A R P 和C l e a v e dC a s p a s e -3的蛋白表达(均P <0.05,图5)㊂以上结果表明过表达M i r t 2可以减少缺氧复氧心肌细胞凋亡蛋白的表达,保护细胞的活力㊂1:对照组;2:缺氧复氧组;3:过表达对照组;4:M i r t 2过表达组;与对照组比较,*P <0.05;与过表达对照组比较,#P <0.05图5 M i r t 2过表达对缺氧复氧心肌细胞凋亡蛋白表达的影响F i g.5E f f e c t o fM i r t 2o v e r e x p r e s s i o no na p o p t o s i s p r o t e i n s i nh y p o x i a -r e o x y g e n a t i o n -i n d u c e d c a r d i o m y o c y t e s ㊃35㊃申 健等.L n c R N A M i r t 2通过调控MK P -1/J N K 通路保护心肌细胞避免缺氧复氧损伤2.6 过表达M i r t 2对缺氧复氧心肌细胞中M K P -1/J N K 通路的影响W e s t e r n b l o t 蛋白检测结果显示,t -J N K ㊁t -c -J u n 的表达在各组之间无差异㊂与对照组相比,H 9C 2心肌细胞缺氧复氧后细胞中M K P -1蛋白表达显著减少,p-J N K ㊁p-c -J u n 蛋白表达显著增加;与过表达对照组相比,过表达M i r t 2增加了M K P -1蛋白表达,减少了p -J N K ㊁p -c -J u n 的蛋白表达(均P <0.05,图6)㊂以上结果表明过表达M i r t 2可能通过影响M K P -1/J N K 通路在缺氧复氧心肌细胞发挥保护作用㊂1:对照组;2:缺氧复氧组;3:过表达对照组;4:M i r t 2过表达组;与对照组比较,*P <0.05;与过表达对照组比较,#P <0.05图6 M i r t 2过表达对缺氧复氧心肌细胞凋亡蛋白的影响F i g.6E f f e c t o fM i r t 2o v e r e x p r e s s i o no na p o p t o s i s p r o t e i n s i nh y p o x i a -r e o x y g e n a t i o n -i n d u c e d c a r d i o m y o c y t e s 3 讨论急性心肌梗死(AM I)是一种常见的致死性疾病,威胁着全球人民的生命健康[13]㊂及时再灌注是抢救缺血心肌的关键[14]㊂尽管再灌注可以保护缺血心肌免受不可避免的死亡,但它有副作用,造成缺血/再灌注(I /R )损伤㊂最近研究发现L n c R N A 参与缺血/再灌注的心肌细胞损伤过程[15-16]㊂因此,需要进一步探究L n c R N A 与缺血/再灌注心肌细胞损伤的发病机制㊂炎症反应是一个复杂的过程,涉及细胞因子㊁趋化因子㊁血管生成因子和其他介质的协同作用[17]㊂缺血再灌注后的炎症反应被认为与转录因子N F -κB 的激活有关,转录因子N F -κB 可刺激多种炎症介质的表达,包括T N F -α㊁I L -1β㊁I L -6和I L -8[18-19]㊂因此,限制这些炎症介质对治疗心肌缺血再灌注可能是有益的㊂我们研究发现,H 9C 2心肌细胞在缺氧复氧条件下,I L -1β和I L -6的蛋白表达和浓度显著增加,与过表达对照组相比,M i r t 2过表达可以显著减少炎性因子I L -1β和IL -6的蛋白表达和释放㊂因此,过表达M i r t 2可以抑制炎症反应,在缺血再灌注中发挥保护作用㊂心肌损伤后心肌细胞凋亡是一个与缺氧复氧相关的持续的动态过程[20]㊂减少心肌细胞凋亡被认为是治疗心肌缺血再灌注损伤的有效治疗策略[21]㊂在我们的研究中,过表达M i r t 2增加了缺氧复氧心肌细胞的活性,减少了心肌细胞凋亡㊂同时,过表达M i r t 2对凋亡相关蛋白的表达也产生影响㊂过表达M i r t 2减少了C l e a v e dP A R P 和C l e a v e dC a s p a s e -3的蛋白表达㊂以上结果表明过表达M i r t 2可以减少缺氧复氧心肌细胞凋亡蛋白,保护细胞的活力㊂MK P -1是双特异性磷酸酶的成员,对E R K 1/2㊁J N K 和p 38MA P K 活性负调控[22]㊂据报道,它参与调节L P S 反应,并抑制促炎性细胞因子的分泌[23]㊂一项研究发现m i R -101可以抑制MK P -1的表达以延长巨噬细胞中MA P K s 的激活[24]㊂此外,J N K 被发现可以调节L P S 诱导的MK P -1的产生[25]㊂K i m 等[26]发现谷氨酰胺通过激活MK P -1和抑制L P S 处理的H D P C s 中的N F -κB 和MA P K途径发挥抗炎作用㊂众所周知,MK P -1/J N K 通路在细胞增殖㊁活性和凋亡的生物学过程中发挥重要作用,同时有研究报道其与炎症反应也存在密切关系[27]㊂我们研究发现H 9C 2心肌细胞缺氧复氧后细胞中MK P -1蛋白表达显著减少,p -J N K ㊁p-c -J u n 的蛋白显著增加,与过表达对照组相比,过表达M i r t 2增加了MK P -1蛋白表达和减少了p -J N K ㊁p -c -J u n 的蛋白表达㊂因此,M i r t 2在缺氧复氧心肌细胞损伤中通过MK P -1/J N K 通路发挥作用㊂综上所述,本研究发现L n c R N A M i r t 2参与心肌缺氧复氧损伤过程,发挥抗炎症和保护心肌细胞㊃45㊃华中科技大学学报(医学版) 2021年2月第50卷第1期的作用㊂因此,调控M i r t2表达可以在一定程度上为心肌缺血再灌注损伤提供新的治疗策略㊂参考文献[1]陈玉梅.急性心肌梗死并发首次心力衰竭患者在院死亡率及临床预后分析[J].世界最新医学信息文摘,2018,18(32): 144.C h e nY M.I n-h o s p i t a lm o r t a l i t y a n dc a r d i o v a s c u l a r o u t c o m e si n m y o c a r d i a l i n f a r c t i o n p a t i e n t s w i t ho r w i t h o u tf i r s t-t i m eh e a r t f a i l u r e[J].W o r l dL a tM e d I n f o,2018,18(32):144.[2]A n n e z aP,M a r t e nT,M i c h a e lO.T h e l e c t i n p a t h w a y o f c o m-p l e m e n t i n m y o c a r d i a l i s c h e m i a/r e p e r f u s i o ni n j u r y-r e v i e w o fi t s s i g n i f i c a n c e a n dt h e p o t e n t i a l i m p a c to f t h e r a p e u t i c i n t e r-f e r e n c eb y C1e s t e r a s e i n h i b i t o r[J].F r o n t I m m u n o l,2018,9:1151.[3]N a d a t a n iY,W a t a n a b eT,S h i m a d aS,e ta l.M i c r o b i o m ea n di n t e s t i n a l i s c h e m i a/r e p e r f u s i o n i n j u r y[J].JC l i nB i o c h e m N u-t r,2018,63(1):26-32.[4]孙丽霞,姬延平,苏军,等.芪参益气滴丸对心肌缺血再灌注大鼠炎症反应和细胞凋亡的影响[J].中西医结合心脑血管病杂志,2018,16(23):35-37.S u n L X,J iY P,S uJ,e ta l.T h e i n f l u e n c eo fQ i s h e n Y i q id r o p p i n gp i l l o n t he i nf l a m m a t i o n a n d a p o p t o s i s o fm y o c a r d i a li s c h e m i a r e p e r f u s i o n i nr a t s[J].JC h i nI n t e g r a t i v e M e dC a r-d i o-Ce r e b r o v a s cD i s,2018,16(23):35-37.[5]向家培,华晓芳,王勇,等.甜菜碱对大鼠心肌缺血再灌注损伤炎症及心肌细胞凋亡的影响[J].安徽医学,2018,39(11): 1297-1300.X i a n g JP,H u aX F,W a n g Y,e t a l.B e t a i n e p r o t e c t sa g a i n s t m y o c a r d i a l i s c h e m i a a n d r e p e r f u s i o n i n j u r y v i a s u p p r e s s i n g i n-f l a m m a t i o na n dc a r d i o m y o c y t ea p o p t o s i s[J].J A n h u i M e d,2018,39(11):1297-1300.[6]L i uQ Q,L i uH,H eZG,e t a l.D i f f e r e n t i a l g e n e a n d l n c R N Ae x p r e s s i o n i n t h e l o w e r t h o r a c i c s p i n a l c o r df o l l o w i ng i s ch e m i-a/r e p e r f u s i o n-i n d u c e d a c u t e k i d n e y i n j u r y i n r a t s[J].O n c o t a r-g e t,2017,8(32):53465-53481.[7]L i X,L u o S,Z h a n g J,e t a l.L n c R N A H19a l l e v i a t e dm y o c a r d i-a l I/Rv i as u p p r e s s i n g m i R-877-3p/B c l-2-m e d i a t e dm i t o c h o n-d r i a l a p o p t o s i s[J].M o lT he r N u c l e i c A c i d s,2019,17:297-309.[8]C h e nZ,W a n g X,H o uX,e t a l.K n o c k d o w n o f l o n g n o n-c o d i n gR N A A F A P1-A S1p r o m o t e d v i a b i l i t y a n d s u p p r e s s e d d e a t h o fc a rd i o m y o c y te s i n r e s p o n s e t o I/R i n v i t r o a n d i nv i v o[J].JC a r d i o v a s cT r a n s lR e s,2020,13(6):996-1007.[9]X i n M,L i a n g H,W a n g H,e ta l.M i r t2f u n c t i o n s i ns y n e r g yw i t hm i R-377t o p a r t i c i p a t e i n i n f l a m m a t o r yp a t h o p h y s i o l o g yo f S jög r e n s s y n d r o m e[J].A r t i fC e l l sN a n o m e dB i o t e c h n o l, 2019,47(1):2473-2480.[10]D u M,Y u a n L,T a n X,e ta l.T h e L P S-i n d u c i b l el n c R N AM i r t2i san e g a t i v er e g u l a t o ro f i n f l a m m a t i o n[J].N a tC o m-m u n,2017,8(1):2049.[11]王振杰,徐志鹏,陈硬,等.醋酸钠林格液对失血性休克大鼠心肌炎性介质及N F-κB,MA P K信号通路的影响[J].蚌埠医学院学报,2020,45(3):281-285.W a n g Z J,X uZP,C h e nY,e t a l.E f f e c t o f s o d i u ma c e t a t eR i n-g e r ss o l u t i o no ni n f l a m m a t o r y m e d i a t o r sa n d N F-κB[J].JB e n g b u M e dC o l l,2020,45(3):281-285.[12] H u M,Y eP,L i a oH,e t a l.M e t f o r m i n p r o t e c t sH9C2c a r d i o-m y o c y t e s f r o mh i g h-g l u c o s ea n dh y p o x i a/r e o x y g e n a t i o n i n j u-r y v i a i n h i b i t i o no f r e a c t i v e o x y g e n s p e c i e s g e n e r a t i o na n d i n-f l a m m a t o r y r e s p o n s e s:R o l eo fAM P Ka n dJ N K[J].D i a b e t e sR e s,2016,2016:2961954.[13]苏懿,王磊,张敏州.急性心肌梗死的流行病学研究进展[J].中西医结合心脑血管病杂志,2012,10(4):467-469.S u Y,W a n g L,Z h a n g M Z.E p i d e m i o l o g i ca d v a n c e s i na c u t e m y o c a r d i a l i n f a r c t i o n[J].C h i nJ I n t e g r a t i v e M e dC a r d i o-/C e-r e b r o v a s cD i s,2012,10(4):467-469.[14]中华医学会心血管病学分会,中华心血管病杂志编辑委员会.急性S T段抬高型心肌梗死诊断和治疗指南(2019)[J].中华心血管病杂志,2019,47(10):766-783.2019C h i n e s eS o c i e t y o fC a r d i o l o g y(C S C)g u i d e l i n e s f o r t h ed i a g n o s i s a n dm a n a ge m e n t of p a t i e n t sw i t h S T-s eg m e n t e l e v a-t i o nm y o c a r d i a l i n f a r c t i o n[J].C h i nJC a r d i o l,2019,47(10): 766-783.[15]林蓓佑.外泌体l n c R N A H C G15在急性心肌梗死中的作用机制研究[D].南宁:广西医科大学,2019.L i nBY.R o l e a n dm e c h a n i s mo f e x o s o m a l l n c R N A H C G15i na c u t em y o c a r d i a l i n f a r c t i o n[D].N a n n i n g:G u a n g x iM e d i c a lU-n i v e r s i t y,2019.[16]郝凯丽,路兴爱,武宏春,等.心肌梗死相关l n c R N A的筛选及表达模式分析[J].复旦学报:自然科学版,2018,57(6):70-78.H a oKL,L uX A,W u H C,e t a l.T h e s c r e e n i n g a n de x p r e s-s i o na n a l y s i s o f l n c R N A s r e l a t e d t om y o c a r d i a l i n f a r c t i o n[J].JF u d a nU n i vN a t S c i,2018,57(6):70-78.[17] R a h i m a nF,S a r a hS.I n h i b i t o r y e f f e c t so fd y n o r p h i n3-14o nt h e l i p o p o l y s a c c h a r i d e-i n d u c e dt o l l-l i k er e c e p t o r4s i g n a l l i n gp a t h w a y[J].P e p t i d e s,2017,90(4):48-54.[18]许闪,黄金玲,王靓,等.苓桂术甘汤含药血清对T G F-β1诱导的大鼠心肌细胞H9c2中T N F-α㊁I L-6和I L-1β的影响[J].云南中医学院学报,2015,38(6):1-3,7.X uS,H u a n g JL,W a n g J,e t a l.E f f e c t so f s e r u mc o n t a i n i n g L i n g g u i Z h u g a nd e c o c t i o no nT N F-α㊁I L-6a n d I L-1βo fm y o-c a rd i a lH9c2ce l l s i n j u r y i n d u c e db y T G F-β1[J].J Y u n n a nU n i vT r a d i tC h i n M e d i c a,2015,38(6):1-3,7.[19] X uW,C h e n J,L i n J,e t a l.E x o g e n o u sH2S p r o t e c t sH9c2c a r-d i a c ce l l sa g a i n s th i g h g l u c o s e-i n d u c e di n j u r y a n di nf l a m m a-t i o nb y i n h i b i t i n g t h e a c t i v a t i o no f t h eN F-κBa n d I L-1βp a t h-w a y s[J].I n t JM o lM e d,2015,35(1):177-186. [20] L i uX X,D e n g Y F,X u Y F,e ta l.M i c r o R N A-223p r o t e c t sn e o n a t a l r a t c a r d i o m y o c y t e s a n d H9c2c e l l s f r o mh y p o x i a-i n-d u ce d a p o p t o s i s a n de x c e s s i v ea u t o p h a g y v i a t h eA k t/m T O Rp a t h w a y b y t a r g e t i n g P A R P-1[J].J M o lC e l lC a r d i o l,2018, 118:133-146.[21]诺明,陶慧,哈森塔娜,等.舒芬太尼对心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及B c l-2,L C3Ⅱ,B e c l i n-1表达的影响[J].中西医结合心脑血管病杂志,2020,18(1):50-54.N u oM,T a oH,H a STN,e t a l.E f f e c t s o f s u f e n t a n i l o nm y o-c a rd i a l a p o p t o s i sa n de x p r e s s i o no fB c l-2,L C3Ⅱ,B e c l i n-1i nr a t sw i t hm y o c a r d i a l i s c h e m i a r e p e r f u s i o n[J].JC h i n I n t e g r a-t i v eM e dC a r d i o-C e r e b r o v a s cD i s,2020,18(1):50-54. [22] Z h a n g Y,L e u n g D Y,N.R i c h e r sB,e t a l.V i t a m i nDi n h i b i t sm o n o c y t e/m a c r o p h a g e p r o i n f l a m m a t o r y c y t o k i n e p r o d u c t i o nb y t a r g e t i n g MA P K p h o s p h a t a s e-1[J].I m m u n o l,2012,188(5):2127-2135.[23] G a oY,L i uF,F a n g L,e t a l.G e n k w a n i n i n h i b i t s p r o i n f l a m m a-t o r y m e d i a t o r s m a i n l y t h r o u g ht h er e g u l a t i o n o f m i R-101/MK P-1/MA P K p a t h w a y i n L P S-a c t i v a t e d m a c r o p h a g e s[J].P L o SO n e,2014,9(5):e96741.[24] Z h uQ Y,L i uQ,C h e nJX,e t a l,M i c r o R N A-101t a r g e t sM A P Kp h o s p h a t a s e-1t o r e g u l a t e t h e a c t i v a t i o no fM A P K s i nm a c r o p h a-g e s[J].I m m u n o l,2010,185(12):7435-7442.[25]Sán c h e z-T i l lóE,C o m a l a d aM,X a u s J,e t a l.J N K1i s r e q u i r e df o r t h e i n d u c t i o no fM k p1e x p r e s s i o n i n m a c r o p h ag e sd u r i n gp r o l i f e r a t i o n a n d l i p o p o l y s a c c h a r i d e-d e p e n d e n t a c t i v a t i o n[J].JB i o lC h e m,2007,282(17):12566-12573.[26] K i m DS,S h i nM R,K i m YS,e t a l.A n t i-i n f l a m m a t o r y e f f e c t so f g l u t a m i n e o nL P S-s t i m u l a t e dh u m a nd e n t a l p u l p c e l l s c o r-r e l a t ew i t h a c t i v a t i o n o fMK P-1a n d a t t e n u a t i o n o f t h eMA P Ka n dN F-κB p a t h w a y s[J].I n tE n d o d J,2015,48(3):220-228.[27]万敏,许美霞.盐酸羟考酮通过J N K/p38MA P K信号通路调控异丙肾上腺素诱导的心肌细胞凋亡的机制[J].中国老年学杂志,2020,40(5):1055-1059.W a n M,X u M X.E f f e c t o f o x y c o d o n eh y d r o c h l o r i d eo nm y o-c a rd i a l a p o p t o s i s i n d u ce d b y i s o p r o t e r e n o l v i a J N K/p38MA P Ks i g n a l i n gp a t h w a y[J].C h i nJG e r o n t o l,2020,40(5): 1055-1059.(2020-10-24收稿)㊃55㊃申健等.L n c R N A M i r t2通过调控MK P-1/J N K通路保护心肌细胞避免缺氧复氧损伤。
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异丙酚预处理对HK-2细胞缺氧/复氧损伤后水通道蛋白-1表
达的影响
冯娅妮马虹
中国医科大学附属第一医院麻醉科，辽宁,沈阳 110001
[摘要] 目的:观察异丙酚预处理对HK-2细胞缺氧/复氧损伤后水通道蛋白-1(AQP-1)表达的影响。
方法：将培养的HK-2 细胞随机分为4组：对照组(A 组):
细胞未经任何处理。
Cocl
2组(B组)：培养孔中加入300μM的Cocl
2
处理4h，然
后更换正常的培养基培养24h，之后更换无血清的培养基培养。
脂肪乳剂组(C 组)：培养孔中加入10%脂肪乳剂90μl预处理1h 后同B组。
异丙酚组(D 组)：培养孔中加入用DMEM稀释至终浓度25μmol/L的异丙酚预处理1h后同B组。
MTT 法测定细胞增殖，RT-PCR 技术检测AQP-1和Bcl-2mRNA的表达。
结果：经过25μmol/L的异丙酚预处理1h后，HK-2细胞的增殖明显增高（P<0.01），AQP-1mRNA 的表达明显减少（P<0.01），Bcl-2mRNA的表达明显增加（P<0.01）。
结论：异丙酚预处理通过调节AQP1和Bcl-2的表达从而减轻HK-2细胞缺氧/复氧后的损伤。
[关键词]异丙酚；水通道蛋白-1；Bcl-2；肾缺血。