大黄鱼仔稚鱼不同发育阶段矢耳石形态发育和微结构特征
小黄鱼(Larimichthys polyactis)胚胎发育及仔、稚鱼形态特征观察
小黄鱼(Larimichthys polyactis)胚胎发育及仔、稚鱼形态特征观察詹炜;楼宝;陈睿毅;毛国民;刘峰;徐冬冬;王立改;马涛;徐麒翔【摘要】采用干法授精方法获得受精卵,在人工培育条件下对小黄鱼的胚胎及仔稚鱼形态发育进行观察,描述了各发育时期的发育时序和形态特征.结果表明,小黄鱼受精卵呈圆球形,无色透明,单油球,浮性,卵径(1413±73)μm,油球径(465±23)μtm.在水温(18±0.5)℃,盐度28下,历时50h40min完成孵化.初孵仔鱼全长(3256±112)μtm,卵黄囊长径(1260±50)μm,短径(894±65)μm,肌节32对.在水温(19±1)℃下,仔、稚鱼发育历时35天,4日龄仔鱼开口摄食,6日龄卵黄囊消失,10日龄油球消失,15日龄尾椎骨向上弯曲,25日龄全长(7467±550)μm,各鳍发育基本完成,进入稚鱼期,35日龄全长(22158±420)μm,全身被鳞,进入幼鱼期.【期刊名称】《海洋与湖沼》【年(卷),期】2016(047)005【总页数】7页(P1033-1039)【关键词】小黄鱼;胚胎发育;仔、稚鱼;形态学特征【作者】詹炜;楼宝;陈睿毅;毛国民;刘峰;徐冬冬;王立改;马涛;徐麒翔【作者单位】浙江省海洋水产研究所浙江省海水增养殖重点实验室舟山 316021;浙江省海洋水产研究所浙江省海水增养殖重点实验室舟山 316021;浙江省海洋水产研究所浙江省海水增养殖重点实验室舟山 316021;浙江省海洋水产研究所浙江省海水增养殖重点实验室舟山 316021;浙江省海洋水产研究所浙江省海水增养殖重点实验室舟山 316021;浙江海洋大学舟山 316022;浙江省海洋水产研究所浙江省海水增养殖重点实验室舟山 316021;浙江省海洋水产研究所浙江省海水增养殖重点实验室舟山 316021;浙江海洋大学舟山 316022;浙江省海洋水产研究所浙江省海水增养殖重点实验室舟山 316021;浙江省海洋水产研究所浙江省海水增养殖重点实验室舟山 316021【正文语种】中文【中图分类】Q954小黄鱼(Larimichthys polyactis Bleeker),俗称小鲜、黄花鱼。
鱼类耳石形态研究进展
鱼类耳石形态研究进展何文平【摘要】鱼类耳石形状具有高度的物种特异性,在种类及种群识别研究方面具有重要的研究价值综述了鱼类耳石形态的特征参数、耳石形态研究方法及其在鱼类种类及种群识别中的应用.%Fish otolith morphology is in high species specific with the important research value in species and population identification research. The characters of otolith morphology and research methods of otolith morphology and application in species and population identification were summarized.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2012(000)030【总页数】3页(P14760-14762)【关键词】耳石;形态特征;种群识别【作者】何文平【作者单位】西南大学荣昌校区水产系,重庆402460【正文语种】中文【中图分类】S917.4耳石是存在于硬骨鱼类内耳的膜迷路内石灰质硬组织，主要由碳酸钙构成，起平衡和听觉作用。
内耳的椭圆囊、球囊和听壶中分别具有微耳石(Lapillus)、矢耳石(Sagittaes)和星耳石(Asteriscus)各1对。
鱼类耳石的形态、大小、功能和微结构特征随种类而存在差异［1］。
微耳石和星耳石通常为圆形或卵圆形，而矢耳石为镰刀状(Sickleshaped)或针状(Needle shaped)［2］。
骨镖鱼类和其他硬骨鱼类之间在耳石形态和大小上存在较显著的差异。
在骨缥鱼类中，可能由于与听力密切相关，星耳石和韦伯氏器(Weberian apparatus)靠得很近，且比矢耳石大得多。
骨镖鱼类以外的其他硬骨鱼类，矢耳石通常最大［3］。
养殖渔业工作中的鱼类生长与发育研究
养殖渔业工作中的鱼类生长与发育研究鱼类生长与发育在养殖渔业工作中一直是一个重要的研究领域。
通过深入了解鱼类的生长过程和影响因素，可以帮助养殖业者提高养殖效益，保证养殖鱼类的健康成长。
本文将介绍鱼类生长与发育的基本知识，并探讨一些影响鱼类生长发育的重要因素。
一、鱼类的生长过程鱼类的生长过程可以分为几个阶段，包括卵、仔鱼、幼鱼、稚鱼和成鱼阶段。
每个阶段都有不同的特征和需求，了解这些特征和需求对于成功养殖是至关重要的。
1.卵阶段：卵是鱼类的初生阶段，此时鱼类还未孵化出来。
在卵阶段，温度和氧气是最重要的因素。
温度对卵的发育速度和健康程度有直接影响，而氧气则对卵的呼吸和新陈代谢至关重要。
2.仔鱼阶段：仔鱼是刚刚孵化出来的小鱼，此时它们非常脆弱，对水质要求较高。
仔鱼主要以浮游生物为食，所以养殖者需要提供适合的养殖环境和饲料，以确保仔鱼的健康成长。
3.幼鱼阶段：幼鱼相对于仔鱼来说更加健壮，但还是需要特别关注其饮食和环境。
此时，养殖者需要提供适当的饲料，包括人工制作的饲料和自然饵料，以满足幼鱼的营养需求。
4.稚鱼阶段：稚鱼是已经长大一些的鱼类，它们通常已经具备一定的自我生存能力。
在稚鱼阶段，养殖者需要提供适当的饲料和适宜的生长环境，以促进稚鱼的成长和发育。
5.成鱼阶段：成鱼是鱼类生长发育的最终阶段，此时它们已经具备繁殖能力。
在成鱼阶段，养殖者需要关注饲料和水质的管理，以确保成鱼的生长和繁殖健康。
二、影响鱼类生长发育的因素鱼类生长发育受到多种因素的影响，包括环境因素、饲料管理、水质管理等。
以下是几个主要因素的介绍：1.温度：温度是影响鱼类生长和发育的重要因素之一。
不同种类的鱼类对温度有不同的适应范围，养殖者需要根据具体鱼种的特点来调节水温。
温度过高或过低都会对鱼类的生长发育造成不利影响。
2.饲料管理：合理的饲料管理是保证鱼类正常生长发育的关键。
养殖者需要根据鱼类的种类和生长阶段提供适宜的饲料，包括蛋白质、脂肪、维生素等。
东海银鲳耳石形态特征研究【文献综述】
文献综述农业资源与环境东海银鲳耳石形态特征研究耳石[1-9]是倾斜或者平置于硬骨鱼类内耳的膜迷路内的组织，它主要由碳酸钙构成，无机成分占85％以上，耳石中心为1个圆形的核，核的中心是耳石原基，1个耳石通常具有1个中心核和1个原基，但也有极少数耳石具有1个中心核和2个原基，或2个中心核和2个原基，核周围为同心环纹的生长轮。
在膜迷路内的椭圆囊、球囊和听壶中各具微耳石、矢耳石和星耳石一对，其中微耳石侧扁，矢耳石一般较大，外形有亚圆形、长圆形、盾形等几种，可分为背面、腹面、前缘、后缘、外缘、内缘等几部分，星耳石一般较小。
它对鱼类的平衡和听觉起很重要的作用。
鱼类耳石[10-13]是鱼类良好的信息载体，耳石的形态、大小、功能和微结构特征随种类而存在差异，因此，耳石的形态特征通常作为种类或种群鉴定的工具，而且可作为鉴定年龄和分析生长的材料。
耳石微结构是研究鱼类早期生活史阶段的生长、发育、死亡、生存环境条件等众多方面的有力途径，在日龄鉴定、孵化期和产卵期调查以及早期生长研究中具有其它研究方法无法比拟的优势。
国内外曾有过一些耳石形态特征与微结构特征的特征，为本文的研究提供了理论基础，在国外：Torres，G.J.，Lombarte，A.，and Morales-Nin，B Saggital[33]利用耳石的大小和形状变化来识别不同地域内的三种鳕鱼；Pannella发现耳石上存在日轮，因此耳石日轮生长的研究逐步成为国际鱼类生物学研究的新兴领域，如Williams，T.P.，and Bedford，B.C[32]利用耳石的形态特征来鉴定鱼类的年龄。
在我国，郭弘艺，唐文乔等[14]对中国鲚属鱼类的矢耳石形态特征进行了深刻的研究，研究分析了鲚属鱼类的耳石形态及其与其它鱼类耳石不同之处，同时为鉴别凤鲚、七丝鲚、短颌鲚、刀鲚4种鲚属鱼类提供科学依据；刘必林等[15]、陆化杰等[16]利用主成分分析及主成分之间的关系分别对印度洋西北海域鸢乌贼和西南大西洋阿根廷滑柔鱼的耳石形态特征进行了详细的分析，为更好地了解种群结构和空间分布提供参考，并且都得出这样一个结论，在上述两种鱼类的个体发育过程中，随着胴长不断增加，耳石绝对尺寸逐渐增大，相对尺寸却逐渐减小的科学理论资料；裘海雅等[17]在研究鱼类耳石与年龄关系的进展中，总结分析了国内外鱼类耳石与年龄关系的研究概况，包括耳石生长，耳石日轮、年轮、重量以及耳石元素指纹分别与年龄之间存在的密切关系，在探讨目前研究耳石存在的问题时，对未来研究提出展望，为今后研究耳石提供研究的方向；王菲等[3]研究了东海条石鲷仔鱼耳石日轮与生长的关系，提出耳石轮纹可作为条石鲷仔鱼日龄的判别依据，为准确掌握鱼类的产卵场和产卵时间提供理论性依据，进而为研究特定鱼类资源的发生机制提供科学方法；廖锐等[2]在探究鱼类耳石研究和应用进展中，对耳石研究存在的问题并提出了进一步研究的建议等，所述的研究为本研究提供了许多参照的科学资料，为顺利研究银鲳耳石作了铺垫。
热带鱼类发育早期耳石日轮
CHAPTER 4 of T ropical Fish Otoliths:Information for Assessment,Management and Ecology热带鱼类发育早期耳石日轮Daily otolith increment in the early stage of tropical fishCONTENTS 热带鱼类发育早期耳石日轮01.Introduction 1龄以下鱼的耳石生活史数据的用途1.1 Otolith-based early life history traits1.耳石能提供早期生活史的特征值（Life history traits），即LHT3.幼鱼耳石形态能被用于生态学的研究，如饵料丰富度2.耳石能记录生活史中的转折点，如定居（Settlement）和变态（Matamorphosis ）添加标题文字Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit. Donecluctus nibh sit amet sem vulputate venenatis bibendum orci pulvinar. Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit.Donec luctus nibh sit amet sem vulputate venenatis bibendum orcipulvinar. 1.1 Otolith-based early life history traits生活史特征值定义测量方法鱼的日龄Larval age 鱼体的日龄耳石原基到边缘之间的日轮数出生日期Birth date产卵日或孵化日采集的日期减去鱼的日龄（某些鱼种孵化的时长也要考虑）浮游仔鱼期Pelagic larval duration(PLD)幼虫以浮游生物为食的天数;从出生到定居的时长耳石中心到定居标志线之间的日轮数稚鱼期时长Juvenile age 从定居到变态的时长从定居标志线到耳石边缘的日轮数定居时间Timing of settlement 从漂浮状态转变为底栖的时间采集的日期减去稚鱼期时长日生长量Daily growth 每天的相对生长速率相邻耳石日轮间的距离耳石相对大小Size-at-age某一日龄下耳石的相对大小从耳石原基到某一日龄的距离早期生活史的特征值PLD （pelagic larval duration ）漂浮仔鱼期：从仔鱼转变为稚鱼所经历的时长。
渔业资源生物学重点整理完整版(考研复试必备)
资源生物学重点整理第一部分：名词解释第二章：种群：在一个种的分布区内，有一群或若干群体中的个体，其形态特征相似，生态、生理特征相同，特别是具有共同的繁殖习性，即相同的遗传属性——同一基因库的种内个体群。
基因库：一个种群中所有个体的基因型集合。
群体：可认为群体是种群之下的一个研究单位，指能够满足一个渔业管理模式的那部分鱼，可定义为一个群体。
量度特征：量度特征又叫体型特征，主要是测量鱼体各有关部位的长度和高度，计算它们之间的比值, 主要项目有:全长与体长、头长与体长、体高与体长、吻长与头长、眼径与头长、尾柄高与尾柄长之比等。
第三章：鱼类的生命周期：指鱼类个体从受精卵发育到成语，直至衰老的整个一生的生活过程，又称之为生活史或个体发育。
卵膜：位于卵的最外层，保护卵细胞免受外界因素的伤害，并使卵细胞保持一定形状，对外界环境起隔离的作用，以保证胚胎的正常发育。
卵黄：是一种特殊的蛋白质，由卵细胞质的液泡酿造而成，是胚胎发育所需要的营养物质。
卵黄的大小和胚胎发育时间的长短有关。
油球：是许多种硬骨鱼类卵子的特殊组成部分，它是含有脂肪的，表面围有原生质薄膜的小球状体。
油球对于浮性卵不仅是营养的贮藏，还起到了“浮子”的作用，使卵子能经常保持在一定的水层；但对沉性卵只是营养的贮藏。
卵质：就是卵子的细胞质，是构成卵细胞体的主要部分，是卵细胞营养和生命活动的中心。
卵质的多少决定了细胞的大小。
卵核：又称生殖核或细胞核，卵裂、生长、新陈代谢都和核有直接关系。
极性：由于卵质中卵黄的分布不均匀形成了卵子的极性。
卵黄多的一端称为植物极，卵黄少或没有的一端，即主要是细胞质集中的一端称为动物极。
卵黄间隙或围卵腔：介于卵膜和卵细胞本体之间的空隙。
浮性卵：卵的比重小于水，它的浮力通过各种方式产生，如含有油球，卵黄间隙大等。
沉性卵：卵的比重大于水，卵子产出后沉于水底，一般较浮性卵大，卵黄间隙小。
可分为：不附着沉性卵，附着沉性卵，有丝状缠络卵。
热带鱼类发育早期耳石日增量第四章
热带鱼类发育早期耳石日增量1 介绍我们对于海洋鱼类早期的生态动力研究曾频繁地被称为密不可测的“黑箱”。
然而，幸运的是，几十年前Pannella发现海洋鱼类的耳石记录了年龄和每天的生长信息，这个发现给我们提供了一个有力的工具来揭开这个“黑箱”的谜底。
在那之后越来越多的研究和技术进步，使得科学家们能从幼鱼的耳石中获取大量的精确的细小的早期生活史的信息。
相比较于类似的无脊椎动物的研究，使用耳石微结构包含的大量有价值的信息是鱼类种群研究中最大的优势之一。
个体的年龄信息能被用于研究幼鱼分布状况、补充动力、早期生长、出生率和死亡率以及更为熟知的具体年龄段的生长率。
重要的是，个体的数据可以被扩展到群体和种群的动力研究，包括特定的产卵种群和育苗场。
理解其下的机制是最终预测重要商业鱼种的世代强度的必要一步。
生长率也可以被用于生物能量模型和检测早期生活的关键事件。
最终，对整个生活史的变化所做的生长和存活的研究可能为进一步研究特定生活史阶段的优势和进化提供基础。
在这一章节里，我首先列出了能从幼鱼耳石获得的个体早期生活史数据的普遍用途，包括耳石提供的线索里不同时空尺度的变化。
之后，我展示了从幼鱼耳石提取年龄和生长数据所需的技术原理和步骤。
我具体地讲述了获取样本、处理耳石用以分析、读取增量信息以及分析数据的基础方法。
我也明确指出这个过程存在的固有问题和局限之处。
通过这些基础的步骤，有价值的年龄和生长信息能提取出来用于不同的生态学研究中，包括不同生态环境中的热带幼鱼，比如深海区、1珊瑚礁、海草床和河口红树林边缘区域。
introduction+2.1+2.2+2.9(94-100,124)张慧敏P93-100：introduction4.在热带鱼的早期阶段每日的耳石增加展示：1.1基于欧托利的早期生活史特征耳石可以提供一组变量或早期生命历史(ELH)特征的数据。
幼虫的年龄、出生日期、远洋幼虫期(PLD)、幼年期和沉降时间都涉及到在耳石轴上(表1)的耳石增量，在这段时间内任何时间点的相对日增长都可以通过观察连续增量之间的宽度来获得。
(完整版)鱼类性腺发育
鱼类卵细胞的发育与成熟1.卵原细胞反复进行有丝分裂，细胞数目不断增加，经过若干次分裂后，卵原细胞停止分裂，开始生长，向初级卵母细胞过渡。
此阶段的卵细胞为第Ⅰ时相卵原细胞，以第Ⅰ时相卵原细胞为主的卵巢称第Ⅰ期卵巢。
2. 小生长期是卵母细胞的生长期，开始时，细胞质呈微粒状，细胞核卵形，占卵母细胞的大部分，其内壁四周排列着许多小核（或称核仁），中央为粒状的染色质，有时细胞质中可见卵黄核。
卵母细胞进一步发育，卵膜外出现了一层滤泡膜，由单层上皮细胞组成，内有长形的核。
小生长期发育到单层滤泡为止，这时的卵母细胞，称为卵母细胞成熟的第Ⅱ时相，以第Ⅱ时相卵母细胞为主的卵巢称为Ⅱ期卵巢。
性未成熟的鱼，常有相当长的时期停留在Ⅱ期。
第一时相图（1-3）：卵母细胞一般出现在体长为6.0 cm 以下的当年生幼鱼卵巢中。
生殖上皮具有2—3 层增殖分生而成的密集的卵原细胞, 其大小不一。
胞径3.6—16.0μm,胞核2.5—10.0 μm, 浅紫色, 可见交织状粗丝形染色质(图1), 附于生殖上皮的第1 时相卵母细胞形态不规则, 浅紫色, 具1 个巨大的深紫色核仁(图2)。
基质中第1 时相的卵母细胞长椭圆形, 质膜外出现一层滤泡膜,具2—4 个深紫色滤泡细胞(图3) 。
第二时相（4-7）(1)早期图: 卵母细胞排列紧密, 形态不一;多数呈多角形、少数为卵圆形。
细胞核透亮, 核中染色体逐渐解散, 但仍可看到呈细丝状残迹。
胞质显嗜碱性, 成细颗粒状分布。
核椭圆, 染色浅。
核仁大小不一, 数量增多, 一般位于核膜内缘。
单层滤泡膜, 5—7 个扁平滤泡细胞围绕着卵母细胞(图4)。
(2) 中期: 卵母细胞一般呈椭圆形, 胞质深紫色。
核与胞质间形成一条宽为0.2—0.5μm 的透明层(图5), 透明层内物质密度很稀, 显得透亮。
(3)晚期: 卵母细胞排列松散。
一般呈圆球形, 胞质呈弱嗜碱性, 油球数量明显增多, 分布均匀。
胞质中出现许多呈网状分布的纤维结构, 在网眼中仍有许多被苏木精染成深紫色的微细颗粒。
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大黄鱼仔稚鱼不同发育阶段矢耳石形态发育和微结构特征刘志远;李圣法;徐献明;张翼;黎雨轩【摘要】We documented the morphological development and microstructure of the sagittal otolith during the larval and early juvenile stages (between hatch and 78 d after hatch) of large yellow croaker (Larimichthys crocea). We observed daily periodicity in growth increment formation in the sagittal otoliths. The first daily increment was formed 2 days after hatching (dah), corresponding to the time of first feeding. The sagittas were round in shape during the yolk-sac larval and pre-flexion larval stages, subsequently becoming elongated on the long axis during the flexion larval stage. Following this, the sagitta became ellipsoid in shape during the post-flexion larval stage. During the early juvenile stage, the first secondary primordium began to form between 29-39 dah(32±0.39), corresponding to the timing of metamorphosis from larvae to juvenile. The number of secondary primordium ranged from 5 to 7 in 47-78-day-old juveniles, and the secondary growth zone (SGZ) surrounding the first growth zone (FGZ) formed an "enclosed structure". During this stage, the sagittas were nearly peltate in shape. The radius (R) of the sagitta was significantly and linearly related to standard length (Ls) for all individuals (R =-155.8+39.1 Ls) (n=211, P＜0.001). The growth rates during the larvae stage (ft), calculated based on the width of the daily increment on the sagitta of juveniles, were significantly and linearly related to the time of formation of the first secondary primordium (tsp1) (b =38.6-161.9tsp1) (n=42, P＜0.01). This suggests that the secondary primordium was formed much earlier and metamorphosis was more rapid in faster growing larvae. In summary, the pattern of early life history growth and development of large yellow croaker can be back-calculated based on sagitta size, morphology, and microstructure. Our results provide a theoretical basis for measuring early growth and development and documenting recruitment of large yellow croaker in the field.%对人工培育大黄鱼(Larimichthys crocea)的生长发育与矢耳石形态及微结构特征进行研究,结果表明:(1)大黄鱼矢耳石上的轮纹是每日形成的,第1日轮在孵化后第2天形成,与其初次摄食相对应.(2)大黄鱼卵黄囊期和前弯曲期仔鱼的耳石形态为圆形,进入弯曲期耳石长轴迅速伸长,在后弯曲期耳石形态变为椭圆形.进入稚鱼期,矢耳石开始形成次生核.随后次生核数量逐渐增加,在孵化后47～78 d的个体中,次生核数量稳定在5～7个,耳石近似盾形.(3)根据耳石日轮宽度推算的大黄鱼稚鱼在其仔鱼期生长率(b)与第1个次生核的形成时间(tspt)之间存在明显的线性关系,表明生长较快的个体形成次生核的时间较早,进入稚鱼期所需的时间更短.以上结论表明,大黄鱼矢耳石可以反演其早期生活史阶段的生长发育特征.【期刊名称】《中国水产科学》【年(卷),期】2012(019)005【总页数】9页(P863-871)【关键词】大黄鱼;耳石;日轮;次生核;生长率【作者】刘志远;李圣法;徐献明;张翼;黎雨轩【作者单位】中国水产科学研究院东海水产研究所,农业部东海与远洋渔业资源开发利用重点实验室,上海200090;上海海洋大学海洋科学学院,上海201306;中国水产科学研究院东海水产研究所,农业部东海与远洋渔业资源开发利用重点实验室,上海200090;江苏省海洋水产研究所,江苏南通226007;中国水产科学研究院东海水产研究所,农业部东海与远洋渔业资源开发利用重点实验室,上海200090;上海海洋大学海洋科学学院,上海201306;中国水产科学研究院东海水产研究所,农业部东海与远洋渔业资源开发利用重点实验室,上海200090【正文语种】中文【中图分类】S931耳石记录了鱼类早期生长发育阶段的生活史事件, 如年龄、生长、发育和种群补充等重要信息[1-3]。
大多数鱼类耳石上的轮纹每天形成 1轮,称为日轮[4-6]。
第1日轮的形成通常与孵化或初次摄食有关[7], 通过确定耳石日轮的数量和第 1条日轮的形成时间就可以估算个体的日龄[8-10]。
大量研究表明, 耳石日轮宽度与个体生长速度密切相关, 因此可以用来分析个体的早期生长状况[7, 11]。
耳石上次生核(secondary primordium)的形成通常被认为是仔鱼期向稚鱼期转变的一个重要标志,根据耳石上日轮宽度及次生核的形成时间, 就可以估计个体变态发育的时间及其早期选择性死亡的状况[12-14] 。
大黄鱼(Larimichthys crocea)曾是中国近海重要的经济鱼类, 由于过度捕捞等原因, 大黄鱼资源已严重退化, 目前很难形成鱼汛。
虽然近年来的人工增殖放流已取得初步成效[15], 但大黄鱼种群在自然条件下的繁殖时间及其早期仔稚鱼的生长发育状况还不清楚。
因此本研究通过对人工培育的大黄鱼仔稚鱼的矢耳石形态及微结构进行观察, 分析其耳石轮纹沉积率、耳石形态和微结构特征与个体生长发育的对应关系, 为大黄鱼在自然条件下的早期生长发育及资源补充研究等提供理论基础。
1 材料与方法1.1 大黄鱼仔稚鱼的人工培育大黄鱼仔稚鱼的人工培育于2010年4―6月在江苏省海洋水产研究所吕泗养殖基地进行。
亲本为吕泗养殖基地人工培育的大黄鱼, 经人工催产后取性成熟的雌、雄鱼各10尾放入产卵池中自然产卵受精, 随后收集受精卵放入网箱中, 在水温(20.5±0.5)℃条件下经42 h左右孵化。
仔鱼孵出后, 将网箱内仔鱼转移至3 m×3 m×2 m的培养池中进行饲养, 饲养期间水温为 19.8～22.6℃, 每天更换清洁的天然海水, 保持充氧和通风, 光照与自然同步, pH和盐度分别维持在8.6和25左右。
仔鱼开口时投喂轮虫, 12 d后投喂卤虫, 20 d后投喂混合型饲料, 30 d后投喂桡足类。
本实验从胚胎发育末期听囊内出现耳石后开始取样, 前15天每天取样1次, 15-78 d每隔4天取样1次, 每次随机采集20尾样本(其中10尾进行现场分析处理, 10尾保存在70%乙醇溶液中备用)。
参照Kendall对鱼类早期发育阶段的划分标准[16]将大黄鱼分为 5个发育阶段: 卵黄囊期仔鱼(卵黄囊尚未完全吸收)、前弯曲期仔鱼(卵黄囊完全吸收, 脊索末端未向上弯曲)、弯曲期仔鱼(脊索末端向上弯曲, 但未与体轴垂直)、后弯曲期仔鱼(尾下骨后缘与体轴垂直)和稚鱼期(鳍条完全形成并出现鳞片)。
1.2 耳石磨片的制作仔稚鱼采集后, 在解剖镜下拍照, 观察其形态发育特征, 确定发育分期。
然后测量其标准体长(LS, 从吻部最前端至脊索末端或最后1枚脊椎骨的距离, 精确到 0.01 mm), 再从听囊内取出 1对矢耳石(sagitta), 用清水洗净表面杂质和肌肉组织并选取左侧矢耳石进行分析观察。
仔鱼样本的矢耳石轮纹结构清晰, 可直接分析。
稚鱼样本由于矢耳石上次生核(SP)的形成把耳石分为初级生长区(FGZ)和次级生长区(SGZ, 图 1), 耳石需经双面研磨抛光处理, 具体步骤为: 用指甲油将耳石包埋在载玻片上, 自然干燥后在 1000#的砂纸上环形打磨, 再用3 μm的抛光纸抛光, 直到耳石核心(C)出现, 此时 FGZ上的轮纹通常还不够清晰, 再用丙酮将指甲油融化, 将已抛光面朝下并用指甲油包埋在载玻片上, 最后打磨抛光直到FGZ上所有轮纹清晰可见。
1.3 耳石微结构分析本实验共选取仔稚鱼耳石磨片较清晰的样本211尾(仔鱼 169尾, 稚鱼 42尾), 利用 Olympus BX51光学显微镜和耳石图形分析软件 Ratoc System Engineering(Tokyo, Japan), 对其矢耳石形态结构和微结构特征进行观察和测量。
耳石微结构的测量如图 1所示, 在仔稚鱼矢耳石中, 从耳石核心到耳石末端的最远距离记为耳石半径(R),L和W分别代表耳石的长轴和短轴(测量L和 W时须垂直经过C)。