中药醇沉技术应用与评价_孙玉琦

有机酸广泛存在于植物体的各部位，果实中多见，一般 有酸味，具收敛、固涩、抗菌等作用。有机酸多溶于水、乙醇、 甲醇，难溶于弱极性有机溶剂。甘草流浸膏是甘草浸膏水溶 化后经二次醇沉，分次静置过夜所得，醇沉浓度 65% ，浓氨 试液调 pH 值，甘草酸的含量 1. 8% 以上［12］。杨海燕等［13］研 究了采用醇沉技术纯化金银花中绿原酸的工艺，发现醇沉可 有效去除金银花粗粉中的杂质，最佳醇沉浓度 60% ，绿原酸 收率达 90. 16% 。板蓝根是清热解 毒 的 常 用 中 药，疗 效 确 切，含有苯甲酸、水杨酸等有机酸类成分。板蓝根注射液、板 蓝根冲剂以及大多含板蓝根的中成药制剂均采用水提醇沉 法提取富集有效成分。板蓝根颗粒是板蓝根药材水提后浓 缩至相对浓度 1. 20 g / mL，醇沉浓度 60% ，加入辅料，制粒， 干燥而得。制备 过 程 中 指 标 性 成 分 靛 玉 红、靛 蓝 等 大 量 流 失［14］，而有机酸类成分大多保留。咽舒饮泡腾片由金银花、 麦冬、玄参、薄荷、甘草等醇沉产物加入柠檬酸、NaHCO3 等 辅料制备而成，肖卫红等［15］以绿原酸含量为考察指标，采用 单因素考察的方法，优选了金银花等药材醇沉工艺，确定最 佳工艺为中药水提浓缩液加乙醇至浓度 40% ，醇沉时间 24 h，绿原酸转化率为 79. 4% 。 1. 5 多糖类成分
综上可知，大多数的中药成分都可采用醇沉技术进行纯 化。醇沉浓度一般在 60% ～ 80% 之间，所需醇沉浓度由大 到小的顺序为多糖类、生物碱类、蒽醌类、有机酸类、黄酮类， 与絮凝澄清等新技术相比，具有工艺成熟、过程明确、应用广 泛等优点。然而，通过分析发现，在醇沉技术实际应用过程 中，有的中药所含化学成分的水溶性较差，这类中药是否适 合水提醇沉的方法？ 60% ～ 80% 是最常用的醇沉浓度，是否 能够最大限度保留有效成分除去杂质成分？ 中药所含化学 成分千差万别，是否可以采用类似的醇沉方式？ 这就要求对 醇沉产物的物理性状、化学品质以及生物活性等方面进行研 究，对中药醇沉技术做出综合的评价。 2 中药醇沉结果的评价方法 2. 1 加强醇沉产物物理性状检测
蒽醌类化合物在中药中，尤其是在蓼科、蓼亚科植物中 广泛存在，游离态大多具有结晶型，不溶或难溶于水，成苷后 易溶入热水、乙醇、甲醇中，各种蒽醌及其苷类具有明显的止 泻与抗菌作用。孙玉琦等［9］分别采用一次醇沉、多次醇沉、 分次醇沉、分级醇沉等 5 种方法，制备了大黄水提液 80% 浓 度的醇沉产物，并对醇沉物中游离蒽醌、结合蒽醌的含量进 行比较，发现多次醇沉提取游离蒽醌最多，分次醇沉提的结 合蒽醌最多。茜草含有茜草素、大黄素甲醚等蒽醌类成分，
生物碱在中药化学成分中极其重要，常用的 400 多味植 物中药中至少有 40 余味含有生物碱。生物碱大部分水溶性 差，能溶于乙醇、氯仿等有机溶剂。苦参碱具有抗炎、免疫抑 制等作用，张保献等［3］比较了不同精制方法对苦参水提取液 中苦参总生物碱含量的 影 响，发 现 醇 沉 法 精 制，醇 沉 浓 度 70% ，冷藏放置 24 h，苦参碱含量达到 12. 63 mg / g，是其它方 法的 2 ～ 5 倍。乌头碱及其复方制剂具有祛风除湿、温经止 痛的功效，张风雷等［4］以乌头总生物碱含量与总生物碱收率 为考察指标，通过正交设计研究了附子水提醇沉工艺，确定
摘要：综述了中药醇沉技术在含各种活性成分中药材及其制剂中的应用，并提出了基于物理性状检测、化学品质分析、生
物活性研究的醇沉产物评价方法。醇沉技术可用于生物碱、黄酮、蒽醌、有机酸、多糖等大部分中药成分分离纯化中，可
应用理化性质检测与生物活性相结合的方法对醇沉效果进行综合评价。
中图分类号：R284. 2
2010 年 11 月 第 32 卷 第 11 期
中成药 Chinese Traditional Patent Medicine
November 2010 Vol. 32 No. 11
中药醇沉技术应用与评价
孙玉琦， 刘晓娟， 代春美， 赵文明* （ 辽宁医学院，辽宁 锦州 121001）
关键词：中药； 醇沉； 应用范围； 评价方法
中成药 Chinese Traditional Patent Medicine
November 2010 Vol. 32 No. 11
宁康健等［10］研究了生茜草和茜草炭醇沉产物对小鼠凝血作 用的影响。醇沉工艺为水提液浓缩至相对浓度 1 g / mL，醇 沉浓度 60% ，静置 12 h，结果发现茜草水提醇沉液能够明显 缩短小鼠的凝血时间。涂兴明等［11］考察了复方大黄喷雾液 中大黄素在醇沉工艺中的含量变化情况，分别采用醇沉浓度 60% 、70% 、80% ，发现醇沉产物中大黄素含量呈递增趋势， 而总量基本无变化。 1. 4 有机酸类成分
醇沉工艺不同常会引起醇沉产物物理性质的差异。李 页瑞等［23］以丹参、苦参和枳壳 3 种药材为研究对象，考察醇 沉过程中沉降 颗 粒 含 量、颗 粒 粒 度 和 沉 降 速 度 等 参 数 的 差 异，结果表明，醇沉过程中不同化学成分有不同的沉降特性。 醇沉液常出现澄明度、pH 值不合格等问题，影响了口服液、 注射液的质量；醇沉物常伴有吸潮、黏稠、结块等现象，影响 了散剂、片剂等固体制剂的成型性，甚至影响了制剂的有效 性与安全性，妨碍了中药新剂型、新技术的应用与发展。因 此对醇沉液的颜色、澄明度、pH 值、渗透压、黏度、表面张力 等溶液性质以及醇沉物的颜色、状态、粒度、密度、吸湿性、流 动性等粉体学性质进行比较分析，能够对醇沉技术的可操作 性进行初步判定，保证醇沉产物的进一步研究与应用。 2. 2 加强醇沉产物化学品质分析
醇沉工艺为水提取液浓缩至相对浓度 0. 75 g / mL，醇沉浓度 80% ，调节 pH 至 5，总 生 物 碱 含 量 可 达 6. 48 mg / g，收 率 2. 70% 。小檗碱具有抗炎、镇痛、降血压、降血糖等作用，林 慧彬等［5］以小檗碱和总生物碱的含量为考察指标，研究了采 用醇沉技术精 制 黄 连 解 毒 汤 的 方 法，确 定 浓 缩 液 相 对 浓 度 0. 24 g / mL，醇沉浓度 40% ，静置冷藏 24 h，小檗碱和总生物 碱的含量分别达到 10. 59 mg / g、173. 90 mg / g。 1. 2 黄酮类成分
多糖类成分广泛存在于动物、植物、微生物中，到目前为 止，已有 300 多种多糖类化合物从天然产物中分离出来，研 究表明多糖除了有增强免疫功能、抗肿瘤作用、抗氧化、抗衰 老、消化系统保护作用等生物学效应外，还有抗菌、抗病毒、 降血糖、降血脂、抗辐射、抗凝血等作用。采用醇沉法从沉淀 物中回收多 糖 是 一 种 简 单 而 常 用 方 法［16］。 郑 亚 军［17］采 用 正交试验，优化从椰子花序汁液中纯化椰花汁多糖的醇沉工 艺参数，结果为粗多糖液浓缩度 0. 8，加入 4 倍量 85% 乙醇， 多糖提取率 98. 00% 、含量 91. 44% 。林德祥等［18］以云芝多 糖含量为指标，采用正交试验法优选多孔菌科菌类云芝中云 芝多糖的醇沉工艺，确定醇沉条件为水提液浓缩至相对浓度 1. 25 g / mL，加 4 倍 95% 乙醇，醇沉温度 25 ℃ ，静置时间 24 h，云芝多糖含量达 35% 。陈彦等［19］以多糖含量为指标，对 注射用红参多糖的提取纯化工艺进行研究，确定醇沉条件为 药液相对浓度 1. 0 g / mL，醇沉浓度 80% ，40 ℃ 静置过夜，多 糖含量 76% 以上，粗多糖得率 12% 左右。 1. 6 其它类成分
收稿日期：2010-05-11 作者简介：孙玉琦（1978 － ） ，男，讲师，研究方向：中药新剂型与新技术。 * 通讯作者：赵文明（195416）4673439 E-mail：cpusyq@ 163. com
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2010 年 11 月 第 32 卷 第 11 期
醇沉工艺常导致醇沉产物的化学性质的差异以及有效 成分的流失，应进行分子量、酸碱性等化学性质的研究，郑必 胜等［24］采用不同醇沉浓度和醇沉方式制备广东虫草多糖， 并对多糖组分的分子量分布和含量进行研究，结果表明不同 乙醇浓度醇沉得到的多糖组分的分子量大小和含量存在有 很大差异，且与醇沉工艺有一定的对映性。化学成分含量变 化是醇沉效果的首要表现。首先应进行色谱鉴别，利用醇沉 产物的薄层色谱图谱与原料药比较，鉴别成分的存留情况， 对于有效成分尚不明确的中药，更可显示其实用性。然后进 行定量分析，测 定 一 种 或 几 种 有 效 成 分 或 指 标 性 成 分 的 含 量，计算提取率和转移率，直观分析醇沉过程品质变化。另 外，中药色谱化学指纹图谱技术能够对中药物质组群的含量 及比例关系进行刻划，单一指标成分的含量测定往往难以反
黄酮类化合物在植物界分布广泛，常以游离态或与糖结 合成苷形式存在，一般能溶于水或稀乙醇、甲醇等有机溶剂， 具有很强的生理活性，具有降低血脂、保肝、抗炎、抗菌、扩冠 等多重作用。肿节风中所含总黄酮具有抗肿瘤活性，任荣军 等［6］采用均匀设计的方法，以草珊瑚总黄酮为考察指标，优 选了肿节风的醇沉工艺，结果为水提液浓缩浓度为 0. 6 g / mL，醇沉浓度 50% ，总黄酮保留率约 96. 5% 。银杏总黄酮能 抑制内皮素的活性，宁康健等［7］研究了银杏叶水煎醇沉液对 兔血压的影响，醇 沉 条 件 为 银 杏 叶 水 提 液 浓 缩 至 相 对 浓 度 1. 0 g / mL，醇沉浓度 60% ，耳缘静脉注射能使麻醉兔收缩 压、舒张压降低，对动脉血压影响较大。陈建真等［8］研究了 葛根降糖胶囊水提醇沉的工艺条件，确定醇沉条件水提取液 浓缩至相对浓度 1. 20 g / mL，醇沉浓度 55% ，静置 24 h，浸膏 中葛根素转移率 67. 1% 、含量 24. 36 mg / mL。 1. 3 蒽醌类成分
文献标识码：B
文章编号：1001-1528（2010）11-1961-04
水提取乙醇沉淀法（简称醇沉法） 是中药活性成分纯化 与中药制剂精制过程中常用的方法。从 20 世纪 50 年代以 来，醇沉法 在 中 药 制 剂 生 产 过 程 中 已 得 到 广 泛 应 用。2010 版中国药典 I 部所载的成方制剂和单味制剂中，140 余种是 经过醇沉工艺所得。然而，醇沉法正处在中药关键技术去与 留的十字路口。一方面，醇沉能够纯化提取液，减少中药的 服用剂量和具有良好的成型性，被视为中药制剂提取精制的 “通则”；另一方 面，醇 沉 却 造 成 了 中 药 有 效 成 分 的 流 失，影 响了中药制剂的有效性和安全性，并且存在工艺参数难以控 制、醇沉过程时间长、能源材料费用大等问题［1］。