大鼠抗子宫内膜抗体(EMAb)酶联免疫吸附测定
反复自然流产患者血清P、AsAb、AcA和EmAb水平检测的临床意义
反复自然流产患者血清P、AsAb、AcA和EmAb水平检测的临床意义罗健【摘要】目的探讨反复自然流产患者血清P、AsAb、AcA和EmAb水平的变化及意义.方法应用放射免疫分析法和酶联法对32例反复自然流产患者进行血清P、AsAb、AcA和EmAb水平检测,并与35例正常妇女作比较.结果反复自然流产患者血清孕酮(P)水平非常显著的低于正常人组(P<0.01).结论血清P、AsAb、AcA和EmAb水平与反复自然流产有密切关系.【期刊名称】《淮海医药》【年(卷),期】2011(029)004【总页数】2页(P314-315)【关键词】反复自然流产;孕酮;抗精子抗体;抗心磷脂抗体;抗子宫内膜抗体【作者】罗健【作者单位】江苏省连云港市妇幼保健院,生殖中心,222006【正文语种】中文【中图分类】R714.21文献证实,孕酮(AsAb)是一种重要的性激素,不仅在月经周期的调节中起重要作用,也是维持妊娠必需的一种激素[1]。
AsAb为体内同种异体抗体,是造成免疫不育和反复自然流产的主要原因之一[2]。
抗心磷脂抗体(AcA)和抗子宫内膜抗体(EmAb)抗体测定对原发性不孕症和继发性不孕症以及反复自然流产患者中均具有十分重要的临床价值[3]。
本文报告反复自然流产患者血清中抗精子抗体(P)、AsAb、AcA和EmAb水平的变化,并就临床价值作初步探讨。
1 资料与方法1.1 资料患者组：32例,均为我院门诊经临床明确诊断的反复自然流产患者。
流产﹥ 2次以上,年龄 23-38岁,平均31.2岁。
以上患者均排除外生殖器器质性病患,子宫内膜异位症及遗传病等。
正常人组：35例,均为我院妇科门诊无流产史正常生育妇女,年龄 20～36岁,平均年龄30.4岁。
1.2 方法 (1)血清P水平测定：放射免疫分析法。
试剂盒由北方生物制品研究所提供,操作按说明书进行。
(2)血清AsAb、AcA、EmAb水平测定：采用ELISA法。
401例自然流产的免疫病因分析
作者简介：陈铁福（１９６０－），女，副主任医师，学士，研究方向：临床妇科；张颖（１９６１－），女，研究员，硕士，研究方向：遗传与优生。
［摘要］目的：探讨免疫因素与自然流产的关系。
方法：采用酶联免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ）对４０１例自然流产妇女进行血清抗精子抗体（ＡＳＡｂ）、抗卵巢抗体（ＡＯＡｂ）、抗子宫内膜抗体（ＥＭＡｂ）及抗绒毛膜促性腺激素抗体（ＨＣＧＡｂ）的检测。
结果：流产组１０６例ＡＳＡｂ阳性，阳性率为２６．１４％；９６例ＡＯＡｂ阳性，阳性率为２３．１９％；１０２例ＥＭＡｂ阳性，阳性率为２５．１４％；９２例ＨＣＧＡｂ阳性，阳性率为２２．１９％。
与对照组比较，差异均有高度显著性（Ｐ＜０．００５）。
４种抗体联合检测，抗体的阳性率为４０．００％，与单独检测ＡＳＡｂ、ＨＣＧＡｂ、ＡＯＡｂ和ＥＭＡｂ相比，差异均有高度显著性（Ｐ＜０．００５）。
结论：免疫因素是自然流产的不容忽视的因素，４种抗体的联合检测较单一抗体的检测阳性率高，对自然流产的临床诊治有一定的指导意义。
［关键词］自然流产；免疫病因；抗体［中图分类号］Ｒ７１４．２１［文献标识码］Ａ［文章编号］１００６－８１４７（２００７）０１－００８８－０３Ａｎａｌｙｓｉｓｏｎ４０１ｃａｓｅｓｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｆａｃｔｏｒｓｏｆｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓａｂｏｒｔｉｏｎＣＨＥＮＴｉｅ－ｆｕ１，ＺＨＡＮＧＹｉｎｇ２，ＺＨＡＮＧＸｉｕ－ｌｉｎｇ２，ＬＩＹａｎ２（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｂｓｔｅｔｒｉｃｓａｎｄＧｙｎｅｃｏｌｏｇｙ，ＲｅｎｍｉｎＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＴｉａｎｊｉｎ，Ｔｉａｎｊｉｎ３００１２１，Ｃｈｉｎａ；２．ＧｅｎｅｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴｉａｎｊｉｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）ＡＢＳＴＲＡＣＴＯｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｓｔｕｄｙｏｎｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓａｂｏｒｔｉｏｎａｎｄｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｆａｃ－ｔｏｒｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｓｅｒｕｍａｎｔｉｓｐｅｒｍａｎｔｉｂｏｄｙ，ａｎｔｉ－ｏｖａｒｉａｎａｎｔｉｂｏｄｙ，ａｎｔｉ－ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌａｎｔｉｂｏｄｙａｎｄａｎｔｉ－ＨＣＧａｎｔｉｂｏｄｙｉｎ４０１ｆｅｍａｌｅｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓａｂｏｒｔｉｏｎｗｅｒｅｔｅｓｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｖｅｒａｔｅｓｏｆｔｈｅａｂｏｖｅａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｗｅｒｅ２６．１４％，２３．１９％，２５．１４％ａｎｄ２２．１９％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｒｅｗａｓａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｔｅｓｔｓｐｏｎｔａｎｓｅｏｕｓａｂｏｒｔｉｏｎｇｒｏｕｐａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｖｅｒａｔｅｓｏｆｔｈｅｆｏｕｒａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｕｎｉｔｅｄｗａｓ４０．００％．Ｔｈｅｒｅｗａｓａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｕｎｉｔｅｄｔｅｓｔａｎｄｓｉｎｇｌｅａｎｔｉｂｏｄｉｅｔｅｓｔ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓａｂｏｒｔｉｏｎｉｓｍａｉｎｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｆａｃｔｏｒｓ．Ｕｎｉｔｅｄｔｅｓｔｏｆｆｏｕｒａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｉｓａｖａｌｕａｂｌｍｅｔｈｏｄｉｎｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓａｂｏｒｔｉｏｎ．ＫＥＹＷＯＲＤＳＳｐｏｎｔａｎｅｏｕｓａｂｏｒｔｉｏｎ；Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｆａｃｔｏｒｓ；Ａｎｔｉｂｏｄｙ陈铁福１，张颖２，张秀玲２，李岩２（１．天津市人民医院妇产科，天津３００１２１；２．天津医科大学总医院）４０１例自然流产的免疫病因分析自然流产是一种常见的妊娠并发症，其病因除与遗传、解剖、内分泌因素有关外，４０％～６５％与免疫因素有关［１～３］。
大鼠维生素B6(VB6)酶联免疫分析
大鼠维生素B6（VB6）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T12ng/L -500ng/L使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中维生素B6（VB6）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠维生素B6（VB6）水平。
用纯化的大鼠维生素B6（VB6）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入维生素B6（VB6），再与HRP标记的维生素B6（VB6）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的维生素B6（VB6）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠维生素B6（VB6）浓度。
试剂盒组成标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
试剂报价单3
三明博峰
多胺法
分泌物
50T
155
爱滋病检测试剂(HIV)
爱滋病试剂盒
北京金豪
金标层析
血清
50T
295
爱滋病试剂盒
北京金豪
酶免Biblioteka 血清96T200优生优育系列
巨细胞病毒（CMV）
博峰
金标
血清
24T/48T
70/140
弓型虫（TOX）
博峰
金标
血清
24T/48T
70/140
风疹病毒（RV）
博峰
金标
博峰
金标
血清
24T/48T
115/230
消化道系列
胃幽门螺旋杆菌（HP）
三明博峰
金标
血清
50T
150
其它产品
抗A.B血型
北京金豪
100T
血
盒
40
早早孕试纸条
*美国艾康
100T
尿液
盒
43
试纸系列
尿仪试纸
*桂林优力特
10/11项
尿液
100T
105/110
液基细胞涂片试剂（TCT）
珠海
手工
分泌物
T
18
肝病试剂
乙肝两对半（HBV）
北京金豪
酶联免疫
血清
96T
235
乙肝两对半（HBV）
厦门新创
金标层析
血清
25T
130
乙肝表面抗原（HBsAg）
*广州万孚
金标层析
血清
200T
170
试剂报价单
产品名称
产地
方法
检测物质
检验科项目
包括FT3、FT4、TSH
总甲功三项
包括T3、T4、TSH
妊娠甲状腺功能筛查
包括FT3、FT4、TSH、TPO-Ab
三碘甲状腺原氨酸
T3
甲状腺激素
T4
游离三碘甲状腺原氨酸
FT3
游离甲状腺激素
FT4
促甲状腺激素
TSH
抗甲状腺球蛋白抗体
TG-Ab
抗甲状腺微粒体抗体
TM-Ab
抗甲状腺抗体过氧化物酶抗体
TPO-Ab
促甲状腺素受体抗体
TRAb
血清反T3测定
r T3
肾上腺系列检测
中文名称
简写
促肾上腺皮质激素（化学发光法）
ACTH
醛固酮（化学发光法）
ALD
皮质醇（化学发光法）
COR
糖尿病系列检测
中文名称
简写
葡萄糖耐量试验（空腹，餐后30，60，120，180分钟后抽血）
己糖激酶法
胰岛素（INS）（空腹）
九、免疫检测项目
中文名称
简写
1.乙肝两对半
乙型肝炎表面抗原测定
HBsAg
乙型肝炎表面抗体测定
Anti-HBs
乙型肝炎e抗原测定
HBeAg)
乙型肝炎e抗体测定
Anti-HBe
乙型肝炎核心抗原测定
HBcAg)
2.梅毒螺旋体特异抗体测定(凝集法)
不加热血清反应素试验
3.艾滋病抗体检测
十、微生物检测项目
中文名称
地高辛血药浓度测定（荧光偏振免疫法）
DIG
细胞学检查及常用ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ色技术
骨髓涂片细胞学检验
血片2张、骨髓片6张、病史、血常规报告单
【国家自然科学基金】_酶联免疫吸附检测(elisa)_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140802
1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91102 103 104 105 106
科研热词 推荐指数 酶联免疫吸附测定 9 酶联免疫吸附试验 7 血管内皮生长因子 5 胃肿瘤 5 细胞凋亡 4 逆转录病毒科 3 细胞因子类 3 干燥综合征 3 多克隆抗体 3 elisa 3 鼻炎 2 霜天蛾 2 镍 2 酶联免疫吸附试验(elisa) 2 逆转录聚合酶链反应 2 软骨细胞 2 转染 2 转化生长因子β 1 2 血脑肿瘤屏障 2 血清 2 自身抗体 2 肿瘤坏死因子-α 2 肿瘤坏死因子 2 肺损伤 2 聚合酶链反应 2 糖尿病 2 神经生长因子 2 白细胞介素6 2 炎症 2 模型,动物 2 抗体,单克隆 2 抗体 2 子宫内膜异位症 2 大鼠 2 基因表达 2 同步化 2 变应性 2 变应原 2 卵巢肿瘤 2 单核细胞 2 单克隆抗体 2 动脉粥样硬化 2 免疫特性 2 光刺激 2 低频超声 2 α -胞衬蛋白 2 t淋巴细胞 2 pc12细胞 2 p38有丝分裂原激活蛋白激酶 2 nf-κ b 2 erk1/2 2 14-3-3蛋白 2
53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106
醋酸亮丙瑞林辅助治疗子宫内膜异位症的效果观察
进患者恢复。 由于 EMs 疾病本身具有侵袭性、种植性，探讨相关指
2.2 性激素
标变化对疾病转归有重要意义，EmAb 属于以子宫内膜为
治 疗 12 周 后 研 究 组 血 清 E2、 FSH 水 平 优 于 对 照 组 （P＜0.05），见表 1。
靶原的抗体，具有激素依赖性，在患者卵巢激素调节下内 膜种植于盆腔，巨噬细胞吞噬后，子宫内膜的某些抗原被
t
0.607
2.287
0.424
5.310
0.254 3.115
学, 2019, 10（1）：69-71.
P
0.545
0.024
0.672
＜0.001
0.800
0.002
［3］ 谢桃利. 炔雌醇环丙孕酮片联合散结镇痛胶
2.4 复发率 随访 1 年内研究组失访 1 例，无复发；对照组失访 2
例，复发 7 例。研究组 1 年内复发率 0.00% （0/51） 低于对 照组的 15.56% （7/45），差异有统计学意义 （χ2=8.557，P=
对照组，表明加用醋酸亮丙瑞林治疗 EMs，总有效率可达
96.30% （52/54）；对照组显效 19 例，有效 28 例，无效 6
96.30%，且能显著调节性激素水平，从而降低复发率，促
例，总有效率为 88.68% （47/53）。两组总有效率比较差异 无统计学意义 （χ2=2.243，P=0.134）。
（1） 纳入标准：患者表现为痛经、盆腔痛、性交痛、 腰痛等，B 超与妇科检查发现盆腔部位有包块，均经腹腔
镜手术治疗，腹腔镜术后病理确诊为 EMs；临床资料完 整；入选患者近 6 个月未服用激素类药物；知情本研究， 签署同意书。（2） 排除标准：哺乳期、妊娠期女性；腹腔 镜手术禁忌证者；认知功能障碍者；伴有盆腔炎者；合并 严重心肾等脏器功能不全者；合并生殖系统其他疾病者； 对本研究使用药物过敏者；合并血液系统疾病者。 1.3 方法
复发性流产患者自身抗体的检测
复发性流产患者自身抗体的检测刘继龙（钦州市妇幼保健院生殖中心广西钦州535000）【摘要】目的探讨抗心磷脂抗体（ACA）、抗子宫内膜抗体（EmAb）和封闭抗体（BA）对复发性流产（RSA）诊断的意义。
方法分别检测分析120例RSA患者及93例正常对照组妇女血清ACA、EmAb及BA。
结果RSA组ACA和EmAb阳性率分别为27．5%和28．3%；对照组5．4%和7．5%，两组比较差异均有统计学意义（P＜0．05）。
RSA组BA阴性检测率81．7%明显高于对照组12．9%，差异显著（P＜0．05）。
结论血清相关自身抗体检测对RSA的诊断有重要意义。
【关键词】复发性流产抗心磷脂抗体抗子宫内膜抗体封闭抗体The detection of serum autoantibodies in patients with recurrent spontaneous abortion．LIU Ji－long．Reproductive Medicine Center，Mater-nal and Child Health Hospital of Qinzhou，Qinzhou，Guangxi535000，China．【Abstract】Objective To study the diagnostic significance of anticardiolipin antibody（ACA），anti－endometrium antibody（EMAb）and blocking antibody（BA）in patients with recurrent spontaneous abortion（RSA）．Methods ACA，EmAb and BA were detected in120pa-tients with RSA and93healthy pregnant women．Results The positive rates of ACA and EmAb in RSA patient group were significantly higher than those in control group（27．5%vs．5．4%and28．3%vs．7．5%，P＜0．05）．The negative rate of BA in RSA patient group was also signifi-cantly higher than that of control group（81．7%vs．12．9%，P＜0．05）．Conclusion The detection of serum autoantibodies is important in di-agnosis of RSA．【Key words】Recurrent spontaneous abortion；Anticardiolipin antibody；Endometrial antibodies；Blocking antibody复发性流产（RSA）的治疗可谓医学界的一大“难题”。
大鼠α2微球蛋白αmicroglobulin酶联免疫分析ELISA
大鼠α2微球蛋白(α2-microglobulin)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中α2微球蛋白(α2-microglobulin)含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠α2微球蛋白(α2-microglobulin)水平。
用纯化的大鼠α2微球蛋白(α2-microglobulin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入α2微球蛋白(α2-microglobulin)，再与HRP标记的α2微球蛋白(α2-microglobulin)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的α2微球蛋白(α2-microglobulin)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠α2微球蛋白(α2-microglobulin)浓度。
样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
子宫内膜异位症患者腹腔液中IL-6、IL-8、IL-10含量升高及其临床意义
子宫内膜异位症患者腹腔液中IL-6、IL-8、IL-10含量升高及其临床意义唐家龄;宋淑本;黄子健;李志刚;范雪梅【期刊名称】《现代妇产科进展》【年(卷),期】1999(8)4【摘要】目的：检测子宫内膜异位症（endometriosis，EMS）患者腹腔液中IL-6、IL-8、IL-10含量及其临床意义。
方法：剖腹探查手术中采集EMS组及对照组的腹腔液，用酶联免疫吸附法（ELISA）测细胞因子水平。
EMS组中，13份测IL-6，16份测IL-8，22份测IL-10，共51份，对照组检测57份。
结果：EMS组和对照组IL-6的含量分别为155．88±114．92ng／L和28．74±25．88ng／L （P＜0．01）。
IL-8的含量分别为630．97±404．72ng／L和63．05±62．3ng／L（P＜0．01）。
IL-10也明显高于对照组［（38．88±38．75ng／L比10．45±4．33ng／L（P＜0．01）〕。
结论：EMS患者腹腔液中IL-6、IL-8及IL-10均升高，提示EMS患者的巨噬细胞活性增强，细胞因子含量增加，可干扰患者免疫调节功能。
【总页数】3页(P329-331)【关键词】子宫内膜异位;腹腔液;细胞因子;白细胞介素6【作者】唐家龄;宋淑本;黄子健;李志刚;范雪梅【作者单位】广州市妇婴医院妇产科【正文语种】中文【中图分类】R711.710.3【相关文献】1.香鹿消痛汤对子宫内膜异位症大鼠腹腔液TNF-α、IL-6及IL-8含量的影响 [J], 曹佃贵;陈颖异;蔡珠华;蔡慧兰;蔡宇萍2.EMS患者腹腔穿刺液IL-6、IL-8和血清TNF-α、IL-6、IL-8检测的临床意义[J], 陈月娟3.VEGF、IL-6、IL-8在子宫内膜异位症患者血清和腹腔液中的表达 [J], 潘佳;马汝婵;陈友国;沈芳荣4.子宫内膜异位症患者血清、腹腔液中EMAb、IL-6、IL-8的测定 [J], 贾艳芳5.子宫内膜异位症患者血清、腹腔液中EMAb、IL-6、IL-8的测定 [J], 贾艳芳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
大鼠抗子宫内膜抗体（EMAb）酶联免疫吸附测定
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用
预期应用
ELISA法定量测定大鼠血清、血浆、细胞培养物上清或其它相关液体中抗子宫内膜抗体
（EMAb）含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中抗子宫内膜抗体（EMAb）水平。用抗
原包被微孔板，制成固相，往包被单抗的微孔中依次加入抗子宫内膜抗体（EMAb）、生物
素化的抗大鼠抗子宫内膜抗体（EMAb）抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物
TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的抗子宫内膜抗体（EMAb）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定
吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
1.酶联板：一块（96孔）
2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，
然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为10000pg/mL，做系列倍比稀释后，分别稀释成10000
pg/mL，5000pg/mL，2500pg/mL，1250pg/mL，625pg/mL，312.5pg/mL，156pg/mL，其
原液直接作为最高标准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度0pg/mL，临用前15分钟内配
制。
如配制5000pg/mL标准品：取0.5ml10000pg/mL的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液
的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3.样品稀释液：1×20ml/瓶。
4.检测稀释液A：1×10ml/瓶。
5.检测稀释液B：1×10ml/瓶。
6.检测溶液A：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液A1：100稀释，稀释前根据预先
计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如1ul
检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
7.检测溶液B：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液B1：100稀释。稀释方法同检测
溶液A。
8.底物溶液：1×10ml/瓶。
9.浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10.终止液：1×10ml/瓶（2NH2SO4）。
标本的采集及保存
1．细胞培养物上清：请离心后收集上清，并将标本保存于-20℃，且应避免反复冻融。
2．血清：标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000xg离心20分钟，取上清即可检测，
或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
3．血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C1000xg离心15
分钟，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
操作步骤
各试剂在使用前平衡至室温。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。除空白孔外，余孔分别加标准溶液或待测样
品100ul，注意不要有气泡，轻轻混匀，酶标板加上盖，37℃反应120分钟。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。
3.每孔加检测溶液A工作液100ul，37℃,60分钟。洗板3次，350ul/每孔，甩干。
4.每孔加检测溶液B工作液100ul，37℃，60分钟，洗板5次，甩干。
5.依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光显色30分钟（此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明
显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显）。
6.依序每孔加终止溶液50ul，终止反应（此时兰色立转黄色）。用酶联仪在450nm波长依序
测量各孔的光密度（OD值）。
注：
1．每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2NH2SO4。
测量时先用此孔调OD值至零。
2．为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，
酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.4ml注入孔内，浸泡1-2分钟，根据需
要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
特异性
本试剂盒可同时检测重组或天然的大鼠抗子宫内膜抗体（EMAb），且与其它相关蛋白无
交叉反应。
计算
以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上
绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准
物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出
样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1．洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
2．一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
3．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
4．如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。
5．在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
6．底物请避光保存。
检测范围：
156pg/mL-10000pg/mL
说明
1.在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染，
试剂避免受到微生物的污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。
2.小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。请注意在吸取标本/标准品，酶结合
物或底物时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵
育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。而且，洗涤不充分将影响试验结果。
3.试剂盒保存：部分试剂保存于-20℃，部分试剂保存于2-8℃，具体以标签上的标示为准。
4.浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
5.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任
何影响。
6.中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
7.所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
8.有效期：6个月