正交实验优选铁皮石斛多糖提取工艺的研究
水提法优化广南铁皮石斛多糖的提取工艺
酚试剂 、 蒸馏水、 乙醚、 浓硫酸 、 丙酮、 葡萄糖 、 氯仿 、
８ ０ ％ 的三氯 乙酸溶 液 、正丁 醇 （ 分 析纯 ） 。
收 稿 日期 ：２ ０ １ ４—１ １ —１ １
精密称取 １ ０ ｇ 铁皮石斛粗粉 ，固定浸提温度为
干烦渴 ，食 少干呕 ，病后虚热 ，目暗不 明 １ ２ ］ 。铁皮
石斛 已被 列 为 国家二 级 保 护濒 危植 物 。同 时也 被列
普通离心机 （ 上海安亭科学仪器 厂 ） ，Ｓ Ｘ Ｔ 一 ０ ２ 索 氏 提取器 （ 杭州 汇尔仪器有 限公 司 ） ，Ｈ Ｈ 一 ２数显恒 温水 浴 锅 （ 常 州 国华 电器 有 限公 司 ） ，旋 转 蒸 发 仪
摘要 ：在单 因素实验 的基础上 ，通过正交试验优化热水浸提法提取广南铁皮石斛多糖的工艺，利用紫外 分 光光度法测定 多糖含量。结果表 明，铁皮石斛 多糖 热水浸提法 的最佳提取工 艺为浸提次数 ３ 次 ，料液 比 １： ４ ０ ， 浸提温度 ９ ０ ℃ ，此条件下多糖的得率为 ２ ４ ． ６ ％。 关键词 ：铁皮石斛；正交实验；水提法；硫酸苯酚法；醇沉；离心 中图分 类号 ：Ｇ ９ ４ ９ ． ７ １ ８ ． ４ ３ 文献 标志 码 ： Ａ 文章编 号 ：１ ６ ７ ４—９ ２ ０ ０（ ２ ０ １ ５） ０ ３ —０ ０ ０ ８—０ ４
有 限公 司 ） ，电 子 天平 （ 浙 江 凯 丰 集 团有 限公 司 ） ，
是 兰科 （ Ｏ ｒ ｃ ｈ ｉ ｄ ａ ｃ ｅ ａ ｅ ）石 斛 属 （ Ｄｅ ｎ ｄ ｒ ｏ ｂ ｉ ｕ ｍ）多 年
生附生草本植物 ，干品称为铁皮枫斗 ，是我 国传统
名 中药 【 ｎ，是石 斛 中的极 品。用 于 阴 伤津 亏 ， 口
石斛中多糖含量的测定
题目石斛中多糖含量的测定学生姓名高换楼学号1111034082所在学院化学与环境科学学院专业班级化工1102班指导教师季晓晖完成地点陕西理工学院2015 年 06 月 08 日石斛中多糖含量的测定高换楼（陕西理工学院化学与环境科学学院化工专业1102班，陕西汉中723001）季晓晖[摘要] 石斛为我国常用贵重药材，有养阴清热、益胃生津的功效，石斛一直备受国内外研究者的重视。
本文利用蒽酮-硫酸法对铁皮石斛多糖的含量进行了测定，并采用正交试验得到最佳实验方案，在石斛粉碎程度为粉末、液料比为50mL/g、提取2次，每次3小时的情况下多糖提取率最高。
本文的实验结果为今后铁皮石斛多糖提取的质量评价及其进一步开发和利用提供参考依据。
[关键词] 石斛；多糖；蒽酮-硫酸法；抗氧化性；测定；Determination of Dendrobium polysaccharide contentGAO Huanlou（Grade 02, Class 11, Major chemical engineering, School of chemical and environmental science Dept, Shaanxi University of Technology, Hanzhong 72300x, Shaanxi）Tutor: JI XiaohuiAbstract: Dendrobium is in common use in our country precious medicinal herbs, the effect of nourishing yin and clearing heat, nourishing stomach fluid, Dendrobium has attracted a lot of attention of researchers at home and abroad. The anthrone-sulfuric acid method of Dendrobium officinale polysaccharide content were measured, and using the orthogonal test and the optimum solution is obtained. In Dendrobium degree of comminution is in the form of powder, liquid to solid ratio for 50mL/1g, extraction 2 times, every time 3 hours of polysaccharides extraction rate was the highest. The experimental results for the quality evaluation of future Dendrobium officinale polysaccharide extraction and its further development and utilization to provide reference.Key words: Dendrobium; polysaccharide; anthrone-sulfuric acid method; antioxidation; determination;目录1论文综述 (1)1.1石斛生物碱 (1)1.2石斛多糖 (1)1.3铁皮石斛的其他化学成分 (3)1.3.1氨基酸类 (5)1.3.2微量元素 (5)1.3.3木脂素类 (5)1.3.4酚酸类 (5)1.3.5苯丙素类 (6)1.3.6芪类其衍生物 (6)1.3.7菲类和联苄类化合物 (7)1.4石斛的药理作用 (7)1.4.1增强机体免疫作用 (7)1.4.2抗氧化作用 (7)1.4.3抗肿瘤作用 (7)1.4.4抗疲劳作用 (8)1.4.5降血糖作用 (8)1.4.6生津作用 (8)1.4.7其他药理作用 (8)2实验 (8)2.1材料和试剂、仪器 (8)2.1.1仪器 (8)2.1.2材料及试剂 (9)2.2试验方法 (9)2.2.1预处理与纯化过程 (9)2.2.2样品制备及试剂配制 (9)2.2.3测定 (9)2.2.4铁皮石斛多糖抗氧化性测定 (10)2.2.5多糖提取的正交试验 (10)2.2.3计算 (11)2.2.5结果与分析 (11)3结论 (13)4外文翻译 ...................................................................................................................... 错误!未定义书签。
水提-匀浆法提取石斛中多糖的工艺研究
水提-匀浆法提取石斛中多糖的工艺研究张义;何剑文;龙群珍;庄晓琳;白音;任健敏【摘要】以不同品种石斛为研究对象,在水提法的基础上,引入匀浆辅助处理,采用正交试验研究了提取时间、提取次数、提取温度对铁皮石斛多糖提取的影响.结果表明,在水温80℃、提取时间70s、提取次数5次时,提取效率较佳,这种操作简单、提取效率高的石斛多糖提取新方法,可为其他植物多糖的提取提供参考.【期刊名称】《韶关学院学报》【年(卷),期】2017(038)009【总页数】3页(P6-8)【关键词】石斛;多糖;正交实验法;提取工艺【作者】张义;何剑文;龙群珍;庄晓琳;白音;任健敏【作者单位】韶关学院化学与环境工程学院;韶关学院化学与环境工程学院;韶关学院化学与环境工程学院;韶关学院化学与环境工程学院;韶关学院英东生命科学学院,广东韶关512005;韶关学院化学与环境工程学院【正文语种】中文【中图分类】TS201.1;TQ464.1石斛（Dendrobium nobile Lindl）是兰科（Orchidaceae）石斛属（Dendrobium）多年生附生草本植物,是我国传统名贵中药［1］.多糖是石斛的主要活性成分之一，可促进机体免疫力，具有抑制肿瘤、抗氧化、降血糖和延缓衰老等功效［2］.因此，石斛的人工栽培、石斛多糖的药理作用及提取工艺成为近年来的研究热点［3-4］.石斛多糖的提取主要采用水提法，在水提时引入酶、超声波等辅助处理后提取效率增加.本文以铁皮石斛为研究对象，在水提法的基础上，引入匀浆辅助处理，研究了石斛多糖的提取工艺条件，建立了一种操作简单、提取效率高的石斛多糖提取新方法，为石斛多糖和其他植物多糖的提取提供参考.云南铁皮石斛、广西铁皮石斛、始兴金钗石斛、广西金钗石斛、云南金钗石斛（石斛采收后去叶留茎洗净，60℃的干燥箱烘干）；葡萄糖、无水乙醇、浓硫酸、苯酚等，所用试剂均为分析纯；所用水为高纯水.JP-150-A-8型高速万能粉碎机（永康市久品公贸有限公司）、飞利浦HR2101型搅拌机（飞利浦投资有限公司）、电热恒温鼓风干燥箱（上海贺德实验有限公司）、BSA224S型电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）、LD-UPW型纯水机（上海砾鼎水处理设备有限公司）、722S分光光度计（上海佑科仪器仪表有限公司）. 2.1 石斛的预处理称取适量石斛粉末，加入无水乙醇回流［5］，去除可溶性单糖，滤渣挥干溶剂，备用.2.2 多糖的提取方法2.2 .1 水提-匀浆法准确称取预处理好的石斛0.5 g，放入装有过滤网的搅拌机内，加入100 mL 80℃的热水，以第2档的速度匀浆浸提，分别提取5次，每次时间70 s，收集并合并过滤好的提取液，转移至1 L的容量瓶中定容，得到石斛多糖提取待测液.2.2 .2 水提法［6］准确称取预处理好的石斛0.5 g，加入20 mL蒸馏水，90℃水浴浸提1 h，残渣反复提取三次，趁热过滤，合并滤液，加蒸馏水定容到100 mL，稀释4倍后，得到石斛多糖提取待测液.2.3 多糖的测定方法采用苯酚－硫酸法［7］对石斛提取液中的多糖进行测定.分别准确移取不同体积的葡萄糖标准溶液（浓度为91 ug/mL）于比色管中，然后全部加水补到相同体积.分别准确加入5%苯酚溶液1 mL、浓硫酸5 mL，摇匀，置于沸水浴中加热20 min，取出于冰水浴中冷却5 min，以试剂空白为参比，在488 nm波长下测其吸光度A，有关数据见表1，溶液的吸光度越大，表明溶液中多糖的含量越高.以吸光度A为纵坐标，葡萄糖标准溶液体积V为横坐标，绘制标准曲线，线性回归方程为A=0.789V+0.009 3，相关系数为r=0.999 5.准确移取一定体积的石斛提取待测液于比色管，按照上述同样的步骤测定其吸光度.由标准曲线的线性回归方程计算葡萄糖标准溶液体积V，根据下列公式计算干燥石斛中多糖的含量：3.1 提取时间对铁皮石斛多糖提取效率的影响按照实验方法 2.2.1，改变提取时间 0、30、45、60、75 s，分别进行多糖提取，得到石斛多糖提取液.再按照2.3多糖的测定方法，测定提取液的吸光度，以吸光度大小衡量铁皮石斛多糖的提取效率，结果见图1.由图1可见，溶液的吸光度随着提取时间的增长而提高，到60 s时吸光度达到最大，之后吸光度有所降低.说明提取达到一定时间时，多糖基本溶出，为节约成本，初步确定提取时间为50～70 s.3.2 提取次数对铁皮石斛多糖提取效率的影响按照实验方法 2.2.1，提取次数分别为 1、2、3、4、5 次，提取时间为 60 s，得到石斛多糖提取液，采用蒽酮-硫酸法测定其吸光度.由图2可以看出，吸光度随提取次数的增加而增大，但超过4次之后，吸光度的增长趋缓，同样考虑节约成本，初步选择提取3～5次.3.3 提取温度对铁皮石斛多糖提取效率的影响按照实验方法 2.2.1，改变水的温度分别为 50、60、70、80、90℃，提取次数5次，提取时间为60 s，得到石斛多糖提取液，测定其吸光度.由图3可知，提取水的温度升高，吸光度增加，吸光度在80℃时达到最大.说明较高的温度有利于多糖的溶出，但温度太高可能会造成多糖的降解，初步确定提取温度为70～90℃.3.4 正交试验设计根据提取时间、提取次数和提取温度三个单因素对水提-匀浆法提取铁皮石斛多糖提取效率的影响结果，设计三因素三水平正交试验优化提取工艺条件，见表2. 3.5 正交试验结果正交试验结果见表3，由此可知，水提-匀浆法提取铁皮石斛多糖影响因素的主次顺序为B＞C＞A，即提取次数影响最大，提取温度次之，提取时间影响最小.提取工艺最佳条件为B3C2A3，即提取次数为5次，提取温度为80℃，提取时间为70 s，由正交表可知在最佳方案下多糖的提取率为32.09%.3.6 不同品种石斛中多糖的提取结果按照2.2.1和2.2.2实验方法，对不同品种的石斛进行多糖的提取，结果见表4.结果表明，水提-匀浆法提取石斛多糖的效果远高于传统的水提法.不同品种的石斛的多糖含量相差也较大，铁皮石斛的多糖含量远高于金钗石斛，说明多糖是铁皮石斛的特征成分［8］.在水提法的基础上，引入匀浆辅助处理，改进了提取工艺，与传统水提取法相比，水提-匀浆法操作简单，提取时间短，提取效率高.以铁皮石斛为对象，研究了提取时间、提取次数、提取温度三因素对石斛多糖提取的影响，在水温80℃、提取时间70 s、提取次数5次时，提取效率较佳.石斛多糖含量与其品种和种植环境有密切关系，铁皮石斛的多糖含量远高于金钗石斛.水提-匀浆法是一种较好的多糖提取方法，可以用于其他植物多糖的提取.【相关文献】［1］江苏新中医学院.中药大辞典[M].上海:上海科学技术出版社,1985:586.［2］白音,包英华,金家兴,等.我国药用石斛资源调查研究[J].中草药,2006（9）:4-6.［3］张子燕,石海英,白音.石斛仿野生栽培模式研究[J].韶关学院学报,2016（8）:56-58.［4］薛丹,黄豆豆,黄光辉,等.植物多糖提取分离纯化的研究进展[J].中药材,2014,37（1）:157-161. ［5］黄晓君,聂少平,王玉婷,等.铁皮石斛多糖提取工艺优化及其成分分析[J].食品科学,2013,34（22）:21-26.［6］李程程,丁长春.水提法优化广南铁皮石斛多糖的提取工艺[J].文山学院学报,2015,28（3）:8-10.［7］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京:中国医药科技出版社,2015:283. ［8］徐德林,储士润,肖世基,等.不同产地的铁皮石斛和金钗石斛石斛多糖、石斛碱、氨基酸含量的比较[J].时珍国医国药,2016,27（11）:2738-2740.。
化学选论作业--铁皮石斛多糖的研究进展.
铁皮石斛多糖的研究进展***，学号：*************大学化学与材料工程学院摘要：本文综述了近五年来国内外铁皮石斛多糖成分的研究进展，参考了三十余篇文献。
介绍了铁皮石斛多糖的含量、提取工艺、结构分析、抗氧化性、增强免疫力及抑制肿瘤等方面。
关键词：铁皮石斛；多糖；抗氧化性；铁皮石斛( Dendrobium officinale Kimura et Mi-go ) 为兰科石斛属多年生附生草本植物，是一种名贵的中药材，自古以来就有“药中黄金”之美誉，民间称其为“救命仙草”，主要生长在我国西南和江南各省。
[1]由于铁皮石斛在自然条件下生长的环境较为苛刻，加上人们过度采挖，导致野生的铁皮石斛资源濒临灭绝，目前铁皮石斛已经实现了人工栽培，但一般也不易成活。
铁皮石斛主要含有多糖、生物碱、氨基酸、菲类化合物等化学成分，药理研究证明铁皮石斛具有抗肿瘤，增强免疫功能及抗氧化活性。
[2,3]本文就铁皮石斛多糖的含量、提取工艺、结构分析，抗氧化性、调节免疫力及抑制肿瘤等方面研究工作做一概述。
1 多糖含量铁皮石斛中多糖含量比较高，铁皮石斛所含多糖的种类很多, 其总多糖含量一般在30%以上。
但是不同产地的铁皮石斛中多糖的含量不一样，人工栽培和野生的铁皮石斛多糖的含量也有差别，铁皮石斛的不同部位多糖含量有差异，加工前后铁皮石斛中多糖的含量则有更大的差别。
[4]徐程等[5]检测了8种不同产地的铁皮石斛总多糖含量，发现浙江富阳品种最高，其次是浙江雁荡、福建、云南、广东、广西和湖南。
黎万奎等[6]将人工栽培的铁皮石斛和野生铁皮石斛加工的铁皮枫斗进行了对比研究，多糖含量分别为25. 31%和29. 38%，说明人工栽培铁皮石斛与野生铁皮石斛的多糖含量有差别但不是很大。
铁皮石斛多糖的分布部位茎中＞茎上＞茎下＞根部[7]有人对25 种石斛属植物36个样品的多糖含量进行测定，结果广西的加工品一级枫斗中多糖含量高达45.98% ，而原植物铁皮石斛中多糖含量仅为18. 20%。
铁皮石斛多糖的研究进展
铁皮石斛多糖的研究进展xx（xx，xx，xx）摘要：以系统的文献调研为基础,对兰科石斛属植物铁皮石斛多糖的含量、药理作用、提取方法和组成加以综述。
该文对其多糖的含量、药理作用、提取方法和组成等方面做了详细而全面的总结,为今后铁皮石斛药用资源的更好的开发利用提供参考。
关键词: 铁皮石斛多糖药效药用资源1 引言铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo),是兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium)多年生附生草本植物[1],一种名贵珍稀濒危的中药材。
自古以来就有“植物熊猫”、“救命仙草”的美誉。
其主要分布于西南部（大别山）、东部（鄞县、天台、仙居）、西部（宁化）、广西西北部（天峨）、（地点不详）、东南部（石屏、、麻栗坡、西畴）。
生于海拔达1600米的山地半阴湿的岩石上[2]。
铁皮石斛具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳等功效,位列“中华九大仙草之首”,被录入2010版药典[3]。
由于铁皮石斛在自然条件下生长的环境较为苛刻，加上人们过度采挖，导致野生的铁皮石斛资源濒临灭绝。
目前铁皮石斛已经实现了人工栽培，但一般也不易成活。
铁皮石斛主要含有多糖、生物碱、氨基酸、酚类化合物等化学成分。
现代药理研究表明铁皮石斛在增强免疫力、抗肿瘤、抗氧化、抗疲劳、降血糖、生津、镇咳等方面有多种功效[4]。
本文就铁皮石斛多糖的含量、药理作用、提取方法和组成等方面研究工作进行概述。
2 铁皮石斛多糖含量的研究近年来,铁皮石斛多糖的研究得到了人们越来越多的关注。
由于铁皮石斛多糖是铁皮石斛的主要成分，其含量较高,还具有提高免疫力、抗氧化、抗肿瘤等功效,使得铁皮石斛在医学上具有极大的应用前景。
多糖的含量测定方法有苯酚-硫酸法[5]、3,5-二硝基水酸法[6]、分子光谱法[7]等。
2.1 不同器官组织、不同生长期多糖含量不同无论是野生苗还是人工栽培苗，都是茎中多糖含量最高，又尤以二年生的茎中多糖含量最高。
铁皮石斛多糖复合酶法提取工艺及其抗氧化性
铁皮石斛多糖复合酶法提取工艺及其抗氧化性薛燕;敢小双;黄开丽;李丽;王巧娥;董银卯【期刊名称】《食品工业科技》【年(卷),期】2018(039)003【摘要】探讨复合酶法提取铁皮石斛多糖的最佳工艺以及酶解多糖的抗氧化活性.利用单因素及L18(37)正交实验研究了酶配比、酶浓度、酶解温度、酶解时间、料液比及pH对多糖得率的影响,并通过清除DPPH、ABTS自由基研究酶解多糖的抗氧化活性.结果显示酶解最优条件:中性蛋白酶与纤维素酶比例为2∶1,酶浓度为10％,料液比为1∶120,酶解温度为55℃,pH6.0,酶解时间为3h,在此条件下多糖得率为43.85％±1.8％;酶解多糖对DPPH、ABTS自由基的IC50分别为1.331、0.467 mg/mL,说明酶解石斛多糖具有较好的抗氧化活性.【总页数】6页(P215-219,225)【作者】薛燕;敢小双;黄开丽;李丽;王巧娥;董银卯【作者单位】中国轻工业化妆品重点实验室,北京工商大学,北京100048;无限极(中国)有限公司,广东广州510623;中国轻工业化妆品重点实验室,北京工商大学,北京100048;中国轻工业化妆品重点实验室,北京工商大学,北京100048;中国轻工业化妆品重点实验室,北京工商大学,北京100048;中国轻工业化妆品重点实验室,北京工商大学,北京100048【正文语种】中文【中图分类】TS201.1【相关文献】1.正交试验法优化铁皮石斛多糖的高效高压差低温连续式提取工艺 [J], 宋力飞;刘常青;马志鹏;王旭龙;罗俊;容永赐;李伟杰2.铁皮石斛花多糖提取工艺及体外抗氧化性研究 [J], 缪园欣;廖明星;孙爱红;李蓉3.铁皮石斛多糖的提取工艺及对生物活性影响研究进展 [J], 喻明军;向敏;夏勇;刘西岭;李涛;徐娟4.铁皮石斛多糖的提取工艺及对生物活性影响研究进展 [J], 喻明军;向敏;夏勇;刘西岭;李涛;徐娟5.响应面法优化滇产铁皮石斛多糖的提取工艺 [J], 李倩倩;王昀;李月;左绍远;陈贵元因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
正交试验报告ppt课件
试验材料和仪器
试验材料 悬浮培养于1/2MS液体培养基的铁皮石解原球茎，于60度烘干后，经粉碎、干 燥恒重处理后备用。
试剂
氯仿、苯酚、浓硫酸、正丁醇、乙醇、葡萄糖、冰醋酸、胃蛋白酶、考马斯亮 蓝G-250、牛血清蛋白均为分析纯。 仪器 UV-1700型分光光度计、索氏提取器、HH-S恒温水浴涡、ZFQ85A旋转蒸发仪、 SHZ-200型双配套循环水式多用真空泵、冷冻干燥机。
金钗石斛类原球茎诱导及增殖的正交试验 3种石斛兰以茎段为外植体的离体快繁技术 霍山石斛细胞悬浮培养及条件优化
不同因素对大苞鞘石斛原球茎分化的影响
金钗石斛原生质体的制备与融合 铁皮石斛组培苗生根条件优化研究
石斛ISSR-PCR体系的优化
春石斛和铁皮石斛试管苗壮苗生根条件的优化
多糖提取条件的确立
采用L8(24)正交设计，试验重复2次，各处理内容见表1。
ห้องสมุดไป่ตู้
何铁光, 杨丽涛, 李扬瑞等. (2006). 铁皮石斛原球茎多糖提取最佳工艺研究. 西北农业学报, 15(5), 240-243.
石斛快繁技术
稀土微肥对铁皮石斛试管苗壮苗的影响 铁皮石斛原球茎液体悬浮培养的研究 霍山石斛原球茎液体培养条件的优化 不同激素浓度对铁皮石斛高效快繁体系的影响
正交试验优选环草石斛
不同氮磷钾营养水平对铁皮石斛组培苗生长的影响 大苞鞘石斛组织培养快繁研究
大苞鞘石斛胚组织培养及植株再生研究
• 多糖含量：
多糖含量 = 总糖 - 还原糖。
石斛多糖含量的测定方法：苯酚硫酸法
苯酚制取:取苯酚200g，加铝片O.2g和碳酸氢钠O.1g，蒸馏， 收集182摄氏度馏分，称取一定量重蒸苯酚，加入蒸馏水混匀， 溶解即得。置棕色瓶中，放冰箱内备用。
铁皮石斛花多糖提取工艺及体外抗氧化性研究
铁皮石斛花多糖提取工艺及体外抗氧化性研究缪园欣;廖明星;孙爱红;李蓉【摘要】以铁皮石斛花为材料,通过单因素和正交试验对超声波-微波协同提取铁皮石斛花多糖的工艺进行研究.结果表明,超声波-微波协同提取铁皮石斛花多糖的最佳工艺为:超声时间55 min,料液比1:50(g/mL),微波时间3 min,微波功率450 W,在此工艺条件下铁皮石斛花多糖提取率为7.22％.对超声波-微波协同提取的铁皮石斛花多糖进行抗氧化的活性测定,试验结果显示铁皮石斛花多糖对DPPH·、羟基自由基有明显的清除作用.【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2019(040)002【总页数】5页(P52-56)【关键词】铁皮石斛花;多糖;超声波;微波;抗氧化性【作者】缪园欣;廖明星;孙爱红;李蓉【作者单位】荆楚理工学院生物工程学院,湖北荆门448000;湖北省荆门市畜牧兽医局,湖北荆门448000;荆楚理工学院生物工程学院,湖北荆门448000;荆楚理工学院生物工程学院,湖北荆门448000【正文语种】中文铁皮石斛（Dendrobium officinale）是兰科石斛属多年生草本植物，是我国传统的名贵中草药，素有“救命仙草”之称[1-2]。
现代药理学研究发现铁皮石斛具有益胃生津、滋阴清热、抗氧化、降血糖等功能，此外研究还发现其对心血管和免疫系统疾病具有显著的疗效[2-4]。
化学成分分析发现铁皮石斛含有生物碱、水溶性多糖、黄酮等生物活性成分[5-8]。
石斛属植物一直以茎为药，而花未被药用。
近年来，随着铁皮石斛大规模的种植，铁皮石斛花产量急增，造成了极大的资源浪费[9]。
为了充分利用铁皮石斛花资源，对铁皮石斛花进行化学成分分析，发现其含有较丰富多糖、浸出物及氨基酸等营养成分[10-11]。
多糖是一类广泛存在于微生物、植物细胞壁和动物细胞膜中的复杂糖类物质，具有抗氧化、抗肿瘤、调节免疫等药理作用[12-14]。
本试验采用超声波-微波协同法对铁皮石斛花多糖的提取工艺进行优化，并对铁皮石斛花多糖的体外抗氧化性进行研究，为铁皮石斛花的开发及生物活性研究提供理论依据。
铁皮石斛多糖提取工艺研究进展
ＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｇｒｅｓｓｏｎＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｆｒｏｍ Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ Ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ
ＮｉｎｇＮａ１，２，ＨａｎＪｉａｎｊｕｎ１，２，ＳｈｉＹｏｎｇ１，ＺｈａｎｇＷｅｎ１，２，ＹｕＪｉａｎｓｈｅｎｇ１，２
（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＴｏｎｇｒｅｎＶｏｃａｔｉｏｎａｌａｎｄＴｅｃｈｎｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｔｏｎｇｒｅｎ ５５４３００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｎａｔｉｏｎａｌａｎｄ ＬｏｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｒｅｆｏｒＳｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎＥｔｈｎｉｃＣｈｉｎｅｓｅＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＨｅｒｂｓ，Ｔｏｎｇｒｅｎ ５５４３００，Ｃｈｉｎａ）
铁皮石斛多糖为兰科植物铁皮石斛 Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ ＫｉｍｕｒａｅｔＭｉｇｏ的干 燥 茎。 主 要 分 布 于 广 西、贵 州、云 南 等 地。 铁皮石斛味 甘 甜、性 微 寒。 具 有 生 津 养 胃、滋 阴 清 热 之 功 效。 临床上用于口 干 烦 渴、虚 热 不 退 等 症 ［１］。 铁 皮 石 斛 含 有 多 糖、 黄酮类、酚酸类等成分［２］。相关药理研究表明铁皮石斛多糖具 有调节免疫力［３］、抗氧化［４］、止泻［５］等多种活性。因此，铁皮石 斛多糖可广泛应用于食品、保健食品、生物医药等行业，具有较 高的深度开发和应用价值。本文对铁皮石斛多糖的提取工艺 研究进行综述，为相关深入研究提供参考。
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山 东 化 工 ＳＨＡＮＤＯＮＧＣＨＥＭＩＣＡＬＩＮＤＵＳＴＲＹ ２０１９年第 ４８卷
铁皮石斛多糖提取工艺研究进展
宁 娜１，２，韩建军１，２，石 勇１，张 稳１，２，郁建生１，２
铁皮石斛多糖的闪式提取工艺及质量评价
铁皮石斛多糖的闪式提取工艺及质量评价李贝贝;陈岳亭;朱孟夏;卢燕【摘要】目的建立铁皮石斛多糖的闪式提取工艺及质量标准.方法采用闪式提取器常温快速提取铁皮石斛粗多糖,正交试验优化液料比、提取次数、提取温度等参数.对24批不同产地、不同品种石斛的多糖糖含量及单糖组成进行聚类分析,拟定铁皮石斛多糖质量标准.结果铁皮石斛多糖闪式提取最佳工艺条件为:液料比30 mL·g-1,浸泡30 min后,常温提取3次,每次提取2 min.采用优化工艺制备的铁皮石斛多糖的糖含量为70.68％～99.82％,单糖组成中甘露糖与葡萄糖比例为3.75～25.60,可与水草石斛、金钗石斛多糖明确区分.结论闪式提取铁皮石斛多糖工艺高效、稳定,所制备的粗多糖糖含量不低于70％,甘露糖与葡萄糖的含量比值不低于3.5.【期刊名称】《药学研究》【年(卷),期】2018(037)005【总页数】5页(P270-274)【关键词】铁皮石斛;多糖;闪式提取;单糖组成;聚类分析【作者】李贝贝;陈岳亭;朱孟夏;卢燕【作者单位】复旦大学药学院,上海201203;复旦大学药学院,上海201203;复旦大学药学院,上海201203;复旦大学药学院,上海201203【正文语种】中文【中图分类】R284.2石斛早在秦汉年间的《神农本草经》就有记载，并列为上品，“主伤中，除痹，下气，补五脏虚劳，羸瘦，强阴。
久服厚肠胃，轻身延年”。
铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)因表皮呈铁绿色而得名，为中药石斛之极品，唐朝开元年间的道家经典《道藏》将铁皮石斛奉为“九大仙草”之首，民间称赞它为“滋阴圣药”，用它入膳，可以保养身体，延年益寿。
多糖是铁皮石斛的主要成分，具有免疫调节[1－3]、抗肿瘤[4－5]、抗氧化[6]、抗炎[4，6－7]、降血糖[8－10]等功效。
目前铁皮石斛的提取方法多采用热水浸提法，但该法耗时长、温度高、提取效率低，约17.45%～24.9%[10－11]，严重地限制了铁皮石斛的工业化应用，寻求快速高效的提取工艺尤为重要。
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3 讨 论由测定结果可见,各组织中都能检测到两种指标性成分。胃、小肠、大肠等消化组织中两种指标性成分的含量都很高,随时间变化,含量越低,符合药物吸收特点。其他组织,从莪术醇的分布来看,脾和肝的分布较多,随时间变化含量降低明显,脑、肾和肺的分布较少,心脏分布最少;从莪术二酮的分布来看,脾、肾和肺的分布较多,脑和肝的分布较少,心脏分布最少。可修回日期:2009-08-15作者简介:尚喜雨(1969-),女,河南南阳人,讲师,硕士,研究方向:生物制药。见,脾中两种指标性成分含量都较高,可以推测脾对于莪术油的利用较多,而心脏中两种指标性成分的含量都较低,可以推测心脏对于莪术油的利用较少。参考文献[1] 王琰,王慕郁.姜黄属.常用中药的研究进展[J].中国药学杂志,2001,36(2):80.[2] 李国栋,许付,沈爱军.莪术油的研究进展[J].中国药学杂志,2002,37(11):806-809.[3] 宋笑丹,刘红梅,魏华,等.B-榄香烯脂体在大鼠体内的组织分布[J].中国药学杂志,2007,42(19):1480-1482.[4] 郝震峰,王本杰,张蕊,等.液相色谱质谱联用技术测定动物血浆和组织中莪术醇[J].山东大学学报(医学版),2008,46(8):823-827
正交实验优选铁皮石斛多糖提取工艺的研究尚喜雨1,王传铭2(11南阳医学高等专科学校,河南南阳473000;21红河学院,云南蒙自661100)
摘 要:目的:通过对铁皮石斛多糖提取方法的实验研究,寻找效果较好的提取条件,为铁皮石斛的开发研究提供参考资料。方法:以水为提取剂,在不同微波功率条件、固液比、浸提时间及提取剂的pH值等条件下进行正交实验,来确定各因素不同水平对石斛多糖提取量的影响。结果:在微波功率400W,pH值为8,微波作用时间6min;1:50的条件下多糖提取量为17.48%。结论:微波辅助提取铁皮石斛多糖的方法得到了较高的多糖提取率。关键词:正交实验;铁皮石斛;提取;工艺研究中图分类号:R28411 文献标识码:B 文章编号:1000-1719(2010)04-0708-02
铁皮石斛是我国名贵的中药材,具有滋阴清热、生津益胃、免疫调节等功效,其主要有效成分是多糖。尽管许多研究已充分证明了石斛多糖具有各种活性,但其提取方法和工艺尚未成熟,许多相关研究得到的不同石斛的多糖含量各不相同;即使同样是铁皮石斛,不同时间不同实验所得到的结果也不尽相同,没有可参照性。基于效率、成本多方面的考虑,各种方法的开发、比较、分析,仍是研究工作的焦点之一。石斛多糖提取的方法有很多,包括溶剂提取法、酸提法、碱提法等,本文采用正交实验,用微波辅助提取法对铁皮石斛进行多糖的提取,以期找到效果较好的提取条件。1 材 料111 实验材料 铁皮石斛(DendrobiumcandidumWall1ExLindl1)两年生栽培植株取自云南屏边。样品洗净,一部分材料95e杀青,再于60e烘箱中烘干;另取一部分先于25e室温下放置20天,再置阳光下曝晒干燥。然后粉碎,过60目筛,备用。112 主要试剂及仪器 苯酚试剂(配制),硫酸、乙醇、葡萄糖等试剂均为分析纯。电子天平、真空干燥箱、紫外可见光分光光度计、高速离心机、索氏提取器(山西瑞世化工)、微波炉WD700S-1型(格兰仕微波炉电器有限公司)等。2 方法和结果211 标准曲线 ¹显色条件观察:显色温度选择精密量取葡萄糖标准品溶液014mL,照标准曲线项下方法操作,于15、25、50、90e显色后分别测定吸光度值分别为0.154、0.156、0.160、0.156。可以看出,葡萄糖溶液显色后在不同温度条件下放置显色,其吸光度值变化不大。故本实验采用沸水浴后室温放置。显色稳定性观察:取葡萄糖标准品溶液014mL,按上述方法操作,在加苯酚-硫酸后,室温下间隔5、15、30、60、120、180min分别测其吸光度值。结果分别为01144、01157、01161、01159、01159、01160,表明该显色在30min后趋于稳定,3h内稳定。因此,显色时间采用30min为宜,在3h内测定完成。º硫酸-苯酚法比色绘制标准曲线:精密称取105e干燥至恒重的葡萄糖10mg,置100mL量瓶中,加蒸馏水适量使溶解,稀释至刻度,摇匀,即得到标准品溶液(每毫升含葡萄糖100Lg)。精密量取此标准品溶液011,012~017mL共7份,分别置于试管中,加蒸馏水使成210mL,再各加苯酚试剂110mL,摇匀,迅速滴加浓硫酸510mL,摇匀,放置5min,置沸水浴中加热15min,冷水迅速冷却至室温。另以蒸馏水210mL同法操作,作为空白对照,用分光光度法于490nm处测定吸光度。以标准品溶液经过不同程度稀释后的糖浓度X为横坐标,吸光度Y为纵坐标作图(图1),绘制葡萄糖标准曲线,得线性回归方程:Y=010085X-010029(r=01997)。可见葡萄糖在5~35Lg/mL范围内呈线性关系。212 微波辅助提取多糖 正交实验:依据L18(37)正交表,以水为提取剂,在不同微波功率条件、固液比、浸
#708# 辽宁中医杂志2010年第37卷第4期 提时间以及提取剂的pH值等条件下进行实验,来确定各因素不同水平对石斛多糖提取量的影响,其因素水平设置见表1,结果及分析见表2~3。表1 微波辅助提取实验因素水平表水平因素A微波功率(W)B固液比(g/mL)CpH值D微波作用时间(min)12001B306424001B507636001B7088 正交试验结果直观性分析和方差分析表明,微波功率是对多糖提取影响最大的因素,提取量最多的是400W,;pH值和微波作用时间的影响也非常显著,最佳的pH值为8,时间是6min;固液比的影响不显著(P>0105),最适的固液比是1B50。4个因素最佳组合为A2B2C3D2。采用此最优条件进行2次重复试验验证,多糖提取量为17148%。表2 微波辅助提取正交试验结果试验号A微波功率(W)B固液比(g/mL)CpH值D微波时间(min)多糖含量(%)11111132122215134313331513342112171955222316128623311711673121141828323218177933131812810113315167111211131671213221415413212315125142231171861523121819916313217169173213171618332115111K114159151731615815127K217125161591512217121K317105161571710816140R2166018611861194表3 微波辅助提取多糖正交试验的方差分析因素偏差平方和自由度F比F临界值显著性微波功率261242301595114*固液比2187231355114pH值111082121925114*微波时间111432131335114*误差21576 注:*P<0105。213 多糖含量测定 ¹石斛多糖的提取纯化精密称取石斛干燥粉末1g,经石油醚(60~90e)200mL回流脱脂2次,每次1h。再用80%乙醇回流提取2次,每次2h,弃去乙醇提取液,以除去单糖和低聚脂。将药渣分别加200mL水,于90e水浴提取2次,每次2小时。合并提取液,旋转蒸发仪上减压浓缩至100mL。浓缩液加3倍量乙醇,放置48h。抽滤,收集沉淀,用100mL蒸馏水溶解,再加稀乙醇使沉淀,放置,离心,取其上清液继续加乙醇使含醇量达70%以上,放置,倾出上清液,沉淀依次用乙醇、无水乙醇洗涤,减压过滤,60e干燥。即得石斛多糖。º换算因素的确定精密称取石斛多糖30100mg,置100mL量瓶中,加少量水溶解并稀释至刻度,摇匀做储备液。分别精密吸取4份储备液各015mL,以下按/标准曲线0项下/加蒸馏水使成210mL,,0操作,测定吸光度。依据回归方程计算出多糖液中的葡萄糖浓度。并按公式
f=CDw
求出换算因素f。式中:w=多糖的重量(Lg),C=多糖溶液中葡萄糖的浓度,D=多糖稀释因素。表1 石斛多糖换算因素计算结果
平行实验重复数吸光度A多糖液中的葡萄糖浓度(Lg)换算因素f10120012318824115702201200923197651156403012022241129411554140120152410471115594平均0120122410088115619
»多糖含量的计算经微波法提取石斛多糖的正交实验所得到的多糖溶液,用硫酸-苯酚法依照/标准曲线的绘制0项下操作,计算出溶液中的葡萄糖浓度。然后根据以下公式计算石斛多糖的含量。
多数含量=CDfW@100%
式中:C=供试液葡萄糖浓度(Lg),D=供试液的稀释因素,W=供试品重量(Lg),f=换算因素214 数据处理 所有统计分析均采用SPSS1310软件和Excel软件处理,在PC机上完成。3 讨 论利用微波提取石斛多糖,具有提取量高、准确、快速、操作成本和原料预处理成本低,并且对环境无害等优点。这是由于在微波交变电磁场作用下,极性物质引起强烈的极性振荡,细胞的生命活动中所必须具备的物质、能量、信息交换的正常条件和环境遭到严重破坏,这样有利于物质的迅速浸出和扩散。另外,一些极性物质在电场取向方面的运动会增加,容易从组织中渗出。4 小 结通过正交实验,考虑实际情况,确认了最佳提取条件:微波功率400W,pH值为8,微波作用时间6min;1B50。此条件下多糖提取量为17148%。
#709# 辽宁中医杂志2010年第37卷第4期