小鼠肿瘤模型
肿瘤模型我们一般常用的就是小鼠模型和人肿瘤裸小鼠移植瘤模型。其中用得最多的是皮下模型，另外还有腹水（或者尾静脉注射）以及原位模型，其他的模型很少用，就不提他们了。
小鼠模型分三大类：第一类是以S180、EAC、H22等为代表的，他们的宿主小鼠多选用KM，可产生腹水，也可在皮下成瘤。多以腹水传代，实验时抽取腹水，经过一定稀释后皮下接种构建模型，接踵后第二天开始给药，给药7到10天，接种10天后结束试验，剥取肿瘤称瘤重。
1. 关于构建瘤种
可以用体外细胞株培养后，用PBS悬浮至1~3×106/0.1ml/mouse，i.p接种即可，最好用6号左右的针头，就是常用的2ml一次性注射的针头。
2. 关于腹水传代
观察到第一代的种鼠肚子较大后（一般约8~9天左右），可以传代，传代时取1ml注射器，用2ml注射器的针头，种鼠腹部消毒后直接将针头插入抽取腹水即可，注意不要把针头插得很深，尽量浅一点，还可以把老鼠拎起来，利用重力，让腹水集中在某处便于抽取，一般抽个0.5ml就可以了，不用离心，直接用PBS3~6倍稀释后，接种到新的老鼠腹腔，腹水颜色为白色或者略有发黄都是正常的，但是血性腹水说明不好，需要注意调整，第二代以后，尽量6~7天的时候传代，不要等的时间太久，否则腹水容易血性。三代后可用于试验。
3. 关于接种进行试验
这个时候抽取的腹水需要量比较多，一般需要处死种鼠后，小心地用消毒眼科剪刀镊子剥开腹部皮肤，注意不要弄破肌肉，然后，用镊子（最好是哪种前面有倒勾的镊子，学名好像是唇型镊）拎起腹部的肌肉，用剪刀剪开一个小口，然后用玻璃滴管或者去掉针头的注射器吸取腹水。然后进过一定的稀释后，接种到小鼠的腋下。关于稀释量，各个实验室的情况都不一样，最好摸索一下，开始的时候可以适当的计数，但是要用台盼兰染色后计活细胞数。接种部位在小鼠腋下，但是不要深入到腋窝里面，会给以后的操作带来麻烦。接种时的进针处离接种处远一点，让针头在皮下多走一段，不容易污染。有的人接种的时候喜欢针头向上用力，紧贴着表皮往里走，然后注射的时候感觉阻力较大，打出来的皮丘又紧又圆，这样的接种，会使肿瘤与皮肤严重粘连，不利于最后肿瘤的剥取。也不要紧靠肌肉，肿瘤会与肌肉严重粘连。应该在两者之间，进针的感觉轻松自如，针头很自由，虽然打出来的肿瘤不会很圆很漂亮，但是相对好剥取一些。
4. 关于观测指标
主要是按时称体重，试验结束后剥取肿瘤称瘤重。因为出瘤已经是接种后的第6天左右了，第10天就结束时间，瘤体积的数据意义就不大。小鼠肿瘤很难剥，这是没有办法的，只能耐心，没有太好的办法，剥多了以后，手上会掌握一些巧力，有一些帮助，但是我们还是很头痛小鼠肿瘤试验结束。肿瘤组织周围经常会有一些血窦的形成，弄破后会有血和黄色的液体流出，正常的，但是剥瘤子的时候不要把它弄破，会严重影响瘤重。按照SFDA的规定，平均瘤重小于1g，或者单个瘤重小于200mg，认为肿瘤生长不良，试验作废。
小鼠模型第二类是以lewis肺癌、B16为代表的，他们的宿主多为C57。不产生腹水，只能皮下生长。多用插块法或者匀浆法传代和接种做试验。有一种做法也是接种后第二天开始给药，还有一种做法是接种三天后给药，接种后两周结束试验，剥取肿瘤称重。
1. 关于瘤种构建
体外细胞株，培养后PBS悬浮至1~3×106/0.1ml/site，接种至小鼠腋下，即可。
2. 关于传代与接种
剥取肿瘤，在PBS中取出肿瘤表面包膜和中心的坏死部分，剪刀剪成小块，小块大小以套管针的针口为标准。用镊子将小块从针头处塞进18~20号的套管针，接种至小鼠腋下，用套管针中间的实体针将瘤块推出即可。 还可以在上述肿瘤组织剪成小块后，用玻璃匀浆器匀浆后，200目筛网过滤，收集滤液，活细胞计数，PBS稀释后用注射器接种，稀释量也需要各个实验室自己摸索。
也是三代后可用于试验。
3. 关于观测指标
可以在出瘤后测量瘤体积，但是主要还是考察瘤重。
小鼠模型第三类是以P388、L1210为代表的白血病模型。宿主为DBA2，也有人用C57与DBA2的F1代传代，DBA2用于试验，但是我们两种宿主都传过代，没有发现有什么区别。他们能形成腹水，一般不用于皮下接种试验，平时多用腹水传代，实验时多用腹腔接种或尾静脉接种考察生存时间。也是接种后第二天开始给药
这个就不细说了，很多可以参考第一类，主要几点就是，他们的腹水都是血性的。另外，腹水量也不多，有的时候可以先注射一到两毫升的PBS后，再抽取。
肿瘤模型构建
小鼠模型分三大类
第一类是以S180、EAC、H22等为代表的，他们的宿主小鼠多选用KM，可产生腹水，也可在皮下成瘤。多以腹水传代，实验时抽取腹水，经过一定稀释后皮下接种构建模型，接种后第二天开始给药（这里与指导原则相悖，指导原则要求肿瘤长至100-300立方毫米时才给药），给药7到10天，接种10天后结束试验，剥取肿瘤称瘤重。
1. 构建瘤种
可以用体外细胞株培养后，用PBS悬浮至1~3×106/0.1ml/mouse，i.p接种即可，最好用6号左右的针头，就是常用的2ml一次性注射的针头。细胞悬液接种时要选活力好的细胞，就是对数期。细胞生长至瓶底70~80%满的时候认为是对数生长期。
2. 腹水传代
观察到第一代的种鼠肚子较大后（一般约8~9天左右），可以传代，传代时取1ml注射器，用2ml注射器的针头，种鼠腹部消毒后直接将针头插入抽取腹水即可，注意不要把针头插得很深，尽量浅一点，还可以把老鼠拎起来，利用重力，让腹水集中在某处便于抽取，一般抽个0.5ml就可以了，不用离心，直接用PBS3~6倍稀释后，接种到新的老鼠腹腔，腹水颜色为白色或者略有发黄都是正常的，但是血性腹水说明不好，需要注意调整。
第二代以后，尽量6~7天的时 候传代，不要等的时间太久，否则腹水容易血性。三代后可用于试验。腹水瘤接种时，接种量不要太高，1*107/ml，0.2ml即可，多按1：3用生理盐水稀释，否则有可能腹水血性。超过7天的腹水再传代，动物的周龄太大（>6周）,传代次数太多也很容易出现血性腹水。一般小鼠肿瘤模型都控制在30多代以内（也有说50多代的）。出现血性以后可以调整一下：血性腹水可以离心后加0.17N的NH4CL溶液破红细胞，然后精确控制条件（接种量，传代时间，动物周龄等）传几代，很多情况下再传一两代后会有无腹水血性的种鼠出现，然后用这只种鼠的腹水继续传代。
腹水难抽有几种情况，要么接种天数不够，腹水不够多，一般要等动物肚子很大了才去抽。要么就是压力的问题。有的动物腹水很稠。这时可撕开小鼠肚子，拿掉针头，直接抽干净，最多的时候可抽到5ml。
3. 接种
这个时候抽取的腹水需要量比较多，有时需要处死种鼠后，小心地用消毒眼科剪刀镊子剥开腹部皮肤，注意不要弄破肌肉，然后，用镊子（最好是哪种前面有倒勾的 镊子，学名好像是唇型镊）拎起腹部的肌肉，用剪刀剪开一个小口，然后用玻璃滴管或者去掉针头的注射器吸取腹水。然后进过一定的稀释后，接种到小鼠的腋下。关于稀释量，各个实验室的情况都不一样，最好摸索一下，开始的时候可以适当的计数，但是要用台盼兰染色后计活细胞数（计数的时候要注意，有一些很细小的细胞是血细胞，不要计数）。如果接种细胞量偏大会造成肿瘤早期就溃烂，所以不要为了追求肿瘤生长速度而一味的提高接种细胞量。接种部位在小鼠腋下，但是不要深入到 腋窝里面，会给以后的操作带来麻烦。可以往尾部或背部靠一些，不要往腹部靠，容易使肿瘤被垫料磨烂。接种部位可以选择腋下或者后肢,有的文章说是背部接种,但是背部血管不发达,营养不够,一般不建议采用.
接种时的进针处离接种处远一点，让针头在皮下多走一段，不容易污染。有的人接种的时候喜欢针头向上用力，紧贴着表皮往 里走，然后注射的时候感觉阻力较大，打出来的皮丘又紧又圆，这样的接种，会使肿瘤与皮肤严重粘连，不利于最后肿瘤的剥取。也不要紧靠肌肉，肿瘤会与肌肉严重粘连。应该在两者之间，接种的时候要精确控制接种在皮下，进针深度1.5cm左右, 针头沿皮肤水平进入,然后挑起表皮,注射。进针的感觉轻松自如，针头很自由，虽然打出来的肿瘤不会很圆很漂亮，但是相对好剥取一些。
防止接种的时候老鼠乱动，正确手法是用拇指和食指捏住老鼠的颈部皮肤，无名指和手掌下部把老鼠的后肢捏住，捏颈部的时候手指尽量多捏一点皮肤，然后右手（你是左手抓动物的话）拉住后肢，尽量往下拉，让老鼠的身体伸展开来，在用无名指固定，中指可以放在老鼠的身体下面，适当的往上顶，使老鼠的腋下一代完全平展，皮肤不用绷得太紧，平展就可以了，另外接种的时候进针点很靠下，针头在皮下走一段再注射，速度不要太快。注射前针头稍微动一动，能动就说明在皮下，否则可能 在皮内或者肌肉内。一般来说都是有鼓包的但是要是你接种位置太深入腋窝，你是看不到鼓包的。主要靠针头稍微动一动来判断。
4. 观测指标
主要是按时称体重，试验结束后剥取肿瘤称瘤重。因为出瘤已经是接种后的第6天左右了，第10天就结束时间，瘤体积的数据意义就不大。小鼠肿瘤很难剥，只能耐心，没有太好的办法，剥多了以后，手上会掌握一些巧力，有一些帮助，但是我们还是很头痛小鼠肿瘤试验结束。肿瘤组织周围经常会有一些血窦的形成，弄破后会有血和黄色的液体流出，正常的，但是剥瘤子的时候不要把它弄破，会严重影响瘤重。按照SFDA的规定，平均瘤重小于1g，或者单个瘤重 小于200mg，认为肿瘤生长不良，试验作废。
第二类是以lewis肺癌、B16为代表的，他们的宿主多为C57。不产生腹水，只能皮下生长。多用插块法或者匀浆法传代和接种。有一种做法也是接种后第二天开始给药，还有一种做法是接种三天后给药，接种后两周结束试验，剥取肿瘤称重。
1. 瘤种构建
体外细胞株，培养后PBS悬浮至1~3×106/0.1ml/site，接种至小鼠腋下，即可。
2. 传代与接种
体内瘤源用于传代接种，有两种手段（均为无菌操作），套管针插块法对瘤组织损伤小，可能100％成瘤。匀浆法对瘤组织损伤大，成瘤可能小于100％。
（1） 插块法：种鼠处死后体表消毒，将肿瘤组织剥离下来后，置于在PBS或0.9%无菌氯化钠注射液中洗涤干净，然后剪开，去处中心颜色变暗坏死部分，以及外表的包膜（如果比较明显的话），选外围发亮部分。清洗干净，然后换到干净的PBS中，用剪刀剪成1mm直径左右的小块，最后用镊子将小块从针头处塞进18~20号的接种套管针（最好用的是胸膜活检针20号，但是现在已经买不到了，可以用硬脊膜外穿刺针18号磨平针头后代替），在老鼠的皮肤上剪一小口，接种于动物腋下或者其他部位。塞的组织块的量以接种针头的口径为准，不能太紧也不能太松，以孔径为标尺，尽量保持差不多大小的接种量。如出现出针挂组织的问题，关键在于针头的磨制，在针后部的小突起于小缺口吻合后，实体针弯曲方向应该与套管针磨制的斜面一致，接种时，实体针要推到底，也就是后 面的小突起与小缺口契合，然后针头“舔住”肌肉层转一圈再退针，还有就是瘤块一定要完全塞入针头内，外面不能有漏出来的。
（2）匀浆法：种鼠处死后体表消毒，将肿瘤组织剥离下来后，置于PBS等体系中（以下均以PBS为例），用剪刀剪开，剔出中心的坏死部分，以及外表的包膜（如果比较明显的话），清洗干净，然后换到干净的PBS中，用剪刀剪成1mm直径左右的小块，然后用玻璃匀浆器匀浆，注意上下次数不可超过5次，匀浆时可以适当的旋转，200目筛网过滤，然后取滤液用台盼兰活细胞计数，根据计数结果进行稀释，最后将组织悬液用注射器接种。最终的稀释量，需要根据你瘤株
小鼠抗肿瘤实验报告
#### 一、实验背景
肿瘤是当今世界严重的公共卫生问题之一，其发病率和死亡率逐年上升。因此，寻找有效的抗肿瘤治疗方法对于提高人类健康水平具有重要意义。本研究旨在通过构建小鼠抗肿瘤实验模型，探讨新型抗肿瘤药物的作用效果，为临床抗肿瘤治疗提供理论依据。
#### 二、实验材料与方法
1. 实验动物：选取SPF级C57BL/6小鼠，体重18-22g，雌雄各半，由XX实验动物中心提供。
2. 实验药物：抗肿瘤药物XX，由XX制药公司提供。
3. 实验仪器：小鼠抗肿瘤实验模型、显微镜、细胞培养箱、CO2培养箱、酶标仪、凝胶成像系统等。
4. 实验方法：
（1）构建肿瘤模型：采用皮下注射法，将S180肿瘤细胞悬液注入小鼠腋下，建立S180荷瘤小鼠模型。
（2）分组与给药：将荷瘤小鼠随机分为以下四组：
A组：空白对照组，不给予任何处理；
B组：模型组，给予等量生理盐水；
C组：低剂量实验组，给予低剂量抗肿瘤药物；
D组：高剂量实验组，给予高剂量抗肿瘤药物。
（3）观察指标：
1）肿瘤体积：每周测量肿瘤直径，计算肿瘤体积；
2）体重：每周测量小鼠体重；
3）生存率：记录各组小鼠的存活天数；
4）肿瘤细胞凋亡：采用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况；
5）肿瘤微环境：检测肿瘤组织中巨噬细胞、淋巴细胞等免疫细胞浸润情况。 #### 三、实验结果
1. 肿瘤体积：经过4周实验，各实验组肿瘤体积均较模型组显著减小（P<0.05），且高剂量实验组肿瘤体积最小。
2. 体重：各实验组小鼠体重与模型组相比无显著差异（P>0.05）。
3. 生存率：高剂量实验组小鼠生存率最高，达80%，显著高于模型组（P<0.05）。
4. 肿瘤细胞凋亡：TUNEL法检测结果显示，高剂量实验组肿瘤细胞凋亡率显著高于模型组（P<0.05）。
5. 肿瘤微环境：高剂量实验组肿瘤组织中巨噬细胞、淋巴细胞等免疫细胞浸润情况较模型组显著增加（P<0.05）。
20230508Lewis 肺癌C57小鼠移植瘤模型的建立
Lewis 肺癌 C57BL/6 小鼠移植瘤模型的建立
1) LLC 细胞株培养，显微镜下观察细胞状态良好，位于对数生长期，胰酶消化离心去上清后用 PBS 重悬，细胞计数后细胞浓度调整为 1X107 细胞／ml，备用。
2) 6-8 周龄，雄性 C57BL/6J 小鼠，重 18-20ｇ，词养在 SPF 级的动物实验室内，小鼠在实验室内适应环境 3-5 天。预计接种前一天予小鼠背部剃毛膏剃毛处理。
3）每支EP管吸取150ul细胞悬液，冰上携带入动物房。
4) 皮下接种 LLC 肿瘤细胞，取小鼠的背部，用 75％的酒精棉签擦拭消毒，1ml的注射器吸取100ul（约1X106个细胞）细胞悬液，，每次吸取细胞悬液前均先混匀EP管中悬液，斜形进针，种瘤后观察、记录小鼠状态及成瘤状况。
5）每2天测量肿瘤体积，体积计算方式：最长径×最短径2/2。1X106细胞建模，接种后第3天可部分观察到肿瘤。第5天筛选肿瘤体积一致小鼠入组。
动物模型：裸鼠PC-9细胞肿瘤模型
动物模型：裸鼠PC-9细胞肿瘤模型
一、嘉美实验裸鼠PC-9细胞肿瘤模型的构建方法
采用腋窝皮下接种PC-9人肺癌细胞，建立PC-9人肺腺癌细胞裸鼠移植瘤模型并给与药物进行干预，观察药物对肿瘤的作用。
二、裸鼠PC-9细胞肿瘤模型的构建及后续实验操作
1、25只BALB c裸鼠，适应性饲养一周后，调整制备好的PC-9人肺腺癌细胞单细胞悬液浓度，用1m 1l无菌注射器吸取细胞悬液，于每 裸鼠右侧腋下皮下注射0.2mL细胞悬液(接种细丹 包量约为1×x102/ml)，细胞悬液接种 于裸鼠的右侧腋下7-10d后，观察成瘤情况，肿瘤仁
本积大于100m3后，选取肿瘤大小 相近的小鼠按肿瘤体积随机分为4组:(1)对照组 ，5只；(2)高剂量组，7只:(3)中剂量组，7 )顺铂组，6只。当天高剂 量组、中剂量组、顺铂组开始给药 其中，高剂 量组连续21天每天灌胃给 药，顺铂组每三天腹腔注射给药，齐量5m/e次。每两天测量荷瘤裸鼠体重和 冲瘤体积。于第22天停止给药病禁食2h，第再次测量肿瘤体积，计算相对肿瘤体 积(RTV)，绘制肿瘤生长曲线，毛材当天称量最后一次体重和瘤重计算肿瘤指数 完整剥离瘤块，其中一半瘤块组织于 10%福尔马林中固定，备用；另半肿瘤组织存 放于液氮中冻存。血样用109 mmol/L枸櫞酸钠19抗凝，分离血浆。
2、小鼠接种PC-9人肺腺癌细胞后 9天左右，可观察到裸鼠右侧腋下均 现黄豆大小瘤块，于当天开始测量肿瘤体积并 称重。于接种第11天时，测量肿瘤生 长指数和体重时发现，各组荷瘤裸鼠肿瘤体积均 值达到100mm3，于当天开始分组给药 在给药过程中发现，顺铂组荷瘤裸鼠的体重下阳 夆明显，与对照组相比具有极显著性差异 루(P<0.01)高剂量组荷瘤裸鼠的体重于d7、dI 3、d19天时有显著性差异(P~0.05)，其他各组体重与对照组相比均无明显差异。顺 铂组肿瘤体积于d13、d17、dl9、d21 d23时与对照组相比明显减小，并有显著性差 :(P<0.05)，在d15天时有极显著性差 쿠(P<0.01)。高剂量组和中剂量组肿瘤体积也明 显小于对照组，但无显著性差异。血浆 中APTT、PT检测结果发现，高剂量组和中剂量 组小鼠血浆中APTT指标明显低于对 照组，顺铂组小鼠血浆中APPT指标高于对照组 但各组小鼠血浆中APPT变化均无显著性差异。中剂量组和顺铂组小鼠血浆中PT 肯标明显低于对照组，并具有极显著性 差异。实验过程中，各组未见小鼠死亡。
这些肿瘤免疫小鼠模型,别说你不知道
这些肿瘤免疫小鼠模型，别说你不知道 原创2018-12-21 订阅号APExBIO
要说当今社会哪种癌症治疗手段最火热，癌症免疫疗法（Cancer Immunotherapy）当之无愧。科学家们热衷于从免疫系统着手消灭肿瘤细胞。自美国詹姆斯·艾利森（James P. Allison）和日本免疫学家本庶佑（Tasuku Honjo）因其开创性的癌症治疗方法获得2018年诺贝尔医学奖后，更是为癌症的免疫治疗增添了热度。
虽说免疫检查点抑制剂、
癌症疫苗和细胞治疗等方面取得的成就为患者带来了希望，
然而建立可以模拟人类疾病的免疫活性小鼠模型仍是一个重大挑战。免疫疗法的临
床前研究需要具有完整功能免疫系统的体内模型。当前的临床前免疫治疗小鼠模型
包括同源肿瘤模型、基因工程小鼠模型和人源化肿瘤模型，本文将浅谈这几种模型。
一、同源肿瘤模型
▲同源肿瘤模型（Syngeneic tumor models）。利用在体外生长和扩增的鼠肿瘤细胞系，
将其注射（通常皮下或原位）到免疫活性（Immune-competent）宿主中。
这是最早出现和最常使用的临床前模型。同源肿瘤模型是将永生化的小鼠肿瘤细胞
系接种到近交品系小鼠中形成的同种移植模型。肿瘤细胞系可以是自发性的、致癌
物诱导的或转基因的。受体小鼠拥有完整的鼠源免疫系统，具有完全的免疫活性
（immuno-competent），且该免疫系统与同种移植肿瘤组织相容。
▲常见的同源肿瘤小鼠模型整理（包括鼠肿瘤细胞系、癌症类型、鼠宿主和使用的药物）
同源模型易于建立，且有良好的免疫应答。可以用免疫检查点抑制剂（例如抗PDL-1，
抗PD-1，抗-CTLA-4）等药物来评估荷瘤小鼠中肿瘤免疫疗法的效果。
同源细胞系可以在实验室中轻松培养和大量扩增，这种模型价格低廉，操作起来相当简单且重
复性强。
同系模型的另一个优点是宿主的免疫系统是正常的，这可能最大化模拟肿瘤微环境
的真实生活情况。缺点是移植的小鼠组织可能无法完全代表临床情况下人类肿瘤的
PDX人源化小鼠模型介绍
PDX人源化小鼠模型介绍
PDX (patient derived xenografts)动物模型是指将病人的新鲜肿瘤组织简单处理后移植到免疫缺陷小鼠上，依靠小鼠提供的环境生长，这种模型保留了原代肿瘤的微环境和基本特性，为研究肿瘤的机制、治疗和药物筛选提供了一个非常理想的体内模型。
小鼠肿瘤模型一直以来都是作为医学研究体内实验的最基本的模型，其建立也是日新月异，特别是转基因小鼠，例如：SCID,
NOD/SCID, NOD/SCID/GC-NULL (ie, NSG) mice 的建立为异种移植提供了无免疫排斥小鼠模型，并为人类肿瘤异种移植模型的建立及移植肿瘤的传代奠定了更加坚强的基础。人来源肿瘤异种移植于免疫缺陷小鼠模型PDX，其移植肿瘤保留了原代肿瘤的分化程度、形态特征、结构特点以及分子生物学基本特性和肿瘤微环境，是目前较理想的肿瘤模型。PDX模型在肿瘤研究中，特别是在新型药物的筛选、 个体化治疗的评估研究上都有重要的应用价值（赛业可提供pdx小鼠模型构建）。
PDX模型研究方向：
· PDX建模：不断探索更多癌种的PDX建模方法，提高建模成功率，建立PDX建模标准化SOP。
· 临床前研究：利用PDX模型进行药物筛选，以及对已上市药物进行“再验证”试验研究。
· 临床基础研究：利用PDX模型寻找新的肿瘤生物标志物，进行肿瘤克隆演化、肿瘤分子特征、肿瘤致病机制等方面的研究。
· 临床应用研究：利用PDX模型进行肿瘤个体化治疗研究，为临床医生提供治疗决策依据。 PDX模型优势 ：
PDX小鼠模型服务内容：
1、 在取回组织后，将组织通过传递窗进入SPF动物房
以下操作都应在超净台内完成：
2、 准备好加了双抗的PBS缓冲液、DMEM培养基、培养皿和冰袋
3、 倒入适量的PBS和DMEM于冰上的培养皿中，取出组织，放入PBS中初步清洗，剔除坏死和正常组织；如果坏死比较严重的，可以适当清洗两次
肿瘤正位小鼠模型建立
人舌癌颈淋巴结转移模型
[1]Animals: male BALB/c-nu/nu nude mice(5 weeks old; weight, 17 to 20 g; 49 mice in 4
batches), 种植肿瘤后，喂软食物及提高食物蛋白含量。
Cells：1.所有样品来自同一患者（左舌部分化良好鳞状细胞癌伴左侧颈淋巴结转移）转移淋巴结组织。
2.新鲜淋巴结转移灶置于含10%血清和1%青霉素-链霉素双抗的RPMI-1640培养基中，仔细移除肿瘤囊外结缔组织，将肿瘤组织切成1*1*1mm3小块（刚过106个，保证99%的细胞能存活）。
3.从获得组织到种植要在2h之内。
Surgical procedures：2%氯胺酮腹腔麻醉；小鼠舌部1%碘棉球消毒；切口2mm深、2mm长于舌部middle third right margin；肿瘤样品（1 mm3）种植于舌部肌肉；缝合；均由一个人操作，操作时间7-10min/只;密切观察。
后续工作：每只老鼠切下2-3个淋巴结；每个淋巴结切成两半，一半用于HE染色，一半继续注入小鼠舌部；肿瘤生长时间为4w/批；总共种植4次。
种植肿瘤生长转移观察：种植肿瘤后4w，断颈，称重，解剖；舌、淋巴结、肺组织浸于10%福尔马林；石蜡包埋；3-4ul切片厚度；HE染色；组织学观察，观察3-5个区域，有一切片观察到转移肿瘤细胞则可认为此淋巴结有转移。
免疫组化染色：为了确定转移淋巴结肿瘤细胞来自人，用mouse monoclonal IgG2a cytokeratin
(SC-6258; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA)1:100稀释，其中阳性对照用患者原始肿瘤细胞，阴性对照使用同样肿瘤细胞但不使用一抗。
小鼠状况：种植后前两周状态良好，之后进食困难，采用处理后食物喂养，第四周时，小鼠体重没有显著性减少（P>0.05），没有恶病质死亡小鼠。
小鼠肺癌模型
小鼠肺癌模型
类型 小鼠品系 方法 优点/缺陷
化学诱导肺癌模型 A/J小鼠或者BALB/c裸鼠，自发肺肿瘤频率最高的小鼠品系为A/J 使用化学致癌物，常用的如乙基亚硝脲采用口服、吸入、腹腔注射、支气管灌注或支气管黏膜下注射等方法对小鼠进行诱癌 成瘤时间长（数月），诱发肿瘤不易转移
异位移植模型 C57BL/6、昆明种小鼠（少）、IRM-2小鼠 皮下移植：将肿瘤细胞悬液或外科手术中采集的肿瘤组织移植到小鼠的背部、腋部、后肢等即可 需重复移植
原位移植模型 C57 BL/6小鼠 （1）支气管注射
（2）肺内注射
（3）胸膜注射 有较高的肿瘤成瘤率，而且能突显肿瘤的侵袭和转移特性，从更大程度上模拟人体肺肿瘤的微环境，故该模型为目前较为理想的肺癌动物模型
转移模型 BALB/c裸鼠、NOD/SCID小鼠 （1）尾静脉注射
（2）骨髓注射 比较符合解决临床问题的模型
转基因模型（定制） SP-C /myc / IgEGF 双转基因小鼠(寿命9
个月)、K-ras和p53突变的肺癌小鼠、EGFR突变和K-Ras诱导的内源性小鼠模型 SV40T抗原与p53蛋白和Rb蛋白结合，建立的转基因小鼠UT7.1发展出多灶性细支气管腺癌
肿瘤动物模型的构建
肿瘤动物模型的构建
第一类是皮下移植瘤
顾名思义，这种模型的建立是将肿瘤细胞或肿瘤组织直接种植在小鼠的皮下。种植的点也有讲究，一般选择血运淋巴回流丰富的腹股沟和腋窝。可根据实验设计选择移植点，统一移植点的位置，除了遵守实验统一的条件外，待肿瘤成熟后收集肿瘤时留下照片证据也显得美观。
裸鼠（Balb/c 鼠， 无毛发， T 淋巴细胞缺陷）是比较常见和常用的实验用鼠，尤其是在皮下移植瘤肿瘤模型的建立中起到重要作用。裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的优点。当然，这种肿瘤模型也有缺陷，即不能很准确的模拟正常人体肿瘤发生发展的过程。
肿瘤细胞移植时的简要步骤：
首先准备好要移植的肿瘤细胞（细胞量根据不同肿瘤略有不同，我们所用的前列腺癌细胞系每个移植点一般选择 1x106左右；肿瘤细胞可与基质胶 1:1 混匀后用 1 ml 注射器吸取，基质胶能够给肿瘤细胞提供营养环境，有助于肿瘤细胞生长）。
戴无菌手套后，将小鼠用左手大拇指和食指捏住颈部皮肤，然后将鼠尾用左手无名指和小指固定于左手大鱼际。将腋窝或腹股沟用 75% 酒精消毒 3 次。右手持吸有肿瘤细胞和基质胶混合液的注射器，在腹股沟或腋窝的位置，45 度斜角进针，注意不要突破腹膜，将针头保持于皮下位置。
然后近水平位置将针头几乎完全插入皮下，将混有基质胶的肿瘤细胞注射入皮下（肿瘤细胞量约 1x106），快速退针，左手食指轻压针孔约 1 min 后将小鼠放回饲养笼中，注意将小鼠侧放于垫料上，防止其不适呕吐时呕吐物误入呼吸道引起窒息。2～3 h 后观察小鼠是否苏醒。
如果是利用肿瘤组织（人体肿瘤标本或小鼠移植瘤传代）建立裸鼠皮下移植瘤模型，则需要首先将肿瘤组织用无菌 PBS（或 1640 培养基）洗涤 3 次，然后在无菌平皿上切成或用无菌剪刀剪成<1 mm3 体积的小块（种植前可裹基质胶）备用。
将小鼠用水合氯醛麻醉后平卧于解剖板上，四肢用胶带固定，将腋窝或腹股沟用 75%
24_血液系统恶性肿瘤的人源化小鼠模型
1 / 26 血液系统恶性肿瘤的人源化小鼠模型
第一部分 人源化小鼠模型简介 ........................................................................................... 2
第二部分 血液系统恶性肿瘤概述 ....................................................................................... 4
第三部分 小鼠模型在研究中的重要性 ............................................................................... 6
第四部分 人源化小鼠模型的构建方法 ............................................................................... 9
第五部分 血液系统恶性肿瘤模型的应用 ......................................................................... 11
第六部分 模型的优势与局限性分析 ................................................................................. 15
第七部分 最新研究进展和未来方向 ................................................................................. 17
第八部分 结论与展望 ......................................................................................................... 21 2 / 26 第一部分 人源化小鼠模型简介
荷瘤小鼠检测指标
荷瘤小鼠检测指标
荷瘤小鼠（即软组织肿瘤小鼠模型）是一种被广泛应用于肿瘤研究的实验动物模型，它可以用于评估抗肿瘤药物的疗效和了解肿瘤发展机制。在对荷瘤小鼠进行检测时，可以使用多种指标来评估肿瘤的生长、转移和治疗效果。下面将介绍一些常用的荷瘤小鼠检测指标。
1. 肿瘤体积和质量：荷瘤小鼠体内的肿瘤通常会导致体积的增大和质量的增加。通过定期测量肿瘤的体积和质量，可以评估肿瘤的生长速度和治疗效果。
2. 肿瘤生长曲线：通过记录肿瘤体积的变化，可以绘制肿瘤生长曲线，进一步分析肿瘤的生长特征和生长动力学参数，比如生长速率、潜伏期和翻倍时间等。
3. 肿瘤组织学检测：通过取出肿瘤组织进行组织学检测，可以观察肿瘤的组织学特征，比如肿瘤细胞的形态、核分裂指数、细胞凋亡程度和血管生成情况等。组织学检测结果还可以用于评估治疗的抑制效果和了解肿瘤发展机制。
4. 免疫组织化学染色：免疫组织化学染色可以用于检测肿瘤相关标志物的表达情况，比如细胞增殖标志物（Ki-67）、血管内皮细胞标志物（CD31）和凋亡标志物（Caspase-3）等。通过染色的强度和范围，可以评估这些标志物的表达水平和分布情况。
5. 肿瘤标志物检测：肿瘤标志物是指在肿瘤发生、发展和转移过程中，与肿瘤有关的特异性生物标志物。常用的肿瘤标志物包括癌胚抗原（CEA）、糖类抗原
199（CA199）和神经元特异性烯醇化酶（NSE）等。通过检测这些标志物的水平变化，可以评估肿瘤的发展程度和治疗效果。
6. 肿瘤转移检测：肿瘤转移是肿瘤发展的重要特征之一，因此，对于荷瘤小鼠模型，也需要检测肿瘤的转移情况。可以通过检查淋巴结、肺、肝和骨骼等常见转移部位的组织学特征和转移灶的数量，来评估肿瘤的转移程度和转移力。
以上是一些常用的荷瘤小鼠检测指标，通过检测这些指标，可以评估荷瘤小鼠模型的肿瘤生长情况、转移情况和治疗效果。这些指标的综合分析可以为肿瘤研究提供全面的信息，加深对肿瘤发展机制和治疗方法的认识。