不同的抗原修复方法对肾活检标本石蜡切片免疫荧光染色的影响

不同的抗原修复方法对肾活检标本石蜡切片免疫荧光染色的

影响

简介

肾活检是诊断某些肾脏疾病的重要手段。在进行肾活检时，通常需要进行免疫

荧光染色来确定肾脏病理组织的类型和程度。在进行免疫荧光染色时，免疫抗原修复是一个关键的步骤，它可以增强抗原在组织中的表达，提高染色效果。本文将探讨不同的抗原修复方法对肾活检标本石蜡切片免疫荧光染色的影响。

抗原修复方法

在进行免疫荧光染色时，抗原修复的主要目的是恢复或增强组织中的抗原表达，使其更易于被抗体检测。目前常用的抗原修复方法包括化学方法、热处理法和酶消解法。下面分别介绍它们的原理和操作步骤。

化学方法

化学方法是一种使用化学物质对组织进行抗原修复的方法。化学物质一般都是酸、碱或其他特定化合物，它们可以通过改变组织中蛋白质的构象，使其易于与抗体结合。常用的化学物质包括醋酸、乙酸、甲酸、谷氨酰胺等。

操作步骤

1.将药液加入试管中。

2.离心石蜡切片，并将其放入药液中。

3.在适当的温度和时间下进行反应。

4.在 PBS 溶液中洗涤石蜡切片。

5.进行抗体染色。

热处理法

热处理法是将组织样本放入高温环境中，以改变蛋白质的构象。它可以使组织

中抗原更易于被抗体识别和结合。该法使用方便，但需要控制好时间和温度，过渡的热处理会导致组织破坏或失去抗原，而时间过短则容易影响染色效果。

操作步骤

1.将石蜡切片放到蛋白酶降解试剂中，进行蛋白酶降解。

2.将石蜡切片放入热处理缓冲液中。

3.用高压蒸气炉进行热处理，温度一般在 90-100°C，时间在 10-20 分

钟。

4.在 PBS 溶液中洗涤石蜡切片。

5.进行抗体染色。

酶消解法

酶消解法是将组织中的蛋白质通过裂解和水解等方式分解为更容易被抗体检测

的分子。酶消解法适用于形态不易被破坏的组织样本，如肝、肾等。

操作步骤

1.将石蜡切片放入酶消解缓冲液中进行反应，时间一般在 20-30 分钟。

2.在 PBS 溶液中洗涤石蜡切片。

3.进行抗体染色。

影响因素

抗原修复方法的选择需要考虑多个因素，如待测抗原类型、形态、表达水平、

抗体类型等。同样的抗原修复方法在不同的条件下也可能影响免疫染色结果。

温度和时间

化学方法和热处理法都需要在一定的时间和温度下进行反应。过度或不足的反

应时间会影响抗原的恢复效果。过渡的反应时间会破坏组织结构，使抗原丢失或减弱，不足的反应时间则可能导致胚胎抗原结构不稳定、不完整，影响抗体和抗原的特异性反应。一般情况下，化学方法需要 10-30 分钟，65-80°C 下的热处理法需要15-30 分钟。

pH 值

化学方法使用的酸和碱的 pH 值不同，pH 过高或过低会影响石蜡切片的结构和

染色效果。pH 过高会导致组织碎裂，pH 过低则会影响抗体和抗原的结合效果。一般情况下，pH 控制在 6.0-9.0。

缓冲液浓度

酶消解法和热处理法涉及到缓冲液，浓度的不同会影响反应结果。浓度过低会

使缓冲液的缓冲能力不够，使 pH 值变化，导致反应不成功。过高的浓度则会降低

抗原恢复效果。

结论

在进行肾活检标本石蜡切片免疫荧光染色时，抗原修复是一个至关重要的步骤。本文介绍了不同的抗原修复方法，包括化学方法、热处理法和酶消解法。不同的抗原修复方法在某些条件下的效果也各有不同。因此，在选择抗原修复方法时，需要根据实验要求和标本类型进行综合考虑。