实验九.补骨脂素的提取,分离与鉴定
实验九 补骨脂素的提取,分离与鉴定
实验九补骨脂素的提取，分离与鉴定实验九补骨脂素的提取，分离与鉴定实验九补骨脂素、异补骨脂素的提取、分离和鉴定补骨脂为豆科植物补骨脂psoraleacorylifolial.的潮湿明朗果实。
具备滋阴助阳、温中化痰之功。
主治肾虚早泄、遗精遗尿及腰膝冷痛，小便频数；外用治身白癫风。
补骨脂中所含数种香豆素和黄酮类成分，主要存有补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂双氢黄酮(补骨脂甲素)、异补骨脂查耳酮(补骨脂乙素)、补骨脂次素等。
药理研究证明，补骨脂甲被誉为显著扩冠促进作用，补骨脂素及异补骨脂素就是具有稀释紫外线性质的光敏性物质，因此就是抗炎白癫风的有效成分，制剂存有祛白素，补骨脂注射液、复方补骨脂酊等。
一、补骨脂中主要成分的物理性质1．补骨脂素(psoralen):c11h603,无色针状结晶(乙醇)，mp189oc,~190oc。
溶于乙醇、苯、氯仿、丙酮；微溶于水、乙醚和石油醚。
uvλmaxm(lgε):242sh(4.38),247(4.40),291(4.03),330(3.80)。
irνmaxcm-1:1710,1630,1575,1259。
2．异补骨脂素(isopsoralen):c11h603,无色针状结晶，mp137oc,~138oc。
溶甲醇、乙醇、丙酮、苯、乙醚；微溶水、乙醚，容易溶石油醚。
uvλmaxm(lgε):245(4.38),297(3.96)。
irνmaxcm-1:1724,1709,1613,1513,1370,1330,1266,1250,1055,999,833,747。
3．补骨脂双氢黄酮(补骨脂甲素)(bavachin,corylifolin):c20h2021,无色结晶，mp191oc,~192oc,[α]d为-29.1o（乙醇）。
4.异补骨脂查耳酮(补骨脂乙素)(isobavachalcone,corylifolinin):c20h20o4,黄色针状结晶，mp154oc,~156oc。
补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的提取分离与检识
补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的提取分离与检识之马矢奏春创作（一）目的要求学习香豆素类化合物的提取分离及检识, 通过实验要求：1．掌握用溶剂法提取香豆素类化合物的把持技术.2．通过补骨脂素和异补骨脂素的分离, 熟悉干柱色谱的把持技术.3．掌握香豆素类化合物的检识方法.（二）主要化学成份的结构及性质补骨脂为豆科植物补骨脂Psoralea corylifolia L.的干燥成熟果实, 全国各地多有栽培.含有多种呋喃香豆素类成份, 主要含补骨脂内酯（补骨脂素）、异补骨脂内酯（异补骨脂素）和补骨脂次素等.其中补骨脂素和异补骨脂素为抗白癜风的主要有效成份, 具有光敏性质.1.补骨脂素(psoralen) 又称补骨脂内酯, 分子式C11H6O3, 分子量186.16.无色针状结晶（乙醇）, mp.189～190℃, 有挥发性.溶于甲醇、乙醇、苯、氯仿、丙酮；微溶于水、乙醚和石油醚.2.异补骨脂素(isopsoralen) 分子式C11H6O3, 分子量186.16.无色针状结晶, mp.137～138℃, 溶于甲醇、乙醇、丙酮、苯、氯仿, 微溶于水、乙醚, 难溶于冷石油醚.补骨脂素异补骨脂素3.补骨脂乙素(isobavachalcone) 又称补骨脂酮、异补骨脂查耳酮.分子式C20H20O4, 分子量324.36.黄色片状结晶（甲醇-水）, mp. 166～167℃.4.补骨脂甲素(coryfolin) 又称补骨脂黄酮, 分子式C20H20O4, 分子量324.36.无色针状结晶, mp.191～192℃.补骨脂乙素补骨脂甲素（三）实验原理本实验根据补骨脂素和异补骨脂素等在乙醇中溶解度年夜, 利用乙醇从中药补骨脂中提取补骨脂素及异补骨脂素等, 并用活性炭吸附脱色, 再依据补骨脂素和异补骨脂素的极性不同, 利用柱色谱予以分离.（四）实验内容1：把20g补骨脂研磨后用50%乙醇冷浸提取72h,24h,24h,每次用六倍量体积的乙醇.铺薄层硅胶板, 为了下次筛分离条件, 铺好15块板.2：用补骨脂素和异补骨脂素的标准品通过TLC筛选硅胶柱色谱的分离条件.根据文献, 设计了石油醚：乙酸乙酯10：1, 石油醚：乙酸乙酯8：1, 石油醚：乙酸乙酯6：1, 石油醚：乙酸乙酯4：1等几组流动相配比, 经过对Rf值的比力, 最终决定用石油醚：乙酸乙酯6：1作为硅胶柱色谱分离的分离系统.把醇提液减压浓缩至剩下20ml水左右.萃取：浓缩后的混旋液加蒸馏水至100ml, 用乙酸乙酯萃取三次.3.柱色谱分离, 采纳湿法装柱干法上样.薄层色谱检识薄层板：硅胶G-CMC-Na板试样：补骨脂素乙醇液异补骨脂素乙醇液对比品：补骨脂素对比品乙醇液异补骨脂素对比品乙醇液展开剂：①石油醚-醋酸乙酯（6∶1）显色：紫外灯下观察荧光（五）实验说明及注意事项1．提取药材应是未炮制过的补骨脂种子,其补骨脂素和异补骨脂素等成份含量较高.2．补骨脂素和异补骨脂素含内酯结构, 具有内酯类成份的通性, 可用碱提酸沉法提取, 但因补骨脂种子中含有年夜量油脂和糖类成份, 易与碱水发生皂化反应和形成胶状物, 致使难以滤过, 降低收得率, 故选用50％乙醇提取而不用碱溶酸沉法提取.3．由补骨脂种子中提取所得的精制品, 为补骨脂素和异补骨脂素的混合物结晶, 两者含量近于1∶1, 但随药材品种、质量等分歧而有不同.在进行干柱色谱分离之前, 应先进行薄层色谱检查, 了解两者含量情况.因两者皆具有光敏作用, 均为有效成份, 故临床应用时, 不势必两者分开.。
补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的提取分离与检识之欧阳法创编
补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的提取分离与检识（一）目的要求学习香豆素类化合物的提取分离及检识，通过实验要求：1．掌握用溶剂法提取香豆素类化合物的操作技术。
2．通过补骨脂素和异补骨脂素的分离，熟悉干柱色谱的操作技术。
3．掌握香豆素类化合物的检识方法。
（二）主要化学成分的结构及性质补骨脂为豆科植物补骨脂Psoralea corylifolia L.的干燥成熟果实，全国各地多有栽培。
含有多种呋喃香豆素类成分，主要含补骨脂内酯（补骨脂素）、异补骨脂内酯（异补骨脂素）和补骨脂次素等。
其中补骨脂素和异补骨脂素为抗白癜风的主要有效成分，具有光敏性质。
1.补骨脂素(psoralen) 又称补骨脂内酯，分子式C 11H 6O 3，分子量186.16。
无色针状结晶（乙醇），mp.189～190℃，有挥发性。
溶于甲醇、乙醇、苯、氯仿、丙酮；微溶于水、乙醚和石油醚。
2.异补骨脂素(isopsoralen) 分子式 C 11H 6O 3，分子量186.16。
无色针状结晶，mp.137～138℃，溶于甲醇、乙醇、丙酮、苯、氯仿，微溶于水、乙醚，难溶于冷石油醚。
补骨脂素 异补骨脂素3.补骨脂乙素(isobavachalcone) 又称补骨脂酮、异补骨脂查耳酮。
分子式C 20H 20O 4，分子量324.36。
黄色片状结晶（甲醇-水），mp. 166～167℃。
4.补骨脂甲素(coryfolin) 又称补骨脂黄酮，分子式C 20H 20O 4，分子量324.36。
无色针状结晶，mp.191～192℃。
补骨脂乙素 补骨脂甲素（三）实验原理本实验根据补骨脂素和异补骨脂素等在乙醇中溶解度大，利用乙醇从中药补骨脂中提取补骨脂素及异补骨脂素等，并用活性炭吸附脱色，再依据补骨脂素和异补骨脂素的极性差异，利用柱色谱予以分离。
（四）实验内容1：把20g补骨脂研磨后用50%乙醇冷浸提取72h,24h,24h,每次用六倍量体积的乙醇。
铺薄层硅胶板，为了下次筛分离条件，铺好15块板。
补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的提取分离与检识讲解
补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的提取分离与检识（一）目的要求学习香豆素类化合物的提取分离及检识，通过实验要求：1．掌握用溶剂法提取香豆素类化合物的操作技术。
2．通过补骨脂素和异补骨脂素的分离，熟悉干柱色谱的操作技术。
3．掌握香豆素类化合物的检识方法。
（二）主要化学成分的结构及性质补骨脂 为豆科植物补骨脂Psoralea corylifolia L.的干燥成熟果实，全国各地多有栽培。
含有多种呋喃香豆素类成分，主要含补骨脂内酯 （补骨脂素）、异补骨脂内酯 （异补骨脂素）和补骨脂次素等。
其中补骨脂素和异补骨脂素为抗白癜风的主要有效成分，具有光敏性质。
1.补骨脂素(psoralen) 又称补骨脂内酯，分子式C 11H 6O 3，分子量186.16。
无色针状结晶（乙醇），mp.189～190℃，有挥发性。
溶于甲醇、乙醇、苯、氯仿、丙酮；微溶于水、乙醚和石油醚。
2.异补骨脂素(isopsoralen) 分子式 C 11H 6O 3，分子量186.16。
无色针状结晶，mp.137～138℃，溶于甲醇、乙醇、丙酮、苯、氯仿，微溶于水、乙醚，难溶于冷石油醚。
O O O OOO补骨脂素 异补骨脂素3.补骨脂乙素(isobavachalcone) 又称补骨脂酮、异补骨脂查耳酮。
分子式C 20H 20O 4，分子量324.36。
黄色片状结晶（甲醇-水），mp. 166～167℃。
4.补骨脂甲素(coryfolin) 又称补骨脂黄酮，分子式C 20H 20O 4，分子量324.36。
无色针状结晶，mp.191～192℃。
CH3 H3CHOOHOHOOOHHOCH3H3C补骨脂乙素补骨脂甲素（三）实验原理本实验根据补骨脂素和异补骨脂素等在乙醇中溶解度大，利用乙醇从中药补骨脂中提取补骨脂素及异补骨脂素等，并用活性炭吸附脱色，再依据补骨脂素和异补骨脂素的极性差异，利用柱色谱予以分离。
（四）实验内容1：把20g补骨脂研磨后用50%乙醇冷浸提取72h,24h,24h,每次用六倍量体积的乙醇。
补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的提取分离与检识之欧阳生创编
补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的提取分离与检识（一）目的要求学习香豆素类化合物的提取分离及检识，通过实验要求：1．掌握用溶剂法提取香豆素类化合物的操作技术。
2．通过补骨脂素和异补骨脂素的分离，熟悉干柱色谱的操作技术。
3．掌握香豆素类化合物的检识方法。
（二）主要化学成分的结构及性质补骨脂为豆科植物补骨脂Psoralea corylifolia L.的干燥成熟果实，全国各地多有栽培。
含有多种呋喃香豆素类成分，主要含补骨脂内酯（补骨脂素）、异补骨脂内酯（异补骨脂素）和补骨脂次素等。
其中补骨脂素和异补骨脂素为抗白癜风的主要有效成分，具有光敏性质。
1.补骨脂素(psoralen) 又称补骨脂内酯，分子式C11H6O3，分子量186.16。
无色针状结晶（乙醇），mp.189～190℃，有挥发性。
溶于甲醇、乙醇、苯、氯仿、丙酮；微溶于水、乙醚和石油醚。
2.异补骨脂素(isopsoralen) 分子式 C11H6O3，分子量186.16。
无色针状结晶，mp.137～138℃，溶于甲醇、乙醇、丙酮、苯、氯仿，微溶于水、乙醚，难溶于冷石油醚。
补骨脂素异补骨脂素3.补骨脂乙素(isobavachalcone) 又称补骨脂酮、异补骨脂查耳酮。
分子式C20H20O4，分子量324.36。
黄色片状结晶（甲醇-水），mp. 166～167℃。
4.补骨脂甲素(coryfolin) 又称补骨脂黄酮，分子式C20H20O4，分子量324.36。
无色针状结晶，mp.191～192℃。
补骨脂乙素补骨脂甲素（三）实验原理本实验根据补骨脂素和异补骨脂素等在乙醇中溶解度大，利用乙醇从中药补骨脂中提取补骨脂素及异补骨脂素等，并用活性炭吸附脱色，再依据补骨脂素和异补骨脂素的极性差异，利用柱色谱予以分离。
（四）实验内容1：把20g补骨脂研磨后用50%乙醇冷浸提取72h,24h,24h,每次用六倍量体积的乙醇。
铺薄层硅胶板，为了下次筛分离条件，铺好15块板。
补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的提取分离与检识之欧阳术创编
补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的提取分离与检识（一）目的要求学习香豆素类化合物的提取分离及检识，通过实验要求：1．掌握用溶剂法提取香豆素类化合物的操作技术。
2．通过补骨脂素和异补骨脂素的分离，熟悉干柱色谱的操作技术。
3．掌握香豆素类化合物的检识方法。
（二）主要化学成分的结构及性质补骨脂为豆科植物补骨脂Psoralea corylifolia L.的干燥成熟果实，全国各地多有栽培。
含有多种呋喃香豆素类成分，主要含补骨脂内酯（补骨脂素）、异补骨脂内酯（异补骨脂素）和补骨脂次素等。
其中补骨脂素和异补骨脂素为抗白癜风的主要有效成分，具有光敏性质。
1.补骨脂素(psoralen) 又称补骨脂内酯，分子式C11H6O3，分子量186.16。
无色针状结晶（乙醇），mp.189～190℃，有挥发性。
溶于甲醇、乙醇、苯、氯仿、丙酮；微溶于水、乙醚和石油醚。
2.异补骨脂素(isopsoralen) 分子式C11H6O3，分子量186.16。
无色针状结晶，mp.137～138℃，溶于甲醇、乙醇、丙酮、苯、氯仿，微溶于水、乙醚，难溶于冷石油醚。
补骨脂素异补骨脂素3.补骨脂乙素(isobavachalcone) 又称补骨脂酮、异补骨脂查耳酮。
分子式C20H20O4，分子量324.36。
黄色片状结晶（甲醇-水），mp. 166～167℃。
4.补骨脂甲素(coryfolin) 又称补骨脂黄酮，分子式C20H20O4，分子量324.36。
无色针状结晶，mp.191～192℃。
补骨脂乙素补骨脂甲素（三）实验原理本实验根据补骨脂素和异补骨脂素等在乙醇中溶解度大，利用乙醇从中药补骨脂中提取补骨脂素及异补骨脂素等，并用活性炭吸附脱色，再依据补骨脂素和异补骨脂素的极性差异，利用柱色谱予以分离。
（四）实验内容1：把20g补骨脂研磨后用50%乙醇冷浸提取72h,24h,24h,每次用六倍量体积的乙醇。
铺薄层硅胶板，为了下次筛分离条件，铺好15块板。
补骨脂素和异补骨脂素的提取分离和结构鉴定
补骨脂素和异补骨脂素的提取分离和结构鉴定摘要：补骨脂为中医治疗脾肾阳虚的传统补虚药物，其新型的生物活性已逐渐受到重视并被开发使用，同时对补骨脂所含活性成分的研究也逐步深入，为临床治疗提供新药物提供可靠依据。
本文就有关补骨脂的研究作一综述。
关键词：补骨脂异补骨脂结构提取分离结构鉴定中药补骨脂始载于<开宝本草>，为豆科植物补骨脂的干燥成熟果实，别名破故纸、黑故子、胡故子等，其性温，味辛，具补肾助阳之功效。
在传统的中医临床上主治肾虚冷泻，阳萎，小便频数，腰膝冷痛，虚寒喘咳等病症。
据现代研究表明，补骨脂还具有抗肿瘤，抗菌，抗骨质疏松，雌激素作用以及治疗白癜风等多重药理活性。
补骨脂所具有的这些药理活性与其所含的活性成分有着密切联系。
因此，近年来；国内外学者对补骨脂化学成分的提取分离及相关药理作用进行了多方面的研究，并取得一些新成果，为进一步开发利用补骨脂奠定了基础。
补骨脂的植物来源、品种、科属及分布补骨脂来源为豆科植物补骨脂PsoraleacorylifoliaL.的果实。
属于补骨脂属，蝶形花科，约130种，分布于热带和亚热带地区，我国有补骨脂P.corylifoliaFranch.1种，产西南部，种子入药。
分布于山西、陕西、安徽、浙江、江西、河南、湖北、广东、四川、贵州、云南。
临床应用和药理活性研究概况1药理作用研究进展1.1皮肤药理研究补骨脂素(PSO)口服后,增加皮肤对紫外线的敏感性,经UVA 照射,可与表皮角质层细胞的DNA形成光加合物,抑制DNA合成,减低表皮细胞的过速增生,其用于银屑病治疗的疗效已为临床所肯定。
PSO为一光敏感物质,PSO和8MOP均能促进皮肤黑色素的合成,并使之沉积于皮下。
95%乙醇的补骨脂提取物对酪氨酸酶有明显的激活作用,而酪氨酸酶是人体内黑素合成的关键酶,因此认为补骨脂系通过提高酪氨酸酶的活性使黑色素的生成速度和数量增加。
1.2抗癌活性研究有研究表明补骨脂具有抗癌活性,实验表明补骨脂素对KB细胞、Hela细胞、小鼠肉瘤、艾氏腹水癌等有抑制作用。
补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的提取分离与检识
补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的提取分离与检识之老阳三干创作（一）目的要求学习香豆素类化合物的提取分离及检识,通过实验要求：1．掌握用溶剂法提取香豆素类化合物的把持技术.2．通过补骨脂素和异补骨脂素的分离,熟悉干柱色谱的把持技术.3．掌握香豆素类化合物的检识方法.（二）主要化学成份的结构及性质补骨脂为豆科植物补骨脂Psoralea corylifolia L.的干燥成熟果实,全国各地多有栽培.含有多种呋喃香豆素类成份,主要含补骨脂内酯（补骨脂素）、异补骨脂内酯（异补骨脂素）和补骨脂次素等.其中补骨脂素和异补骨脂素为抗白癜风的主要有效成份,具有光敏性质.1.补骨脂素(psoralen) 又称补骨脂内酯,分子式C11H6O3,分子量186.16.无色针状结晶（乙醇）,mp.189～190℃,有挥发性.溶于甲醇、乙醇、苯、氯仿、丙酮；微溶于水、乙醚和石油醚.2.异补骨脂素(isopsoralen) 分子式 C11H6O3,分子量186.16.无色针状结晶,mp.137～138℃,溶于甲醇、乙醇、丙酮、苯、氯仿,微溶于水、乙醚,难溶于冷石油醚.补骨脂素异补骨脂素3.补骨脂乙素(isobavachalcone) 又称补骨脂酮、异补骨脂查耳酮.分子式C20H20O4,分子量324.36.黄色片状结晶（甲醇-水）,mp. 166～167℃.4.补骨脂甲素(coryfolin) 又称补骨脂黄酮,分子式C20H20O4,分子量324.36.无色针状结晶,mp.191～192℃.补骨脂乙素补骨脂甲素（三）实验原理本实验根据补骨脂素和异补骨脂素等在乙醇中溶解度年夜,利用乙醇从中药补骨脂中提取补骨脂素及异补骨脂素等,并用活性炭吸附脱色,再依据补骨脂素和异补骨脂素的极性不同,利用柱色谱予以分离.（四）实验内容1：把20g补骨脂研磨后用50%乙醇冷浸提取72h,24h,24h,每次用六倍量体积的乙醇.铺薄层硅胶板,为了下次筛分离条件,铺好15块板.2：用补骨脂素和异补骨脂素的标准品通过TLC筛选硅胶柱色谱的分离条件.根据文献,设计了石油醚：乙酸乙酯10：1,石油醚：乙酸乙酯8：1,石油醚：乙酸乙酯6：1,石油醚：乙酸乙酯4：1等几组流动相配比,经过对Rf值的比力,最终决定用石油醚：乙酸乙酯6：1作为硅胶柱色谱分离的分离系统.把醇提液减压浓缩至剩下20ml水左右.萃取：浓缩后的混旋液加蒸馏水至100ml,用乙酸乙酯萃取三次.3.柱色谱分离,采纳湿法装柱干法上样.薄层色谱检识薄层板：硅胶G-CMC-Na板试样：补骨脂素乙醇液异补骨脂素乙醇液对比品：补骨脂素对比品乙醇液异补骨脂素对比品乙醇液展开剂：①石油醚-醋酸乙酯（6∶1）显色：紫外灯下观察荧光（五）实验说明及注意事项1．提取药材应是未炮制过的补骨脂种子,其补骨脂素和异补骨脂素等成份含量较高.2．补骨脂素和异补骨脂素含内酯结构,具有内酯类成份的通性,可用碱提酸沉法提取,但因补骨脂种子中含有年夜量油脂和糖类成份,易与碱水发生皂化反应和形成胶状物,致使难以滤过,降低收得率,故选用50％乙醇提取而不用碱溶酸沉法提取.3．由补骨脂种子中提取所得的精制品,为补骨脂素和异补骨脂素的混合物结晶,两者含量近于1∶1,但随药材品种、质量等分歧而有不同.在进行干柱色谱分离之前,应先进行薄层色谱检查,了解两者含量情况.因两者皆具有光敏作用,均为有效成份,故临床应用时,不势必两者分开.。
补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的提取分离与检识讲解
补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的提取分离与检识（一）目的要求学习香豆素类化合物的提取分离及检识，通过实验要求：1•掌握用溶剂法提取香豆素类化合物的操作技术。
2•通过补骨脂素和异补骨脂素的分离，熟悉干柱色谱的操作技术。
3•掌握香豆素类化合物的检识方法。
（二）主要化学成分的结构及性质补骨脂为豆科植物补骨脂Psoralea corylifolia L.的干燥成熟果实，全国各地多有栽培。
含有多种呋喃香豆素类成分，主要含补骨脂内酯（补骨脂素）、异补骨脂内酯（异补骨脂素）和补骨脂次素等。
其中补骨脂素和异补骨脂素为抗白癜风的主要有效成分，具有光敏性质。
1.补骨脂素（psoralen）又称补骨脂内酯，分子式C11H6O3，分子量186.16。
无色针状结晶（乙醇），mp.189〜190C,有挥发性。
溶于甲醇、乙醇、苯、氯仿、丙酮；微溶于水、乙醚和石油醚。
2.异补骨脂素（isopsoralen）分子式C11H6O3,分子量186.16。
无色针状结晶，mp.137〜138C，溶于甲醇、乙醇、丙酮、苯、氯仿，微溶于水、乙醚，难溶于冷石油醚。
3.补骨脂乙素（isobavachalcone）又称补骨脂酮、异补骨脂查耳酮。
分子式C20H20O4，分子量324.36c黄色片状结晶（甲醇-水），mp. 166〜167C。
4.补骨脂甲素（coryfolin）又称补骨脂黄酮，分子式补骨脂素C20H20O4,分子量324.36。
无色针状结晶，mp.191〜192 C（三）实验原理本实验根据补骨脂素和异补骨脂素等在乙醇中溶解度大，利用乙醇从中药补 骨脂中提取补骨脂素及异补骨脂素等， 并用活性炭吸附脱色，再依据补骨脂素和 异补骨脂素的极性差异，利用柱色谱予以分离。
（四）实验内容1:把20g 补骨脂研磨后用50聽醇冷浸提取72h,24h,24h,每次用六倍量体 积的乙醇。
铺薄层硅胶板，为了下次筛分离条件，铺好 15块板。
2：用补骨脂素和异补骨脂素的标准品通过 TLC 筛选硅胶柱色谱的分离条件。
补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的提取分离与检识
补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的提取分离与检识之阿布丰王创作（一）目的要求学习香豆素类化合物的提取分离及检识，通过实验要求：1．掌握用溶剂法提取香豆素类化合物的操纵技术。
2．通过补骨脂素和异补骨脂素的分离，熟悉干柱色谱的操纵技术。
3．掌握香豆素类化合物的检识方法。
（二）主要化学成分的结构及性质补骨脂为豆科植物补骨脂Psoralea corylifolia L.的干燥成熟果实，全国各地多有栽培。
含有多种呋喃香豆素类成分，主要含补骨脂内酯（补骨脂素）、异补骨脂内酯（异补骨脂素）和补骨脂次素等。
其中补骨脂素和异补骨脂素为抗白癜风的主要有效成分，具有光敏性质。
1.补骨脂素(psoralen) 又称补骨脂内酯，分子式C11H6O3，分子量186.16。
无色针状结晶（乙醇），mp.189～190℃，有挥发性。
溶于甲醇、乙醇、苯、氯仿、丙酮；微溶于水、乙醚和石油醚。
2.异补骨脂素(isopsoralen) 分子式C11H6O3，分子量186.16。
无色针状结晶，mp.137～138℃，溶于甲醇、乙醇、丙酮、苯、氯仿，微溶于水、乙醚，难溶于冷石油醚。
补骨脂素异补骨脂素3.补骨脂乙素(isobavachalcone) 又称补骨脂酮、异补骨脂查耳酮。
分子式C20H20O4，分子量324.36。
黄色片状结晶（甲醇-水），mp. 166～167℃。
4.补骨脂甲素(coryfolin) 又称补骨脂黄酮，分子式C20H20O4，分子量324.36。
无色针状结晶，mp.191～192℃。
补骨脂乙素补骨脂甲素（三）实验原理本实验根据补骨脂素和异补骨脂素等在乙醇中溶解度大，利用乙醇从中药补骨脂中提取补骨脂素及异补骨脂素等，并用活性炭吸附脱色，再依据补骨脂素和异补骨脂素的极性差别，利用柱色谱予以分离。
（四）实验内容1：把20g补骨脂研磨后用50%乙醇冷浸提取72h,24h,24h,每次用六倍量体积的乙醇。
铺薄层硅胶板，为了下次筛分离条件，铺好15块板。
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实验九补骨脂素、异补骨脂素的提取、分离和鉴定
补骨脂为豆科植物补骨脂Psoralea coryli folia L.的干燥成熟果实。
具有补肾助阳、温中止泻之功。
主治肾虚阳痿、遗精遗尿及腰膝冷痛，小便频数；外用治白癫风。
补骨脂中含有数种香豆素和黄酮类成分，主要有补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂双氢黄酮(补骨脂甲素)、异补骨脂查耳酮(补骨脂乙素)、补骨脂次素等。
药理研究证明，补骨脂甲素有明显扩冠作用，补骨脂素及异补骨脂素是具吸收紫外线性质的光敏性物质，因此是抗白癫风的有效成分，制剂有祛白素，补骨脂注射液、复方补骨脂酊等。
一、补骨脂中主要成分的物理性质
1．补骨脂素(psoralen) : C11H603, 无色针状结晶(乙醇)，mp189ºC, ~ 190ºC。
溶于乙醇、苯、氯仿、丙酮；微溶于水、乙醚和石油醚。
UVλmax m( lgε ): 242sh (4.38), 247 (4.40), 291 (4.03), 330 (3.80)。
IRνmax cm-1 : 1710, 1630, 1575,1259。
2．异补骨脂素(isopsoralen): C11 H603, 无色针状结晶，mp137ºC, ~ 138ºC。
溶于甲醇、乙醇、丙酮、苯、氯仿；微溶于水、乙醚，难溶于石油醚。
UVλmax m( lgε ): 245 (4.38), 297 (3.96)。
IRνmax cm-1 : 1724, 1709, 1613, 1513, 1370, 1330, 1266, 1250, 1055, 999, 833, 747。
3．补骨脂双氢黄酮(补骨脂甲素)(bavachin, corylifolin): C20H2004, 无色结晶，mp191ºC, ~ 192ºC,[α]D为-29.1º（乙醇）。
4. 异补骨脂查耳酮(补骨脂乙素)(isobavachalcone, corylifolinin): C20H20O4,黄色针状结晶，mp154ºC, ~ 156ºC。
5.补骨脂次素（psoralidin）: mp292ºC。
二、目的要求
1. 掌握用溶剂法提取呋喃香豆素类化合物的操作技术。
2. 通过补骨脂素和异补骨脂素的分离，熟悉干柱色谱法的操作技术。
3. 掌握香豆素类化合物的鉴定方法。
三、基本原理
根据内酯类化合物在乙醇中溶解度大，水中溶解度小的性质，利用乙醇，从中药补骨脂中提取补骨脂素及异补骨脂素，并用活性炭进行脱色，最后利用两者的极性差异，用氧化铝干柱层析予以分离。
四、操作
(一)提取分离流程
(二)提取
1．超声波振荡提取
200g①，用50％乙醇②1500m1分3次进行超声波振荡提取，每次30min, 过滤，合并滤液，回收乙醇至无醇味，放置过夜，倾去上清液，得棕黑色粘稠物。
将棕黑色粘稠物加20倍量甲醇分4次回流，每次15min，趁热抽滤，合并滤液，浓缩至小体积，放置析晶，滤取结晶，80ºC干燥即得补骨脂素粗品，称重。
2.浸渍法提取
称取补骨脂粗粉200g，用50％乙醇浸泡3次，每次24h，合并3次滤液，回收乙醇至无醇味，以下操作同1法。
3．称取补骨脂粗粉200g，放入1000ml烧瓶中，加入50％乙醇500ml，热回流1h, 过滤，回收乙醇至无醇味，放置过夜，倾去上清液，得棕黑色粘稠物。
将棕黑色粘稠物加80ml甲醇溶解，加少许活性炭，回流l0min，趁热抽滤，滤液回收甲醇至小体积，放置析晶。
(三)精制
将上述粗品加适量甲醇(3：100的比例)溶解，加少许活性炭，回流l0min，趁热抽滤，滤液放冷析晶，滤取结晶，少量甲醇淋洗，80ºC以下干燥即得补骨脂素精品③。
(四)补骨脂素和异补骨脂素的分离
取色谱用中性氧化铝40g，装于直径1.6cm*30cm的色谱柱中。
取补骨脂素精品甲醇液约1-2ml，加样，以石油醚-乙酸乙酯（1：2）作洗脱剂，洗脱，每20ml为一溜份，各溜份回收溶剂后，用薄层板检查，和标准品对比，于紫外光灯下观察荧光与颜色。
(五)鉴定
1．呈色反应
(1)异羟肟酸铁反应取补骨脂素精品少量，置于试管中，加入7％盐酸羟胺甲醇溶液2滴～3滴，再加10％氢氧化钾甲醇溶液2滴～3滴，于水浴上加热数分钟，冷却，用盐酸调至pH3～4，加1％三氯化铁试液1滴～2滴，观察溶液颜色。
(2)开环闭环试验取样品少许加稀氢氧化钠溶液1m1—2m1，加热，观察现象；再加稀盐酸试液几滴，观察所产生现象。
(3)荧光取样品少许溶于氯仿中，用毛细管点于滤纸上，于紫外光灯下观察荧光与颜色。
2．薄层色谱鉴定
薄层板：硅胶G—CMC-Na板。
点样：补骨脂素精品乙醇液、干柱色谱分得的两样品乙醇液、补骨脂素对照品乙醇液及异补骨脂素对照品乙醇液。
展开剂：石油醚一乙酸乙酯(2：3)。
展开方式：上行展开。
显色：在紫外光灯(365nm)下观察荧光斑点。
观察记录：记录图谱，计算Rf值。
五、附注
①原料最好用未炮制过的补骨脂种子，其中补骨脂素和异补骨脂素含量较高。
②补骨脂含大量油脂，据文献报道，用50％乙醇或40％丙酮提取，方法简便,得率高，亲脂性杂质少，乙醇又较丙酮便宜，故选用50％乙醇提取。
利用香豆素内酯类的特点，用碱提酸沉法，由于补骨脂中含大量油脂和糖类成分，易发生皂化反应和形成胶状物，难以过滤，得率低。
③从补骨脂中提取得到的白色针状物，为补骨脂素和异补骨脂素的混合物，两者含量比随药材的品种、质量不同而不同，由于两者均属于光敏性物质，故临床应用时，不必将两者分开。
在进行干柱色谱分离前，应先做薄层色谱检查两者的含量情况。
六、思考题
1. 从中药中提取香豆素类成分还有哪些方法?
2．异羟肟酸铁反应的机理是什么?
参考文献
1．洪永福等，补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的分离和鉴定，药学通报，(10)1979，447页．
2．徐永昭，补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的提取实验，中药通报，7(5)1982，30页．3．翼春如等编，中药化学实验技术与实验，郑州，河南科学技术出版社，1986，291页．4．吴焕，补骨脂的化学成分(综述)，中草药通讯；(10)1978，32页．。