实时荧光定量PCR在植物害虫研究中的应用

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实时荧光定量PCR的研究进展及其应用

实时荧光定量PCR的研究进展及其应用一、本文概述实时荧光定量PCR（Real-Time Quantitative PCR，简称qPCR）是一种在分子生物学领域广泛应用的分子生物学技术，它能够在PCR 扩增过程中实时监测反应产物的积累，从而精确地定量目标DNA或RNA的初始浓度。

自20世纪90年代诞生以来，qPCR技术以其高灵敏度、高特异性、快速性和定量准确等优点，在基因表达分析、病原体检测、基因型鉴定、基因突变分析、药物研发等多个领域发挥了重要作用。

随着技术的不断发展和完善，实时荧光定量PCR已成为现代生物学研究中不可或缺的工具。

本文旨在全面综述实时荧光定量PCR技术的最新研究进展，包括其原理、方法、技术优化、应用领域的拓展以及面临的挑战等。

文章首先简要介绍qPCR技术的基本原理和常用方法，然后重点论述近年来在技术优化、多重PCR、数字化PCR等方向上的进展。

接着，本文详细探讨实时荧光定量PCR在基因表达分析、病原体检测、基因型鉴定、基因突变分析、药物研发等领域的应用案例和前景。

文章还将讨论实时荧光定量PCR面临的挑战，如引物设计、数据分析等问题，并提出相应的解决方案。

通过本文的综述，读者可以对实时荧光定量PCR技术的最新进展和应用有一个全面的了解，为相关研究提供参考和借鉴。

二、实时荧光定量PCR的基本原理与技术特点实时荧光定量PCR（Real-time Fluorescent Quantitative PCR，简称qPCR）是一种在PCR扩增过程中，通过对荧光信号的实时检测，对特定DNA片段进行定量分析的技术。

其基本原理是利用荧光染料或荧光标记的特异性探针，在PCR反应过程中实时检测PCR产物量的变化，从而得到DNA模板的初始浓度。

实时性：通过荧光信号的实时检测，可以实时了解PCR产物的生成情况，无需PCR结束后进行电泳等后续操作，大大缩短了实验时间。

定量性：通过标准曲线的建立，可以准确地计算出DNA模板的初始浓度，实现了PCR的定量分析。

PCR技术在植物检疫性病害鉴定中的应用

1、样品采集：选择具有典型症状的病害样本进行采集，并做好记录。
2、DNA提取：将采集的病害样本进行处理，去除蛋白质等杂质，提取出其中的DNA。
3、引物设计：根据已知的病害基因序列，设计出特异性的引物。
4、PCR扩增：将DNA模板、引物、dNTP等反应液加入PCR反应管中，进行PCR 扩增。
5、产物检测：对PCR扩增后的产物进行电泳分析或荧光检测，观察是否有特异性条带或荧光信号。
3、植物生物安全监测：qPCR技术可以用于植物生物安全监测，如监测外来入侵植物的扩散情况和评估植物种质资源的遗传多样性。
然而，qPCR技术在植物检疫中的应用也存在一些不足，如对设备要求较高、对实验条件和操作技能的要求严格，以及可能出现的假阳性和假阴性结果等问题。因此，需要进一步改进和完善qPCR技术，以提高其准确性和可靠性。
PCR技术在植物检疫性病害鉴定中的应用
目录
01
一、PCR技术在植物检疫性病害鉴定中的应用前沿研究
03 四、PCR技术在植物检疫性病害鉴定中的应用案例及评价
二、PCR技术在植物
02 检疫性病害鉴定中的原理和流程
04 参考内容
植物检疫性病害是指对农业生产和植物生态环境造成严重危害的植物病害，其鉴定与防治对保障农业生产和生态安全具有重要意义。近年来，随着分子生物学技术的迅速发展，聚合酶链式反应（PCR）技术在植物检疫性病害鉴定中得到了广泛应用。本次演示将从PCR技术在植物检疫性病害鉴定中的应用前沿研究、原理和流程、实验方法和结果分析以及应用案例及评价等方面进物检疫中的应用实践
1、植物病原物检测：qPCR技术可以快速、准确地检测植物病原物，如病毒、细菌、真菌等。例如，针对水稻矮缩病毒的qPCR检测方法，可以实现对病毒的特异性识别和定量检测。

实时荧光定量PCR技术在真菌检测中的应用

实时荧光定量PCR技术在真菌检测中的应用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction, qPCR）是一种高效、灵敏的分子生物学技术，广泛应用于科研和医学诊断等领域。

其在真菌检测中的应用，具有快速、准确和高通量的优势，被广泛应用于食品安全、环境监测和临床诊断等领域。

一、介绍实时荧光定量PCR技术的原理是通过引入荧光探针和荧光剂来实时监测PCR反应的扩增过程，从而实现样本中目标DNA的定量检测。

相比传统的聚合酶链反应，实时荧光定量PCR技术的特点在于不需要进行后续的凝胶电泳步骤，并且具有更高的灵敏度和特异性。

二、真菌检测的重要性真菌是一类广泛存在于自然环境中的微生物，对于人类的健康和生态系统的平衡具有重要影响。

某些真菌可以引起严重的传染病，比如肺真菌感染和侵袭性真菌感染，对人类健康构成威胁。

此外，在食品加工和贮存过程中，真菌的污染也会导致食品腐败和毒素产生，对食品安全产生负面影响。

因此，及早检测和鉴定真菌的存在是至关重要的。

三、实时荧光定量PCR技术在真菌检测中的应用1. 物质检测实时荧光定量PCR技术可以应用于食品加工和生物样品中真菌物质的检测。

通过选择合适的荧光探针和引物，可以在样本中快速且准确地检测到真菌的存在及其数量水平。

这种方法不仅可以大大缩短检测时间，还可以减少人为操作的干扰和误差。

2. 环境监测实时荧光定量PCR技术在环境监测中广泛应用于水体、土壤和空气中真菌的检测。

通过采集样品并提取其中的DNA，利用实时荧光定量PCR技术可以在短时间内快速、精确地检测出真菌的存在和分布情况，为环境保护和生态研究提供科学依据。

3. 临床诊断实时荧光定量PCR技术在临床诊断中应用广泛，可以用于快速检测和鉴定引起病原菌感染的真菌种类。

通过从患者样本中提取DNA，并使用特定的引物和荧光探针，实时PCR可以在短时间内对真菌感染进行准确诊断，从而指导临床治疗和预防措施的制定。

实时荧光定量PCR技术的原理及其应用

实时荧光定量PCR技术的原理及其应用引言实时荧光定量PCR（Polymerase Chain Reaction）技术是一种细胞遗传学和分子生物学研究中常用的分子检测技术。

它能够迅速、准确地进行DNA或RNA的定量测量，并在许多领域中广泛应用，例如基因表达分析、病原微生物检测和病毒定量等。

本文将重点介绍实时荧光定量PCR技术的原理和一些典型应用。

实时荧光定量PCR技术原理实时荧光定量PCR技术是在传统PCR反应的基础上发展而来的一种PCR变体。

其原理可以简单概括为光信号的实时检测和荧光强度的定量分析。

实时荧光定量PCR技术的具体步骤如下：1.引物与探针设计在实时荧光定量PCR反应中，合适的引物和探针设计是至关重要的。

引物用于在反应中特异性地扩增目标DNA或RNA序列，而探针则用于荧光信号的检测。

引物和探针的设计需要确保其与目标序列的亲和力和特异性，以避免非特异性扩增和假阳性结果。

2.标定曲线制备为了进行定量分析，需要事先制备一条标定曲线。

标定曲线通常是通过浓度已知的目标序列的一系列稀释样品制备的。

这些稀释样品经过PCR扩增后，荧光信号的强度与初始浓度呈线性关系。

通过测量待测样品的荧光信号强度，并利用标定曲线进行外推，可以获得目标DNA或RNA的定量结果。

3.PCR反应体系组装PCR反应体系的组装需要考虑到引物和探针的最优浓度，以及反应缓冲液、酶和模板DNA或RNA的最佳配比。

此外，反应体系中还需要加入辅助成分，如酶抑制剂和荧光染料，以提高PCR反应的特异性和灵敏度。

4.实时荧光检测及数据分析在PCR反应进行过程中，荧光信号会随着目标DNA或RNA的扩增而增强。

实时荧光定量PCR仪会实时监测和记录荧光信号的变化情况，并生成扩增曲线。

通过分析荧光信号的增长速度和荧光信号的峰值，可以确定目标DNA或RNA的起始浓度。

实时荧光定量PCR技术应用1. 基因表达分析实时荧光定量PCR技术在基因表达分析中被广泛应用。

实时荧光定量PCR技术在植物检疫中应用的研究进展

实时荧光定量ＰＲ（ｅｌｔｅｌｏｅｃｎＣＲａ —ｉｆｒｓｅｔｍｕ
了生物入境安全。
ｑａｔａｖＣＦ — Ｃ技术是２ｕｎｉｔｅＰＲ，ＱＰＲ）ｔｉ０世纪９Ｏ年代
第５卷第１期１
２１０２年１月
湖北农业科学
ＨｕｅＡｇｉｕｔｒｌｃｅｃｓｂｉｒｌａＳｉｎｅｃｕ
Байду номын сангаас
Ｖｏ＿．ｌ５１Ｎｏ１
Ｊｎ，０１ａ．２２
实时荧光定量ＰＲ技术在植物检疫中应用的Ｃ研究进展
黄海泉
物疫情的检测与应用。
关键词：时荧光定量ＰＲ技术；物检疫；物病害实Ｃ植植
中图分类号：４ — ￥１３
文献标识码：Ａ
文章编号：４９８ｆ０２０ — ０５００３ — １４２１）１００ —４１
ｑａａｔｅｗｓｓｕｉｄａｄｉｒｖｄｔｅｄｔｃｉｇｅｃｅｃｎｎｔｒｎｅｅｆｐａｔｅｉｅｃｈｐｌａｉｎｏｕｎｕｒｎｉａｔｄｅｎｍｐｏｅｈｅｅｔｆｉｎｙａｄｍｏｉｉｇｌｖｌｏｌｎｐｄｍｉ．Ｔｅａｐｉｔｆｑａ — ｎｎｉｏｃｏｔａｉｅｌｏｅｃｎｅｄｔｃｉｎｎｌｎｓｐｄｍｉａｓｄｙｆｎｉｂｃｅｉｉｔｆｒｓｅｃｅｅｔｉｐａｔｔｖｕｏｅｉｅｃｃｕｅｂｕｇ，ａｔｒａ，ｖｒｓｓａｄｅｔｄｓｗａｏｒｈｎｉｅｙｅｉｅｎ．ｍａｏｅｓｃｍｐｅｅｓｌｄ — ｕｍｖｓｒｅ．ｃｉｄｂ

实时荧光定量PCR在植物病害流行学中的应用

研究中，文对近年来实时荧光定量ＰＲ技术在病菌初始茵源的定量分析、本Ｃ病害流行动态的监测、寄主抗病性的快
速鉴定和植物病原茵的抗药性监测等方面的应用进行了综述。关键词实时荧光定量ＰＲ；植物病害流行学；应用Ｃ中图分类号：Ｓ４２１３．文献标识码：ＡＤ：１．９９ｊｉｎ０２ —１４．０１０．０ＯＩ０３６／．ｓ．５９５２２１．４０４ｓ
聚合酶链式反应（ｏｙｒｓｈｉｅｃｏ，ｐｌａｅｃａｒａｔｎｍｅｎｉ
数越少，ｔ越大，者之间关系的建立是荧光定Ｃ值两
量ＰＲ用于定量的依据。因此它除具有常规ＰＲＣＣ的基本特点之外，具有诸多优点：）时以准确定量，且由于动力学Ｃ对并范围广，可在很大浓度范围内进行定量；）去了扩２省增产物后续的处理工作，如凝胶电泳和ＥｅｈｄＢ（ｔｉｉｕｂｏｄ）ｍｒｍｉｅ染色等，以大量的缩短时间和减少劳可
２ｏｌｅｆｒｎｍｙａＢｏｅｈｏｏｙ，ＣｉｇｒｕｔｒｌｎｖｒｉＢｉｎ１０９，Ｃｉ．ＣｌｇＡｏｏｎｉｔｎｌｅｏｇｄｃｇｈｎａＡｉｌａｉｓｔｅｊｇ０１３ｈｎｃｕＵｅｙ，ｉａ）
ＡｂｔａｔＲｅｌｔｕｎｉａｉｅＰｓｒｃａ —ｉｍｅｑａｔｔｔｖＣＲａｅｎｗｉｅｙｕｅａｉｕｒａｆｐａｔａｈｌｇｅｅｒｈ．Ｉｅｅｔｈｓｅｄｌｓｄｉｖｒｏｓｅｓｌｎｔｏｏｙｒｓａｃｂｎａｏｐｎｒｃｎｙａｓｔｈｓｂｅｐｌｄｔｈｕｎｉａｉｅｓｕｉｓｏｐｄｍｉｌｇｆｐａｔｄｓａｅ．Ｔｈｐｉａｉｎｆｒａ — ｅｒ，ｉａｅｎａｐｉｏｔｅｑａｔｔｔｄｅｆｅｉｅｏｏｙｏｌｎｉｅｓｓｅｔｖｅａｐｌｔｓｏｅｌｃｏｔＣＲｏｅｉｅｉｌｇｆｐａｔｄｓａｅｒｅｉｗｅｉｍｅＰｔｐｄｍｏｏｙｏｌｎｉｓｓｗｅｅｒｖｅｄ，ｉｃｕｉｇｔｅｑａｔｆｃｔｎｏｎｔａｎｃｌｍｆｅｎｌｄｎｈｕｎｉｉａｉｆｉｉｉｌｉｏｕｕｏｏｐｔｏｅｓｈｎｔｒｎｆｄｓａｅｅｉｅｉｓｈｄｎｉｉａｉｎｏｏｔｒｓｓａｃ，ｍｏｉｏｉｇｏｕｇｃｄｅａｈｇｎ，ｔｅｍｏｉｏｉｇｏｉｓｐｄｍｃ，ｔｅｉｅｔｆｃｔｏｆｈｓｅｉｎｅｅｔｎｔｒｎｆｆｎｉｉｅｒ —

荧光定量PCR技术在微生物检测中的应用研究

荧光定量PCR技术在微生物检测中的应用研究随着生物技术的不断发展，荧光定量PCR技术在微生物检测中越来越受到广泛关注和应用。

荧光定量PCR技术是一种基于PCR的核酸检测技术，其主要优势在于高灵敏度、高特异性和高通量检测能力，可以用来检测微生物的数量、种类和变化。

本文将介绍荧光定量PCR技术在微生物检测中的应用研究。

1.荧光定量PCR技术的基本原理荧光定量PCR技术是一种快速、准确、高通量的核酸检测技术，其基本原理是利用PCR技术扩增DNA，同时使用荧光标记和荧光探针来检测PCR扩增产物的数量。

荧光标记和荧光探针是一种分子探针，可以根据PCR扩增产物的数量发出荧光信号，从而实现快速、准确的微生物检测。

2.荧光定量PCR技术的应用范围荧光定量PCR技术应用广泛，包括微生物检测、临床诊断、食品安全、环境监测等方面。

其中，微生物检测是荧光定量PCR技术的主要应用领域之一。

3.荧光定量PCR技术在微生物检测中的应用研究主要集中在以下几个方面：3.1 微生物数量的检测荧光定量PCR技术可以用来检测微生物的数量。

在传统的微生物检测中，一般采用文化方法或光学显微镜技术，这些方法需要耗费大量时间和人力成本，并且准确率有限。

而荧光定量PCR技术可以快速、准确地检测微生物数量，因此成为微生物检测的重要方法之一。

3.2 微生物种类的鉴定荧光定量PCR技术可以用来鉴定微生物的种类。

在传统的微生物检测中，常常也会出现误判的情况，而荧光定量PCR技术可以通过检测微生物的特异性DNA序列，对微生物的种类进行准确鉴定。

3.3 微生物变化的监测荧光定量PCR技术可以用来监测微生物变化。

在微生物检测中，微生物的数量和种类常常存在一定的波动性，因此需要进行定期监测。

荧光定量PCR技术可以对微生物变化进行快速、准确地监测，有助于预测微生物的发展趋势。

4.应用前景和展望随着生物技术的不断发展和微生物领域的研究深入，荧光定量PCR技术在微生物检测中的应用前景非常广阔。

PCR相关技术在植物病毒检疫检测中的应用

Key words： Plant virus PCR Quarantine and detection
近年来，植物病毒在世界各国的危害日趋严重，所发现和报道的病毒种类日益增多，目前植物病毒分为 18 个科（包括 3 个含有动物病毒的科、2 个由反转录转座子组成的科），76 个属（包括 20 个未定科的悬浮属），共有近 1 000 种病毒，其中包括约 280 个暂定种［1］。加入 WTO 以后，随着我国的对外开放及国际贸易不断扩大，境外植物病毒通过口岸进入境内的风险逐渐加大，我国出入境检验检疫部门面临着空前的挑战。由于各种原因，目前植物病毒在口岸被检验检疫机关截获的机率依然不高，远远低于昆虫和真菌检出率。目前，国内针对植物病毒的检疫方法主要包括鉴别寄主反应（生物学方法）、电镜观察、血清学试验和分子生物学手段。聚合酶链式反应（ polymerase chain reaction，PCR）技术是一种在体外快速扩增特定 DNA 序列的方法。PCR 及其相关技术以其快速、灵敏和准确等优点已广泛应用于植物病害的检测研究［2］。自 1983 年美国 PE 公司的 Mullis 等发明了聚
3 免疫捕捉反转录-PCR（ immunocapture reverse transcription PCR，IC-RT-PCR）
技术
免疫捕捉反转录 PCR（ IC-RT-PCR）检测技术是免疫学技术与 RT-PCR 技术相结合建立起来的检测技术。该技术不需进行病毒 RNA 的抽提，操作更容易，并且在不破坏病毒粒体的情况下，即可实现病毒的检测。该方法中的病毒特异性抗体可用依赖于 dsRNA 的单克隆抗体替代，为不具备病毒特异性抗体或采用免疫学技术很难检测的病毒提供了一个可行的检测方法。其灵敏度与典型的 RT-PCR 检测技术相同［17］。陈建军等［18］在检测葡萄卷叶病毒 Ⅲ 时，比较了常规的 RT-PCR 和 IC-RT-PCR 技术，发现 RT-PCR 不很稳定，易受环境、实验仪器和实验员身体上 RNA 酶的影响，植物组织中蛋白质、DNA 和多糖也直接影响试验结果，而 IC-RT-PCR 可以避免上述问题，使检测简便、快速。已有报道表明，从 10 － 4 稀释度的番木瓜叶粗汁液（相当于 0． 5 μg 鲜叶组织的量）中检测到了番木瓜环斑病毒［19］。

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能性；３（）可以在很大浓度范围内（１倍）＞０进行定量，有较高的灵敏度、异性和精确性；ｄ特（）既可以做定性分析又可以做定量分析【ｌ】。同时该技术也与传Ｈ
统的Ｐ技术相比还有其不足之处：１ＣＲ（）由于减少了
第３４卷第２期２ｌ年６月０１
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Ｖｏ．４ＮＯ２Ｉ３．．Ｊｎ，２ｌｕｅ０ｌ
ＪＡＮＧＸＩＰＬＡＮＴＰＲＯＴＥＣＴＩＩＯＮ
实时荧光定量ＰＲ在植物害虫研究中的应用Ｃ
郭庆，王忠跃，孔繁芳，武艳霞
与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始
拷贝数越多，Ｃ值越小。因此只要获得未知样品的ｔＣ值，即可从标准曲线上得到该样品的起始拷贝数ｔ
【ｌｌ】
。
荧光也有很大帮助。
２２水解探针（ａｎａ）．Ｔｐｌｎ目前在实时荧光定量ＰＲ技术中应川较多的水Ｃ
了对ＤＡＮ模板的定量，它具有实时性、快速、灵敏、
高通量、特异性强、自动化程度高、重复性好、准确定量等特点。
敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点，被广泛应用于基础研究，成为分子生物学、鉴别遗传疾病和快速检测病毒和病菌感染必
关键词：实时荧光定量ＰＲ；Ｃ；植物害虫；荧光阈值；荧光探针Ｃｔ
中图分类号：￥６－７３３
文献标识码：Ａ
文章编号：１０－４４（０１２０７７０６２９２１）０ —０４ —０
１８年美国Ｐｅｓ司人类遗传研究室的９３ＥＣｔ公ｕＫｒｌｓ明了聚合酶链反应（ｏｙｒｓｈｉａｙＭｕｌ发ｉＰｌｍｅａｅＣａｎＲａｔｎＰＲ）ｅｃｉ，Ｃ川，该体外核酸扩增技术具有特异、ｏ
近年来，实时荧光定量ＰＲＣ技术不断完善，取得了突飞猛进的发展。由于该技术本身的优越性，被广泛应用于医疗检测、药物疗效考核、基因表达研究、转基因研究、基因检测、病原体检测、动植
物检测、食品安全等不同研究领域【】目前，实９。＇
时荧光定量ＰＲＣ技术成为分子生物学研究中的重要
解探针是Ｔｐｎ针。探针５端标记一个荧光基ａｍａ探 ’
１实时荧光定量ＰＲ的特点．３Ｃ实时荧光定量ＰＲＣ与传统ＰＲ比，它具有诸Ｃ相
多优点：１（）定量原理独特，川产生荧光信号的多少米显示扩增产物的量，实现了动态实时连续荧光监
工具【，而在植物害虫研究上的报道相对其他领 ¨
推出实时荧光定量ＰＲＣ技术。由于传统的ＰＲＣ技术都是依赖于产物的终点浓度进行分析的，存在不能
准确定量，且操作过程中易污染而使得假阳性率高等缺点，使其应用受到局限，直到近年来荧光共振
个ＰＲ程，在荧光信号指数扩增阶段，ＰＲ物Ｃ进Ｃ产
不同，目前实时荧光定量ＰＲＣ应川比较 ‘ Ｉ泛的为四 ’
大类，分别是荧光染料（ＹＢｅｎ、水解探针ＳＲＧｒｅ）
（ａｍａ）Ｔｐｎ、杂交探针、分子信标，除此以外还有荧光标记引物，复合探针法，ＬｇｆＰｙｌｏｓｉｈ－、Ｃｃｉｎ、ｕｃ
（中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室，北京１０９）０１３
摘要：实时荧光定￣ＰＲ技术作为一项新兴技术，以快速、准确定量、便捷等优点广泛应用于科学研究各个领域，．Ｃ越来越受到人们的重视。近年来，随着实时荧光定ｍＰＲ－Ｃ技术的发展和深入，大大提高了植物害虫的研究水平。本文结合了最近几年来应用于鉴定和研究植物害虫的情况，同时也介绍了在植物病原线虫和害螨研究中的应用，综合论述了实时荧光定量ＰＲＣ技术在植物害虫研究中的应用。
传递剑长波长（能量）的荧光基团，相当于短波低长荧光集团释放的荧光被屏蔽，这个过程称为
ＦＥＴ。Ｒ
也限制了其的应用范围；（）由ｒ该技术极其灵敏，４
所以对实验操作的精确度要求较高。
１实时荧光定量ＰＲ．２Ｃ的原理
环（ｙｌ）代表阈值（ｈｅｈｌ）。对于ＣＣｃｅ，ＴＴｒｓｏｄｔ
ＳＢｅｎ异地与ｄＤＹＲＧｒｅ特ｓＮＡ结合，发山荧光信号
［８１１
。
ＤＮＡ结合染色的方法不需要使川特异性荧光标
记的探针，相对简便，同时也降低了检０的成本，其特异性完全由ＰＲ的引物所决定。主要不足是：Ｃ其染料与ＤＮＡ双链分子的结合是特异性的，它可以和反应体系中所有ＤＮＡ分子结合，易受到１特异性卜
在荧光扩增曲线指数增长期设定的一个荧光强度标准，一般这个阈值是以ＰＲＣ反应的前１个循环的荧５光信号作为荧光基础信号，荧光闽值的缺省设置是３５循环的荧光信号的标准偏差ｌ倍，如果检测－ｔ个０到的荧光信号超过闽值才被认为是可信的信号。而在ＰＲ增过程中，扩增产物的荧光信号达到荧光Ｃ扩闽值时所经历的扩增循环数被称为Ｃ值，Ｃ表循ｔ代
实时荧光定餐ＰＲ术是指在ＰＲ应体系中Ｃ技Ｃ反
２实时荧光定量ＰＲ的分类Ｃ
根据荧光基团标记Ｉ现能量共振转移方式的实
加入荧光基团，随着ＰＲＣ反应的进行，扩增产物不
断积累，荧光信号的强度不断增加。每经过一个循环，收集一次荧光强度信号，从而得到一条荧光扩增曲线，利用荧光信号积累强度的变化实时监测整
ｑａｔａｖＣ，ＱＰＲ）ｕｎｉｔｅＲＦ．Ｃ是在常规ＰＲｔｉＰＣ技术基础上把荧光共振能量转移与荧光标记探针相结合，并巧妙地把核酸扩增、杂交、光谱分析和实时检测技术融合在一起的一项创造性技术，该技术不仅实现
收稿日期：２１－３２００．４１基金项目：国家葡萄产业技术体系（ｙｙｘ３）ｎｃｔ．０
的应用前景。
ＦＥ）ＲＴ技术用于ＰＲＣ定量后，上述问题才得到较好的解决【，随着实时荧光定量ＰＲ４ＪＣ的发明，此技术
在不同研究领域都发挥出重要作用】。实时荧光定量ＰＲ（ｅ１ｉｆｏｅｃｎｅＣｒａ．ｍｅｌｒｓｅｃｔｕ
够近时，能量可以从短波长（高能量）的荧光基团
。
作者简介：郭庆，男，内蒙古海拉尔人，在读研究生，主要从事葡萄根瘤蚜检测及防治控工作。通信作者：Ｅｍａｌｗａｇｈ００＠ｓａｔｍ。－ｉｎｚｙ３１ｉ．：ｎｏ
・８・４
江
西
植
保
Ｌｔｃｒｉ、Ａｍｐｉｕｒ。ＵＸ、Ｓｏｐｏｎｌｏ等【叫１ｌｆ
董的对数值与起始模板量之间存在线性关系，最后在这一阶段通过Ｃ值和标准曲线对未知模板进行定ｔ量分析的方法。在实时荧光定量ＰＲ术中有两个Ｃ技
个游离的荧光分子形成，可通过检测系统观察剑信
号的变化，实现了荧光信号的累积与ＰＲ物形成Ｃ产
完全同步。利标准品模极系列绘制山标准曲线，
结合各样品的Ｃ值，可确定样品的起初模板簟Ｉ。ｔｌ …
扩增后电泳的检测步骤，因此不能监测扩增产物的
不到该探针５端荧光基团发出的荧光。在ＰＲ增 ’ Ｃ扩过程中，由于Ｔｑ的５一’ 切酶活性将探针的荧光ａ酶 ’ 外３基团切下，荧光基团与淬灭基团远离，不能发生ＦＥＲＴ而产生荧光信号，每扩增一条ＤＡ链就有一Ｎ
不可少的研究工具。２日１９年本人Ｈｇｃｉ９ｉｈ想实时观ｕ
察ＰＲ反应的全过程，最终达到检测样品中的ＤＣＮＡ
量的目的，最早提出了实时荧光定量ＰＲ的设想【Ｃ２，
引
，
继而由１９年美国ＡｐｌｄＢｏｙｔｍｓ司首先９６ｐｉｉｓｓｅｅ公
２１荧光染料（ＹＢｅｎ．ＳＲＧｒｅ）
ＳＲＧｅｎ一种能与ｄＤＡ特异结合的染ＹＢｒｅ是ｓＮ
料，在ＰＲ反应体系中，加入过鼙ＳＢｅｎＣＹＲＧｒｅ，