混合植物甾醇中豆甾醇和β-谷甾醇的高效液相色谱分析.pdf222
高效液相色谱法测定油脂中β-谷甾醇的含量
高效液相色谱法测定油脂中β-谷甾醇的含量邱丰艳;丁力;曹红云【摘要】建立了高效液相色谱法准确、高效测定油脂混合体系中β-谷甾醇含量的方法，并对油脂混合物中β-谷甾醇的提取工艺进行了优化。
采用C18反相色谱柱对β-谷甾醇含量进行测定，流动相为甲醇-水(体积比98．5：1．5)，检测波长210 nm。
结果表明：β-谷甾醇在25~500μg/mL范围内，质量浓度与峰面积呈良好的线性关系(R2=0．9998)，仪器检出限为7．5μg/mL，相对标准偏差(RSD)为0．85%；油脂混合物中β-谷甾醇的最佳提取工艺条件为提取次数4次，离心转速2000 r/min，皂化温度80℃，皂化时间210 min；在最佳提取工艺条件下β-谷甾醇的回收率为93．44%~96．48%，RSD为1．70%。
%The accurate and efficient method for determing β-sitosterol content of oil mixture by HPLC was established,and the extraction process of β-sitosterol from oil mixture was optimized. C18 reverse-phase chromatography column was used for the determination ofβ-sitosterol content under the conditions of mobile phase methanol - water (volume ratio 98. 5:1. 5 ) and detection wavelength 210 nm. The re-sults showed that the mass concentration of β-sitosterol had a good linear relationship with peak area in the range of 25-500μg/mL. The correlation coefficient, the instrumental limit of detection and the rela-tive standard deviation (RSD) were 0. 999 8, 7. 5 μg/mL and 0. 85% respectively. The optimal extrac-tion conditions of β-sitosterol from oil mixture were obtained as follows:extraction times four, centrifugal speed 2 000 r/min, saponification temperature 80℃ and saponification time 210min. Under these conditions,the recovery rate and RSD of β-sitosterol were 93. 44% -96. 48% and 1. 70%, respectively.【期刊名称】《中国油脂》【年(卷),期】2014(000)007【总页数】5页(P91-94,95)【关键词】HPLC;β-谷甾醇;油脂混合物【作者】邱丰艳;丁力;曹红云【作者单位】龙岩学院生命科学学院，福建龙岩364012;龙岩学院生命科学学院，福建龙岩364012;龙岩学院生命科学学院，福建龙岩364012【正文语种】中文【中图分类】TS225.1;TQ646β-谷甾醇是天然植物脂质中分布最广的甾醇类物质，具有良好的生理活性和安全性，不仅可降低人体对胆固醇的吸收，还可降低血浆中总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量[1-3]。
结晶法分离精制混合植物甾醇中_谷甾醇和豆甾醇
Solvent (x10-2 g/ml)
Solvent (x10-2 g/ml)
40 30 20 10 0
30
20 1 10
1
0 20
30
40 T ( oC )
50
60
20
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40 T ( oC )
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图 4 豆甾醇和β –谷甾醇在不同溶剂中溶解度随温度的变化曲线 Fig.4 The change of solubilities of stigmasterol and β -sitosterol with temperature in different solvents
表 1 以环己酮为溶剂用分级结晶法精制β –谷甾醇的实验结果 Table 1 The experimental results of purifying β -sitosterol by fraction crystallization using cyclohexanone as solvent
No. of re-crystallization 1 2 3 Cyclohexanone/ phytosterols (ml/g) 2.50 2.40 2.35 Melting point (o C) 141~145 136~140 136~139 β -sitosterol (%) by IR by UV 75.1 75.6 81.7 8 2.3 87.5 88.4 Theoretical x (%) 86.5 91.5 98.8 Yield (%) 53.68 49.53 38.65
过 程 工 程 学 报 The Chinese Journal of Process Engineering
中药色谱分析试验讲义试验一高效液相色谱操作及其参数的测定一
《中药色谱分析》实验讲义实验一高效液相色谱操作及其参数的测定一、目的要求：1．熟悉高效液相色谱仪的原理和基本方法2．熟悉使用高效液相色谱仪基本操作方法二、实验提要：以高压液体为流动相的液相色谱分析法称高效液相色谱法（HPLC）。
其基本方法是用高压泵将具有一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂泵入装有填充剂的色谱柱，经进样阀注入的样品被流动相带入色谱柱内进行分离后依次进入检测器，由记录仪、积分仪或数据处理系统记录色信号或进行数据处理而得到分析结果。
由于高效液相色谱法具有分离效能高、选择性好、灵敏度高、分析速度快、适用范围广（样品不需气化，只需制成溶液即可）、色谱柱可反复使用的特点，在《中国药典》中有50种中成药的定量分析采用该法，已成为中药制剂含量测定最常用的分析方法。
高效液相色谱法按固定相不同可分为液-液色谱法和液-固色谱法；按色谱原理不同可分为分配色谱法（液-液色谱）和吸附色谱法（液-固色谱）等。
目前，化学键合相色谱应用最为广泛，它是在液－液色谱法的基础上发展起来的。
将固定液的官能团键合在载体上，形成的固定相称为化学键合相，不易流失是其特点，一般认为有分配与吸附两种功能，常以分配作用为主。
C18（ODS）为最常使用的化学键合相。
根据固定相与流动相极性的不同，液-液色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法，当流动相的极性小于固定相的极性时称正相色谱法，主要用于极性物质的分离分析；当流动相的极性大于固定相的极性时称反相色谱法，主要用于非极性物质或中等极性物质的分离分析。
在中药制剂分析中，大多采用反相键合相色谱法。
三、实验内容1.高效液相色谱系统组成：（一）高压输液系统由贮液罐、脱气装置、高压输液泵、过滤器、梯度洗脱装置等组成。
1.贮液罐由玻璃、不锈钢或氟塑料等耐腐蚀材料制成。
贮液罐的放置位置要高于泵体，以保持输液静压差，使用过程应密闭，以防止因蒸发引起流动相组成改变，还可防止气体进入。
2.流动相流动相常用甲醇-水或乙腈－水为底剂的溶剂系统。
植物油中甾醇含量快速测定方法
植物油中甾醇含量快速测定方法邹燕娣;包李林;熊巍林;周青燕;林俞霞【摘要】Based on GB/T 25223-2010,the detection method of sterol content in vegetable oil was simplified and optimized,and the optimized method was tested for the repeatability,comparison and accuracy.Test results were showed that:the selection of cholesterol as internal standard substance,alumina chromatography extraction of saponification substance as influenza virus samples,samples without silicon alkylation reagents,all of the above made it simpler,convenient,fast,and the cost was lower.The simplified method was used to test repeatability RSD％ of 0.012％～3.4％;The recovery rate of soda-sterol was 94.07％～ 104.0％,which indicated that the method was repeatable and accurate,and could be applied to the sterol content in vegetable oil.%在GB/T 25223-2010基础上,对植物油中甾醇含量的检测方法进行了简化和优化,并对优化后的方法进行了重复性、比对和准确率实验.实验结果表明:选用胆固醇为内标物,氧化铝层析提取不皂化物作为待检样品,样品中不加硅烷化试剂,使得方法更简便,快速,成本更低.简化后的方法实验重复性RSD为0.012％～3.4％;豆甾醇加标实验回收率为94.07％～104.0％,说明该方法的重复性和准确性良好,能较好地应用在植物油中甾醇含量.【期刊名称】《中国粮油学报》【年(卷),期】2018(033)005【总页数】4页(P102-105)【关键词】甾醇;植物油;气相色谱;检测;优化;快速【作者】邹燕娣;包李林;熊巍林;周青燕;林俞霞【作者单位】道道全粮油股份有限公司;国家油菜籽加工技术研发分中心,岳阳414000;道道全粮油股份有限公司;国家油菜籽加工技术研发分中心,岳阳414000;道道全粮油股份有限公司;国家油菜籽加工技术研发分中心,岳阳414000;道道全粮油股份有限公司;国家油菜籽加工技术研发分中心,岳阳414000;道道全粮油股份有限公司;国家油菜籽加工技术研发分中心,岳阳414000【正文语种】中文【中图分类】TQ646植物甾醇是一种三萜醇类化合物，其化学结构与胆固醇非常相似，仅侧链结构不同，是一种天然的活性成分，具有十分重要的生理功能，如降胆固醇浓度、抗癌作用、基体抗氧化、预防心脑血管、免疫调节等特点[1-5]，广泛应用在医药和化妆品行业。
甾醇分离研究
(1) 2 -（ 9 -咔唑）乙酰氯主要用于伯胺、氨基酸 的衍生化，具有较高的检测灵敏度，其用于伯醇、 仲醇的衍生化未见报导。 (2)进行柱前衍生化实验不仅灵敏度高，并克服了 谷甾烷醇无发色基团，紫外检测的不足。
谢敏浩 分析化学简报 2006.9
甾醇和甾烷醇衍生物的高效液相分离色谱图
谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇检测灵敏度分别是紫外检测 高效液相色谱的 31、40和 33倍 ,并克服了谷甾烷醇分子 中无发色基团 ,紫外无法检测的不足 ,谷甾烷醇检出限则 为 23.2 nmol/L。
一些研究者发现不用衍生化处理也可以很好的 分离植物甾醇和甾醇酯。例如： Yuji Shimada用DB-lht毛细管柱,程序升温，火 焰离子检测器390℃，直接进样，分离分析了包 含甾醇、甾醇酯、游离脂肪酸、脂肪酸甲酯的样 品。
由于操作温度高，对仪器的要求比较严格，普通 的色谱仪和柱子不能够满足要求，所以在一定程 度GC 直接分离甾醇受到限制。
衍生化气相色谱质谱联用法同时 测定烟叶中多种植物甾醇
实验过程
烟末提取液 皂化：KOH/EtOH
正己烷萃取
……
硅烷衍生化
GC-MS分离检测
向章敏
光谱实验室
2011.9
烟叶甾醇衍生物GC/MS分离色谱图
1-胆甾醇；IS-正三十二烷；2-菜油甾醇；3-豆甾醇；4-谷甾醇； 5-β-香树甾醇；6-豆甾-5，24（28）-双烯-3-β-醇；7-羊毛甾醇
高效液相色谱分离植物甾醇现状
分离主要针对组成简单的样品，对复杂样品和生物 样品的研究较少。 高效液相色谱法易受流动相和处理方法的影响，重 现性较低，同时常规检测器灵敏度低，限制了它在 分离方面的应用
高效液相色谱法测定三叶委陵菜中β-谷甾醇含量
高效液相色谱法测定三叶委陵菜中β-谷甾醇含量邓凤玲【摘要】目的建立测定三叶委陵菜中β-谷甾醇含量的方法.方法采用高效液相色谱(HPLC)法,Agilent TC C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:甲醇- 水(96:4);流速:1.2 mL·min-1;检测波长:210 nm;柱温:30 ℃.结果β-谷甾醇在40.48～202.4 μg·mL-1范围内线性关系良好,r=0.999 8,平均回收率为98.11%,RSD为1.36%;β-谷甾醇在三叶委陵菜中平均含量为1.83 mg·g-1.结论该方法简便,准确,可控,可作为该产品的质量控制方法.【期刊名称】《医药导报》【年(卷),期】2011(030)007【总页数】2页(P939-940)【关键词】三叶委陵菜;β-谷甾醇;色谱法,高效液相;含量测定【作者】邓凤玲【作者单位】武汉市汉口医院药剂科,430012【正文语种】中文【中图分类】R286;R927.1三叶委陵菜(Protentilla Freyniana Bornm)为多年生草本植物，其根茎或全草入药，味苦涩，具清热、解毒、凉血、镇痛之功效，可用于治疗骨结核、口腔炎、跌打损伤、外伤出血等［1-2］。
三叶委陵菜中含有多种甾体化合物，其中β-谷甾醇(β-sitosterol)为主要活性成分之一［3-4］。
笔者采用高效液相色谱(HPLC)法对β-谷甾醇进行测定，方法简便，分离结果令人满意，重复性好，可为三叶委陵菜的质量控制提供参考。
1 仪器与试药Agilent高效液相色谱仪(单元泵，手动进样器，紫外检测器，柱温箱，变色龙工作站)，β-谷甾醇(中国药品生物制品检定所，批号:110851-200708)，三叶委陵菜根茎于2009年7月采自江西省庐山，由华中科技大学同济医学院药学院生药系陈家春教授鉴定，粉碎成粒径0.250～0.425 mm(40～60目)粉末，其他试剂均为分析纯。
重结晶法分离混合植物甾醇中豆甾醇
２ 实验结果与讨论
２ ｌ 标准样 品 、 ， 原料 殛分离 产物 的红外 光谱
一
谷 甾醇标 准样品 、 甾醇标准样 品 和原料 混 合植物 甾醇 的红外 光谱 图见 图 １ ．由图 可 以看 豆 ～３
Ｏ 引 言
以植物 油精 制过程 中 的副产 物为 原料 ， 以提 取 得到 混合植 物 甾醇． 可 － 混 合植 物 甾醇 是一 类结 “ 构相似 、 物理性 质差别 小的化 合物 ， 其主要成 分有 一 甾醇 、 甾醇 、 谷 豆 菜油 甾醇 及 菜子 甾醇 等 ， 其中 豆 甾醇 占 ２ 以上．将混 合植物 甾醇进行 有效分 离精 制 ， 以为其工 业和 科研 应用创 造条件 ， ０ 可 因此 实 现 单组分 高纯 度植物 甾醇 的规模 化 生产是 一个重要 的研 究课 题． 依据 混合 植物 甾醇 中侧链基 团的不 同 ， 从其 中分 离 精制获 得纯组分 ．一 甾醇 、 甾醇 、 ９谷 豆 菜油 甾醇 及 菜子 甾醇 的工 艺路 线方 法有 下几 种 ： 直接 利用混 合植物 甾醇 中各组分 的溶 解 度差异 ， 择合适 选 的 有机溶剂进 行 多步 萃取 、 结 晶分离 ； 用有机酸 与混 合植物 甾醇 中所 含的 醇羟 基发生 酯化反 应生 重 利
传统 的豆 甾醇 的分 离采 用 化学 方法 ， 其原理 是溴 与豆 甾醇 发生 溴化反 应 ， 生成 的 溴化豆 甾醇 的 乙酰化 物在 乙醇中结 晶析 出 ， 用锌 粉处 理 后进 行皂 化 反应 ， 再 可在丙 酮 中结 晶得 到纯 度 较 高的 豆 甾 醇 ．这 种工 艺在大 规 模工 业化 生 产 中存 在 的主要 歃 是 反应 和分 离 步骤 多 ， 成本较 高 ， 作困难 ， 操 环 境 污染大 ， 回收 率 较低．本 文作 者 拟直 接 利 用混合 植 物 甾醇中 不 同 甾醇 组分 在 有机 溶剂 中的溶解 度 差异， 分别选 择 甲苯、 甲苯一 酮和 甲苯 一 丙 甲醇 为重结 晶溶剂 ， 扶混 合 植物 甾醇 中重 结 晶分 离豆 甾醇 对 的工 艺进行研 究．
混合植物甾醇中豆甾醇和β-谷甾醇的高效液相色谱分析
混合植物甾醇中豆甾醇和β-谷甾醇的高效液相色谱分析许文林;沙鸥;钱俊红;鲁萍
【期刊名称】《分析测试学报》
【年(卷),期】2003(022)006
【摘要】应用高效液相色谱对豆甾醇、β -谷甾醇和重结晶法分离精制的混合甾醇进行了分析测定; 实验采用的色谱柱为 Hypersil ODS反相柱(4.6× 150 mm, 5 μ m), 流动相为甲醇, 紫外检测波长为 210 nm, 恒溶剂洗脱, 混合植物甾醇在 10 min 内得到了很好的分离; 实验结果表明, 采用液相色谱法能够快速准确地测定混合甾醇中豆甾醇和β -谷甾醇的含量.
【总页数】4页(P98-101)
【作者】许文林;沙鸥;钱俊红;鲁萍
【作者单位】扬州大学,化学化工学院,江苏,扬州,225002;扬州大学,化学化工学院,江苏,扬州,225002;扬州大学,化学化工学院,江苏,扬州,225002;扬州大学,化学化工学院,江苏,扬州,225002
【正文语种】中文
【中图分类】O657.72;Q946.48
【相关文献】
1.混合甾醇中β-谷甾醇和豆甾醇的红外光谱法分析测定 [J], 钱俊红;许文林
2.从混合植物甾醇分离豆甾醇和β-谷甾醇的工艺研究 [J], 孙登文;张凡;刘福祯;陆振民
3.气相色谱法测定植物甾醇中β-谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、菜籽甾醇的含量[J], 黄银波;花露;陈君;叶平
4.气相色谱法测定植物甾醇中β-谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、菜籽甾醇的含量[J], 黄银波;花露;陈君;叶平
5.结晶法分离精制混合植物甾醇中β-谷甾醇和豆甾醇 [J], 许文林;黄一波;钱俊红;
沙鸥
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收稿日期：2002-12-10；修回日期：2003-09-11基金项目：江苏省教育厅自然科学基金资助项目（99kjb150007）；江苏省“青蓝工程”跨世纪学术带头人基金作者简介：许文林（1963-），男，江苏苏州人，教授，博士.第22卷第6期分析测试学报VOl.22NO.62003年11月FENXI CESHI XUEBAO (JOurnal Of Instrumental Analysis )NOV.2003混合植物甾醇中豆甾醇和!-谷甾醇的高效液相色谱分析许文林，沙鸥，钱俊红，鲁萍（扬州大学化学化工学院，江苏扬州225002）摘要：应用高效液相色谱对豆甾醇、!-谷甾醇和重结晶法分离精制的混合甾醇进行了分析测定；实验采用的色谱柱为Hypersil ODS 反相柱(4.6X 150mm ，5!m )，流动相为甲醇，紫外检测波长为210nm ，恒溶剂洗脱，混合植物甾醇在10min 内得到了很好的分离；实验结果表明，采用液相色谱法能够快速准确地测定混合甾醇中豆甾醇和!-谷甾醇的含量。
关键词：高效液相色谱；植物甾醇；豆甾醇；!-谷甾醇中图分类号：O657.72；@946.48文献标识码：A文章编号：1004-4957（2003）06-0098-03植物甾醇是一类以环戊烷全氢菲（甾核）为骨架的天然醇类化合物。
自然界存在的主要有豆甾醇、!-谷甾醇、菜油甾醇、菜子甾醇等。
近年来经研究表明，植物甾醇是一类具有生理活性的物质，广泛地运用于医药、食品、化妆品等行业，尤其是豆甾醇和!-谷甾醇，经实验证明其具有明显的降胆固醇、消炎、退热等疗效。
因此甾醇的分离精制及分析测定也受到研究者的普遍重视[1,2]。
由甾醇结构式可见这两种甾醇的结构极其相似，采用一般的化学方法很难对其中某一组分的含量进行分析测定。
目前国内外报道的分析甾醇的方法有毛地黄皂甙法、薄层色谱法、气相色谱法和液相色谱法(HPLC )等[3~6]。
由于HPLC 不需衍生化，且在较温和的实验条件下进行，不破坏样品的性质。
近年来越来越多的研究者采用HPLC 法对植物甾醇进行分析研究。
本文利用该法对混合植物甾醇中的!-谷甾醇和豆甾醇进行了分析测定，采用面积归一法定量，该法适合于对大量样品的分析，简化了操作步骤，是一种较为简便的测试方法。
1实验部分1.1仪器及试剂仪器：高效液相色谱仪Agilent 1100(2000Agilent TechnOlOgies Inc,America )，G1314A VWD 紫外检测仪，色谱柱为Hypersil ODS 反相柱(4.6X 150mm ，5!m )，UV-2501PC 紫外可见分光光度计（日本岛津公司）。
试剂：豆甾醇(96.7!，AcrOs Organics )；!-谷甾醇（83.4!，AcrOs Organics ）；植物甾醇（江苏春之谷生物制品有限公司）；甲醇(色谱纯)、正戊醇(分析纯)、环己酮(分析纯)。
1.2色谱分析条件检测波长为210nm ，柱温为35.0C ，流动相为色谱纯甲醇，流速为0.7mL /min ，试样进样量为20!L 。
1.3样品制备方法1.3.1植物甾醇的精制称取一定量的粗植物甾醇，分别置于正戊醇或环己酮溶剂中[7]，升温至60C ，待甾醇完全溶解后，将该溶液置于60C 温水中自然冷却、结晶，待温度达到室温，将结晶物通过真空抽滤从母液中分离出来，滤饼在真空烘箱中50C 下干燥。
干燥后的滤饼重复上述重结晶步骤，多次重结晶后得到精制甾醇。
1.3.2样品处理分别称取一定量的豆甾醇、!-谷甾醇样品和不同结晶条件下获得的植物甾醇，用图1植物甾醇的高效液相色谱图Fig.1The chrOmatOgraphy Of phytOsterOis图2豆甾醇、!-谷甾醇的HPLC 吸收峰面积与浓度的关系曲线Fig.2The curve Of peak area (A )versus thecOntent Of different sterOis2.4面积归一法在本实验体系中的应用图3为粗植物甾醇的紫外吸收光谱图。
由图可见该混合物的最大紫外吸收波长为210nm ，根据紫外吸光度值A 与浓度的关系，本文测定了豆甾醇、!-谷甾醇和混合植物甾醇在甲醇溶液中的摩尔吸光系数。
结果见表2。
由表2可知这3种甾醇的摩尔吸光系数几乎相等。
由于本实验采用紫外检测器对各组分进行检测，在液相色谱操作条件完全相同时，可以认为上述3种甾醇的摩尔校正因子近似相等，即公式X i !=(f i A i /!f i A i )X 100!中f i 相近，因而上式可以简化为X i !=(A i /!A i )X 100!，利用面积归图3植物甾醇的紫外吸收光谱Fig.3The UV spectrum Of phytOsterOis表1回收率测定结果Tabie 1Resuit Of recOvery testsNO OriginaiAddedFOundRecOvery "O /(mg ·L -1)"A /(mg ·L -1)"F /(mg ·L -1)R /!10.0920.3470.3449920.184 2.604 2.6191013 2.761 1.736 1.7149943.6780.8680.876101无水甲醇溶解并定容至刻度，混匀，过0.45!m 微孔滤膜后，在实验设定条件下进行HPLC 测定。
2结果与讨论2.1豆甾醇和!-谷甾醇的定性与定量对粗甾醇样品（主要含有豆甾醇、!-谷甾醇及少量菜油甾醇和菜子甾醇）进行定性与定量分析，得到粗甾醇的液相色谱图，经与标样的液相色谱对照，确定保留时间为8.878和9.668min 处的峰分别为豆甾醇和!-谷甾醇的检测峰，根据甾醇的极性、反相色谱出峰次序及相关文献可以确定保留时间为7.913和8.341min 处的吸收峰为菜子甾醇与菜油甾醇的检测峰（图1）。
以豆甾醇和!-谷甾醇标准样品的液相色谱峰面积对相应的浓度作图，x 为豆甾醇和!-谷甾醇的物质的量浓度，y 为相应的峰面积，得到直线的回归方程为y =1.4527X 103x 。
结果表明在实验浓度范围内豆甾醇和!-谷甾醇液相色谱的紫外检测峰面积与浓度呈良好的线性关系，线性相关系数为0.99982（图2）。
2.2回收率的测定回收率实验采用加标回收法。
取同样的样品4份，分别加入已知量的豆甾醇，按照前述样品处理方法进行处理并测定，回收率在99!~101!之间，测定结果见表1。
2.3精密度试验平行测定甾醇样品，利用外标法求得样品中豆甾醇的含量分别为47.64!、47.26!、47.66!、47.67!、47.59!，RSD 值为0.15!；!-谷甾醇的含量为39.43!、39.25!、39.27!、39.28!、39.04!，RSD 值为0.12!。
第6期许文林等:混合植物甾醇中豆甾醇和!-谷甾醇的高效液相色谱分析992.5混合植物甾醇中豆甾醇和!-谷甾醇的含量测定在相同实验条件下，分别用外标法和面积归一法对以正戊醇和环己酮为溶剂进行重结晶试验所获得的样品进行含量测定，测定结果见表3，色谱图见图4。
图4环己酮六次结晶产物的色谱图Fig.4The chromatography of the products of the sixth recrystaIIization using cycIohexanone as asoIvent表3不同溶剂对混合植物甾醇进行重结晶的测定结果TabIe 3The experimentaI resuIts of recrystaIIizing phytosteroIs in !-pentanoI or cycIohexanone as a soIventSoIvent AnaIysis method SampIe Content of steroIs at the different stage of recrystaIIization /!123456!-PentanoIPeak area normaIization StigmasteroI 52.4656.3361.1066.0470.12-!-SitosteroI 37.5534.5730.5326.6021.31-ExternaI standard methodStigmasteroI 51.0455.6860.7465.8969.25-!-SitosteroI 36.5234.0329.7225.7620.67-CycIohexanonePeak area normaIization StigmasteroI 52.8658.1063.2468.9673.7776.91!-SitosteroI 37.3733.0628.5823.6818.3614.49ExternaI standard methodStigmasteroI 52.3257.4662.5968.6772.6976.64!-SitosteroI36.6932.7327.3622.7117.4514.03一化法可确定混合植物甾醇中各组分的相对含量。
100分析测试学报第22卷由实验测定结果可知，对于本研究体系，由于植物甾醇结构的特殊性，可采用外标法或面积归一法对其进行含量分析。
3结论应用反相高效液相色谱检测分析混合植物甾醇中的豆甾醇和!-谷甾醇，操作在常温下进行，样品不需要衍生化处理，方法快速简单，结果可靠。
采用面积归一法或外标法均可为重结晶法分离提纯植物甾醇的研究提供快速准确的测定方法。
参考文献：[1]许文林，王雅琼，鲁萍.脱臭馏出物中植物甾醇的回收和精制[J ].过程工程学报，2002，2（2）：167-170.[2]许文林，王雅琼，鲁萍.脱臭馏出物中植物甾醇回收的技术经济分析[J ].化学工业与工程，2002，19（4）：335-339.[3]彭莺，刘福祯，高欣.天然植物甾醇的应用与提取工艺[J ].化工进展，2002，21（1）：49-53.[4]戴玲妹，祝心茹，赵天贵.维生素E 中游离甾醇的气相色谱分析[J ].中国油脂，2000，25（3）：41-42.[5]ABIDI S L.Chromatographic anaIysis of pIant steroIs in foods and vegetabIe oiIs [J ].J Chromatogr ,A,2001,935(2):173-201.[6]CARERI M,ELVIRI L,MANGIA A.Liguid chromatography -UV detemination and Iiguid chromatography -atomospheric pressure chemicaI ionization mass spectrometric characterization of sitosteroI and stigmasteroI in soybean oiI [J ].J Chromatogr ,A,2001,935(2):249-257.[7]许文林，王雅琼，黄一波，等.重结晶法精制植物甾醇的溶剂选择[J ].扬州大学学报（自然科学版），2002，5（1）：58-62.HPLC AnaIysis of StigmasteroI and !-SitosteroI in PhytosteroIs表2各种甾醇的摩尔吸光系数TabIe 2The "of different steroIsSampIe Concentration AbsorbanceAbsorption waveIengthMoIar extinction coefficient "/(mmoI ·L -1)##/nm "/（L ·moI -1·cm -1)StigmasteoI 1.1165 1.8316210 1.6404>103!-SitosteroI 1.0194 1.6557210 1.6241>103PhytosteroI1.09751.77702101.6191>103第22卷第6期分析测试学报VOI.22NO.62003年ll月FENXI CESHI XUEBAO(JOurnaI Of InstrumentaI AnaIysis)NOv.2003核磁共振法定量测定替米考星含量王强l，汪茂田l，张志权2(l.河南省分析测试中心，河南郑州450002；2.河南省大明实业有限责任公司药物化工研究所，河南郑州450002)摘要：用核磁共振(l H NMR)法测定了药品替米考星(tiImicOsin)的含量，给出了完整的实验条件和注意事项，线性实验测得线性回归系数为0.9985，重复性实验测得RSD为0.327!，表明此方法做为一种药物的定量方法具有简单易行、结果准确的优点，可用做某些没有对照品的药物定量方法的补充。