腺苷脱氨酶ADA测定
腺苷脱氨酶(ADA)测定及意义
腺苷脱氨酶（ADA）测定及意义
腺苷脱氨酶（ADA）是嘌呤核苷代谢中重要的酶类，属于巯基酶，每分子至少含2个活性巯基，其活性能对氯汞甲酸完全抑制。
ADA广泛分布于人体各组织中，以胸腺、脾和其他淋巴组织中含量最高，肝、肺、肾和骨胳肌等处含量较低。
血液中ADA主要存在于红细胞、粒细胞和淋巴细胞，其活性约为血清的40～70倍，T淋巴细胞比B淋巴细胞该酶活性更高。
1．正常参考值：
速率法：健康成年人：0-19.6 U/L。
比色法：按ADA的习用单位计算，健康成年人为：0-25 U/L。
按国际单位计算，健康成年人为：≤30 U/L。
2．临床意义
血清ADA活性增高见于：
①肝脏疾病：急性黄疸性肝炎，肝细胞出现损伤，在黄疸尚未出现前，可见增高。
因
ADA分子量较ALT小，当肝细胞轻度受损时ADA比ALT先释入血内。
慢性肝炎活动期，慢性迁延性肝炎升高明显；肝硬化、原发性肝癌时，ADA活性也升高。
②肿瘤引起的阻塞性黄疸、前列腺癌和膀胱癌、网状细胞瘤、淋巴瘤、溶血性贫血、
风湿热、伤寒、痛风、重症地中海贫血、骨髓性白血病、结核、自身免疫性疾病、传染性单核细胞增多症和心力衰竭等均可引起此酶升高。
③结核性胸腹水ADA活性显著增高，癌性胸腹水不增高，而血清中ADA活性二者无
明显差别，故测定胸腹水中ADA活性有助于将两者鉴别。
④结核性脑膜炎ADA显著增高，而病毒性脑膜炎则不增高，颅内肿瘤及中枢神经系统
白血病稍增高。
所以脑脊液ADA检测可以作为中枢神经系统疾病诊断和鉴别诊断的重要指标。
腺苷脱氨酶测定
腺苷脱氨酶测定检验科于2012年7月开展血液ADA检测，该试验主要用于辅助诊断肝脏疾病，指导临床治疗，取得了良好的效果。
现总结如下：1.概述腺苷脱氨酶是嘌呤核苷代谢中重要的酶类，属于巯基酶，每分子至少含2个活性巯基，其活性能对氯汞甲酸完全抑制。
ADA能催化腺嘌呤核苷转变为次黄嘌呤核苷，再经核苷磷酸化酶作用生成次黄嘌呤，其代谢缓和终产物为尿酸。
腺苷脱氨酶是一种与机体细胞免疫活性有重要关系的核酸代谢酶。
测定血液、体液中的ADA及其同工酶水平对某些疾病的诊断、鉴别诊断、治疗及免疫功能的研究日趋受到临床重视。
ADA活性是反映肝损伤的敏感指标，可作为肝功能常规检查项目之一，与ALT或GGT等组成肝酶谱能较全面地反映肝脏病的酶学改变。
ADA广泛分布于人体各组织中，T淋巴细胞含量尤其丰富。
血清ADA活性升高见于急性肝炎、酒精性肝纤维化、慢性活动性肝炎、肝硬化、病毒性肝炎和肝细胞瘤病人，结核病渗出液中也可见ADA活性增高。
结合ALT或γ-GT，检测病人血清ADA 活性对肝脏疾病诊断更具有独特价值。
2.检测仪器与原理：检测所用仪器为日立7180全自动生化分析仪，检测原理：ADA 催化腺嘌呤核苷脱氨转变为次黄嘌呤核苷，再经嘌呤核苷磷酸化酶（PNP）作用生成次黄嘌呤。
次黄嘌呤经次黄嘌呤氧化酶（XOD）作用转变为尿酸和过氧化氢（H2O2）。
H2O2在过氧化物酶（POD）存在的情况下，可与N-乙醛-N-（2-羟基-3-硫丙基）-3-甲基苯胺（EHSPT）和氨基安替比林（4-AA）生成醌染料，醌染料生成速率与ADA含量相关。
3.技术优点：该技术具有测定精密度高，抗干扰能力强，标本中胆红素≤342umol/L，血红蛋白≤200mg/dl，甘油三酯≤8.47mmol/L，抗坏血酸≤4mg/dl 及NH4+对本试剂测定无影响，适合自动化快速测定的特点，为临床常规开展ADA检测应用创造了有利条件。
4.参考范围：4-24U/L，或66-398nkat/L。
ADA
迈克试剂标准操作程序目录1、用途 (2)2、检测原理 (2)3、样本 (2)3.1、样本类型 (2)3.2、样本的贮存和稳定性 (2)4、试剂 (2)4.1、试剂组成 (2)4.2、试剂装载 (3)4.3、试剂稳定性 (3)4.4、试剂规格 (3)5、参数设置 (3)6、校准 (3)6.1、校准品 (3)6.2、校准品准备 (3)6.3、校准品稳定性 (4)6.4、校准条件 (4)6.5、校准品溯源性 (4)6.6、校准实施 (4)7、质量控制 (4)7.1、质控品 (4)7.2、质控品的稳定性 (4)7.3、质控规则 (4)7.4、失控纠正 (5)8、样本测定 (5)8.1、安排 (5)8.2、实施 (5)9、性能指标 (5)9.1、精密度 (5)9.2、检测范围 (6)9.3、抗干扰能力 (6)9.4、方法学比较 (6)10、参考范围及危急值 (6)11、临床意义 (7)12、安全防护措施 (7)13、参考文献 (7)1、用途腺苷脱氨酶测定试剂盒（酶法）旨在通过HITACHI 7000系统定量分析血清或血浆中的腺苷脱氨酶的活性。
2、检测原理化学反应式：腺苷＋H 2O −−→−ADA肌苷＋NH 3肌苷＋Pi −−→−PNP 次黄嘌呤＋1-磷酸核糖 次黄嘌呤＋2 H 2O ＋2O 2−−→−XOD尿酸＋2H 2O 2H 2O 2＋4-AAP ＋EHSPT −−→−POD4H 2O ＋苯醌类 分析仪HITACHI 7000能自动的按一定的体积比例将样品和试剂加入测试杯中，分析仪采用速率法在546nm 波长下测定吸光度变化率值（△A/min ），其△A/min 与样品中腺苷脱氨酶的活力成正比。
3、样本 3.1、样本类型样本为空腹血清；血浆（肝素抗凝，0.1mg 肝素可抗凝1.0ml 血液；EDTA 抗凝，1.8mgEDTA 可抗凝1.0ml 血液）。
3.2、样本的贮存和稳定性装有血样的试管应一直密封放置。
腺苷脱氨酶(ADA)
腺苷脱氨酶（ADA）参考值：0-15U/L 海丰参考区间4~24U/L介绍：腺苷脱氨酶(ADA)为一种与机体细胞免疫活性有重要关系的核酸代谢酶，其作用是催化水解腺苷生成肌苷和氨。
ADA广泛存在于各组织中，以盲肠、小肠黏膜、脾脏、胸腺中含量最高，肝脏、肺、肾、心脏、骨骼肌、神经组织等处含量较低，肝脏含量约为小肠的7%~10％。
肝内ADA90％存在与细胞浆水溶性部分，其余在细胞核内。
此外，血细胞(红细胞、粒细胞、淋巴细胞)内ADA活性约为血液中40倍~70倍，因此测定ADA时应避免溶血。
血清中的ADA主要来自肝脏，所以肝细胞损伤或膜通透性增强，均可使血中酶活性增高，故可依据该酶活性增高或降低反映肝细胞损伤和恢复程度。
血清腺苷脱氨酶（ADA）正常值：(1)酶速率法(37℃)：健康成年人：7.7-19.3 U/L(2)分光光度法：<25 U/L(3)比色法：健康成年人为：5～25 U/L诊断参考：肝脏疾病：ADA活性是反映肝损伤的敏感指标，可作为肝功能常规检查项目之一，与ALT或GGT等组成肝酶谱能较全面地反映肝脏病的酶学改变。
一．ADA活性是反映肝损伤的敏感指标，可作为肝功能常规检查项目之一，与AIT或GGT等组成肝酶谱。
（1）用于判断急性肝损伤及残留病变急性肝炎时ALT明显升高。
ADA仅低度，中度升高。
但重症肝炎发生酶胆分离时，尽管ALT不高，而ADA常明显升高。
而ALT恢复正常，ADA持续升高者，常易复发或易迁延为慢性肝炎。
（2）协助诊断慢性肝病在反映慢性肝损伤时ADA较ALT为优。
慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌患者血清ADA活性显著升高，因而可判断慢性肝病的程度。
另外，慢性活动性肝炎活性明显高于慢性迁延性肝炎。
故可用于二者的鉴别诊断。
（3）有助于肝纤维化的诊断ADA活性差异与肝细胞损害关系不大，与肝纤维化程度相关。
肝纤维化程度增加，ADA活性增加。
（4）有助于黄疸的鉴别据文献报道，阻塞性黄疸血清ADA活性明显低于肝细胞性黄疸及肝硬化伴黄疸。
腺苷脱氨酶(ADA),试剂标准操作规程(SOP)--ADA
试剂标准操作规程目录1.检测原理2.标本采集与处理2.1 受检者的准备2.2 静脉采血2.3 抗凝剂2.4 标本处理3. 试剂3.1 试剂3.2 校准血清3.3 试剂与校准血清的稳定性4. 仪器5. 操作6. 计算7. 操作性能7.1 精密度7.2 准确度7.3 灵敏度7.4 可报告范围7.5 特异性7.6 干扰8. 参考值9. 临床意义附录A: 参数1. 检测原理腺苷在腺苷脱氨酶作用下脱氨基形成黄苷。
黄苷在PNP作用下生成次黄嘌呤，次黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶（XOD）作用下转化为尿酸和过氧化氢（H2O2）。
H2O2与EHSPT和氨基安替比林（4-AA）反应生成有色染料，产物的颜色与ADA活性成正比。
ADA腺苷+H2O -----------------------黄苷+ 氨PNP黄苷+ 磷酸------------------------次黄嘌呤+ 核糖-1-磷酸XOD次黄嘌呤2H2O2+2O2----------------------尿酸+H2O2POD2H2O2+4-AA+EHSPT -----------------------醌式染料2．标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂：血浆使用EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。
2.4 标本处理：血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，置洁净试管加盖低温保存。
腺苷脱氨酶（ADA）测定试剂盒（过氧化物酶法）产品技术要求lideman
腺苷脱氨酶（ADA）测定试剂盒（过氧化物酶法）产品技术要求lideman腺苷脱氨酶（ADA）测定试剂盒（过氧化物酶法）适用范围：本产品用于体外定量测定人血清或血浆中腺苷脱氨酶的含量。
1.1规格试剂1（R1）:3×60mL、试剂2（R2）:1×60mL；校准品（选配）：1×1mL。
低值质控品（选配）：1×1mL；高值质控品（选配）：1×1mL。
1.2组成试剂盒由试剂、校准品（选配）和质控品（选配）组成。
试剂1（R1）： Tris缓冲液：50mmol/L pH 8.0；4-氨基安替比林：4mmol/L；4-AA ：2mM ；PNP ：0.1U/mL；XOD：700U/L；过氧化物酶：2KU/L；试剂2（R2）：mops缓冲液：50mmol/L pH 7.0；腺苷：10mM；EHSPT：2mM。
校准品组成：单个水平的冻干校准品，在水基质中添加腺苷脱氨酶，稳定剂0.1%。
定值范围：（80～180）U/L。
质控品组成：两个水平的冻干质控品，在水基质中添加腺苷脱氨酶，稳定剂0.1%。
定值范围：（20～50）U/L和（80～180）U/L。
2.1 外观液体双试剂：试剂1（R1）：无色澄清液体，试剂2（R2）：无色澄清液体。
校准品：冻干品，溶解后为无色至淡黄色液体。
质控品：冻干品，溶解后为无色至淡黄色液体。
2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。
2.3 溯源性：根据GB/T 21415及有关规定提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容，该校准品溯源至参考物质（BCR-647，IRMM）。
2.4 试剂空白2.4.1 空白吸光度在37℃、（546nm±10%范围内的）波长、1cm光径条件下，用去离子（或生理盐水）水作为样品加入试剂测试时，试剂空白吸光度应<0.3 ABS。
2.4.2 空白吸光度变化率在37℃、（546nm±10%范围内的）波长、1cm光径条件下，用去离子（或生理盐水）水作为样品加入试剂测试时，试剂空白吸光度变化率（ΔA/min）应≤ 0.003 ABS/min。
检验科腺苷脱氨酶ADA标准操作规程
检验科腺苷脱氨酶（ADA）标准操作规程【目的】体外检测血清腺苷脱氨酶（ADA）含量。
【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机一、检测原理ADA腺苷 + H2O 次黄甘 + 氨PNP次黄甘+磷酸次黄嘌呤+核糖-1-磷酸XOD次黄嘌呤+2H2O 尿酸+H2O2POD2H2O2+4-AA+TOOS+H3+O 红色苯醌色素+5H20在上述反应中，通过在546nm处测定红色苯醌色素生成速率，即可测得样本中腺苷脱氨酶（ADA）的活性。
二、试剂1.试剂本科使上海复星长征医学科技有限公司ADA试剂盒，为液体双试剂。
各组分如下：试剂1（R1）4-氨基安替比林 0.4g/L嘌呤核苷酸磷酸化酶 1.3KU/L黄嘌呤氧化酶 2KU/L过氧化物酶 2KU/L试剂2（R2）TOOS 0.9g/L腺苷 4.0 G/L2.校准要求2.1使用与试剂配套使用的复星长征腺苷脱氨酶校准血清对测定进行校。
2.2校准间隔2.2．1 试剂批号变更时，使用与试剂配套使用的复星长征校准品对测定进行校准后再对临床病人样本进行测定。
三、操作按生化分析仪操作要求结合长征试剂说明书输入测定参数，并按校准、质量控制、样本测定的顺序进行常规测定。
腺苷脱氨酶(ADA)检测在结核性胸腹水鉴别诊断中的应用
检 测在 结核 性胸 腹水 鉴别诊 断 中的应 用
价 值 ， 定 其 鉴 别 临 界 值 。 方 法 ： ２０ 确 对 ２
例 胸 腹 水 标 本 的 ＡＤＡ检 测 结 果 分 组 进 行
４ ５例癌性胸腹水 Ａ Ａ含 量 ， Ｄ 与其他 病例
否癌性胸腹水 或其 他性质 ， 则需要结 合其 他 指标 分 析。也 有报 道认 为 ： Ｄ Ａ Ａ较 高 时还要考虑 急性 淋 巴细胞 白血病 及风 湿 病 的可能 。本文资料 中 ， 仅有 １例淋巴 细胞 白血病和 ３例风湿病 ， 由于病例太少 无法进行统计论证 。
Ｒ Ｃ（ ｅｅ ｅ ｐｒｔ ｇ Ｃ ａａｔ ｉ Ｏ Ｒ ｃｉ ｒＯ ｅａ ｎ ｈｒｃ ｒ — ｖ ｉ ｅｓ
７ １０ ２ ０ ６陕西 电子 ４果 作为结核 Ｄ
摘 要 目的 ： 讨 腺 苷 脱 氨 酶 （ Ｄ 探 Ａ Ａ）
性胸腹水与癌性胸腹水 的鉴别依 据 ， 但他 们忽视了非结核性非癌性胸腹水 的鉴别。 我们曾将本文 中 １３例非 结核 组病 例 中 ７
诊， 临床诊断 明确 。
仪 器 与 方法 ： 标 本 留 取 ： 疾 病 治 ① 于
疗前抽取胸腹水 ， 离心后吸取上清 ２ ｌ ｍ 与
０ ” ｚ ０ ４
１一 ＰＥ
时 诊 断 敏 感 度 为 ８ ． ７ ， 异 度 为 ６６ ％ 特
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小试管进行 检测 ， 不能及 时检 测 ， 一 如 置
・Ｃ 、 Ｔ 核磁 共 振 、 片 、 胸 Ｂ超 、 瘤 标 记 物 、 肿 病 理 细胞 学 检 验 、 核 菌 素 试 验 等 检 查 确 结
曲线下的面积计算 ：线下面积 Ａ ｚ＝
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腺苷脱氨酶ADA测定
1检验目的
指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2原理
ADA
腺苷+H2O 肌苷+NH3
PNP
肌苷+Pi 次黄嘌呤+1-磷酸核糖
XOD
次黄嘌呤+2 H2O+2O2尿酸+2 H2O2
POD
H2O2 +4-AAP+EHSPT 4H2O+苯醌类
3标本要求
3.1使用新鲜血清,不使用血浆.
3.2在采集血液后2h分离血清.
3.38h内不能及时测定血清可存放于2-80C冰箱保存,3天后测定的血清置-150C―-200C 冰冻保存,但冰冻血清只能复融一次.
3.4严重溶血或脂血的标本不能作测定.
4试剂
4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司ADA试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1试剂组成
试剂1 60 ml,试剂主要成分如下:
Tris—HCL缓冲液（PH8.0）50.0mmol/L XO 0.2u/ml 4-AAP 2.0mmol/L POD 0.6u/ml
PNP 0.1u/ml NaN3 0.2g/L
试剂2 60 ml,试剂主要成分如下:
Tris—HCL缓冲液（PH4.0） 50.0mmol/L EHSPT 2.0 mmol/L 腺苷 10.0mmol/L
4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂（盒）自生产之日起有效期为12个月。
试剂1 与试剂2 启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定20天。
4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
4.2 校准品：
4.2.1采用以检测用水为空白的方式进行校准。
4.2.2校准及校准频次的要求：正常情况下，应每周至少对测定进行一次校准。
当发生下列情况时（如：使用的试剂批号发生改变时、使用的仪器进行维修、保养或关键部件进行更换后、质控品的测定结果发生漂移或超出规定的范围等），应重新对测定进行校准后再对患者的样本进行检测。
5 仪器
AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪
6 操作步骤
6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。
6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。
6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。
6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。
7 质量控制
在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
8 计算方法
在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以U/L报告。
9 参考值
4-22 u/L（37℃）
10 临床意义
ADA在良恶性难辨的渗出液鉴别诊断上有重要价值，国内外研究表明，ADA对诊断结核性渗出液的特异性和敏感性明显优于活检和细菌学法、结核性胸腹水ADA活性显著增高，癌性胸腹水不增高，而血清ADA活性二者无显著差异，此外，脑脊液ADA检测可作为中枢神经系统疾病诊断和鉴别诊断的重要指标，结核性脑膜炎显著增高，病毒性脑炎不增高，颅内肿瘤及中枢神经系统白血病稍增高。
11 操作性能
11.1本法的ADA可报告范围为 0—200 u/L（37℃）
11.2精密度CV≤5%
11.3准确度测定值在正常及异常质控范围内
12 超出范围结果处理
如果超过线性范围用生理盐水1：1稀释，结果乘2
13 病危报警值的处理：
无。
14 补救措施
当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。
15 参考文献
15.1叶应妩，王毓山，申子瑜主编·全国临床检验操作规程·中华人民共和国卫生部医政司编·(第四版)
15.2钱士匀主编.临床生物化学及生物化学检验实验指导.人民卫生出版社，2012年第5版
15.3府伟灵,徐克前主编.临床生物化学检验.北京.人民卫生出版社,2012年第5版
15.4试剂说明书。