类风湿性关节炎患者2H4_T淋巴细胞亚群的流式细胞仪分析[1]
类风湿关节炎患者Th亚群的双标流式细胞分析
经 Ｐ Ａ 离 子 霉 素和 莫 能菌 素 刺 激 培 养 ６ｈ后 ， 能 Ｍ ／ 均
测 出细 胞 内 ＷＮ Ⅱ ４阳 性 细 胞 ， 不 加 刺 激 剂 培 一／ ， 而 养 则 细 胞 内细 胞 因子 染 色 阴性 。 ２２ Ｒ ． Ａ患 者 Ｓ ＭＣＰ ＭＣ表 达 细 胞 内细 胞 因 子 的 Ｆ ／Ｂ
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１ 材 料 与 方 法
１１ 标 本 ． Ｒ Ａ患 者 滑液 单 个 核 细胞 （ Ｆ Ｃ 和外 周 ＳＭ ）
维普资讯 中 国免 疫 学 杂 志来自２Ｏ ０ ２年 第 １ ８卷
类风湿关节炎 患者 Ｔ ｈ亚 群 的双 标 流 式 细胞 分 析
张 浩 董 书魁 李雪丽
Ｒ ９ ． Ｂ ２８
王清娟
林
虎① （ 二炮 兵 总 医院 检 验科 ， 京 １ｏ８ ） 第 北 ｏｏ８
患者 滑液 和 外 周血 中 ｒ １Ｔ２和 Ｔ０的分 布及 平 衡 Ｉ ，ｈ １ ｈ ｈ
情 况 ， 究 １１ 群 在 Ｒ 研 １亚 Ａ发 病 机 制 中 的 作 用 和 意 义
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产 品 。Ｐ Ａ、 子霉 素 、 能菌 素 、 聚 甲醛 、 素 均 Ｍ 离 莫 多 皂
每份标 本 检 测 １ ０ ０００个 淋 巴 细胞 ， 用 Ｘ Ｙ Ｔ Ｍ 采 ＬＳ ＳＥ
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类风湿关节炎患者淋巴细胞亚群分析
类风湿关节炎患者淋巴细胞亚群分析王云萍;董佳莉【期刊名称】《临床医药实践》【年(卷),期】2016(025)012【摘要】目的：检测类风湿关节炎（RA）患者外周血淋巴细胞亚群，探讨 RA 患者外周血淋巴细胞亚群与疾病转归之间的相关性。
方法：采取横断面研究，纳入RA 患者42例，其中初发组15例，治疗组27例。
根据治疗前后类风湿关节炎疾病活动性评分（DAS28）的变化，治疗组分为缓解组12例和难治组15例。
用流式细胞术测定外周血淋巴细胞亚群。
采用 t 检验、单因素方差分析（one - way ANOVA）、χ2检验、Pearson 相关性分析进行统计学处理。
结果：初发组的淋巴细胞、CD3＋ T 细胞、CD56＋ CD16＋ NK 细胞计数均低于对照组（P ＜0.01），而 CD19＋ B 细胞高于对照组（P ＜0.01）；难治组的淋巴细胞、CD3＋ T 细胞、CD56＋ CD16＋ NK 细胞计数均低于缓解组（P ＜0.01），而 CD19＋ B 细胞高于RA 缓解组（P ＜0.01）；T、B 淋巴细胞与 DAS28评分、红细胞沉降率（ESR）均具有相关性。
结论：各型淋巴细胞均在RA 中起着重要作用，且与疾病活动度相关。
【总页数】4页(P911-914)【作者】王云萍;董佳莉【作者单位】运城同心风湿病医院，山西运城 044000;运城同心风湿病医院，山西运城 044000【正文语种】中文【中图分类】R593.22【相关文献】1.类风湿关节炎合并骨质疏松症患者外周血T淋巴细胞亚群、炎症因子水平与骨代谢指标的相关性分析2.类风湿关节炎并发骨质疏松患者外周血淋巴细胞亚群的表达水平3.甲氨蝶呤、硫酸羟氯喹联合小剂量甲泼尼龙对老年类风湿关节炎患者外周血淋巴细胞亚群的影响4.依那西普联合甲氨蝶呤对类风湿关节炎患者外周血T 淋巴细胞亚群及血清炎症因子水平的影响5.T淋巴细胞亚群CD3+,CD4+,CD8+及CD4+/CD8+类风湿关节炎患者外周血中的变化因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
流式细胞术检测淋巴细胞亚群操作规程
流式细胞术检测淋巴细胞亚群操作规程一、编号：JS0604二、标题：流式细胞术检测淋巴细胞亚群操作规程三、关键词：流式细胞术淋巴细胞操作规程四、目的：规范流式细胞术检测淋巴细胞亚群的实验操作五、背景知识：T细胞亚群变化的临床意义主要表现在肿瘤、自身免疫性疾病中。
在感染性疾病中，因为CD4+ T细胞是辅助、诱导T细胞的标志，CD4+ T 细胞下降常见于某些病毒感染性疾病，如AIDS、巨细胞病毒感染、瘤型麻风。
而CD4+ T细胞长期低于正常水平，常提示患者易于被病毒等微生物侵袭。
CD8+是抑制、杀伤T细胞的标志，在传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染、慢性乙型肝炎等感染性疾病中，CD8+ T细胞常升高。
CD4+／CD8+细胞比值下降，除肿瘤等疾病外，常见于AIDS、瘤型麻风、传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染、血吸虫病等。
六、原理：利用不同荧光物质标记的抗CD3、CD4、CD8单克隆抗体，与待测成分作用，然后上流式细胞仪检测待测细胞。
待测细胞随流动室内的流动鞘液排列成单列，一个个迅速通过激光聚焦区，激光在对每个细胞进行照射时可同时得到前向角散射和侧向角散射2种散射光以及激发荧光标记物质发出的信号，利用这些信号，可计算出CD3+、CD4+、CD8+的相对含量，从而得出各细胞群的相对比值。
七、仪器设备和材料：肝素抗凝静脉血1ml，不同荧光素标记的抗CD3、CD4、CD8单克隆抗体，同型阴性对照荧光物，溶血剂，固定剂，流式细胞仪。
八、操作步骤1、100μ1抗凝血加20μl荧光单克隆抗体，同时做阴性对照。
2、避光室温作用20min，溶去红细胞后，固定剂固定。
3、上流式细胞仪测定，以阴性对照测出本底参数，调节荧光补偿，设定阳性参数值，软件将计算出阳性表达细胞比例。
九、注意事项1、为保证所得结果的可靠性，每次试验前应以标准荧光微球检测仪器的变异系数。
2、每次应做阴性对照、阳性对照、正常对照、质控对照，以确保将各种试剂及操作过程对结果的影响降至最低。
流式细胞仪测定淋巴细胞和T淋巴细胞HLA-B27表达比较
流式细胞仪测定淋巴细胞和T淋巴细胞HLA-B27表达比较凡瞿明;张国元
【期刊名称】《川北医学院学报》
【年(卷),期】2004(019)002
【摘要】目的通过用流式细胞仪测定淋巴细胞和T淋巴细胞HLA-B27的表达,对比分析,寻求一种经济实用的HLA-B27检测方法.方法用流式细胞仪分别以SSC-FSC特性选定淋巴细胞和CD3+确定T淋巴细胞测定HLA-B27的表达情况,分析其差异.结果两者表达百分率无本质性差异.结论用单色HLA-B27荧光抗体处理样本,采用流式细胞仪测定HLA-B27的表达结果完全能满足临床需要.
【总页数】2页(P87-88)
【作者】凡瞿明;张国元
【作者单位】川北医学院附属医院检验科,四川,南充,637000;川北医学院附属医院检验科,四川,南充,637000
【正文语种】中文
【中图分类】R446.11+3
【相关文献】
1.强直性脊柱炎与HLA-B27的表达及T淋巴细胞亚群和细胞因子相关性分析 [J], 邓菊慧;李志强;张睿;李艳梅
2.流式细胞仪测定小儿再障外周血NK细胞及T淋巴细胞亚群 [J], 魏晓军
3.流式细胞仪测定肝病患者T淋巴细胞亚群及NK细胞 [J], 李玉中;王朝晖;等
4.Beckman和BD两种机型流式细胞仪检测CD4^＋T淋巴细胞数比较研究 [J],
卢红艳;吴昊;赵辉;宋淑静;计云霞;孙伟东;张启云;张芹;黑发欣;赵月娟;叶景荣
5.应用微量淋巴细胞毒与流式细胞仪检测HLA-B27的比较 [J], 方勇飞;钟兵;李维;王勇
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类风湿关节炎患者T细胞亚群的检测及意义
类风湿关节炎患者T细胞亚群的检测及意义
张卫平
【期刊名称】《中国社区医师（医学专业）》
【年(卷),期】2012(014)021
【摘要】目的:研究T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+类风湿关节炎(RA)患者外周血中的变化,分析其在类风湿关节炎发病的作用及意义,并探讨其在类风湿关节炎发病的机制.方法:挑选43例类风湿关节炎患者(观察组),另取正常体检者30例为对照组.采用免疫荧光法检测CD3+、CD4+、CD8+水平,观察其在类风湿关节炎炎中表达的变化.结果:类风湿关节炎患者CD3+、CD4+及
CD4+/CD8+水平较对照组明显下降而CD8+水平较对照组的无明显变化.结论:类风湿关节炎患者外周血中CD3+、CD4+及CD4+/CD8+,表达下降,免疫功能受损,其外周血淋巴细胞的增生能力和细胞毒反应性下降.
【总页数】2页(P242-243)
【作者】张卫平
【作者单位】300193天津中医药大学第一附属医院
【正文语种】中文
【相关文献】
1.强直性脊柱炎和类风湿关节炎患者外周血T细胞亚群检测的意义 [J], 苏帆;赵丹;苏卓娃;马文松
2.类风湿关节炎患者T细胞亚群的检测及意义 [J], 张卫平
3.弥漫大B细胞淋巴瘤患者外周血可溶性白细胞介素-2受体T细胞亚群及自然杀
伤细胞检测的临床意义 [J], 许晓强;邢志华;张巧花
4.女性不孕不育患者外周血DNT细胞、T细胞亚群的检测及临床意义 [J], 梁杨焕;张炯;谢芹
5.免疫球蛋白、白细胞介素及T细胞亚群检测对慢性荨麻疹患者的临床意义 [J], 崔昭婷
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类风湿关节炎淋巴细胞亚群的临床研究
类风湿关节炎淋巴细胞亚群的临床研究
郭宁茹
【期刊名称】《临床合理用药杂志》
【年(卷),期】2016(9)8
【摘要】目的探索类风湿关节炎(RA)患者外周血T淋巴细胞亚群水平变化。
方法选择2014年8月-2015年7月医院门诊收治的RA患者45例为研究组,另选择同时期进行健康体检者45名为对照组,使用流式细胞分析仪测定T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+比值)并进行组间比较。
结果研究组
CD3+(58.86±5.65)%、CD4+(31.56±4.32)%和CD4+/CD8+比值(1.15±0.33)与健康对照组比较明显减少,CD8+(29.32±3.78)与健康对照组比较明显增加,上述差异均有统计学意义(P<0.05)。
结论 RA发病与细胞免疫功能受损有密切相关性,T淋巴细胞亚群变化可为临床诊断和治疗提供参考,极具应用和推广价值。
【总页数】2页(P130-131)
【作者】郭宁茹
【作者单位】河南省濮阳市油田总医院风湿免疫科
【正文语种】中文
【中图分类】R725.622.5
【相关文献】
1.PD-1在类风湿关节炎外周血T淋巴细胞亚群表达的临床意义
2.六味补肺益肾颗粒治疗支气管哮喘患者的临床疗效及对T淋巴细胞亚群、炎症因子的影响研究
3.
初发类风湿关节炎患者外周血淋巴细胞亚群及TNF-α、IL-6表达与临床意义4.T 淋巴细胞亚群分析联合胸腺肽α1治疗对严重脓毒血症预后的临床研究5.T淋巴细胞亚群检测在新型冠状病毒肺炎临床应用价值中的研究进展
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两种流式细胞仪检测T细胞亚群的比对分析
两种流式细胞仪检测T细胞亚群的比对分析流式细胞仪是一种用于研究和分析细胞的仪器。
它可以通过分析细胞的表面标记物或细胞内的分子，来获得关于细胞亚群的信息。
其中，T细胞是一类重要的免疫细胞，可以分为多个不同的亚群，如细胞毒性T细胞（CD8+）、辅助性T细胞（CD4+）等。
在免疫学研究和临床检测中，了解T细胞亚群的数量和比例对于评估免疫功能的状态至关重要。
下面将介绍两种常用的流式细胞仪检测T细胞亚群的比对分析方法。
1.全血淋巴细胞表面标记法全血淋巴细胞表面标记法是通过将新鲜全血样本进行细胞表面标记，然后使用流式细胞仪进行分析。
该方法的优点是样本处理简单快速，可以直接得到体内T细胞亚群的比例。
具体步骤如下：（1）制备淋巴细胞上清液：将新鲜全血样本与等体积的生理盐水混合，用离心管密封离心，将上清液分离出来。
（2）染色：将淋巴细胞上清液转移到离心管中，加入适量的表面标记的单克隆抗体。
常用的表面标记抗体有CD3、CD4和CD8等。
（3）洗涤：离心管密封离心，将上清液倒掉，再次加入适量的生理盐水洗涤淋巴细胞。
（4）流式细胞仪检测：将洗涤后的细胞上样到流式细胞仪中，设置相应的检测参数，如激发波长和荧光信号的检测通道。
通过流式细胞仪收集数据，并使用分析软件对数据进行解析和计算。
这种方法的优点是可以同时检测多种T细胞亚群，准确计算亚群的比例。
但是由于这种方法无法获得细胞内的功能和分子表达信息，只能通过表面标记物进行鉴定。
2.胞浆染色法胞浆染色法是通过流式细胞仪检测细胞胞浆内的标记物，从而分析T 细胞亚群的比例。
该方法通常与细胞表面标记法联合使用，可以同时获得细胞表面和胞浆内的信息。
具体步骤如下：（1）制备全血淋巴细胞上清液：与全血淋巴细胞表面标记法相同。
（2）染色：将淋巴细胞上清液进行细胞膜标记和胞浆胞浆标记。
胞浆标记常用的有抗体和荧光染料，如免疫球蛋白（IgG）等。
（3）洗涤：与全血淋巴细胞表面标记法相同。
（4）流式细胞仪检测：与全血淋巴细胞表面标记法相同，但需要在分析软件中选择相应的通道来检测胞浆标记物。
淋巴细胞亚群流式
淋巴细胞亚群流式
淋巴细胞亚群流式是一种通过流式细胞术检测淋巴细胞亚群的方法。
流式细胞术是一种用于分析细胞特性和功能的生物技术，通过将单个细胞与特异性抗体结合，对细胞表面和内部标记物进行定量和定性分析。
在淋巴细胞亚群流式中，通过使用特异性抗体标记不同的淋巴细胞亚群，如T细胞、B细胞、NK细胞等，然后利用流式细胞仪对标记后的细胞进行快速分析和计数。
这种方法可以获得淋巴细胞亚群的相对百分比和绝对值，从而评估机体的免疫状态。
淋巴细胞亚群流式在临床诊治中发挥了重要作用。
例如，在白血病诊断和治疗中，通过监测异常淋巴细胞亚群及绝对计数结果，可以为临床初步判断信息提供依据。
同时，在诊疗阶段，更为明确的白血病分型及MRD监测有助于为治疗方案选择、临床疗效分析、预后判断、复发监测等方面提供更加精准的医学决策支持。
此外，在免疫重建过程中，多参数流式细胞术结果对于及时评价患者的细胞免疫功能，指导免疫抑制剂等药品的使用种类和剂量等方面均具有重要价值。
需要注意的是，临床检测都有标准化的检测方案，可以直接上机调用建立好的内置模板，使用比较方便。
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T 细胞无明显变化 ,CD8 T 细胞明显减少 ,CD4 Π CD8 比值增加 。CD4 2H4 T 细胞在 CD4 T 细胞中的比例减少 , 而 CD4
+ + + + + + + + +
4B4 T 细胞的比例增加 。 进一步研究发现 ,RA 患者活化的 CD25 T 淋巴细胞比率增加 。此外 , 血清学研究发现 ,RA 患者 IgG
类风湿性关节炎 ( Rheumatoid Arthritis , RA) 是一 种病因复杂的自身免疫性疾病 ,其发病机制至今还不 清楚。许多学者认为 T 淋巴细胞亚群比率异常在 RA [1 ] 发病机制中可能具有重要作用 。但这种异常在类 风湿性关节炎患者中尚无一定的规律。鉴于此 , 本 文利用流式细胞仪技术对 11 例 RA 患者外周血淋巴 细胞亚群进行了检测 ,并观察了其血清免疫球蛋白含 量的变化 ,以寻找其免疫功能紊乱的证据 ,揭示细胞 和体液免疫功能异常在 RA 发病机制中的意义。
・132 ・
中国免疫学杂志 1999 年第 15 卷
类风湿性关节炎患者 2 H4 T 淋巴细胞亚群的流式细胞仪分析
② ③ 吴福国 邱翠娥 韩晓琳 朱立平 蒋 明 ( 山东济宁医学院生化教研室 ,济宁 272113)
+
①
中国图书分类号 R593. 2 R392 摘 要 目的 : 了解类风湿性关节炎患者免疫功能的异常变化 , 探讨其发病机制 。方法 : 使用间接免疫荧光和直接免疫 荧光方法对 11 例 RA 患者和 12 例健康人的外周血 T 淋巴细胞进行了研究 。结果 :RA 患者与对照组比较 CD3 + T 细胞和 CD4 +
吴福国等 类风湿性关节炎患者 2H4 + T 淋巴细胞亚群的流式细胞仪分析 第3期
・133 ・
兴实验试剂开发公司提供 。 1. 3 外周血单个核细胞 ( PBMNC) 的制备 从肘静 脉取 10 ml 血 , 肝 素 抗 凝 , 与 等 量 磷 酸 盐 缓 冲 液 ( PBS) 混匀后 , 置含 10 ml 淋巴细胞分离液 ( 上海试 剂二厂产品) 的离心管中 , 离心后取界面层细胞 , 洗 涤 3 次 ,计数细胞 ,调整细胞浓度为 1 × 10 ml 。 1. 4 细胞表面分化抗原间接免疫荧光染色与直接 免疫荧光染色 取1× 10 PBMNC , 分别与各种稀释 μ 的单抗 100 l 混匀 , 置冰浴 30 min , 冷洗涤液洗 3 次 。若为直接免疫荧光染色试剂则直接加 0. 5 ml PBS 上机 。 若为非直接免疫荧光染色试剂则需要加 1 :30 稀释的 FITC 标记兔抗鼠 IgG 100 μ l , 冰浴 30
centrations in RA patients were significantly higher than that in healthy controls. However , there were no significantly differences between RA patients and healthy controls in the serum IgM and IgA. Conclusion :The combination of the increment in helper T cells , the reduction in sup2 pressor T cells , and the increment in activated T cells may lead to excessive production of autoantibodies in RA patients. Key words Rheumatoid arthritis T lymphocyte subsets Immunoglobulin Flow cytometry
n
Normal RA
P
12 11
CD3 62. 79 ± 6. 35 60. 69 ± 7. 22 > 0. 05
CD4 46. 23 ± 6. 12 48. 16 ± 7. 25 > 0. 05
CD8 25. 81 ± 6. 41 20. 50 ± 7. 11 < 0. 05
CD4Π CD8 1. 79 ± 0. 20 2. 34 ± 0. 23 < 0. 01
服用对免疫功能有影响的药物如糖皮质激素等 。 1. 2 主要试剂 CD3 ,CD4 和 CD8 单克隆抗体试剂 由中国医科院基础所单抗室提供 。抗 Tac ,MsIgG12
RD1 ,MsIgG 2FITC ,T42FITCΠ 2H42RD1 单克隆抗体为美
国 Coulter 公司产品 。FITC 标记兔抗鼠 IgG 为卫生 部北京生物制品研究所产品 。免疫球蛋白 IgG、 IgM 和 IgA 单向扩散定量检测板和标准曲线是由北京科
Analysis of 2 H4 T lymphocyte subsets in the peripheral blood of patients with rheu2 matoid arthritis
+
WU Fu2Guo , QIU Cui2E , HAN Xiao2 Lin et al . Department of Biochemistry , Jining Medical College , Shandong 272113
1 材料与方法
1. 1 研究对象 12 例正常对照为本室自愿献血
者 ,男 5 例 ,女 7 例 ,年龄 19～50 岁 , 平均 34 岁 。11 例类风湿性关节炎患者为北京协和医院内科临床免 疫及风湿病学组门诊病人 , 均符合美国风湿病学会
1982 年 RA 的分类标准 , 其中男 3 例 , 女 8 例 , 年龄 24～72 岁 ,平均 46 岁 。均处于活动期 。检测前均未
+ + +
析 上述结果提示 , RA 患者 CD4 T 细胞与对照组 + 比较无明显变化 ,为进一步观察组成 CD4 T 细胞的 两个亚群之间是否有区别 ,用抗 2H4 单抗又分别对 10 例正常人和 10 例 RA 患者外周血淋巴细胞进行 + + 了测定 。结果表明 , RA 患者 CD4 2H4 T 细胞和
① 中国医学科学院基金资助 ② 中国医学科学院基础医学研究所单克隆抗体研究室 ,北京 100005 ③ 北京协和医院内科 ,北京 100730 作者简介 : 吴福国 ,男 ,34 岁 , 副教授 , 硕士研究生 , 主要从事风湿病 的分子发病机制和诊断研究 ; 朱立平 ,男 ,60 岁 , 研究员 , 博士生导师 , 主要从事细胞和 分子免疫学研究 , 特别是淋巴细胞分化抗原的分子生物 学研究
细胞 ,用仪器内装的 MDADS Ⅱ 计算机分析 。
表 1 RA 患者与正常人 T 淋巴细胞亚群检测结果比较( %)
Tab. 1 Cell surface characteristics of T lymphocytes in blood from patients with RA and healthy controls( % )
+ + + + trols. (2) The percentage of CD4 2H4 cells among CD4 cells in PB from patients with RA was markedly decreased ( P < 0. 01) ,but the + + percentage of CD4 4B4 cells was significantly increased ( P < 0. 01) compared with that in PB from healthy controls. (3) Serum IgG con2 + + + + +
n
+
CD4 + 2H4 + T ± 8. 62 22. 87 ± 9. 21 < 0. 01
+
CD4 + 4B4 + T cells CD4 T cells ( %) 57. 59 ± 8. 73 77. 13 ± 8. 87 < 0. 01