15:15-15:35 陈长兰-微波法虫草素提取
微波消解-ICP-MS法测定青海和西藏产区冬虫夏草中的35种元素

微波消解-ICP-MS法测定青海和西藏产区冬虫夏草中的35种元素张敏敏;赵恒强;赵志国;刘伟;刘倩;梁琰;耿岩玲;黄璐琦;王晓【摘要】To determine the contents of 35 elements(including 16 rare earth elements)in 17 batches of Chinese caterpillar fungus from Qinghai and Tibet and make preliminary identification analysis of their habitats,a total of 35 elements in Chinese caterpillar fungus samples were determined by microwave digestion-ICP-MS,including 3 batches from Yushu,4 batches from Naqu and 10 batches from Guoluo.Furthermore,cluster analysis was carried out on the measurement results of 3 producing areas. Results showed that the contents of 35 elements in 17 kinds of Chinese caterpillar fungus samples from different origins have obvious differences. And the limits of the 4 kinds of harmful elements(Cd,Pb,As and Cu) were recommended. The results of cluster analysis showed that the samples from Yushu and Guoluo were close,and the difference was small,while the sample from Naqu was far away,and its relative difference was larger. This method is quick,accurate and feasible,which provides a theoretical basis for quality control and medication guidance of Chinese caterpillar fungus from different habitats.%为了测定青海和西藏产区的17批冬虫夏草中的35种元素(其中16种为稀土元素)的含量,并进行初步产地鉴别分析,运用微波消解-ICP-MS法测定了3批玉树、4批那曲和10批果洛产区的虫草样本,并对3个产区的测定结果进行聚类分析.结果表明,不同产区的虫草药材各种元素含量差别较大,本文对其中4种有害元素Cd,Pb,As,Cu推荐了限量标准;聚类分析结果表明,玉树和果洛产区聚类较近、差异性较小;那曲产区聚类较远,相对差异性较大.该方法快捷、准确、可行性强,为不同产地冬虫夏草药材的质控和用药安全指导提供了理论依据.【期刊名称】《山东科学》【年(卷),期】2017(030)005【总页数】7页(P14-20)【关键词】ICP-MS;冬虫夏草;微量元素;稀土元素【作者】张敏敏;赵恒强;赵志国;刘伟;刘倩;梁琰;耿岩玲;黄璐琦;王晓【作者单位】山东省中药质量控制技术重点实验室,山东省科学院中药过程控制研究中心,山东省分析测试中心,山东济南250014;山东省中药质量控制技术重点实验室,山东省科学院中药过程控制研究中心,山东省分析测试中心,山东济南250014;山东省中药质量控制技术重点实验室,山东省科学院中药过程控制研究中心,山东省分析测试中心,山东济南250014;山东省中药质量控制技术重点实验室,山东省科学院中药过程控制研究中心,山东省分析测试中心,山东济南250014;山东省中药质量控制技术重点实验室,山东省科学院中药过程控制研究中心,山东省分析测试中心,山东济南250014;山东省中药质量控制技术重点实验室,山东省科学院中药过程控制研究中心,山东省分析测试中心,山东济南250014;山东省中药质量控制技术重点实验室,山东省科学院中药过程控制研究中心,山东省分析测试中心,山东济南250014;中国中医科学院中药资源中心,道地药材国家重点实验室培育基地,中国中医科学院,北京100700;山东省中药质量控制技术重点实验室,山东省科学院中药过程控制研究中心,山东省分析测试中心,山东济南250014【正文语种】中文【中图分类】R284.1Ab stract∶To determine the contents of 35 elements (including 16 rare earth elements) in 17 batches of Chinese caterpillar fungus from Qinghai and Tibet and make preliminary identification analysis of their habitats, a total of 35 elements in Chinese caterpillar fungus samples were determined by microwave digestion-ICP-MS, including 3 batches from Yushu, 4 batches from Naqu and 10 batches from Guoluo. Furthermore, cluster analysis was carried out on the measurement results of 3 producing areas. Results showed that the contents of 35 elements in 17 kinds of Chinese caterpillar fungus samples from different origins have obvious differences. And the limits of the 4 kinds of harmful elements (Cd, Pb, As and Cu) were recommended. The results of cluster analysis showed that the samples from Yushu and Guoluo were close, and the difference was small, while the sample from Naqu was far away, and its relative difference was larger. This method is quick, accurate and feasible, which provides a theoretical basis for quality control and medication guidance of Chinese caterpillar fungus from different habitats.Key words∶ICP-MS;Chinese caterpillar fungus; trace elements; rare earth elements冬虫夏草又称虫草,为麦角菌科真菌冬虫夏草菌Cordyceps sinensis (Berk. ) Sacc. 寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座和幼虫尸体的干燥复合体[1]。
虫草中虫草素和虫草酸含量的测定 汪陈才

HPLC测定祁连产冬虫夏草中虫草素和虫草酸的含量汪陈才(2008 B,青海师范大学,化学系)摘要为建立一种有效的利用高效液相色谱法(HPLC)测定冬虫夏草中虫草素和虫草酸含量的方法,用甲醇超声提取虫草素、水超声提取虫草酸,再利用高效液相色谱、示差折光检测器和紫外检测器分别测定冬虫夏草中虫草素和虫草酸含量。
通过对样品进行预处理,色谱条件和方法指标的验证,建立了定量检测虫草中虫草素和虫草酸的一种有效方法,二者精密度( RSD) ≤1.77% 。
虫草素、虫草酸检出限为50 ng/mL 和1.5 μg/mL。
测得样品中虫草素和虫草酸的平均组分含量为0.258mg·g-1和79.7mg·g-1二者回收率在93.7%~98.4%之间。
该方法具有快速、准确、简便的特点。
关键字: 高效液相色谱虫草虫草素虫草酸Abstract:A high performance liquid chromatographic (HPLC) with diode- array detector (DAD) and refractive index detector ( RID) method for the determination of cordycepin and cordycep acid in cordyceps sinensis was studied. Both of it were extracted by Methanol and water with Ultrasonic wave. Then by using high performance liquid chromatography, refractive index detector and a UV detector were measured in Cordyceps and cordycepic acid content. Based on the sample pretreatment, chromatographic conditions and method validation, establishes the quantitative detection of cordycepin and cordycepic acid is an effective method. Their precision (RSD) were lower than 1.77%. The samples of cordycepin and cordycep acid content averages are 0.258 mg•g1and 79.7mg•g-1. Their recovery were between 91.9% and 93.7%. The method is rapid, accurate and simple features.Key words HPLC; Cordyceps sinensis; Cordycepin; Cordycep acid冬虫夏草(Cordyceps Sinensis)与人参、鹿茸齐名,为中国三宝之一。
北冬虫夏草中虫草素的微波辅助提取

第3 8卷 第 7期 21 0 0年 7月
东
北林业大来自学学报
Vo . 8 No 7 13 .
J RNAL OF N OU ORT HEA T F ES RY UN VER I S OR T I S TY
J1 0 0 u .2 1
北 冬 虫 夏 草 中 虫 草 素 的 微 波 辅 助 提 取 ’
n esy Ji 12 1 , .R. h a ; h nl teScn e t l opt finCt, inPoic )/o ma o i r t, in 3 03 P v i l C i ) Ma eg (h eodC nr si l l i Ji rv e / Ju l f n Z i aH a o Ji y l n
一
,
虫草素 的提取积累 了微波 提取经 验 , 家用微 波炉作 为微波 但 提 取 装 置 存 在 着 不 能 程 序 升 温 , 热 功 率 不好 控 制 , 且 因 无 加 并
密 闭萃 取 罐 , 成 提 取 成 分 损 失 等 缺 点 。 微 波 溶 剂 萃 取 仪 是 造
( 阳谷成堂生物科 技有 限公 司提供 ) 虫 草素 标准 品 ( 国 沈 ; 中 药 品 生 物 制 品 检 定 所 提 供 ) 甲 醇 ( 口色 谱 纯 ) 超 纯 水 。 ; 进 ; 仪器 : 国 C M公 司 C M— A S微波快速溶 剂萃取仪 ; 美 E E M R 美 国 安 捷 伦 公 司 A inl0 g et10高 效 液 相 色 谱 仪 ( 3 1 ut l G11 A Q a— p mp E l s D — 1 u ; c peX B C 8柱 ; 11 B D D 检 测 器 ) 美 国 瓦 里 i G35 A ; 安公司 C r50 ay00紫外可见近红外光谱仪 ; 国赛 多利斯公 司 德 Sg a .6离 心 机 ; 国 H MA 超 纯 水 器 ;日本 岛 津 公 司 i 21 m 韩 U N A 20电 子 天 平 ; Z .00真空 干燥 箱 等 。 Y2 D F6 9 1 2 方 法 . 121 虫草素质量分数的 H L . . P C测 定 样 品 前 处 理 : 北 冬 虫 夏 草 菌 子 实 体 样 品 7 ℃ 真 空 干 将 0
蛹虫草小麦培养基中虫草素提取工艺研究

TN Q i 2脚 Jn W N n ci,A G J— u n ( . u hu Poi eBohmsy E gnei A i n , u r g u ¨, E n. K N ih a 1 G i o r n i e ir ni r g h c z vc c t e n C n r G i o n et, u agG i o 50 5 C i ; .C lg et , u huU i ry G i n u h u5 02 , hn 2 o eeo e z vi y z a l f
(. 1贵州大学 贵州省生化工程中心, 贵州 贵阳 502 ;. 5052 贵州大学 生命科学学院, 贵州 贵阳 502 ) 505
摘 要: 通过对比提取溶剂、 液比、 料 温度 、H值及 时问对提取蛹 虫草小麦培 养基 中虫草素的影响 , p 以确定 虫草素
提 取最佳工艺参数 。结果表明 : 最佳提取参数 为水提取、 H值 5 料 液比 l5 、 p , :0 温度 7 ℃、 O 时间3 。该方法从蛹 虫 h 草小麦培养基 中提取 虫草素 , 提取率可达 9 .7 。 48% 关键词 : 虫草小麦培 养基 ; 蛹 虫草素; 提取
中图分类号: 6 77 :9 7 4 0 5 .2 R 7 . 文献标识码 : A 文章编号 :0 8一 4 7 2 1 )4— 5 0 10 o 5 (0 1 0 37— 5
Ex r c i n Pr t c lo r y e i r m o d c p h a e i m t a to o o o fCo d c p n f o C r y e s W e t M d u
1 材 料 与 方 法
1 1 材 料 .
11 1 仪 器及试剂 分析型高效液相色谱仪 ( get 10美 国) 旋转蒸发器 ( E一 2 .. A in l0 l ; R 5 A上海亚荣生化
均匀设计优选虫草素微波辅助提取工艺的研究

9 % ,i a 司; 8 Sg 公 m 人工培养蛹虫草子实体购 于江苏徐州 。
12 试 验方 法 .
’ 4 O
12 1 高效液 相色谱条 件 . .
色谱 柱型号 为 E l s X B— cpe D i
3 O
C 8 4 6m 20m 5 m) 流动相为 乙腈 一 ( . %乙 1( . m× 5 m, ; 水 01
的结 果 。 1 材料 与 方 法 11 主要 仪 器 、 剂 及原 料 . 试
格兰仕 G0 3 S 8 W2 E L—V 9微 波 炉 , 东 格 兰 仕 集 , 国安捷伦 科技 有 限公 司; H 0 美
F 14型电子分析天平 , A10 常州诺基仪器 有限公 司; 乙腈 为色
酸 ) 进 行 梯 度 洗 脱 ( 1 ; 速 0 8m / n 检 测 波 长 2 0 , 表 )流 . Lmi; 6
n 进样量 2 l柱温 2 m; 0 ; 5℃。在该色谱条件下 , 虫草素峰对 称性好 , 并可以与其他组分达到基线分离。标准 品及样品的
收稿 日期 :0 8—0 2 20 9— 4
4 57 1 , 0.4 微波作用 时间 45mn 液料体 积质量 比3 .2 L , 取 1次。结果 表 明 , 波辅 助提 取对 人工 蛹虫 草 中虫 草 素的 提取 W . i, 994m / 提 g 微 率 为 11% , 传统提 取的 11 倍 , 结果 与回归方 程的拟 合值吻 合 良好 , 明应 用微波 法提取 人工蛹 虫草 中的虫草 素是可行 的 。 .7 是 .4 试验 说
江苏农业科学 2 0 0 8年第 6 期
均匀设计 优选虫草素微波辅助提取工艺 的研究
曹庆穗, 严俊文, 褚 芳, 李 超
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五.微波法提取虫草素正交实验
从表11极差R分析结果可知:微波法R值由大到小依 次为微波功率,提取溶液的pH值,提取溶剂和提取时间。
从正交分析表直观分析可以看出,各因子单因素的 不同水平中, 分别以A2(pH7.0) 、B2(水:乙醇=1: 3) 、C3 (500w)、D3(3min)水平的极差最大,为最优水 平,
为富硒可促进虫草多糖和虫草素等活性成分增加
的机理研究提供一定的理论依据。
本论文侧重于对从蛹虫草中提取虫草素条件 的研究.
目录
一.蛹虫草与虫草素简介
二.虫草素提取方法的研究现状 三.微波法与超声破碎法简介 四.微波法提取虫草素的单因素实验 五.微波法提取虫草素的正交试验 六.超声破碎法提取虫草素的单因素实验 七.超声破碎法提取虫草素的正交试验 八. 微波提取法和超声波提取法的比较
微波法与超声破碎法提取蛹虫草菌丝体 中虫草素的比较研究
Comparison of the Extration of Cordycepin from Cordyceps militaris by Ultrasonic and Microwave method
辽宁大学生命科学院
黄子琪,贲松彬 辽宁大学药学院
但其组合A2B2C2D3 未包括在参加试验的9个组合为 此, 加做一个该组合处理, 测得虫草素含量为 1.731mg/g,证明该组合确实优于组合2和4。
六.超声波法提取虫草素单因素实验
1. 不同提取液pH值的提取效果
表7 不同提取液pH值的提取效果数据表 Table 7 Extraction ratio of different solvent pH
提取液
水 乙醇 水:乙醇=1:1 水:乙醇=1:3 水:乙醇=3:1
虫草素得率(mg/g) 1.214 1.119 1.207 1.231
1.201
从表8 可以看出,乙醇作为提取溶剂的提取效率反而 比纯净水要低,水和乙醇比例为1:3时提取效果最好。超声 波破碎法中水和乙醇比例为1:3的混合溶剂提取效果最佳, 此点与微波法相似。
实验号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 K1 K2 K3 R
提取液pH值 提取液
5
水
5 水:乙醇=1:3
5 水:乙醇=1:1
7
水
7 水:乙醇=1:3
7 水:乙醇=1:1
9
水
9 水:乙醇=1:3
9 水:乙醇=1:1
3.752 3.480
4.092 4.204
3.177 3.337
0.915 0.867
目前常用的提取方法有:浸提法、 超声法、索氏提取法和回流法和微波提 取法。传统的提取方法如浸提法、索氏 提取法和回流法存在着耗时长、被提取 成分损失大、工序多不利于下一步实验 进行、提取效果一般等缺点
三.虫草素的高效液相色谱测定
分别称取0.20g蛹虫草菌丝体干粉, 加入100ml超纯净水, 调节pH值为5、6、7、8、9, 采用微波功率为500W提取3min, 旋转蒸发仪将提取液浓缩至50ml,浓缩
2 硒蛋白的分类、分布及功能
研究证实,硒以两种形式存在于蛋白质中, 一种是以富硒植物和富硒微生物为代表,通 过随机取代蛋白质中的硫的形式进入蛋白质, 所形成的蛋白质叫做含硒蛋白[12、13](Secontaining protein),这一类蛋白质往往没有 确定的生理功能。
另一种是硒以一套高度特化的编码和合成 机制合成蛋白质,利用三个终止密码子之一 的UGA 作为密码子,通过以硒代半胱氨酸 (Sec)的形式进入到蛋白质中,所形成的蛋 白质叫做硒蛋白(Selenoprotein),这类硒蛋 白在生物体内具有特定的生理功能。因此有 人认为Sec被认为是生物体内的第21种氨基酸 。
虫草素是一种具有抑制 细胞分裂作用和抗生素作用 的生物活性物质,具有抗肿 瘤、抑菌、抗疟原虫、抑制 病毒、防治心脑血管疾病、 增强免疫等功能。由于虫草 素为具有重要药用价值的生 物活性物质,近年来对于它 的研究受到广泛重视。 :
二.虫草素提取方法的研究现状
虫草素溶于水、热乙醇、甲醇,所 以一般采用水、乙醇或甲醇等作为溶剂 提取虫草素。
四.微波法提取虫草素单因素实验
3.不同提取时间的提取效果
表5 不同处理时间的提取效果数据表 Table 5 Extraction ratio of different extraction time
提取时间(min) 1 2 3 4 5 虫草素得率(mg/g) 1.303 1.486 1.668 1.497 1.324
一.蛹虫草与虫草素简介
冬虫夏草和蛹虫草是近年来食药用真菌中的 研究热点之一.它们都具有提高人体免疫力和 抗癌抗氧化等重要生理功能.其主要药用成分 都是虫草多糖和虫草素.
50年代即从:蛹虫草人工培养液的菌丝中分离 出虫草素(Cordycepin) ,其化学结构为3’-脱 氧腺苷(3‘-Deoxyadenosine)。
在参会的另一篇论文
蛹虫草富硒条件优化及硒对其中主要活性 成分的影响
贲松彬,黄子琪,王 莹,侯 潇,陈长兰
发现在最优化富硒培养条件下,菌丝体中两种
主要药用活性成分:虫草多糖和虫草素,其含量
分别为226.3mg/g和2.22mg/g,是非富硒菌丝体中
的3.4倍和5.8倍,能大幅提高蛹虫草的药用价值,
六.超声波法提取虫草素单因素实验
3.不同提取时间的提取效果
表9 不同处理时间的提取效果数据表 Table 9 Extraction ratio of different extraction time
提取时间(min)
20 25 30 35 40
虫草素得率(mg/g) 1.117 1.211 1.347 1.225 1.119
(2009S046);蛹虫草液体培养提高菌丝体及培 养液中虫草素含量配套技术研究.
1 硒的作用
硒是哺乳动物自身不可缺少的一种微量
元素,硒具有多重生物学功能,人和动物的 多种疾病被证实与硒缺乏密切相关,硒和维 生素E都是抗氧化剂,二者相辅相成,硒参与 甲状腺激素代谢、抗氧化系统使机体发挥正 常免疫功能。缺硒会引起如衰老组织硬化、 肝坏死、发生克山病,大骨节病、精神萎靡 不振,精子活力下降,易患感冒生长迟缓等 [10] (近年来又发现缺硒与许多常见的慢性病 有关,如引发心肌病、心肌衰竭疾病、癌症、 HIV 感染等[11] 。
在已知的哺乳动物硒蛋白中大多
可以分成六大类:碘甲腺原氨酸脱氢 酶(ID)家族、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-Px)家族、硫氧还蛋白还原 酶(TR)、硒蛋白P (Se-P)、硒代 磷酸合成酶(SPS)和硒蛋白W (Sew)。
在已知的哺乳动物硒蛋白中大多
可以分成六大类:碘甲腺原氨酸脱氢 酶(ID)家族、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-Px)家族、硫氧还蛋白还原 酶(TR)、硒蛋白P (Se-P)、硒代 磷酸合成酶(SPS)和硒蛋白W (Sew)。
桑育黎,代 颖,李慧娇,陈长兰(通讯作者)
所从事研究方向
一.分子生物学方面: 1.动物硒蛋白的细胞定位和分子功能研究. 主要在研课题有:国家自然基金课题(30671176) , 果蝇硒蛋白G-rich的细胞定位和分子功能研究 2.食药用真菌的富硒和有效成分研究. 主要在研课题有:辽宁省教育厅重点实验室项目
微波功率 (W)
300w 500w 1000w 500w 1000w 300w 1000w 300w 500w 3.633 4.447 2.941 1.506
提取时间 (min)
1 2 3 3 1 2 2 3 1 3.657 3.562 3.802 0.240
虫草素得率 (mg/g)
1.167 1.648 0.937 1.600 1.291 1.201 0.713 1.265 1.199
表4 不同提取溶溶剂的提取效果数据表 Table 4 Extraction ratio of different solvents
提取液
水
乙醇 水:乙醇=1:1 水:乙醇=1:3 水:乙醇=3:1
虫草素得率(mg/g)1.357 1.242
1.279
1.447
1.207
从表4 可知,当以微波辅助提取时,当提取溶剂为乙 醇时虫草素的提取得率明显的比提取溶剂为纯净水时要低。 在水与乙醇以不同比例混合为提取溶剂的实验中,水和乙 醇比例为1:3时提取效果最好。
从表9 可以看出,当超声波功率为600W处理时, 随着处理时间的延长,虫草素的提取率逐步增长,若 继续延长处理时间虫草素的提取率有小幅回落。其中 提取时间为30min时虫草素提取效果最好。
六.超声波法提取虫草素单因素实验
4.不同微波功率的提取效果
表10 不同处理功率的提取效果数据表 Table 10 Extraction ratio of different ultrasonic power
超声功率(W)
200 400 600 800 1 000
虫草素得率(mg/g) 1.102 1.119 1.123 1.323 1.207
从表10 中可以看出,800W时超声破碎法提取虫草素 含量测定值最大。从表10 中可以看出,800W时超声破 碎法提取虫草素含量测定值最大。
七.超声波法提取虫草素正交实验
微波功率
300W
虫草素得率(mg/g) 1.570
500W 2.431
1000W 2.031
从表6 中可以看出,在微波提取中,功率为500W时 虫草素的提取得率较另两个功率下的虫草素含量提取 得率明显要高。可见提取时间为3.0min,微波功率为 500W提取效果最佳。
五.微波法提取虫草素正交实验