RAW2647小鼠巨噬细胞protocol
鼠源巨噬细胞RAW264.7中TNF-α 基因的克隆及酶切鉴定
鼠源巨噬细胞RAW264.7中TNF-α 基因的克隆及酶切鉴定赵义龙;黄金凤;赵金香;矫继峰【摘要】TNF-α 能诱导单核巨噬细胞系统的前体细胞分化,是机体非特异性免疫检测中指示性细胞因子.本研究根据Genbank NM-013693上登录的小鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)序列对经过氨基多糖纳米微粒处理过的小鼠RAW264.7细胞进行RNA的提取,且RT-PCR扩增TNF-α 基因.将此片段克隆到PUCm-T载体中,经菌落PCR鉴定和DNA序列测定、酶切鉴定分析验证,证实所克隆序列为TNF-α 基因.序列分析表明,该基因与Genbank中发表序列的同源性达到100%.【期刊名称】《广东畜牧兽医科技》【年(卷),期】2017(042)003【总页数】3页(P42-44)【关键词】RAW264.7;TNF-α;PCR;克隆;酶切鉴定;序列分析【作者】赵义龙;黄金凤;赵金香;矫继峰【作者单位】新疆农业职业技术学院新疆昌吉 831100;新疆五家渠鑫宝农业科技开发有限公司新疆五家渠 831300;营口理工学院辽宁营口 115014;营口理工学院辽宁营口 115014【正文语种】中文【中图分类】Q78（1.新疆农业职业技术学院新疆昌吉 831100；2.新疆五家渠鑫宝农业科技开发有限公司新疆五家渠 831300；3.营口理工学院辽宁营口 115014）肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor;TNF）是一种糖蛋白，以两种形式存在，即TNF-α和TNF-β。
TNF-α主要由单核细胞和巨噬细胞产生，但也可以由T细胞、B细胞、NK细胞和成纤维细胞产生，其包括可溶性的TNF-α和膜相关的TNF-α两种形式[1]。
TNF-α以一种细胞与细胞接触的方式发挥细胞免疫作用，TNF-α可促使某些细胞表达MHCⅠ类分子、细胞间黏附分子，协同IFN-γ诱导MHCⅡ类分子的表达。
启动T细胞介导的细胞免疫，增强T细胞（尤其CTL）、NK细胞、淋巴因子激活性杀伤细胞(LAK)的细胞毒活性[2-3]。
RAW 264.7 细胞使用说明书
RAW264.7细胞使用说明书细胞基本信息产品货号YC-C020细胞名称RAW264.7中文名称小鼠单核巨噬细胞白血病细胞细胞形态单核细胞样/巨噬细胞样，贴壁细胞传代比例1:3~1:690%DMEM+10%FBS培养体系源井细胞培养未加双抗，客户可视实际情况选择添加。
冻存液体系50%DMEM+40%FBS+10%DMSO特殊备注无细胞接收1)冻存细胞：如果是干冰运输的冻存细胞，收到后请立即转入液氮储存或短暂（24H)放至-80℃冰箱保存，或直接进行细胞复苏。
2)活细胞：如果是T25瓶活细胞运输，收到后用75%的酒精对T25瓶外表面进行消毒，之后放在5%CO2、37℃的细胞培养箱静置2h，静置后取出细胞瓶在显微镜下观察细胞贴壁情况和细胞汇合度，分别在200X和40X下各拍2个不同视野的细胞拍照记录。
如果汇合度达到80%以上的传代密度，可以进行传代操作，如果细胞汇合度没有达80%以上不够传代，可以将细胞瓶内的培养基吸出在50ml离心管中并标记该细胞专用培养基后备用，保留8-10ml继续培养至可传代。
注意：收到细胞后，活细胞首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否漏液、浑浊等现象。
冻存细胞若发现干冰已挥发完、冻存管瓶盖脱落、破损等异常情况，请务必拍照保留，并于收货24h内与我们联系（电话：400-688-9033；https://）。
细胞复苏1)准备工作：将完全培养液置37℃水浴锅预热30分钟，随后将冻存的细胞从液氮中取出，转移到-80℃冰箱，放置数分钟让残余液氮挥发；2)在超净台内用吸管吸取6-7mL完全培养液至15mL离心管中；3)将细胞从-80℃冰箱取出暂时放置于干冰里，复苏时稍稍甩动，去除残留的干冰和液氮，再迅速用镊子夹住盖子放入37℃水浴中快速晃动（注意：水不能没过盖子），使其在1分钟左右完全融化；4)在超净台内，用酒精棉球擦拭冻存管外壁消毒，稍稍晾干。
用单道移液器将所有融化的细胞悬液转至提前准备好的完全培养液中，盖上盖子，1100rpm室温离心4分钟收集细胞；5)超净台内小心吸弃上清，用单道移液器吸取1mL新鲜完全培养液重悬细胞至单细胞悬液，再转移至装有4mL完全培养液的T25cm2培养瓶中，写上细胞名称、复苏日期、代次，放置37℃、5%CO2饱和湿度培养箱内培养。
小鼠巨噬细胞RAW264_7的培养技巧及经验总结
现代生物医学进展 Progress in Modern Biomedicine Vol.12NO.22AUG.2012·技术与方法·小鼠巨噬细胞RAW264.7的培养技巧及经验总结*方瑶毛旭虎△(第三军医大学医学检验系临床微生物教研室重庆400038)摘要：RAW264.7细胞具有很强的黏附和吞噬抗原的能力，是研究微生物学、免疫学的常用细胞株。
很多研究者发现这种细胞形态极不稳定，细胞状态的评价也很困难。
本文作者结合RAW264.7培养经历及文献资料探讨RAW264.7细胞培养的经验教训和评价细胞状态的方法，旨在为培养该细胞的科研工作者提供一定的借鉴。
关键词：小鼠巨噬细胞RAW264.7（TIB-71）；细胞培养；细胞形态中图分类号：Q95-3，Q813文献标识码：A 文章编号：1673-6273（2012）22-4358-02Culture Skill and Experience of RAW264.7*FANG Yao,MAO Xu-hu △(Department of Clinical Microbiology and Immunity,the Third Military Medical University,Chongqing,400038,China)ABSTRACT:RAW264.7has doughty capability of adhesion and antigen phagocytosis,so it is commonly used in microbiology and immunology.However,many researchers find that the cell is very unstable because of its morphous variation,and it is difficult to value its state.In this paper we mainly discussed the skills and experience in culturing RAW264.7and method of evaluating cell state.We hope to provide some references to researchers who would culture such cell line.Key words:Mice macrophages;RAW264.7(TIB-71);Cell culture;Cell morpha Chinese Library Classification(CLC):Q95-3,Q813Document code:A Article ID:1673-6273（2012）22-4358-02*基金项目：国家重大科技专项（2008ZXJ09014-007）作者简介：方瑶（1987-），男，硕士，主要研究方向：病原与宿主相互作用，E-mail ：lolfang@ △通讯作者：毛旭虎，E-mail ：mxh95xy@ （收稿日期：2011-11-23接受日期：2011-12-18)RAW264.7是由Abelson 鼠白血病病毒诱导BALB/c 小鼠产生肿瘤后收集小鼠腹水单核样巨噬细胞得到的细胞株（ATCC Number:TIB-71）。
RAW264
RAW264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)1.背景知识RAW264.7中文全名为小鼠单核巨噬细胞白血病细胞，来源于雄性Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤，是常用的炎症细胞模型之一，常见于研究细胞吞噬、细胞免疫、分子免疫学。
RAW 264.7 是一种单核细胞/巨噬细胞系，具有松散贴壁的立方形或纺锤形细胞和圆形活细胞。
细胞松散附着、堆积并变圆是正常的，尤其是在培养密集时。
活细胞可以分离和漂浮，特别是当培养物变得更加融合时。
这些未附着的细胞仍然有活力，应通过温和离心保留下来，然后重新加入烧瓶中。
不同批次血清的细微差异会导致 RAW 264.7 细胞或多或少的附着。
使用未经热灭活的优质血清，因为热灭活可以减少附着因子和生长因子。
2.RAW264.7细胞培养基本信息细胞照片注意要点（1）在细胞生长的初始阶段，细胞以贴壁的形式生长并呈现出长方体的形态和有“伪足”延伸。
随着培养时间的增加，细胞呈现圆形并以叠加的形式生长。
细胞密度达到一定的程度，会有细胞以悬浮的方式散落到到培养基中，镜下观察会发现悬浮和贴壁的细胞会同时出现。
（2）该细胞传代时不需要用胰酶消化，胰酶会刺激分化。
传代时使用移液枪轻微吹打细胞使细胞脱落，贴壁牢固的细胞舍弃。
（3）该细胞形态上包含松散贴壁的纺锤形和圆形或者立方形。
当细胞密度较大时，细胞会轻微脱落变圆或者许多细胞堆积在一起，有些细胞甚至脱落漂浮。
这些漂浮的细胞是存活的，在传代时应收集起来，离心后细胞沉淀可以继续培养。
（4）血清质量差异可能引起细胞贴壁能力变化，应选用高质量的胎牛血清。
超过3天不传代细胞容易分化；在细胞培养过程中，细胞吞噬抗原过多、培养条件恶劣或传代后细胞稀疏等情况，都会使细胞呈现出梭形、长梭形的形态，消化难度增加；培养时，存在少量分化细胞，属于正常现象，当贴壁细胞的比例高于20%，说明细胞生长环境有异常，需排查培养箱设置、培养基成分，以及培养器皿是否异常。
（5）若需控制细胞的分化，RAW264.7使用吹打传代，能更好地控制细胞分化率。
小鼠巨噬细胞RAW264.7的培养技巧及经验总结
小鼠巨噬细胞RAW264.7的培养技巧及经验总结小鼠巨噬细胞RAW264.7的培养技巧及经验总结引言：巨噬细胞是免疫系统中重要的成分，广泛存在于骨髓、血液、淋巴组织等处。
巨噬细胞具有特殊的吞噬能力，能够吞噬病原菌及其代谢产物，调控免疫反应和清除废物，对维持人体内环境稳定起着重要作用。
因此，很多研究都需要使用巨噬细胞进行相关实验，本文将介绍一种常用的实验动物模型小鼠巨噬细胞RAW264.7的培养技巧及经验总结。
一、材料和试剂1. 培养基：DMEM高糖培养基（Dulbecco's Modified Eagle Medium）。
2. 补充剂：10%胎牛血清（Fetal Bovine Serum，FBS），1%青霉素-链霉素溶液。
3. 漂洗液：DPBS（Dulbecco's Phosphate Buffered Saline）。
4. 消化液：0.25%胰酶溶液。
5. 凝胶：1%琼脂糖凝胶。
6. 染色剂：Trypan Blue。
二、培养条件1. 温度：37℃。
2. 湿度：95%。
3. CO2浓度：5%。
三、培养步骤1. 培养皿的处理将培养皿倒置放在培养柜中，加入少量95%酒精进行消毒，再倒置晾干入培养箱。
2. 细胞传代1) 将细胞培养液放入离心管中，500g离心5分钟，倒掉上清液。
2) 加入适量的DPBS定量漂洗。
3) 加入适量的0.25%胰酶溶液，室温静置10分钟，观察细胞的脱落程度。
4) 加入适量的DMEM高糖培养基，将细胞悬浮液用吸管吸取到离心管中。
5) 500g离心5分钟，倒掉上清液。
6) 加入适量的DMEM高糖培养基进行细胞计数。
3. 细胞接种1) 取出一支分装好的小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞冻存管，迅速放入37℃的水中解冻。
2) 将细胞悬浮液滴加入新培养皿中，加入足够的DMEM高糖培养基使细胞浓度达到合适的浓度（一般为10万/mL）。
3) 等待24-48小时，观察细胞生长情况，细胞覆盖率达到80%以上即可进行下一步实验。
RAW264.7小鼠巨噬细胞protocol.pptx
2.3. 隔天后，于无菌操作箱内取出 flask 内之培养基，(取出之培养基可以再使用)，仅 留约 5-10ml 培养基于 flask 内，依一般培养方式再将细胞置入培养箱中，或细胞已长满盘， 则将细胞做传代培养。
RAW264.7 细胞株的 Cell Culture
一、RAW264.7 细胞培养的特点 1、RAW264.7 细胞一般为圆形或椭圆形，功能活跃时，可呈多突形。细胞核为圆形或椭圆形， 染色较深。贴壁特别牢固。
（一）细胞冻存
6
1. 配制冻存培养液；（通用的为培养基：血清：DMSO=7：2：1，但其中的血清可进行 调整，如上面的仁兄用的 4：5：1，比例过高） 2. 取对数生长期的细胞（冻存前一天换液），用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来， 悬浮生长的细胞则直接将细胞移至 15ml 离心管中；
3. 离心 1000rpm，5min； 4. 去除胰蛋白酶及旧的培养液，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细 胞 均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为 5×106/ml～1×107/ml；
3.如果一次效果还不理想，可重复多次。直到找到细胞完美形态。其中要注意，结合 细胞喜欢的生长情况。喜欢多一点数量长得好的细胞就等贴壁细胞比较多点的时候再传。反 之亦然。
不明之处：培养之前，一切与细胞接触的玻璃器皿和器具都要进行过去热源处理。（200-250℃ 烘烤 4-6h）？？
7
8
四、RAW264.7 细胞形态不好时的处理方法 1.倒掉旧的培养基，加入 3ml 新的培养基（有无血清的都可）洗涤一次，用滴管吸走，
然后再加入 3ml 的培养基，进行预吹打，控制吹打力度，轻轻地大概沿着瓶底过一遍，然后 吸走。这时侯再开始正式的消化、吹打。
9
RAW264.7巨噬细胞
刚好我最近也在养这个细胞，试着做下解答。
根据ATCC的介绍，这个细胞是贴壁生长的（我观察觉得是半贴壁的），传代的时候不要用胰酶消化，而是直接用细胞刮刀刮下，然后吹散成单个细胞即可。
以下是ATCC的详细说明，希望能对你的细胞培养有所帮助。
Propagation: ATCC complete growth medium: The base medium for this cell line is ATCC-formulated Dulbecco's Modified Eagle's Medium, Catalog No. 30-2002. To make the complete growth medium, add the following components to the base medium: fetal bovine serum to a final concentration of 10%.Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%Temperature: 37.0°CSubculturing: Protocol: Subcultures are prepared by scraping.For a 75 cm2 flask, remove all but 10 ml culture medium (adjust amount accordingly for other culture vessels). Dislodge cells from the flask substrate with a cell scraper; aspirate and add appropriate aliquots of the cell suspension into new culture vessels. Subcultivation Ratio: A subcultivation ratio of 1:3 to 1:6 is recommendedMedium Renewal: Replace or add medium every 2 to 3 days。
RAW264.7小鼠巨噬细胞protocol
ＲAW２６4、７细胞株得相关信息ATCC：美国模式培养物集存库(Aｍｅrican tｙｐe ｃulｔure cｏllｅcｔion)得简写收到冷冻管细胞得处理方式1、收到细胞株包裹时，请检查细胞株冷冻管就是否有解冻情形, 若有请立即通知。
细胞株请尽速开始培养,或立即冷冻保存(置于–70℃,隔夜后，移到液氮)。
2、收到T25 flask细胞得处理方式于寄送过程中，为避免起泡造成细胞脱落死亡,Ｔ２5 fｌasｋ均加满培养基。
２、1、检查flａsk 外观，并于显微镜下观察细胞生长状况与有无污染现象,若有任何问题，不要打开盖子，请立即通知细胞实验室。
２、２、将原封之Ｔ25 fｌask 静置于３７℃, 5% CO２培养箱中,使细胞回温至３7℃，并让运送过程中少数脱落得细胞可再附着生长.２、3、隔天后，于无菌操作箱内取出flask内之培养基，（取出之培养基可以再使用）,仅留约5—10ml 培养基于flask 内，依一般培养方式再将细胞置入培养箱中,或细胞已长满盘, 则将细胞做传代培养。
ＲAW2６4、7细胞株得ＣelｌCuｌｔure一、RAW２64、7细胞培养得特点1、RＡW2６4、7细胞一般为圆形或椭圆形,功能活跃时，可呈多突形。
细胞核为圆形或椭圆形,染色较深。
贴壁特别牢固。
２、RＡW264、7具有很强得吞噬能力,当吞噬抗原后,细胞会释放趋化因子,进一步促进细胞伸出伪足，增强粘附攀爬能力。
细胞吞噬抗原过多、培养环境恶劣都会促进该细胞呈现梭形、长梭形,镜下会瞧到具有细长伪足得小细胞被类似上皮得梭形大细胞取代。
3、每次传代都很难消化下来.用力过大则对细胞损伤较大,这种细胞传代时接种密度要大,否则容易使巨噬细胞向终末细胞分化,细胞变成长形，并且不能回复,这就是培养这种细胞时最需要注意得问题。
４、对于ＲAW264、7细胞她得声场时喜欢结伴。
正常生长状态应该就是一小片一小片得生长,片片之间不连接，等到长到更多更密得时候会连成大片,并且会叠加成层。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
RAW２64、７细胞株得相关信息ATＣC:美国模式培养物集存库(American ｔｙpe cｕlture cｏllectｉon)得简写收到冷冻管细胞得处理方式1。
收到细胞株包裹时,请检查细胞株冷冻管就是否有解冻情形, 若有请立即通知。
细胞株请尽速开始培养,或立即冷冻保存(置于–70℃,隔夜后,移到液氮)。
２。
收到Ｔ25 flasｋ细胞得处理方式ﻫ于寄送过程中,为避免起泡造成细胞脱落死亡,T25 flａsk 均加满培养基。
2ﻫ.１、检查flａsk 外观,并于显微镜下观察细胞生长状况与有无污染现象,若有任何问题,不要打开盖子,请立即通知细胞实验室。
２。
2. 将原封之Ｔ25 flasｋ静置于37℃, 5% CＯ2 培养箱中,使细胞回温至3７℃,并让运送过程中少数脱落得细胞可再附着生长。
2.3. 隔天后,于无菌操作箱内取出ｆlａｓk内之培养基,(取出之培养基可以再使用),仅留约5—1０ｍl 培养基于flask 内,依一般培养方式再将细胞置入培养箱中,或细胞已长满盘, 则将细胞做传代培养。
ＲAW264。
7细胞株得Ceｌl Culｔure一、ＲＡＷ２64、7细胞培养得特点１、RAW264.７细胞一般为圆形或椭圆形,功能活跃时,可呈多突形。
细胞核为圆形或椭圆形,染色较深。
贴壁特别牢固。
２、RAＷ２64。
7具有很强得吞噬能力,当吞噬抗原后,细胞会释放趋化因子,进一步促进细胞伸出伪足,增强粘附攀爬能力。
细胞吞噬抗原过多、培养环境恶劣都会促进该细胞呈现梭形、长梭形,镜下会瞧到具有细长伪足得小细胞被类似上皮得梭形大细胞取代。
3、每次传代都很难消化下来。
用力过大则对细胞损伤较大,这种细胞传代时接种密度要大,否则容易使巨噬细胞向终末细胞分化,细胞变成长形,并且不能回复,这就是培养这种细胞时最需要注意得问题。
4、对于RAW264.7细胞她得声场时喜欢结伴。
正常生长状态应该就是一小片一小片得生长,片片之间不连接,等到长到更多更密得时候会连成大片,并且会叠加成层、所以,要很好地控制好细胞得生长速度,不要等到叠加成层得时候再传代。
5、RAW264、7细胞传代后贴壁时间较短,半小时就能贴很多,刚贴壁就是细胞呈圆形,折光度很好,镜下观察如小珍珠状一个个地散落于瓶底面、生长一段时间后,部分细胞会变成类似四角形,伸出伪足之类得。
这个时候就就是提醒您注意传代了,这部分细胞如再不传代,很容易就老化掉、二、RAW2６4、7细胞传代1) 将培养瓶内旧得培养液弃掉, 然后用D－Hanｋs液洗两次,(一定要洗干净,以免影响胰酶得消化作用)2) 加入０。
25%胰酶-EDTA消化,25cm培养瓶加０。
4ml, 3７度消化5ｍin,镜下瞧到细胞变圆,间隙增大、(值得注意得就是该细胞对机械损伤比较敏感)３)立即加含1０%FＣS得培养液终止消化,用细胞刮刀轻刮,注意,这时候用吸管吹不下来,但就是刮刀却很容易刮下来,而且对细胞得损伤极小４)离心,弃上清,加新得培养液(１0％ＦＣS),小心吹匀,分装入新得培养瓶三、RＡW26４。
7细胞冻存及复苏(一)细胞冻存1. 配制冻存培养液;(通用得为培养基:血清:ＤMSO=７:2:1,但其中得血清可进行调整,如上面得仁兄用得4:5:１,比例过高)2、取对数生长期得细胞(冻存前一天换液),用胰蛋白酶把单层生长得细胞消化下来,悬浮生长得细胞则直接将细胞移至15ml离心管中;3、离心１000rpm,5miｎ;4、去除胰蛋白酶及旧得培养液,加入适量配制好得冻存培养液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数,调节冻存液中细胞得最终密度为５×106/ｍl～１×１０７／ml;5. 将细胞分装入冻存管中,每管1～1、5 ml(不超过冻存管容量得８０%);6、在冻存管上标明细胞得名称,冻存时间及操作者;7。
冻存:标准得冻存程序为降温速率-1～—2℃/ ｍin;当温度达-25℃以下时,可增至—5℃～－1０℃/min;到-1０0℃时,则可迅速浸入液氮中。
也可将装有细胞得冻存管放入－2０℃冰箱2h ,然后放入－70℃冰箱中过夜,取出冻存管,移入液氮容器内、(具体操作为4°C 20mｉn,-20°Ｃ30ｍin,—7０℃过夜,转入液氮中)(二) 细胞复苏1。
从液氮容器中取出冻存管,直接浸入37℃温水中,并不时摇动令其尽快融化。
(1ｍin以内溶解完毕,不能将口进入水面下)2。
从３7℃水浴中取出冻存管,打开盖子,用吸管吸出细胞悬液,加到离心管并滴加10倍以上培养液,混匀;3. 离心, 1000rpm,5mｉｎ;４。
弃去上清液,加入含10％小牛血清培养液重悬细胞,计数,调整细胞密度,接种培养瓶,37℃培养箱静置培养;(复苏时细胞密度稍大,可提高复苏效率)5、次日更换一次培养液,继续培养。
(可更换一半培养液,避免跨度太大,影响细胞状态)(三)接种四、RAW264、7细胞形态不好时得处理方法1。
倒掉旧得培养基,加入3mｌ新得培养基(有无血清得都可)洗涤一次,用滴管吸走,然后再加入3ml得培养基,进行预吹打,控制吹打力度,轻轻地大概沿着瓶底过一遍,然后吸走。
这时侯再开始正式得消化、吹打。
２。
把吹打下来得细胞悬液加入到新得培养瓶内,培养瓶事先加入培养基,放入培养箱内培养,按时间点观察细胞贴壁情况。
１0分钟观察一次,２0分钟,３0分钟观察一次、选择一个时间点,已经有部分细胞贴壁得情况下,重新置于洁净台,底面朝上迅速倒出其中得培养基,加入３ml新培养基再轻轻洗一次。
然后加入完全培养基培养。
后续观察细胞生长情况以及形态。
我称之为“二传”。
3。
如果一次效果还不理想,可重复多次。
直到找到细胞完美形态。
其中要注意,结合细胞喜欢得生长情况。
喜欢多一点数量长得好得细胞就等贴壁细胞比较多点得时候再传、反之亦然。
不明之处:培养之前,一切与细胞接触得玻璃器皿与器具都要进行过去热源处理。
(2０0－25０℃烘烤4—6h)？?RＡＷ264.7细胞株Cell Ｃｕｌture得材料(一)仪器1. 净化工作台２。
离心机3、恒温水浴箱4。
冰箱(４℃、-２0℃、—70℃)５. 倒置相差显微镜6、培养箱7、液氮冰箱(二)玻璃器皿1、吸管(弯头、直头)2、培养瓶3.玻璃瓶(２50ml、100ml)4、废液缸(三)塑料器皿1。
吸头2. 枪头3、胶塞４。
移液管(10ｍl)5、15ml离心管6、冻存管(１～2ｍl)(四)其她物品１.微量加样枪２.红血球计数板３、记号笔4. 医用橡皮膏5.移液枪(五)试剂１。
Ｄ—Ｈanks液2。
胎牛血清３。
培养液４. 双抗(青霉素、链霉素)5、胰蛋白酶(0。
25%)6。
7、4%NａHCO37. ＤMＳO(分析纯)或无色新鲜甘油附1.胎牛血清品牌整理第一类,最高级别,就是专门用于干细胞得特级胎牛血清ﻫ１、Hycloｎe得特级胎牛血清ﻫ目前,性能最好得血清,还就是要说说Hycｌone得特级胎牛血清,货号就是SH３00７0。
03,它就是Hyｃlone得“招牌菜”。
Hｙclｏne特级胎牛血清(Deｆinｅd ＦＢS),货号ＳH300７0,就是世界上唯一经过40纳米过滤得顶级胎牛血清,极佳得促细胞生长作用及产品稳定性。
内毒素含量≤10ＥＵ/ｍl,血红蛋白含量≤10mg/dl。
ﻫ此血清可以广泛用于各种细胞培养,包含任何干细胞系得培养。
2、Ｇｉbco得特级胎牛血清稍次一点得就是Gibcｏ公司在美国原装生产得特级胎牛血清,这款血清,货号就是1600０—0４4,就是100ｎm过滤3次,内毒素与血红蛋白含量都可以与Hyclone得SH3０070。
０３相媲美。
也可以用于培养大部分得干细胞系。
同样就是美国来源,所以渠道特殊。
3.TCB得特级胎牛血清ﻫTCB(TiｓsuｅCｕlture Bｉoloｇｉcaｌs)公司作为一家生物行业类得著名供应商,成立于1978年,大部分血清得采集与加工都在加利福尼亚、每一批得原材料都经过严格筛选,所有得产品都在FDA认证得cGMＰ车间进行！4。
Bioｉｎｄ特优级胎牛血清血源来自北美与澳大利亚BｉｏInd公司得生产完全符合ＧMP得要求,并通过ISO９0０0:2001与ISO 1３4８5:2０03质量认证。
以安全,稳定,高效为原则得BioInd公司,所有得产品质量均完全符合国际标准。
Ｂｉｏlｏgｉcal Ｉnduｓtr ｉes主营细胞培养类产品,BioＩnd工厂加工得胎牛血清均符合ＵSＤA标准及欧洲标准血清。
根据美国农业部标准,原始血清均采自未发生疯牛病(BＳE)与口蹄疫(FMＤ)疫情得国家。
Bioｌogical Industrｉes三步滤菌处理法,最后得过滤步骤为连续通过三个100纳米得滤膜。
血清生产得洁净级别为１０0级。
所有分装工作台都通过高效微粒空气过滤器过滤,并保持正压分装环境要对总微粒、悬浮微粒数与压力进行监控。
分装之后,终产品迅速-２0度冻存,并隔离,直到所有得质量控制检测完成、第二类,优等胎牛血清1.Hyｃｌoｎｅ得加拿大优等胎牛血清ﻫ性价比最高得就是Hyclonｅ加拿大优等胎牛血清(ＣhａracterizendFＢS)SH30396。
0３血清采自加拿大,由ｈycloｎe 公司总部得员工采集加工,采集方法,加工过程,检定标准与美国原产优等胎牛血清完全一致,市场价格低于美国原产得。
经过3次１00nm过滤,内毒素含量≤２5EU/ｍl,血红蛋白含量≤２5ｍg/dl２、Ｈycｌoｎe得南美优级胎牛血清ﻫ大体与加拿大得优等血清就是一样得,级别也非常相似,货号就是sv3００8７、02,该胎牛血清来源于南美洲,以封闭得心脏穿刺方式采集,产品经3次10０ｎm 过滤,经严格检测确保无支原体,细菌病毒检测依据美国药典(UＳＰ)与美国联邦法规第九篇(9CFR),内毒素含量≤１0 EU/ｍl,血红蛋白含量≤20 mg／dｌ,完全符合美国HyＣｌone＆reg; 优等胎牛血清得检测标准。
ﻫ３、Ｇiｂco得澳大利亚胎牛血清ﻫ情况与Ｈycｌｏne得澳大利亚胎牛血清差不多,市场价也就是3２0０元/500ｍl左右。
这一级别得血清,也能用于干细胞培养,可就是,不象特级胎牛血清那么优秀、因为,此胎牛血清属于澳大利亚生产得,不在疫区,可以正常报关进口,目前没有受到任何影响,所以,就目前而言,算就是最好得胎牛血清了,有不少客户都此血清来培养干细胞,效果还就是比较不错。
ﻫ4、TCB得优级胎牛血清ﻫ情况与Hｙｃlone得澳大利亚胎牛血清差不多,市场价也就是2300元/500ｍl左右。
这一级别得血清,也能用于干细胞培养,可就是,不象特级胎牛血清那么优秀、第三类,一般级别得进口胎牛血清ﻫ1、Hycloｎe得南美胎牛血清目前,市场上用得最多得Hｙｃlone血清就是南美胎牛血清(FＢS)SＶ30087 ,此血清采自南美,在国内(兰州)过滤并测试检验,经三次1０0纳米过滤,根据中国商标法得规定标贴中文标签,内毒素含量≤10EU／ｍｌ,血红蛋白含量≤20mｇ/d、ﻫ此血清广泛用于各种肿瘤细胞得培养,还没有资料记载能够用于干细胞,也听说有少数人用于干细胞培养得,不过,因为本身血红素比较高,所以,最好不要用于干细胞,2、Gibco得南美胎牛血清ﻫ这款血清,就是Gibco针对Hyclone南美胎牛血清做得,价格比较贵,好像就是1780元/50０ｍ。