液相色谱原始记录-呋喃唑酮液相
高效液相色谱法同时测定饲料中的呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因、呋喃它酮药物残留量
Ｔ ＴＲｏＦ Ｉ ＵＲＡＮＴｏＩ ＮＥ ＡＮＤ ＦＵＲＡＬＴＡＤｏＮ Ｎ ＥＥ ＢＹ 耶 ＬＣ Ｉ Ｆ Ｄ
Ｃ ｅ ｇ ｌ，ＧＥ ｉ ＡＯ Ｐ ｎ － ＮＧ Ｊｎ—ｐ ｉ，ＹＩ ａ—ｌ ‘ ｅ ＮＤ ｕ ，ＲＵ ｎ ，Ｌ ｅ —ｎ ａ 。 Ｉ ＡＮ Ｊ ｎ—ｎ 。 ＡＮ Ｘｉ ＩＰ ｉ ｕ ｎ ，Ｌ Ｇ ｕ ｉ
关键词 ： 高效液相色谱法 ； 饲料 ； 呋喃唑酮 ； 呋喃西林 ； 呋喃妥 因； 呋喃它酮
中 图分 类 号 ： ５ Ｓ８９ 文 献标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ： ０ ２ ２ （００ ０ ０２ ０ １ ０— ３４ ２ １ ）３— ４４— ４ ０
．
ＤＥＴＥＲＭ Ｉ ＮＡＴＩ ｏＮ ｏＦ ＴＨＥ ＰＥＳＴＩ ＤＥ ＣＩ ＲＥＳ ＩＵＥＳ ｏＦ Ｉ） ＦＵＲＡＺｏＬＩ ） ＩｏＮＵＭ 。ＦＵＲＡＣⅡ
山东农业 大学学报 （ 自然科学版 ） ０ ０ １（ ） ４ ４— ２ ，２ １ ，４ ３ ： ２ ４ ７
Ｊｕ ａ ｏ ｈ ｎ ｏ ｇＡ ｒ ｕ ｕａ Ｕ ｉｅ ｉ （ ａ ｒｌ ｃｅ ｃ ） ｏ ｒｌ ｆ ａ ｄ ｎ ｇｉ ｌ ｒｌ ｎｖｒ ｔ Ｎ ｔ ａ Ｓ ｉｎ ｅ ｎ Ｓ ｃｔ ｓｙ ｕ
（ ． ａ ｔ ｎ ｙ ｘｔ ｎ ｐ ｃｉ ｎ ｕ ｒｎｉｅＢ ｒａ ， ｎａ ２ ４ ０ ， ｈｎ ； １ Ｙ ｎａ Ｅ ｔ ＆Ｅ ｉ Ｉｓ ｅｔ ｎａ ｄＱ ａａ ｔ ｕｅ ｕ Ｙａ ｔ ６ － １ Ｃ ｉａ ｉ ｒ ｏ ｎ ｉ ０ ２ Ｉ ｓ ｔｔ ｏ ｏ ｄＳ ｉ ｃ ｎ ｎ ｉｅｒ ｇ ｈ ｎ ｏ ｇ Ａ ｒ ｕｔｒ ｎ ｅ ｉ ， ａ ｎ２ １ １ ， ｈｎ ） ．ｎｔ ｕ ｆ ｏ ｃｅ ｅａ ｄ Ｅ ｇｎ ｅ ｎ ，Ｓ ａ ｄ ｎ ｇｉ ｌ ａ Ｕ ｉ ｒ ｔ Ｔ ｉ ７ ０ ８ Ｃ ｉ ｉｅ Ｆ ｎ ｉ ｃ ｕ ｌ ｖ ｓｙ ａ ａ
1、动物源食品中呋喃酮残留检测方法-高效液相色谱法
动物源食品中呋喃酮残留检测方法———高效液相色谱法[文献标识码]E [文章编号]100221280(2002)022******* [中图分类号]S859184农业部于2001年11月1日发布农牧发[2001]38号文,发布10种动物源食品中兽药残留检测方法。
方法之一:动物源食品中呋喃唑酮残留检测方法—高效液相色谱法,全文如下:动物源食品中呋喃唑酮残留检测方法—高效液相色谱法1 范 围本标准规定了动物源食品中呋喃唑酮残留量的检测的制样和高效液相色谱测定方法。
本标准适用于鸡的肌肉、肝脏、肾脏组织和鱼肉中呋喃唑酮残留量检测。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。
G B/T1.1-20001标准化工作导则第1部分:标准的结构和编写规则(ISO/IEC Directives,Part 3,1997,Rules for the structure and drafting of Inter2 national Standards,N EQ)G B/T6682—1992分析实验室用水规格和试验方法N Y/T××××—2001动物源食品中兽药残留检测方法标准编制规则3 制 样311 样品的制备 取适量新鲜或冷冻空白或供试组织,绞碎并使均匀。
312 样品的保存 -20℃冰箱中贮存备用。
4 测定方法411 方法提要或原理 组织加C l8混匀后装柱,用正己烷冲洗,真空抽干后,用乙酸乙酯洗脱,洗脱液减压浓缩至干后用流动相溶解,过氧化铝小柱后,用高效液相色谱测定。
412 试剂和材料 以下所用试剂,除特殊注明者外均为分析纯试剂;水为符合G B/T6682规定的二级水。
液相色谱仪原始记录
吕梁市质量技术监督检验测试所
液相色谱仪检定记录
No.JLHX007 受检单位仪器名称
型号/规格出厂编号
生产厂家测量范围
检定依据检定日期
主标准器名称量传时间
检定地址温度℃湿度 %RH 1.外观检查：
2.泵流量设定值误差及流量稳定性误差的检定
3.定性定量测量重复性的检定
4.柱温箱温度设定值误差及控温稳定性的检定
5.梯度准确度的检定
6.紫外-可见光检测器/二极管阵列检测器性能检定
7.荧光检测器性能检定
8.液相色谱柱性能测试记录
9.示差折光率检测器性能检定
检定结论：证书编号：
检定员：核验员：。
饲料中三种硝基呋喃类药物的超高效液相色谱同步检测方法
程为 Ｙ＝１１ ２８０Ｘ＋５１．０６６， 相关系数 ｒ＝０．９９４。硝基呋喃 类药物浓度在 ０．０５～１０ μｇ／ｍｌ 时有良好的线性关系。
１２０ ０００
Ｂ Ａ
Ｃ
９０ ０００
峰面积
１．０ｅ－ ３ ０．３８
１．６９
２．４０
１．９９
６０ ０００ ３０ ０００
Ａ 为呋喃西林 Ｂ 为呋喃妥因 Ｃ 为呋喃唑酮
流动相 Ａ（乙腈）： Ｂ（３‰冰醋酸）（体积比）＝１０： ９０、 流 速 ０．４ ｍｌ／ｍｉｎ、色谱柱为 ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣＴＭ Ｃ１８２．１× ５０ ｍｍ（ｉ．ｄ． １．７ μｍ 颗 粒 ）、柱 温 为 ２５ ℃、检 测 波 长 为 ３６５ ｎｍ、进样量为 ５ μｌ、运行时间为 ３ ｍｉｎ。 １．５ 样品处理
ＡＵ ＡＵ
５．０ｅ－ ４ １．４６
３．１３ ３．４１ ３．６３
０
１．００
２．００
３．００
４．００
时间（ ｍｉｎ）
图 １ 混合标准液的液相色谱图
２．２ 工作曲线的制备 按照试验条件和方法， 在系列样品中进行系列浓
度的加标回收， 以硝基呋喃类药物的峰面积 Ｙ 为纵坐 标，硝基呋喃类药物的质量浓度 Ｘ（μｇ／ｍｌ）为横坐标进行 线性回归，见图 ２。呋喃西林的回归方程为 Ｙ＝１１ ３４８Ｘ＋ ２ ２９９．２，相关系数 ｒ＝０．９９０； 呋喃妥因的回归方程为 Ｙ＝ １２ １０１Ｘ＋１９２．９， 相关系数 ｒ＝０．９９５； 呋喃唑酮的回归方
呋喃妥因
回收率 （％） ７９．２ ８８．５ ９２．３ ８６．９ ８３．８ ９２．３ ９６．２ ７６．９ ８１．５
精密度 （％）
７．５８
回收浓度 （μｇ／ｇ） １．０９ １．２５ １．２ １．１２ １．１ １．１５ １．２０ １．２０ １．２０
水产品中呋喃唑酮含量的高效液相色谱检测法
乙腈 (色谱纯) ; 二氯甲烷 ; 85 %的磷酸 (优级 纯) , 01017M 磷酸缓冲液 , 即用 5ml 移液管吸取 2ml85 %磷酸于 1000ml 容量瓶中定容至刻度 ; 水为 三蒸水 ; 无水硫酸钠 , 经 600～650 ℃灼烧 4h 后 , 置密闭容器中备用 。 113 色谱条件
表 2 高效液相色谱仪精密度的测定
添加浓度 精密度类别
(μg)
平均峰面积 ( S1)
0101
1189166 ±26142
日间精密度 011
10910167 ±211178
110
10792613 ±1615157
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
0101
214 ±21134
日内精密度 011
10795123 ±233188
110
115635 ±1524145
色谱法 [3 ] 陈笑梅 , 鲍晓霞 1HPLC 法测定鳗鱼 、猪肉和对虾中的痢特灵
残留 1 分析测试学报 , 1994 , 13 (3) : 78～80 [4 ] 闫惠文 , 赵小阳 1 液相色谱法测定饲料中的呋喃唑酮 1 中国饲
料 , 2001 , 21 : 18～20
10
关键词 水产品 ,检测 ,液相色谱 ,呋喃唑酮
呋喃唑酮 ( Furazolidone) 是一个广谱抗菌药 物 , 以前 , 在水产养殖生产上常被用于防治鱼类细 菌性疾病 , 有资料表明呋喃唑酮具有诱变致癌作 用[1] , 因此很有必要对水产品中呋喃唑酮的残留量 进行检测 , 从而对其进行有效监控 , 保障消费者的 食用安全 。本文对传统的一些方法[2～4] 进行了修 改 , 建立了水产品中呋喃唑酮残留量的 HPLC 分析 方法 , 该法快速 、准确 、灵敏 。 1 材料和方法 111 仪器与设备
液相色谱－串联质谱法测定水产品中硝基呋喃类代谢物残留量
液相色谱－串联质谱法测定水产品中硝基呋喃类代谢物残留量广东省珠海市斗门区动物卫生监督所 孟轩 梁可昌【摘 要】本文介绍液相色谱-串联质谱法测定水产品中硝基呋喃类药物（呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林）代谢物残留方法。
试样中加入2-硝基苯甲醛溶液，在酸性条件下衍生，乙酸乙酯提取，涡旋离心提取，以乙酸胺和甲醇溶液进行梯度洗脱。
在浓度0.5～20.0纳克/毫升范围内，4种硝基呋喃类代谢物呈良好线性关系，相关系数均不小于0.995，检出限为0.5微克/千克。
在0.5微克/千克,1.0微克/千克,5.0 微克/千克添加水平下，目标分析物的加标回收率为82.0%～103%，相对标准偏差为0.996%～4.46%。
该方法具有操作简单、快捷、灵敏度高等特点，可用于水产品中硝基呋喃类等药物残留的批量检测。
【关键词】水产品；液相色谱-串联质谱法；硝基呋喃类硝基呋喃类药物是通过影响细菌体内的氧化还原酶体系，干扰细菌正常代谢的一类广谱抗生素，曾普遍应用于水产、畜牧业养殖等行业中疾病的预防和治疗。
后续学者陆续研究发现，该类药物对对人体具有致畸胎作用，可能诱发癌症等重大疾病。
为此，2019年12月农业农村部发布的第250号公告中将其归类为食品动物中禁止使用的药物。
硝基呋喃类常用的有４种：呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林。
硝基呋喃类药物进入鱼体后的代谢产物分别为：3-氨基-2-恶唑烷基酮（AOZ）、5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮（AMOZ）、1-氨基-2-内酰脲（AHD）、氨基脲（SEM），由于这些代谢产物与蛋白质结合而相当稳定，所以目前主要通过检测代谢物的残留量，反映硝基呋喃类药物的残留状况。
目前检测兽药残留常见的方法主要有：高效液相色谱－串联质谱法、液相色谱法、常规理化检测法、酶联免疫法、毛细管电泳法等。
本研究基于《国家标准GB31656.13-2021食品安全国家标准水产品中硝基呋喃类代谢物多残留的测定液相色谱-串联质谱法》，结合实验室设备及当地检测需求，建立了准确、高效、快速的硝基呋喃代谢残留量检测方法。
呋喃类药物残留检测技术的研究
1 绪论1.1 研究意义呋喃类抗生素是一种具有五元环结构的有机物，其含有一个5-硝基呋喃官能团，目前普遍被人工合成用来作为抗菌药物。
呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因都属于这类药物。
作为一种广谱抗菌药, 能对多种革兰氏阳性及阴性细菌产生抑制，同时对部分真菌和原生动物也具有一定效果。
呋喃类抗生素曾被广泛应用于养殖业中。
但是硝基呋喃类药物及其残留具有很大的危害。
目前国内外都对呋喃类物质的控制相当严格。
美国颁布法规:食源性动物禁止使用呋喃唑酮和呋喃妥因。
韩国禁止呋喃唑酮等应用于生猪养殖。
欧盟则对所有肉类中硝基呋喃实施零容忍。
在我国，早在02年农业部就在《食品动物禁用兽药及其他化合物清单》中将硝基呋喃类药物禁止。
由于监管机制不健全，同时硝基呋喃的成本低廉效果较好的利益驱动，虽然我国已明文禁止此类药物在养殖业中的使用，但相关个案仍屡屡发生。
例如，06年阳澄湖大闸蟹致癌事件，就是在养殖过程中使用硝基呋喃所导致的。
欧盟也曾检出自中国进口的兔肉、鱼虾、禽肉中含有呋喃类药物残留。
由于抗生素的检出量是世贸组织规定的肉类食品贸易的重要技术参考，因此这类药物的残留将大大制约我国的肉类出口。
加强对我国肉类产品呋喃类兽药残留的检测和监控，势在必行。
为保障人民的身体健康、有效控制硝基呋喃类药物在兽肉生产中的使用和对其残留量进行监控，大力开展硝基呋喃类药物残留检测技术的研究是非常必要的。
1.2 呋喃类兽药简介呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因是常见的四种人工合成的硝基呋喃类抗菌药。
普遍呈黄色粉末状，无味或略苦，性质稳定。
其中常用的呋喃西林难溶于水(1∶4200），微溶于乙醇(1∶590)；呋喃唑酮几乎不溶于水和乙醇；呋喃妥因几乎不溶于水，微溶于乙醇。
1.2.1 呋喃唑酮呋喃唑酮，又名痢特灵，相对分子质量225.2。
呈黄色粉末状（偶尔有黄色晶体出现）。
呋喃唑酮可溶于氯仿，难溶于水和乙醇。
光照后颜色会变深，碰到碱性物质容易分解。
高效液相色谱法测定鸡蛋中呋喃唑酮的残留量
高效液相色谱法测定鸡蛋中呋喃唑酮的残留量丁 岚 谢孟峡3 刘 媛单吉浩 杨清峰 刘素英(北京师范大学分析测试中心,北京100875)(农业部畜禽产品质量监督检验测试中心,北京100026)摘 要 采用基体固相扩散和固相萃取相结合的技术,对鸡蛋中呋喃唑酮残留进行了提取和净化处理,建立了高效液相色谱法检测鸡蛋中呋喃唑酮残留量的方法。
对呋喃唑酮在C 18固定相和硅胶固相萃取柱上的保留行为进行了研究。
采用液相色谱分离,外标法定量,呋喃唑酮标准溶液的峰面积与样品浓度在5μg/L ～215mg/L 范围内呈良好的线性关系,线性回归系数大于0.9999。
鸡蛋样品中呋喃唑酮不同加入量的平均回收率在80.2%～91.1%;相对标准偏差在2.0%～9.5%;最低检出限为10μg/kg 。
分析方法具有良好的重现性,批内、批间定量结果的相对标准偏差均小于10%。
关键词 高效液相色谱,呋喃唑酮,基体固相扩散,固相萃取,鸡蛋2003202227收稿;2003207230接受1 引 言呋喃唑酮(furazolidone )属呋喃西林类化合物,有广泛的抗菌活性,常用来预防和控制霍乱、球虫病、猪肠炎和火鸡黑头病等因细菌和原生物引起的感染1。
但近年来医学研究表明,呋喃唑酮具有很强的致癌性。
从1997年1月起,欧盟、北美等国家已经把呋喃唑酮列为禁用药品,在可食性动物产品进出口中,残留限量为不得检出。
呋喃唑酮的检测方法主要有比色法、薄层色谱法、气相色谱法、反相高效液相色谱法、气相色谱2质谱联用和液相色谱2质谱联用等方法。
牛奶、动物的各种机体组织、体液及血清等基体2,3中呋喃唑酮的检测方法已有报道,但鸡蛋中呋喃唑酮残留量的检测方法标准在国内仍处于空白。
基体固相扩散(matrix s olid 2phase dispersion ,MSPD )和固相萃取(s olid 2phase extraction ,SPE )技术因其简便快捷、样品和溶剂用量少等诸多优点已被广泛应用于食品、水果、蔬菜及动物组织中药物残留的分析4～11。
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色谱柱ZORBAX SB-C18 4.6×150mm,5μm流速1.0mL/min进样量20μL检测波长365 nm
流动相0.017mol/L磷酸：乙腈梯度洗脱步骤（流动相比例）60:40
项目名称
样品峰面积
检测结果（g/kg）
平均值（mg/kg）
V—样品最终定容体积，ml;m—样品质量，g。
备注
呋喃唑酮检出限均为1.0g/kg
检验人：校核人：审核人：
ZLWJ/BG24.11第2页
组分名称及信息
呋喃唑酮
浓度（mg/L）
峰面积AS
备注
组分名称及信息
浓度（mg/L）
峰面积AS
备注
组分名称及信息
浓度（mg/L）
峰面积AS
备注
组分名称及信息
浓度（mg/L）
ZLWJ/BG24.11第1页
液相色谱法检测原始记录
样品名称样品编号样品状态
检测依据SB/T 10387-2004温度20C湿度45（RH/%）检测日期2011年月日
称样量1(m0/g )称样量2(m1/g)称样量3(m2/g)
定容体积（V1/ml）/分取体积（V2/ml）___________最终定容体积（V/ml）1.0
实测
偏差（%）
相对标准偏差（%）
A0
A1ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
A2
X0
X1
X2
呋喃唑酮
计算公式
X= AiCsVV11000/ AsmV2
X—样品中待测组分残留量，μg/kg; Ai—样液中待测组分的峰面积;
Cs—标准工作溶液的浓度，mg/L; As—标准工作溶液的峰面积;
V1—样品定容体积，ml;V2—样品分取体积，ml;
峰面积AS
备注
组分名称及信息
浓度（mg/L）
峰面积AS
备注
组分名称及信息
浓度（mg/L）
峰面积AS
备注
组分名称及信息
浓度（mg/L）
峰面积AS
备注
组分名称及信息
浓度（mg/L）
峰面积AS
备注
检验人：校核人：审核人：