凝胶回收
生物学实验之凝胶回收基础及操作
耗材 移液枪
枪头 离心管
设备 凝胶成像系统
离心机 水浴锅 水平电泳仪
胶回收标准实验流程－实验流程
１柱平衡 步骤
1
向吸附柱 CA2柱 加入500μL 平衡液BL
2
12000rpm, 离心1min
２切胶
1
将目的条 带从琼脂糖 凝胶中切下
2
放入干净的 离心管中
3
弃废液，将 吸附柱重新放回
收集管中
3
称取重量
注：1.如果凝胶重0.1g，其体积可视为100μL，则加入100μL溶液PN。 2.若胶块未完全溶胶，可继续放置几分钟或补加一些溶胶液，直
至胶块完全溶解。
22
4.1 实验流程
4.1.4 吸附DNA
1
2
将所得溶液加入 一个吸附柱CA2中，
室温放置2min
12000rpm, 离心30~60sec
3
弃废液，将吸附柱 重新放回收集管中
4.2 结果分析—琼脂糖凝胶电泳
➢ 将电泳结束后的凝胶放在凝胶成像 系统中拍照保存。
➢ 对结果进行分析： ① 看有无目的带 ② 看是否存在非特异带 ③ 看条带亮度
30
切割 回收
4.2 注意事项
1.洗脱体积不应小于30μL，体积过少 影响回收效率。洗脱液的pH值对于 洗脱效率有很大影响。若后续做测序， 需使用ddH2O做洗脱液，并保证其 pH值在7.0~8.5范围内，pH值低于 7.0会降低洗脱效率。
生物学实验之凝胶回 收基础及操作
目录
一 胶回收基础知识 二 方法及应用 三 试剂耗材与设备 四 操作流程 五 常见问题解答
目录
一 胶回收基础知识 二 方法及应用 三 试剂耗材与设备 四 操作流程 五 常见问题解答
DNA凝胶回收操作流程
DNA凝胶回收QIAquick Gel Extraction Kit① (提前记录1.5ml离心管重量)在紫外灯光下切下含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸干凝胶表面液体并切碎（方便融化），计算凝胶重量（重量作为凝胶体积，100mg≈100μl体积）②入3个凝胶体积的Buffer QG ,每个吸附柱的最大量为400mg。
对于>2%凝胶浓度，加入6个凝胶体积的Buffer QG。
③混个均匀后于50℃加热10min(或者直至凝胶全部溶解)，每2-3min间断混合以助溶解，凝胶完全融化后，确认混合液的颜色为黄色（类似于Buffer QG没加入溶解的凝胶之前的颜色）。
如果混合液的颜色是橙色的或者紫色的，加入10μL 3M sodium acetate(醋酸钠), pH5.0,混合。
混合液转变为黄色。
④加入一个体积的异丙醇于样品中，混合。
⑤将QIAquick吸附柱置于2ml 收集管中，为了吸附DNA，将样品置于吸附柱中， 17900×g(13000rpm) 离心1min。
弃去液体，将QIAquick吸附柱置于相同的收集管上。
⑥如果DNA用于后续测序，体外转录，显微注射，加入500μL Buffer QG于吸附柱上，离心1min,弃去液体，将吸附柱置于新的收集管上。
⑦洗涤，加入750μL Buffer PE于吸附柱中，离心1min,弃去液体，将吸附柱置于新的收集管上。
注意：如果将DNA用于盐敏感型应用（例如，测序，平末端连接反应中），加入Buffer PE后静置2-5min。
为了去除残留液体，继续离心1min。
⑧将收集柱置于新的1.5mL离心管中。
⑨为了洗提DNA，加入50μL Buffer EB(10mM Tris·Cl, pH 8.5),加入膜中央，离心1min。
为了增加DNA浓度，加入30μL Buffer EB于膜中央，静置1min，离心1min。
孵育50℃最多4min,可提高DNA提取效率。
DNA凝胶回收试剂盒产品说明书
北京四正柏生物科技有限公司网站: 客服热线:400-7060-959技术支持:DNA 凝胶回收试剂盒产品编号规格MDN3066-5050次MDN3066-100100次保存条件及效期：常温运输和保存，保质期一年。
产品描述：本试剂盒用于从琼脂糖凝胶中或DNA 反应体系中(如PCR 反应)回收DNA 片段。
试剂盒采用可以高效、专一结合DNA 的硅胶膜和独特的溶胶体系，或DNA 反应体系中回收的单链、双链及环状DNA ，回收效率可达50-90%(跟片段大小相关)。
得到的DNA 可直接用于连接、转化、酶切、测序、杂交等分子生物学实验。
产品组分：使用方法：1.凝胶回收：切取含DNA 片段的琼脂糖凝胶(100mg 左右，尽可能多地把多余的胶切除，否则会影响回收效率)，放入一干净的1.5ml 塑料离心管(自备)中，用移液枪头捣碎，按重量比为1：3到1：5的比例加入通用溶胶液(100mg 琼脂糖凝胶需要加入300μl-500μl 通用溶胶液)。
PCR 产物回收：直接在PCR 反应管中加3-5倍体积的通用溶胶液，混匀，然后跳过第2步、直接从第3步做起。
如果PCR 反应中使用了石蜡，需要预先去除。
2.50℃保温使胶完全溶化(一般需要5分钟)，其间可以振荡数次以促进琼脂糖凝胶的溶化。
如果片段长度在300bp 成份50次包装100次包装通用溶胶液25ml 50ml 吸附柱活化液25ml 50ml 通用洗柱液50ml 100ml 离心吸附柱50套100套DNA 洗脱液10ml 10ml 说明书1份1份以下，建议不要加热，以免DNA变性，影响回收率。
3.在等待期间，活化离心吸附柱。
在离心吸附柱中加入0.5mL吸附柱活化液，套上收集管后室温放置2分钟，然后12,000rpm离心2分钟，倒弃穿透液，再将吸附柱套上收集管后待用。
活化后的离心吸附柱必须在当天使用。
4.在上柱前，在溶化的胶中加入相当于胶块体积1/2的异丙醇（对100mg胶块，加50uL），快速振荡10秒混匀。
dna凝胶回收原理
dna凝胶回收原理
DNA凝胶回收是一种将DNA物质从凝胶中提取出来的技术，其原理主要涉及DNA凝胶的消化、电泳分离和提取等步骤。
首先，需要将含有DNA样品的凝胶切割成小片或小块。
这可以通过将凝胶放在紫外线灯下照射，使其出现亮蓝色荧光，并用刀、剪刀或专用切割工具进行切割。
然后，将DNA凝胶片放入一个离心管或离心管盒中，并加入几倍体积的溶剂（例如Tris-HCl缓冲液）。
随后，将离心管置于37°C的温水浴中，使凝胶片中的DNA溶解。
接下来，通过离心将溶解后的DNA凝胶物质与溶剂分离。
在离心过程中，DNA分子被推到溶剂中，而凝胶片被离心力推到离心管的底部。
最后，将上清液转移到一个新的离心管中，这个上清液即为含有DNA物质的溶液。
这样，DNA物质就从凝胶中回收提取出来了。
需要注意的是，在DNA凝胶回收的过程中，凝胶溶解液的选取和温度控制非常关键。
溶解液的成分和浓度应该适合DNA 的溶解，同时温度的控制也要符合DNA的稳定性，以避免DNA的降解或损伤。
实验十一DNA凝胶回收
加Buffer DE-B后混合物颜色变为黄色，充分混匀以保证形成均一的黄色 溶液。
4. 吸取步骤3中的混合液，转移到DNA制备管（置于2 ml（试剂盒内 提供）离心管）中，12,000×g离心 1 min。弃滤液。
一、实验原理
通过一定的方法将琼脂糖凝胶上 需要的目的DNA带回收下来，用 于下游实验。
琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法
1.柱回收试剂盒
是目前最简单快速的回收方法，只需要将电泳凝胶中 的产物条带切下，用溶解Buffer彻底溶解，上包埋有纯化 填料的纯化柱，离心，再洗涤一次，离心后用洗脱缓冲 液洗脱。全程不过10多分钟，得到的产物溶液可以直接 用于后继实验。这个方法几乎不需要什么技巧就能得到 稳定的结果，也是目前最多商品化试剂盒选择的方法。 但是这个方法不适合用于大片断的回收。
1.在紫外灯下切下含有目的 DNA 的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽 凝胶表面液体并切碎。计算凝胶重量（提前记录 1.5 ml 离 心管重量） ，该重量作为一个凝胶体积（如 100 mg=100 μl 体积） 。
2. 加入 3倍凝胶体积的 Buffer DE-A，混合均匀后于 75°C加 热（低熔点琼脂糖凝胶于 40ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱC加热） ，间断混合（每 23 min） ，直至凝胶块完全熔化（约 6-8 min） 。 * Buffer DE-A为红色溶液。在熔化凝胶的过程中，可以帮 助观察凝胶是否完全熔化。
二、实验目的
1. 从含有目的基因片段凝胶块上回收 DNA。
2.回收目的基因片段为下步连接反应 作准备
凝胶dna回收实验报告
凝胶dna回收实验报告1. 理解DNA凝胶电泳的原理和方法；2. 学习DNA凝胶回收的方法和步骤。
实验材料：1. DNA凝胶电泳仪；2. DNA样品；3. DNA凝胶；4. DNA染料。
实验步骤：1. 准备DNA样品：从细菌或真核生物中提取DNA并纯化。
2. 制备DNA凝胶：根据DNA样品大小选择合适的琼脂糖浓度和电泳缓冲液，将琼脂糖溶解于电泳缓冲液中，加热溶解后，在凝固前加入DNA样品，并将其转移到电泳槽中。
3. 进行DNA凝胶电泳：将DNA凝胶置于电泳仪中，接通电源，设定适当的电流和电压，进行电泳分离。
根据不同的目的和需求，可以选择不同的电泳方法，如平行电泳或垂直电泳。
4. 理解DNA凝胶图谱：观察DNA在凝胶中的迁移情况，根据分离程度和片段大小推断DNA的特性和组成。
5. 染色：使用DNA染料将凝胶中的DNA染色，以便观察和记录。
6. 回收DNA：使用切割刀将感兴趣的DNA片段从凝胶中割下，转移到离心管中。
7. 纯化和测定：使用DNA纯化试剂盒或其他方法纯化回收的DNA，并通过测序或其他技术确认其准确性和纯度。
实验结果：1. DNA凝胶图谱：根据分离情况和染色结果，可以观察到DNA片段的迁移情况和大小分布。
2. 回收的DNA样品：经过回收和纯化后，获得从凝胶中割下的DNA片段。
实验讨论：1. 实验中电泳条件的选择对于DNA凝胶分离的效果和准确性至关重要。
2. 切割凝胶时需要注意避免外源性DNA污染和片段交叉污染。
3. 回收的DNA样品需要经过纯化和测定，以确保其准确性和纯度。
实验结论：1. 通过凝胶DNA回收实验，我们可以将感兴趣的DNA片段从凝胶中割下，并进行后续的纯化和分析。
2. DNA凝胶电泳是一种常用的DNA分离和分析方法，可以用于研究DNA的大小、构成和数量。
3. 正确选择电泳条件，合理操作和纯化步骤，能够获得准确和高质量的回收DNA样品。
实验改进：1. 优化电泳条件，提高凝胶分离效果。
快速凝胶回收实验报告
一、实验目的本实验旨在通过快速凝胶回收方法，从琼脂糖凝胶中回收目的DNA片段，为后续的PCR扩增、酶切、连接等分子生物学实验提供高质量的模板DNA。
二、实验原理凝胶回收是分子生物学实验中常用的技术之一，主要用于从琼脂糖凝胶中回收目的DNA片段。
本实验采用的方法是利用琼脂糖凝胶中的DNA片段在低盐、高pH值条件下，可被特定的吸附剂（如硅胶膜、磁珠等）特异性吸附的特性，通过简单的操作步骤，将目的DNA片段从凝胶中分离、纯化。
三、实验材料1. 琼脂糖凝胶2. 目的DNA片段3. DNA回收试剂盒（含吸附剂、缓冲液等）4. 1.5 mL离心管5. 离心机6. 电泳仪7. 凝胶成像系统四、实验方法1. 准备琼脂糖凝胶电泳，将目的DNA片段与载体DNA混合，加入琼脂糖凝胶中，进行电泳分离。
2. 将电泳后的凝胶在紫外灯下观察，确定目的DNA片段的位置。
3. 使用DNA回收试剂盒中的吸头，将目的DNA片段从凝胶中剪下。
4. 将剪下的凝胶片段放入1.5 mL离心管中，加入适量的缓冲液，用吸头充分混匀。
5. 将混匀后的离心管置于离心机中，以12,000 rpm离心5分钟，使DNA片段吸附在吸附剂上。
6. 弃去上清液，用缓冲液洗涤吸附剂，重复洗涤步骤2次。
7. 将洗涤后的离心管置于离心机中，以12,000 rpm离心3分钟，使DNA片段充分沉淀。
8. 弃去上清液，加入适量的TE缓冲液，用吸头充分混匀，使DNA片段溶解。
9. 使用凝胶成像系统观察DNA片段的回收情况。
五、实验结果与分析1. 电泳结果显示，目的DNA片段成功从琼脂糖凝胶中回收。
2. 凝胶成像系统显示，回收的DNA片段大小与预期相符。
3. 回收的DNA片段纯度较高，可用于后续的PCR扩增、酶切、连接等分子生物学实验。
六、实验讨论1. 本实验采用快速凝胶回收方法，操作简便，节省时间，适用于大量样品的回收。
2. 实验过程中，应注意以下几点：a. 凝胶回收时，应确保目的DNA片段在凝胶中的位置准确。
DNA凝胶回收方法
DNA凝胶回收方法
一、材料：
1.5ml的离心管，离心管架
二、设备：
移液枪，离心机
三、试剂：
溶胶液，75%乙醇
四、操作步骤：
1. 切胶回收后，称重，在离心管中用1ml的枪头捣碎。
2. 加入等体积的溶胶液（如胶为100mg，则加100ul的溶胶液），颠倒混匀。
3. 55℃恒温加热直到凝胶完全融化（约10分钟）,每隔2-3分钟需将管内混悬液混匀一次，以加速凝胶溶解。
4. 加入到回收柱中，室温放置1分钟。
5. 12000rmp离心1分钟，倒弃收集管中的液体。
6. 在DNA回收柱中，加入700ul的75%的乙醇，倒弃收集管中的液体。
7. 重复步骤6。
8. 12000rmp离心1分钟，除去残留的液体。
9. 室温放置5-10分钟，让残留的乙醇充分挥发。
10. 将DNA回收柱置于1.5ml的离心管上，加入30ul的洗脱夜（TE缓冲液），放置1分钟，12000rmp离心1分钟，所得的液体即为回收的DNA。
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AxyPrep DNA 凝胶回收试剂盒
本试剂盒适合从各种琼脂糖凝胶中回收多至8μg DNA（70bp-10Kb），回收率为60-85%。
琼脂糖凝胶在温和的缓冲液(DE-A 溶液)中熔化，其中的保护剂能防止线状DNA 在高温下降解，然后在DE-B 溶液的作用下使DNA 选择性结合到膜上。
纯化的DNA 纯度高，并保持片断完整性和高生物活性，可直接用于连接、体外转录、PCR 扩增、测序、微注射等分子生物学实验。
一、试剂盒组成、贮存、稳定性
2ml离心管1.5ml离心管说明书
Buffer DE-A：凝胶熔化剂，含DNA 保护剂，防止DNA 在高温下降解。
室温密闭贮存。
Buffer DE-B：结合液（促使大于70bp 的DNA 片段选择性结合到DNA 制备膜上）。
室温密闭贮存。
Buffer W1：洗涤液，室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate：去盐液，使用前，按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇（用100%乙醇或95%乙醇），混合均匀，室温密闭贮存。
Eluent：洗脱液，室温密闭贮存。
二、注意事项
1. Buffer DE-A(含有β-巯基乙醇)、Buffer DE-B 和Buffer W1 含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。
若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。
2. 在步骤1 中，将凝胶切成细小的碎块可大大缩短凝胶熔化时间（线型DNA 长时间暴露在高温条件下易于水解），从而提高回收率。
勿将含DNA 的凝胶长时间地暴露在紫外灯下，减少紫外线对DNA造成的损伤。
3. 在步骤2 中凝胶必须完全熔化，否则将严重影响DNA 回收率。
4. 将Eluent 或去离子水加热至65°C，有利于提高洗脱效率。
5. DNA 分子呈酸性，建议在2.5 mM Tris-HCl，pH 7.0-8.5 洗脱液中保存。
三、实验准备
1. 第一次使用前，Buffer W2 concentrate中加入指定体积的无水乙醇。
2. 准备无核酸和核酸酶污染的Tip头、离心管。
3. 准备75°C水浴。
4. 使用前，检查Buffer DE-B是否出现沉淀，若出现沉淀，应于70°C温浴加热熔化并冷却至室温后再使用。
四、操作步骤
1. 在紫外灯下切下含有目的DNA 的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面液体并切碎。
计算凝胶重量（提前记录1.5 ml 离心管重量），该重量作为一个凝胶体积（如100 mg=100 μl 体积）。
2. 加入3 个凝胶体积的Buffer DE-A，混合均匀后于75°C 加热（低熔点琼脂糖凝胶于40°C 加热），间断混合（每2-3 min），直至凝胶块完全熔化（约6-8 min）。
* Buffer DE-A 为红色溶液。
在熔化凝胶的过程中，可以帮助观察凝胶是否完全熔化。
3. 加0.5 个Buffer DE-A 体积的Buffer DE-B，混合均匀。
当分离的DNA 片段小于400bp 时，需再加入1 个凝胶体积的异丙醇。
* 加Buffer DE-B 后混合物颜色变为黄色，充分混匀以保证形成均一的黄色溶液。
步骤4-6 可以选择负压法或离心法。
A. 负压法
4A. 正确连接负压装置，将DNA 制备管插到负压装置的插口上。
吸取步骤3 中的混合液，转移到制备管中，开启并调节负压至-25-30 英寸汞柱，缓慢吸走管中溶液。
5A. 加500 μl Buffer W1，吸尽管中溶液。
6A. 加700 μl Buffer W2，吸尽管中溶液。
以同样的方法再用700 μl Buffer W2 洗涤一次。
* 确认在Buffer W2 concentrate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。
* 两次使用Buffer W2 冲洗能确保盐份被完全清除，消除对后续实验的影响。
7A. 将制备管置于2 ml 离心管（试剂盒提供）中，12,000×g 离心1 min。
B. 离心法
4B. 吸取步骤3 中的混合液，转移到DNA 制备管（置于2 ml（试剂盒内提供）离心管）中，12,000×g
离心1 min。
弃滤液。
5B. 将制备管置回2 ml 离心管，加500 μl Buffer W1，12,000×g 离心30 s，弃滤液。
6B. 将制备管置回2 ml 离心管，加700 μl Buffer W2，12,000×g 离心30 s，弃滤液。
以同样的方法再用700 μl Buffer W2 洗涤一次12,000×g 离心1 min。
* 确认在Buffer W2 concentrate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。
* 两次使用Buffer W2 冲洗能确保盐份被完全清除，消除对后续实验的影响。
7B. 将制备管置回2 ml 离心管中，12,000×g 离心1 min。
8. 将制备管置于洁净的1.5 ml 离心管(试剂盒内提供)中，在制备膜中央加25-30 μl Eluent 或去离子水，室温静置1 min。
12,000×g 离心1 min 洗脱DNA。
* 将Eluent 或去离子水加热至65℃将提高洗脱效率。
六、常见问题分析
（一）、回收率低
1. 目的片段结合量低
1) 琼脂糖凝胶未完全熔化时目的片段只有部分结合到膜上，导致其余的片段在后续洗涤过程中丢失以及出现制备管堵塞现象，最终影响回收效率。
建议：在切胶时尽可能去除不含目的片段的琼脂糖，确保buffer DE-A 的正确用量。
在熔胶过程中要仔细检查确保无固体琼脂糖残留，间隔性的对样品进行摇晃促进凝胶的充分熔化。
2) 小于400bp 的片段未加异丙醇
建议：务必确保已加入1 倍凝胶体积的异丙醇（100%）
3) 电泳缓冲液pH 值过高，影响目的片段的结合
建议：建议加入10μl 3M NaAc 中和。
2. 结合的DNA片段过早的被洗脱
Buffer W2 中未加无水乙醇或者乙醇浓度不是95-100%的
建议：确保加入正确的乙醇量。
每次使用后应拧紧瓶盖，以免乙醇挥发，降低回收率。
3. 洗脱效率低
建议：最后一次Buffer W2 洗涤完后不要将制备管放于负压装置上抽得过干。
洗脱液或者去离子水65°C 预热以及增加洗脱前静置时间至5min，都可提高洗脱效率。
选用合适浓度的琼脂糖凝胶电泳，上样量不超过制备管的最大结合量（8μg）（二）、后续酶促反应不理想
1. 盐污染
建议：确保用Buffer W2 洗涤2 次。
2. 乙醇污染
建议：在最后一次Buffer W2 洗涤后可将制备管离心时间由原来1min 增加至2min。
3. 琼脂糖残留
建议：切胶时尽可能去除不含有DNA 片段部分的凝胶以便于对琼脂糖的处理，确保琼脂糖块在Buffer DE-A中完全熔化。
4. 洗脱产物中含有ssDNA
将洗脱产物95℃加热2min，慢慢冷却至室温，使单链DNA 重新退火即可。