配方粉与原料中的牛乳铁蛋白的定量测定
乳铁蛋白的评测方法
乳铁蛋白的评测方法乳铁蛋白是一种存在于乳制品中的重要蛋白质，具有对人体健康有益的功效。
为了评测乳铁蛋白的质量和功能，科学家们发展出了一系列的方法。
以下将对乳铁蛋白的评测方法进行详细介绍。
一、乳铁蛋白含量的评测方法：1. 尿素凝胶电泳：该方法将乳铁蛋白样品与标准品一同进行电泳，通过比较样品和标准品的带电量和迁移距离，可以计算出乳铁蛋白的含量。
2. 高效液相色谱法：通过将乳铁蛋白样品进行分离和检测，再与标准品进行比较，可以得出乳铁蛋白的含量。
二、乳铁蛋白结构的评测方法：1. 紫外光谱法：通过测量乳铁蛋白样品在紫外光下的吸光度变化，推断出乳铁蛋白的二级结构和三级结构。
2. 红外光谱法：通过测量乳铁蛋白样品在红外光谱范围内的吸收峰位和强度，可以推测出乳铁蛋白分子中的化学键和官能团。
3. 核磁共振谱法：通过测量乳铁蛋白样品在核磁共振仪中的信号，可以得到乳铁蛋白的原子组成和分子结构。
三、乳铁蛋白功能的评测方法：1. 铁离子结合能力评测：通过将乳铁蛋白与含有不同浓度铁离子的溶液接触，测量其对铁离子的结合能力，从而评估乳铁蛋白的铁离子结合能力。
2. 抗氧化活性评测：通过测量乳铁蛋白样品对活性氧自由基的清除能力，评估乳铁蛋白的抗氧化活性。
3. 免疫调节活性评测：通过观察乳铁蛋白样品对免疫反应的影响，评价乳铁蛋白的免疫调节活性。
四、乳铁蛋白质量的评测方法：1. 蛋白质含量测定：通过测量乳铁蛋白样品中的总蛋白质含量来评估其质量。
2. 脂肪含量测定：通过测量乳铁蛋白样品中的脂肪含量，评估其杂质含量。
3. 细菌检测：通过培养乳铁蛋白样品中的细菌，评估其卫生质量和微生物污染情况。
综上所述，乳铁蛋白的评测方法主要包括含量评测、结构评测、功能评测和质量评测。
这些评测方法可以帮助科学家们了解乳铁蛋白的质量、结构和功能，为乳铁蛋白的研究和应用提供科学依据。
随着科学技术的不断发展，评测方法也将不断更新和完善，以满足对乳铁蛋白质量的更精确评估需求。
牛乳铁蛋白多克隆抗体的制备、纯化及定量检测
酶 联 免 疫 吸 附 测 定 （ｅｎｚｙｍｅ—ｌｉｎｋ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒ— ｂｅｎｔ ａｓｓａｙ，ＥＬＩＳＡ）方 法 是 检 测 特 定 蛋 白质 的有 效 方 法 ，具 有 快 速 、灵 敏 、简便 、载 体 易 于 标 准 化 等 优 点 。ＥＬＩＳＡ方 法 结 合 十 二 烷 基 硫 酸 钠 一聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 （ｓｏｄｉｕｍ ｄｏｄｅｃｙｌ ｓｕｌｆａｔｅ—ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＳＤＳ—ＰＡＧＥ）可用 于 针 对 特 定 抗 原 的定 性 和定 量 检 测 。 利 用 此 种 方 法 检 测 生 鲜 乳 及 乳 制 品 中 的乳铁 蛋 白浓 度 需 要 用 到 相 应 的 乳 铁 蛋 白抗 体 ，而 Ｓｉｇｍａ公 司 出售 的 商 品 化 抗 体 价 格 昂贵 ，不 适 合 大批 量样 品 检 测 。因 此 ，本 试 验 通 过 免 疫 新 西 兰大 白兔 来 制 备 兔 抗 牛 乳 铁 蛋 白多 克 隆 抗 体 ，旨在 为 研 究 奶 牛 乳 铁 蛋 白 的 合 成 调 控 提 供 有 效 的试 验 材 料 。为 得 到 纯 度 较 高 、特 异 性 较 强 的抗 体 ，通 过 饱 和 硫 酸 铵 法 和 蛋 白 Ａ 树 脂 对 抗 血 清 进 行 纯 化 ，纯 化 后 得 到 的抗 体 用 ＥＬＩＳＡ 方 法 测 定其 效 价 以 及 与 乳 铁 蛋 白的 抑 制 率 ，以 期 为 定 量
（中国农 业科学 院北 京畜牧兽 医研究所 ，动物 营养学 国家重点实验 室 ，北 京 １００１９３）
摘 要 ：本 试 验 旨在 制备 高 纯度 和特 异 性 的 牛Байду номын сангаас 铁 蛋 白 多克 隆抗 体 ，为 鉴 定 并 定 量检 测 牛 奶 样
乳铁蛋白含量标准
乳铁蛋白含量标准
乳铁蛋白是一种重要的营养成分，它对人体健康有着重要的作用。
乳铁蛋白含量标准是指乳制品中乳铁蛋白的含量符合国家标准
的要求，保证产品质量和安全。
本文将介绍乳铁蛋白的作用、标准
要求以及检测方法，希望能对相关人士有所帮助。
首先，乳铁蛋白是一种重要的铁载体蛋白，它能够帮助人体吸
收铁元素，增强免疫力，促进生长发育，对婴幼儿和孕妇尤为重要。
因此，乳制品中乳铁蛋白的含量标准受到了广泛关注。
根据国家标准，乳制品中乳铁蛋白的含量应当符合一定的要求。
具体来说，牛奶中乳铁蛋白的含量应当不低于每升80mg，奶粉产品
中乳铁蛋白的含量应当不低于每100g 4mg。
这些标准的制定是为了
保证乳制品中乳铁蛋白的含量达到营养需求，确保产品质量和安全。
那么，如何检测乳制品中乳铁蛋白的含量呢？目前，常用的检
测方法主要包括免疫测定法、色谱法和质谱法等。
其中，免疫测定
法是一种常用的快速检测方法，通过专门的试剂盒可以快速准确地
检测出乳制品中乳铁蛋白的含量，具有操作简便、准确性高的特点。
在生产过程中，生产企业应当严格按照国家标准要求，对乳制
品中乳铁蛋白的含量进行检测，并确保产品符合标准要求。
同时，
消费者在购买乳制品时，也应当注意查看产品标签，选择符合标准
要求的产品，以保证乳铁蛋白的摄入量符合营养需求。
总之，乳铁蛋白含量标准是保证乳制品质量和安全的重要依据，对于生产企业和消费者来说都具有重要意义。
希望本文所介绍的内
容能够对相关人士有所帮助，促进乳制品行业的健康发展。
SDS-PAGE法对乳及乳制品中主要蛋白的定性和定量分析
SDS-PAGE法对乳及乳制品中主要蛋白的定性和定量分析作者：***来源：《食品界》2022年第03期嬰幼儿配方奶粉是以母乳为标准，选自优质乳牛的奶源，对牛奶的主要蛋白质成分调整，使其最大限度地接近母乳，从而更适合婴儿的肠胃吸收和营养需求。
牛乳中的蛋白质主要分为酪蛋白和乳清蛋白两个重要组成部分，其中酪蛋白占乳总蛋白含量约80%，酪蛋白主要包含αs1-酪蛋白、αs2-酪蛋白、β-酪蛋白和Ƙ-酪蛋白四种蛋白质，分别占总酪蛋白的比例为4：1：4：1，乳清蛋白占乳总蛋白含量约20%，乳清蛋白主要由α-乳白蛋白（Q-LA）、β-乳球蛋白（B-LG）、免疫球蛋白（Ig）和牛血清蛋白（BSA）组成，分别占总乳清蛋白的5：2：8：5。
其中，α-乳白蛋白含有丰富的色氨酸，能够促进婴儿的神经发育，易被肠道消化吸收，且不易引起婴儿过敏。
为了使婴儿配方奶粉的营养成分更接近母乳，通常会特别添加α-乳白蛋白，且通过调节其他蛋白质的比例，为婴儿提供更健康营养的食品。
目前对牛乳中蛋白质含量检测的方法较多，包括凯氏定氮法、SDS-PAGE电泳法、双缩脲法、分光光度法、高效液相色谱法等。
凯氏定氮法主要用于乳品中总蛋白的含量测定，其他方法不能够实现不同种类蛋白质的有效分离，高效液相色谱虽然检测精确度较高，但存在检测成本高、样品前处理麻烦、不能同时测定多种蛋白质含量等缺点。
本研究旨在通过方法优化，获得操作简单、成本低，能够实现同时测定多种乳及乳制品中主要蛋白质的检测方法，为调整婴幼儿配方奶粉中主要酪蛋白和乳清蛋白的比例提供技术参考。
1. 材料与方法1.1 仪器与设备凝胶电泳仪（美国伯乐BIO-RAD公司）;凝胶成像分析仪（美国伯乐BIO-RAD公司）;双垂直电泳槽（美国伯乐BIO-RAD公司）;MO10型定轨摇床（德国LABSTAR的公司）。
1.2 材料与试剂α-酪蛋白标准品（sigma公司，纯度≥70%）;β-酪蛋白标准品（sigma公司，纯度≥98%）;κ-酪蛋白标准品（sigma公司，纯度≥70%）;α-乳白蛋白（sigma公司，纯度≥85%）;β-乳球蛋白（sigma公司，纯度≥90%）;标准电泳蛋白Maker（sigma公司，6.5-200ku）;鲜牛乳;婴幼儿配方奶粉。
牛乳铁蛋白多克隆抗体的制备、纯化及定量检测
牛乳铁蛋白多克隆抗体的制备、纯化及定量检测王建;郝丽媛;魏婧雅;孙鹏【摘要】This study aimed at preparing polyclonal antibody against lactoferrin in milk with high purity and specificity to provide experimental materials for the identification and quantification of lactoferrin synthesized in milk and mammary gland. Four healthy New Zealand white rabbits were immunized with bovine lactoferrin and challenged again after 4 weeks. Thereafter,the rabbits were immunized once every 2 weeks until antibody titer was desirable. Then the blood was collected from the heart and the serum was obtained. The antibody was puri-fied by the saturated ammonium sulfate method and protein A resin. The sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis(SDS-PAGE)and Western-blot were used to identify the purity and specificity of the puri-fied antibody. Antibody titer was determined and the curve of antibody inhibition was obtained. Finally, we used the obtained antibody to quantitatively determine lactoferrin in commercial liquid milk, milk powder and the homogenate of mammary gland tissue of dairy cows. The results showed that the obtained rabbit anti-bovine lactoferrin polyclonal antibody had high purity and specificity, the antibody concentration was 11.02 mg/mL, and the titer was 1:128 000;lactoferrin concentration in mammary gland tissue of dairy cows was 16.13 μg/g, that in commercial liquid milk was close to 0, and that in milk powder was 5.28 μg/g. In conclusion, lacto-ferrin polyclonal antibody with high purity and specificity was prepared bysaturated ammonium sulfate method and protein A resin in the present study, which can be used to identify lactoferrin in products like milk.%本试验旨在制备高纯度和特异性的牛乳铁蛋白多克隆抗体,为鉴定并定量检测牛奶样品中及奶牛乳腺组织中合成的乳铁蛋白提供试验材料.选用4只健康新西兰大白兔,初次免疫乳铁蛋白4周后进行加强免疫,每2周加强免疫1次,待血清达到抗体效价后,对兔进行心脏采血并分离血清,利用饱和硫酸铵法和蛋白A树脂纯化抗体,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western-blot)法分别用于鉴定纯化后抗体的纯度和特异性.测定纯化后抗体效价,并绘制抗体抑制曲线.最后利用所得抗体对市售液态奶、奶牛乳腺组织匀浆液、奶粉样品中的乳铁蛋白进行定量检测.结果表明,本试验制备的兔抗牛乳铁蛋白多克隆抗体纯度较高、特异性较强,抗体浓度为11.02 mg/mL,效价达到1:128000;采用该抗体测定的乳腺组织样品中乳铁蛋白浓度为16.13 μg/g,液态奶中接近于0 μg/g,奶粉中为5.28 μg/g.总之,本试验采用经过饱和硫酸铵法和蛋白A树脂2步纯化后得到了纯度较高、特异性较强的兔抗牛乳铁蛋白多克隆抗体,可以用于牛奶等产品的乳铁蛋白鉴定.【期刊名称】《动物营养学报》【年(卷),期】2018(030)001【总页数】7页(P100-106)【关键词】乳铁蛋白;多克隆抗体;抗体纯化【作者】王建;郝丽媛;魏婧雅;孙鹏【作者单位】中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,动物营养学国家重点实验室,北京100193;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,动物营养学国家重点实验室,北京100193;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,动物营养学国家重点实验室,北京100193;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,动物营养学国家重点实验室,北京100193【正文语种】中文【中图分类】S852.2近年来，人们对乳品质的要求越来越高，乳蛋白作为衡量乳品质的重要指标，其合成的营养调控已经成为奶牛营养学研究的热点。
婴儿乳粉中的乳铁蛋白检测研究进展
目 前， 市 场 上 的 婴 幼 儿 乳 粉 质 量 参差不齐，由于乳铁蛋白价格昂贵， 很多不良商家出产的乳粉中添加量远 远低于标示水平，甚至标示添加却根 本没有添加却以高昂的价格欺骗消费 者。由于我国没有关于婴幼儿乳粉中 乳铁蛋白检测的国家标准，导致管控 更加困难，造成市场乱象。
市售的婴幼儿乳铁蛋白产品中到 底含不含乳铁蛋白，含量有多少，是 否还有活性是广大消费者关心的问题， 亦是食品质量安全相关负责人员需要 去解决的问题。目前，报道的乳粉中 乳铁蛋白检测方法包括酶联免疫法、 高效毛细管电泳法、生物传感测定法、 高效液相色谱法、高效液相 - 质谱联用 法等。
1 酶联免疫法
酶联免疫法是一种基于抗原抗体 特异性反应的检测方法，具有反应灵 敏、特异性强等优点。在微孔板中包 被抗乳铁蛋白抗体（一抗），加入目 标物乳铁蛋白后，乳铁蛋白与一抗结 合，再加入乳铁蛋白抗体（二抗）与 之形成夹心结构，最后加入显色剂， 利用酶标仪测定特定波长的吸光度值， 其吸光度值与乳铁蛋白含量成正比， 可绘制标准曲线达到定量检测样品中 乳铁蛋白浓度的目的。酶联免疫法虽 然灵敏度高，但通常需要进行多重的 孵化、洗涤和清洗，操作较为繁琐， 且所用抗体及抗抗体制备不易，价格 昂贵，不适用于大批量的样品分析。
用高压直流电场作为驱动达到液相分 离的目的，具有操作简单、灵敏度较 高等优点，但需要解决毛细管壁对目 标物质乳铁蛋白的吸附导致的重复性 差的问题，且检测结果受样品复杂基 质的影响较大。
3 表面等离子共振技术
以临界角入射到不同折射率的两 种金属介质界面的入射光线可以引起 金属产生自由的电子共振，电子吸收 光能量使反射光大幅减弱，能够使反 射光在一定角度内完全消失的入射角 称为 SPR 角。SPR 角随介质表面折射 率变化而变化，而折射率的变化又与 介质表面结合的分子质量成正比，因 此可以通过对生物反应过程中 SPR 角 的动态变化获取生物分子之间相互作 用的特异信号达到检测的目的。基于 表面等离子体共振技术的生物传感免 疫测定法，无需进行标记便可实时、 自动测定婴儿配方奶粉中低含量乳铁 蛋白，但实验温度及样品组成影响测 定结果，仪器设备造价也较为昂贵。
高效液相色谱法测定乳品中乳铁蛋白的含量
高效液相色谱法测定乳品中乳铁蛋白的含量岳虹;刘春霞;吕海燕;李素琴;赵贞;李翠枝【摘要】建立乳品中乳铁蛋白高效液相色谱的测定方法.采用pH值为7.0磷酸盐缓冲溶液做为提取剂,C18色谱柱分离,不同浓度的乙腈-0.5 mol/L的氯化钠溶液-三氟乙酸的二元系统进行梯度洗脱.每100 g奶粉(或每100 mL液态奶)中乳铁蛋白添加量为5～10 mg时,回收率大于90％.定量限为0.5 mg/100 g.该方法具有结果准确,操作简便,重复性好等优点,可用于乳品中乳铁蛋白的检测.【期刊名称】《乳业科学与技术》【年(卷),期】2014(037)004【总页数】4页(P18-21)【关键词】高效液相色谱法;乳铁蛋白;肝素免疫亲和柱【作者】岳虹;刘春霞;吕海燕;李素琴;赵贞;李翠枝【作者单位】内蒙古伊利实业集团股份有限公司,呼和浩特 010010;内蒙古伊利实业集团股份有限公司,呼和浩特 010010;内蒙古伊利实业集团股份有限公司,呼和浩特 010010;内蒙古伊利实业集团股份有限公司,呼和浩特 010010;内蒙古伊利实业集团股份有限公司,呼和浩特 010010;内蒙古伊利实业集团股份有限公司,呼和浩特010010【正文语种】中文【中图分类】TS252.7乳铁蛋白（lactotransferrin，LF），为运铁蛋白中的一种多功能糖蛋白，在1939年从动物乳汁中发现[1-3]。
乳铁蛋白是人体免疫系统的组分之一，具有广谱抗菌、抗氧化、抗癌、调节免疫系统等特别强大生物功能[4-6]，被认为是一种极具开发潜力的食品和饲料添加剂[7-13]，因而建立准确高效的乳铁蛋白的检测方法成为至关重要的任务。
乳铁蛋白分析常存在分离度低，平行性差，检测结果不准确等问题[14-16]。
本实验建立了一种测定乳品中乳铁蛋白含量的新方法，磷酸氢二钠和磷酸二氢钠的缓冲溶液为提取剂[17]，C18色谱柱进行分离，采用紫外检测器检测，灵敏度高，检测结果准确，回收率精密度良好。
乳及乳制品中牛乳铁蛋白含量测定方法比较研究
乳及乳制品中牛乳铁蛋白含量测定方法比较研究陈柔含，韩奕奕，马颖清，刘 洋，丰东升*上海市农产品质量安全中心曁农业农村部食品质量监督检验测试中心（上海），上海 201708摘 要：[目的]探讨两种不同检测方法测定乳与乳制品中牛乳铁蛋白的含量及应用研究。
[方法]对比高效液相色谱（HPLC）法和超高效液相色谱串联质谱（UPLC- MS/MS）法测定生鲜乳、调制乳、超高温瞬时灭菌乳、含乳饮料和奶粉样品等乳及乳制品中牛乳铁蛋白的含量，并对测定结果进一步比较和分析原因。
[结果]两种测定方法均具有较高回收率和较优的重现性，但两者方法对实际样品的测定结果具有一定差异性。
[结论]HPLC法测定牛乳铁蛋白是通过肝素亲和柱纯化富集乳铁蛋白，测定的是非热变性牛乳铁蛋白的含量；而UPLC-MS/MS法测定的是热变性和非热变性牛乳铁蛋白的含量，不受热处理加工工艺的影响。
实验室可针对不同检测目的选择不同方法进行定量研究。
关键词：牛乳铁蛋白；液相色谱；质谱；乳及乳制品文章编号：1671-4393（2022）09-0095-07 DOI:10.12377/1671-4393.22.09.190 引言牛乳铁蛋白（Bovine Lactoferrin，bLF）是牛初乳中非常重要的铁结合型大分子糖蛋白，其分子量为78~80 kDa。
由于其氨基酸序列中含有大量的精氨酸与赖氨酸，故其等电点在7.8~8.2，是一种呈碱性的蛋白质[1]，主要由动物的乳腺上皮细胞分泌及表达。
乳铁蛋白（LF）与铁转运和储存密切相关，且对免疫功能系统的调节具有正向作用，同时拥有广谱抗菌性、抗病毒、抗癌、抗氧化等强大的生物功能，因此被媒体报道为“奶黄金”。
在自然界中，人的母乳中LF的含量较高，在1.0~3.0 mg/mL的范围内[2]，而牛初乳中的含量相对较低。
因此商业上很多基金项目：上海市科委项目“乳及乳制品中乳铁蛋白等活性物质检测技术研究及其应用”（19391902700）作者简介：陈柔含（1996-），女，浙江台州人，硕士，助理畜牧师，研究方向为食品营养品质检测技术研究；韩奕奕（1972-），女，上海人，硕士，正高级畜牧师，研究方向为食品营养品质检测技术研究；马颖清（1984-），女，上海人，硕士，畜牧师，研究方向为食品营养品质检测技术研究；刘 洋（1994-），女，河北承德人，硕士，助理畜牧师，研究方向为食品营养品质检测技术研究。
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RPHPLC 方法制备与仪器条件
3 净化 肝素亲和层析柱先用5 mL磷酸氢二钠溶液平衡，处理完毕后加入样 品提取液，待样品液体完全流出后，再用10 mL磷酸氢二钠溶液淋洗，弃 去全部流出液。最后用3 mL磷酸氢二钠-氯化钠溶液洗脱，收集全部流出 液，用磷酸氢二钠-氯化钠溶液定容至3 mL。将收集溶液过0.45μm水相 滤膜，供液相色谱-DAD检测分析用。 4 仪器参考条件 色谱柱： C4，5 μm，300A。（孔径），250mm×4.6 mm（内径）或 相当者。
辐射状免疫扩散法（radial immunodiffusion，RID）易操作但精度
低; 酶联免疫法（ELISA）灵敏度高但易受干扰重复性差;
表面等离子共振技术（surface plasmon resonance，SPR）实时且自 动化但易受样品组分和温度干扰;
反相高效液相色谱法（RP-HPLC）分离度不足且灵敏度低; 毛细管电泳法（CE）重现性差，难稳定。
反相液相色谱方法
原理： 试样中的乳铁蛋白经磷酸盐缓冲液提取, 提取液经肝素亲和柱净化后,采用反相高效 液相色谱柱分离，以二极管阵列检测器于 280nm处检测，外标法定量。
RPLC 方法制备与提取
1 试样制备 ① 液体试样：样品从冰箱中取出放置至室温，准确称取10 g(精确至0.0001 g)试 样（试样中含乳铁蛋白0.1-10 mg）于50 mL离心管中，待提取。 ② 固体试样：准确称取1 g（精确至0.0001 g）试样（试样中含乳铁蛋白0.1～10 mg）于50 mL烧杯中，待提取。 2 提取 ① 液体试样：试样中加入10 mL磷酸氢二钠溶液，涡旋振荡器振荡2 min，于室温 下3000 r/min离心10 min。将上层脂肪层和下层沉淀层之间的液体小心转移到另 一50 mL离心管中，再向原离心管中加入5 mL磷酸氢二钠溶液重复操作一次，合并 两次液体作为样品提取液备用。 ② 固体试样：试样中加入5 mL温热的磷酸氢二钠溶液（温度不超过50℃），搅拌 使样品完全溶解，将样品全部转入50 mL具塞塑料离心管中，再向原烧杯中加入5 mL磷酸氢二钠溶液，合并两次液体。漩涡振荡器振荡2 min，于室温下3000 r/min 离心10 min。将上层脂肪层和下层沉淀层之间的液体小心转移到另一50 mL离心管 中，再向原离心管中加入5 mL磷酸氢二钠溶液重复操作一次，合并两次液体作为 样品提取液备用。
3. MRM设定
TQ-MRM检测
本方法建立的主要内容
一. 特异肽段的寻找 (蛋白质质谱数据库的查询与应用） 二. 色谱和质谱条件的优化与确定（TQ的MRM的应用） 三. 酶解条件的优化 四. 特异肽段的特异性验证与确认（Q-TOF的全扫描）
五. 内标特异肽的设计与合成
六. 同位素内标物的设计与合成
bovine2 APRKNVRWCTISQPEWFKCRRWQWRMKKLGAPSITCVRRAFALECIRAIAEKKADAVTLD human2 GRRRSVQWCAVSQPEATKCFQWQRNMRKVRGPPVSCIKRDSPIQCIQAIAENRADAVTLD Consensus r v wc sqpe kc wq m k p c r ci aiae adavtld bovine2 GGMVFEAGRDPYKLRPVAAEIYGTKESPQTHYYAVAVVKKGSNFQLDQLQGRKSCHTGLG human2 GGFIYEAGLAPYKLRPVAAEVYGTERQPRTHYYAVAVVKKGGSFQLNELQGLKSCHTGLR Consensus gg eag pyklrpvaae ygt p thyyavavvkkg fql lqg kschtgl bovine2 RSAGWIIPMGILRPYLSWTESLEPLQGAVAKFFSASCVPCIDRQAYPNLCQLCKGEGENQ human2 RTAGWNVPIGTLRPFLNWTGPPEPIEAAVARFFSASCVPGADKGQFPNLCRLCAGTGENK Consensus r ag w p g lrp l wt ep ava ffsascvp d pnlc lc g gen bovine2 CACSSREPYFGYSGAFKCLQDGAGDVAFVKETTVFENLPEKADRDQYELLCLNNSRAPVD human2 CAFSSQEPYFSYSGAFKCLRDGAGDVAFIRESTVFEDLSDEAERDEYELLCPDNTRKPVD Consensus ca s s e pyf y sga fkc l dga gd vaf e tvfe l a rd yellc n r pvd bovine2 AFKECHLAQVPSHAVVARSVDGKEDLIWKLLSKAQEKFGKNKSRSFQLFGSPPGQRDLLF human2 KFKDCHLARVPSHAVVARSVNGKEDAIWNLLRQAQEKFGKDKSPKFQLFGSPSGQKDLLF Consensus fk chla vpshavvarsv gked iw ll aqekfgk ks fqlfgsp gq dllf bovine2 KDSALGFLRIPSKVDSALYLGSRYLTTLKNLRETAEEVKARYTRVVWCAVGPEEQKKCQQ human2 KDSAIGFSRVPPRIDSGLYLGSGYFTAIQNLRKSEEEVAARRARVVWCAVGEQELRKCNQ Consensus kd sa gf r p ds lylgs y t nlr eev ar rvvwcavg e kc q bovine2 WSQQSGQNVTCATASTTDDCIVLVLKGEADALNLDGGYIYTAGKCGLVPVLAENRKSSKH human2 WSGLSEGSVTCSSASTTEDCIALVLKGEADAMSLDGGYVYTAGKCGLVPVLAENYKSQQS Consensus ws s vtc astt dci lvlkgeada ldggy ytagkcglvpvlaen ks bovine2 SSLD..CVLRPTEGYLAVAVVKKANEGLTWNSLKDKKSCHTAVDRTAGWNIPMGLIVNQT human2 SDPDPNCVDRPVEGYLAVAVVRRSDTSLTWNSVKGKKSCHTAVDRTAGWNIPMGLLFNQT Consensus s d cv rp egylavavv ltwns k kkschtavdrtagwnipmgl nqt bovine2 GSCAFDEFFSQSCAPGADPKSRLCALCAGDDQGLDKCVPNSKEKYYGYTGAFRCLAEDVG human2 GSCKFDEYFSQSCAPGSDPRSNLCALCIGDEQGENKCVPNSNERYYGYTGAFRCLAENAG Consensus gs c fde fs qs cap g d p s l ca lc gd qg kcvpns e yygytgafrclae g bovine2 DVAFVKNDTVWENTNGESTADWAKNLNREDFRLLCLDGTRKPVTEAQSCHLAVAPNHAVV human2 DVAFVKDVTVLQNTDGNNNEAWAKDLKLADFALLCLDGKRKPVTEARSCHLAMAPNHAVV Consensus dv af vk tv nt g wak l df llcldg rkpvtea schla apnhavv bovine2 SRSDRAAHVKQVLLHQQALFGKNGKNCPDKFCLFKSETKNLLFNDNTECLAKLGGRPTYE human2 SRMDKVERLKQVLLHQQAKFGRNGSDCPDKFCLFQSETKNLLFNDNTECLARLHGKTTYE Consensus sr d kqvllhqqa fg ng cpdkfclf setknllfndntecla l g tye bovine2 EYLGTEYVTAIANLKKCSTSPLLEACAFLT human2 KYLGPQYVAGITNLKKCSTSPLLEACEFLR Consensus ylg yv i nlkkcstsplleac fl
配方粉与原料中的牛乳铁蛋 白的定量测定
— 同位素稀释酶解串联液质联用法
浙江于乳铁蛋白
乳铁蛋白（Lactoferrin, LF）又称乳转铁蛋白，是一种天然
的、具有免疫功能的球状单体糖蛋白，属于转铁蛋白家族的一
员。 发 分 命 现：1939年 Sorensen 等在动物乳中发现； 1960年 Montreuij & Johansonb 在人乳中发现； 离：1959年 Groves 用色谱得到纯品； 名：1961年 Blanc 和 Isliker 从人乳中分离获得并正
式命名为乳铁蛋白。
结构与形式
结 构：牛乳铁蛋白分子量约 80 KD，689 个氨基酸折叠成两个叶球，四个 区域，可结合两个Fe3+，pI=8.7 存在形式：富含铁形式的 holo-lactoferrin 不含铁形式的 apolactoferrin
牛 乳 铁 蛋 白 与 人 乳 铁 蛋 白 一 级 结 构 比 较
反相色谱的最佳分离
100μg/mL LF 标准品
配方粉
牛
奶
反相色谱分离
4. 同位素内标 设计与合成
数据库搜索比对
酶解蛋白质谱质检测平台
1. 酶解条件优 化
Q-TOF扫描分析
内
标
变性 还原
酶 解
2. 寻找特异肽
合成目标蛋白特异肽 内 标 及其同位素标记肽 目标蛋白
目标蛋白
目标蛋白与内标
多
肽
子离子扫描
在泌乳期间，乳铁蛋白含量随着泌乳时间的不同而发生
变化，如人初乳中乳铁蛋白可达 6-14 mg/mL，常乳期降至1 mg/mL。在乳清蛋白产品中，其浓度可高达30-100 mg/mL。
母乳与牛乳中乳铁蛋白的比较
生物学功能