9种氨基酸UPLC分析方法(异硫氰酸苯酯柱前衍生法)
高效液相色谱柱前衍生化法测定不同产地灵芝中氨基酸的含量
高效液相色谱柱前衍生化法测定不同产地灵芝中氨基酸的含量朱龙平1苗慧1陈建文1（1.中山大学药学院，广东广州5100062.）摘要：有关灵芝中氨基酸含量测定的报道相对较少，且大多数都是用氨基酸分析仪来测定。
本方法用异硫氰酸苯酯为衍生化试剂，处理灵芝样品后用高效液相色谱法测定了不同产地灵芝中六种氨基酸的含量，方法简便可靠，适用于灵芝中氨基酸含量的测定。
关键词：灵芝，高效液相色谱法，柱前衍生化，氨基酸灵芝又称灵芝草、神芝、芝草、仙草、瑞草，是担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌赤芝（G．lucidum·karst）和紫芝（G．japonicrn L loyd）的总称。
灵芝作为拥有数千年药用历史的中国传统珍惜药材，具备很高的药用价值，现代药理学研究证实，灵芝对于增强人体免疫力，调节血糖，控制血压，辅助肿瘤放化疗，保肝护肝，促进睡眠等方面均具有显著疗效。
市面上灵芝类保健品种类繁多，目前国内的每年销售额约十几亿元人民币。
笔者对无限极（中国）公司提供的不同产生的灵芝样品中氨基酸含量进行分析，为更好的利用灵芝提供一些参考。
1实验部分1.1仪器：岛津LC-20A高效液相色谱仪，梅特勒AG285分析天平。
1.2试药灵芝，无限极（中国）有限公司提供，产地如下：经中山大学药学院生药学教研室杨得坡教授鉴定为多孔菌科灵芝属真菌紫芝（G．japonicrn L loyd）。
，氨基酸对照品门冬氨酸，谷氨酸，丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸。
色谱纯乙腈（百灵威），异硫氰酸苯酯（阿拉丁），三乙胺，正己烷等均为分析纯，高纯水实验室自制。
2.实验方法与结果2.1色谱条件色谱柱为venusil Mp柱（250mm×4.6mm，5u m），流动相A为0.1mol/L醋酸钠溶液-乙腈（93:7），流动相B为乙腈-水（8:2）流速为1ml/min梯度洗脱，柱温箱40℃，进样体积2uL，检测波长254nm。
洗脱梯度见表1表1流动相洗脱梯度t（min）A（%）B（%）0 100 013 93 723 77 2329 65 3535 60 4040 0 10045 0 10047 100 02.2对照品溶液分别精密称取缬氨酸、丙氨酸、谷氨酸、门冬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸等对照品约6.0mg，置5ml容量瓶中用纯水稀释并定容至刻度。
柱前衍生高效液相色谱法测定灵芝孢子粉中氨基酸的含量
柱前衍生高效液相色谱法测定灵芝孢子粉中氨基酸的含量殷娇阳1，阎 姝2，田书霞2摘要 目的：建立用于测定灵芝孢子粉中氨基酸含量的柱前衍生化高效液相色谱方法。
方法：采用邻苯二甲醛（OPA）和9-氯甲酸芴甲酯（FMOC）联用对灵芝孢子粉中的氨基酸进行衍生，色谱条件为：Advance Bio AAA（100 mm×4.6 mm，2.7 μm）色谱柱，流动相A为0.01 mol/L磷酸氢二钠和0.01 mol/L硼酸钠溶液，pH值为8.2±0.1，流动相B为甲醇︰乙腈︰水（45︰45︰10）。
流速：0.8 mL/min，柱温：45 ℃，进样量：10 μL，检测波长：338 nm和262 nm。
结果：灵芝孢子粉中检测的17种氨基酸在60 min内分离良好；在一定范围内线性关系良好(r≥0.999，n=6)；加样回收率为95.42%~99.38%，实验方法的精密度、重复性和稳定性的相对标准偏差（RSD）均小于3.0%。
结论：经方法学验证显示，本研究所建立的实验方法适用于灵芝孢子粉中17种氨基酸的含量测定。
关键词：灵芝孢子粉；高效液相色谱法；氨基酸；衍生化中图分类号：R282 文献标识码：A 文章编号：1007-6948(2021)02-0182-07doi：10.3969/j.issn.1007-6948.2021.02.004Assay of Amino Acids in Ganoderma Lucidum Spore Powder by Pre-column Derivatization HPLC YIN Jiao-yang, YAN Shu, TIAN Shu-xia School of Pharmacy, Tianjin Medical University, Tianjin (300070), China Abstract: Objective To establish a pre-column derivatization-high performance liquid chromatography method for the determination of amino acids in ganoderma lucidum spore powder. Methods The amino acids in ganoderma lucidum spore powder were derivatized with o-phthalaldehyde (OPA) and 9-fluorenylmethoxycarbonyl chloride(FMOC). The chromatographic conditions were Advance Bio AAA (100 mm×4.6 mm, 2.7μm) column, and Mobile phase A was 0.01 mol/L disodium hydrogen phosphate and 0.01 mol/L sodium borate solution (pH: 8.2±0.1). Mobile phase B was methanol: acetonitrile: water (45:45:10), flow rate was 0.8 mL/min, the column temperature was 45 ℃, the injection volume was 10 μL and the detection wavelength was fixed at 338 nm and 262 nm. Results 17 amino acids in Ganoderma lucidum spore powder were separated satisfactorily in 60 minutes. All the components exhibited good linear correlation in the given concentration range (r≥0.999, n=6). The recovery rate of the sample was between 95.42% and 99.38%. The RSD of the precision, repeatability and stability of the experimental method were all less than 3.0%. Conclusion The methodological verification shows that the established experimental method is suitable for the determination of 17 amino acids in ganoderma spore powder.Key words: Ganoderma lucidum spore powder; HPLC; amino acid; derivatization灵芝为多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥子实体，灵芝药用在我国已有几千年的历史，被历代医药家视为滋补强壮、扶正固本的神奇珍品[1]。
UPLC-Q-TOF快速测定常见氨基酸含量
UPLC-Q-TOF快速测定常见氨基酸含量王洋;武利庆;杨屹【摘要】结合外标法或同位素稀释质谱法,建立UPLC-Q-TOF快速定量氨基酸分析方法.在无离子对试剂及衍生化情况下,实现对样品中氨基酸的快速测定.采用外标法测定时,14种常见氨基酸在其相应线性范围内,r2为0.953～0.999,LOD为0.001～0.080 mg/g,CV为1.4％～9.8％;采用Q-TOF外标法定量时,CV为1.5％～8.0％,误差为-9.1％～40％;采用同位素稀释质谱法测定各氨基酸浓度时,CV为1.4％～3.8％,误差为-3.4％～3.7％.本方法可在2min之内完成14种氨基酸的分离和定量,大大缩短分析时间.同时由于采用高分辨的飞行时间质谱,避免检测时离子间的相互干扰,提高测定结果的准确性,可用于蛋白质标准物质均匀性、稳定性检验及定量.【期刊名称】《中国测试》【年(卷),期】2014(040)005【总页数】4页(P70-73)【关键词】氨基酸;UPLC-Q-TOF;定量;外标法;同位素稀释;质谱【作者】王洋;武利庆;杨屹【作者单位】北京化工大学,北京100029;中国计量科学研究院,北京100013;北京化工大学,北京100029【正文语种】中文【中图分类】O517;O629.73;O657.63;TM930.114氨基酸是蛋白质的基本组成单元，氨基酸分析是经典的蛋白质定量方法，准确测定样品中氨基酸含量是蛋白质准确定量的前提。
目前，氨基酸的分析检测方法主要有反相高效液相色谱法（RP-HPLC）[1]、毛细管电泳-质谱法（CE-MS）[2]、气相色谱-质谱法（GC-MS）[3]以及液相色谱-质谱联用法（LC-MS）[4]。
在采用RP-HPLC和CE作为分离手段时，往往需要将待测样品衍生、转化为具有紫外可见吸收或能产生荧光的物质，以便于检测。
在采用GC时，也要在柱前将待测样品衍生为易挥发性物质才可以[5]。
而衍生试剂不稳定、衍生化操作繁琐，衍生出的副产物会干扰分析，具有重现性差、准确度低等缺陷[6]。
异硫氰酸苯酯柱前衍生化反相高效液相法同时测定18种氨基酸
文对其实验过程进行了改进， 不用常规的两次蒸发， 仅以正己烷除去干扰因素， 过滤后直接进样分析， 从 而简化了实验步骤， 既节约了时间， 又降低了费用。 将该方法应用于测定含无机离子及小分子肽 （相对 分子质量小于 ） 、 氨基酸、 核苷酸、 低聚糖、 脂类 % " " " 等小分子有机物的小牛血去蛋白注射液中的游离氨 基酸， 结果令人满意。
# 结果
# " ! 对照品混合溶液和实际样品的分离结果 对照品混合溶液和小牛血去蛋白注射液中游离 氨基酸的色谱分离结果见图%和图0 。
图 ! 异硫氰酸苯酯衍生化法测定! %种氨基酸对照品混合溶液的色谱图 & ’ " ! ) * + , . / , + . -, 0 ! %. ’ 1 ,. 2 ’ 3 4 / . 1 3 . + 3 4 3 5 + ’ 6 . / ’ 7 5 38 ’ / *9 * 5 1 ; ’ 4 , / * ’ , 2 . 1 . / 5 ( ( : : ： （ ） ； ： ： ： * D C R B L . 9 D B @ < 7 C * 1! B， 0 & &B BE F ? GB B7 H I H : D C R B L S 8 B 8 9 @ S R 9 8 J 5K； I 8 S 8 : S 7 D LT @ ( 8 C 8 L S = 0 1 FL B； B D U 7 C = @ < 8 8 C R 8 L S’， ) Q ) % 5 ／ ； ， ； ： ， ； ， ； J P@ : 8 S D L 7 S 9 7 C 8 7 L& ? %B D C-< D I 7 R B@ : 8 S @ S 88 C R 8 L S2 5 & P@ : 8 S D L 7 S 9 7 C 8 7 LT @ S 8 9C 7 L 8 @ 9Q 9 @ I 7 8 L S 8 C R S 7 D L& ? &B 7 L& P2 % JB 7 LN P2 0 J ， ； ， ； ， ； ， ； ， ； ， ； ： ／ B 7 L0 J P2 0 MB 7 LJ 1 P2 J 1B 7 LF & P2 F &B 7 L% & & P2 F 1B 7 L% & & P2 F NB 7 L& P2 V C D T9 @ S 8% ? &B -B 7 L H （’ ） ； （W ） ； （ ） ； （W ） ； （Y ） ； （’ ） ； （+ ） ； % H @ < @ 9 S 7 : @ : 7 I < 0 H C R S @ B 7 : @ : 7 I C R J H < 8 9 7 L 8 ! 8 9 F H C : 7 L 8 C 1 H = 7 < S 7 I 7 L 8 7 < G H @ 9 7 L 7 L 8 9 N H S = 9 8 D L 7 L 8 = 9 ) ) Q Q X X Q Q （ ） ； （ ） ； （ ） ； （ ） ； （ ） ； （ ） ； （ ） ； 5 H @ C @ L 7 L 8’ C @ M H 9 D C 7 L 8" 9 D % & H S 9 D < 7 L 8+ 9 % % H ( @ C 7 L 8Z @ C % 0 HB 8 S = 7 D L 7 L 8[ 8 S % J H : < S 8 7 L 8* < % F H 7 < D C 8 R : 7 L 86 C 8 % 1 H ) X X X X （） ； ； （" ） ； （+ ） ； （） 8 R % G H L D 9 C 8 R : 7 L 8 % N H = 8 L C @ C @ L 7 L 8 = 8 % 5 H S 9 S D = @ L 9 % M H C < 7 L 8 < H C 8 R : 7 L 8 ) X X ) ) ) X X
柱前衍生化RP—HPLC测定鸡内金中16种氨基酸的含量
柱前衍生化RP—HPLC测定鸡内金中16种氨基酸的含量采用酸水解法制备水解氨基酸样品溶液，以异硫氰酸苯酯（PITC）柱前衍生化后进行HPLC分析。
采用Ultimate Prime C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相A 0.1 mol·L-1醋酸钠溶液（调pH至6.5）-乙腈（93∶7），流动相B乙腈-水（8∶2）；流速1.0 mL·min-1；柱温40 ℃；检测波长254 nm；梯度洗脱。
氨基酸衍生溶液在36 h内保持稳定，16种氨基酸线性相关系数均大于0.999 5，加样回收率在98.01%～101.8%。
该方法操作简便，精密度和重复性良好，可用于鸡内金中16种水解氨基酸含量的测定。
标签：鸡内金；氨基酸；衍生化；异硫氰酸苯酯；高效液相色谱现代研究表明，鸡内金主要含有蛋白质、多种氨基酸、维生素和微量元素等。
氨基酸作为蛋白质的基本结构单位和生物代谢过程中的重要物质，是人体的必需营养成分之一。
笔者利用PITC柱前衍生化方法针对鸡内金中16种氨基酸类成分进行了测定。
1 材料Agilent HPLC1100系统：四元泵、真空在线脱气机、二极管阵列检测器（DAD）、Agilent ChemStation 工作站；BT25S電子天平（1/10万，北京赛多利斯科学仪器有限公司）；FE20 pH计（上海梅特勒-托利多仪器有限公司）。
16种氨基酸对照品，批号分别为L-天冬氨酸（Asp）110103，L-谷氨酸（Glu）110109，L-丝氨酸（Ser）120116，L-甘氨酸（Gly）120301，L-组氨酸（His）120112，L-精氨酸（Arg）101201，L-苏氨酸（Thr）120113，L-丙氨酸（Ala）120117，L-脯氨酸（Pro）100311，L-酪氨酸（Tyr）120201，L-缬氨酸（Val）120113，L-蛋氨酸（Met）110125，L-异亮氨酸（Ile）110801，L-亮氨酸（Leu）120117，L-苯丙氨酸（Phe）090712，L-赖氨酸（Lys）100423，以上对照品均购自上海友思生物技术有限公司，纯度均≥98%；10批鸡内金分别购买于安徽（1）、湖南（2）、浙江（3）、上海（4）、内蒙古（5）、广东（6）、江苏（7）、云南（8）、河北（9）、山东（10），由上海中医药大学修彦凤副教授鉴定为雉科动物家鸡G. gallus domesticus的干燥沙囊内壁。
AQC柱前衍生法在氨基酸分析测定中的应用
册 技术要 求 国际协 调会 （Ｃ 分 别 推荐 了 ８种 和 ７种 ＩＨ） 柱后 衍生 的氨 基酸 自动分 析仪 法 和柱前 衍 生 的高 效 液
的分 离效 果不 理想 。在填 料方 面 ， 过 实验 ， 经 笔者 推 荐
氨 基酸测定 方 法并 给 出指 导 性 的应 用 ， 析 方 法 包 括 使用 ３ ｍ粒度 的填 料 。 分
天津药学
Ｔａｊ Ｐ ａｍ ｃ ２ １ ｉ ｉ ｈ ｒ ａｙ ０ ０年 ｎｎ
第２ ２卷第 ５期
５ ｌ
综
述
Ａ ＱＣ 柱 前 衍 生 法 在 氨 基 酸 分 析 测 定 中 的 应 用
覃 婷婷 ， 白海娇 ， 黄哲 苏 ， 海生 李
（ 天津市药品检验所 ， 天津
摘 要工作中十分重要的技 术之一 ， 大多数氨基酸和胺类化合物无 吸收和荧光发 射特
征， 进行化学衍生化是提高其分析检测灵敏度 和特异性 的有效手段 ， 其中 ， Ｑ Ａ Ｃ柱前衍生法是 近几年广为接 受的方法 。本 文对 Ａ Ｃ柱前衍生法在 氨基 酸分 析测定 中的原理 、 Ｑ 影响因素及其应用情况进行综述。
稳定 ， 在室温及 干燥 条件下 ， 周 内几乎没有 变化 ， １ 且 有很强 的紫 外吸 收 ， 可用紫 外检 测器 检测 。 ２ Ａ Ｃ柱前 衍生 法测 定氨 基 酸的主 要 影响 因素 Ｑ ２ １ 色谱 柱 在设 定 的几种 梯度 洗 脱 条件 下 ， 过对 ． 经 国内外十几个品牌色谱柱的考查 ， 能够对近 ２ ０种 Ａ Ｃ Ｑ 氨基 酸衍 生物 有着 良好 分离性 能 的色 谱柱 包括 ： ％ 。 Ｗａ ｒ 公 司的 Ａ ｃ ｔｓ ｅ ｃｑ—Ｔ ｇ专用 柱 （ ． ｍ ０ｍｍ。 ２ 以下 ， 。 ａ ３ ９ｍ ｘ１ ５ ３ ｍ） Ｎ ｖ — ａ （ ． 、 ｏ ａ ｐ ｋＣ８ ３ ９ｍｍ×１ ０ｍ 、 ｙ ｅ ｙＣ８ ２ ３ ＡＱ Ｊ ５ ｍ） Ｓｍｍ ｔ ｌ ｒ ． Ｃ衍 生剂 （． ３ ９ ｍｍ ×１０ ｍ ５ ｍ） Ｋ ｏ ｓ Ｄ （ ． ｍ ×１ ０ 、 ｒｍａｉ Ｏ Ｓ ３ ９ ｍ ｌ ５ ２３ １ Ａ Ｃ的稳 定 性 ．． Ｑ
OPA-FMOC联用柱前衍生化法氨基酸类成分测定原理及其在药物分析中的应用
流动相梯度：
时间(min) 0.0 12.0 15.0 30.0 35.0 38.0 49.0 52.0
流动相B（%） 0 22 22 70 70
100 100
0
流速（ml·min-1） 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.5 1.5 1.0
每次实验前 要根据实际 情况，对梯 度进行微调
样品配制
单位： mg/mL
试验注意事项
流动相PH值必须精确调节至7.20±0.05
PH值 ，这样才能保证试验的可重复性
试验开始前，各泵一定要用纯水过度，
泵
特别是B泵（有机相），避免流动相中盐
的析出而损坏泵
衍生 试剂
衍生试剂稳定性较差，长时间放置后会 氧化变质，色谱峰增多，干扰检测。一 般在4℃下可以保存1周左右
OPA-FMOC联用柱前衍生化法
1986年惠普/安捷伦将OPA和FMOC衍生反应依次 结合，实现了氨基酸的全自动衍生、色谱分离和 检测。
让样品先与OPA试剂充分反应，将一级氨基酸全部 反应完全，接着样品中剩余的二级氨基酸再与 FMOC反应。
由于FMOC、FMOC衍生物和反应副产物比任何 OPA衍生物的疏水性都强，所以它们不会干扰任何 一级氨基酸的检测。
纯水 纯水 硼酸盐 OPA FMOC 样品
柱前自动衍生过程
从1号瓶中吸取0uL水
纯水 纯水 硼酸盐 OPA FMOC 样品
柱前自动衍生过程
从4号瓶吸取1uLOPA试剂
纯水 纯水 硼酸盐 OPA FMOC 样品
柱前自动衍生过程
从1号瓶中吸取0uL水
纯水 纯水 硼酸盐 OPA FMOC 样品
柱前自动衍生过程
纯水 纯水 硼酸盐 OPA FMOC 样品
异硫氰酸苯酯柱前衍生法测定复方氨基酸注射液(3AA)中氨基酸含量
异硫氰酸苯酯柱前衍生法测定复方氨基酸注射液(3AA)中氨基酸含量张莹;黄哲甦【摘要】目的:建立采用异硫氰酸苯酯柱前衍生化高效液相色谱法测定复方氨基酸注射液(3AA)的含量.方法:色谱柱:Diamonsil C18 (2)(250mm×4.6 mm,5μm)；流动相:A为0.1 mol/L醋酸钠溶液(pH 6.5)-乙腈(93:7)；B为乙腈-水(80:20)梯度洗脱,流速:1.0 ml/min；柱温:40℃；检测波长:254 nm.结果:各个氨基酸的浓度与其相应色谱峰面积的线性相关系数均达到0.999以上；各个氨基酸的浓度与其相应色谱峰面积呈良好的线性关系,回收率在98.5％～99.6％.结论:该方法适用于测定复方氨基酸注射液(3AA)的含量,具有准确、快速和灵敏度高等优点.【期刊名称】《天津药学》【年(卷),期】2013(025)004【总页数】4页(P17-20)【关键词】异硫氰酸苯酯;柱前衍生;高效液相色谱法;复方氨基酸注射液【作者】张莹;黄哲甦【作者单位】天津市药品检验所,天津300070;天津市药品检验所,天津300070【正文语种】中文【中图分类】R927.2复方氨基酸注射液(3AA)为复方制剂，由缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸配制而成，可用于各种原因引起的肝性脑病、重症肝炎以及肝硬化、慢性活动性肝炎。
亦可用于肝胆外科手术前后。
该品种现收载于卫生部药品标准(二部)第六册(生化药品第一分册)中，国外药典未见收载。
原质量标准中含量测定仅规定用适宜的氨基酸分析仪或高效液相色谱仪测定氨基酸的含量，因目前国内使用氨基酸分析仪分析该品种的情况较少，多数情况下使用柱前衍生高效液相色谱法进行测定，且柱前衍生法可采用几种不同的方法，如:PITC、DNFB、AQC等方法，不同的方法需要制备合适的对照品溶液和供试品溶液的浓度，以及采用不同的衍生试剂等。
考虑到原标准检验方法的可操作性较差，对样品质量的仲裁带来一定的难度，因此本文采用异硫氰酸苯酯柱前衍生化高效液相色谱法测定复方氨基酸注射液(3AA)的含量［1］，该方法具有准确、快速和灵敏度高等优点。
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9种氨基酸UPLC分析方法（异硫氰酸苯酯柱前衍生
法）
2013-09-05
方法：
HPLC
基质：
标准溶液
应用编号：
103087
化合物：
Asp（天冬氨酸） Glu(谷氨酸) Ser(丝氨酸) Gly(甘
氨酸) His(组氨酸) Arg(精氨酸) Thr(苏氨酸) Ala(丙
氨酸) Pro(脯氨酸) Tyr(酪氨酸) Val(缬氨酸) Met(蛋
氨酸) Cys(胱氨酸) IIe(异亮氨酸) Leu(亮氨酸)
Nle(正亮氨酸) Phe(苯丙氨酸) Trp(色氨酸) Lys(赖
氨酸)
固定相：
Endeavorsil C18
色谱柱/前处理小柱：
Endeavorsil C18 1.8μm 100 x 2.1mm
样品前处理：
1 溶液配制：氨基酸储备液：称取一定量氨基酸标准
品，用0.1 mol/l HCl水溶液溶解，配成氨基酸单标
浓度为0.05 mol/l 氨基酸使用液：将储备液用0.1
mol/l HCl水溶液稀释，得到浓度为0.002 mol/l的氨
基酸单标和混标，待衍生 0.1 mol/l HCl水溶液：量
取8.3 ml浓盐酸，然后用纯水定容至1000 ml 异硫氰
酸苯酯（PITC）溶液：将250 μl异硫氰酸苯酯用乙
腈定容至10 ml，得到0.2 mol/L异硫氰酸苯酯溶液三
乙胺溶液：将1.4 ml三乙胺用乙腈定容至10 ml，得
到1.0 mol/L三乙胺溶液 0.1 mol/l HCl水溶液：量
取8.3 ml浓盐酸，然后用纯水定容至1000 ml 2 标准
溶液衍生化：量取200 μl氨基酸混合使用液，置于
1.5 ml塑料离心管中，准确加100 μl 1 mol/l三乙
胺乙腈溶液和100 μl 0.2 mol/l异硫氰酸苯酯乙腈
溶液，混匀，室温反应1小时，然后加入正己烷400 μ
l，旋紧盖子后剧烈振荡5~10 s，静置分层，取200 μ
l下层溶液与800 μl水混合，0.22 μm针式过滤器过滤，待分析。
色谱条件：色谱柱：Endeavorsil C18，100×2.1 mm，1.8 μm (Cat#:87003) 流动相： A：0.05 mol/L乙酸钠水溶液（冰乙酸调节pH至6.50±0.05） B：甲醇：乙腈：水=20：60：20（V：V：V）流速：0.3 mL/min 柱温：35 ℃检测器：UV 254 nm 进样体积：2.0 μL
文章出处：天津应用实验室
关键字：天然氨基酸、Asp（天冬氨酸）、Glu(谷氨酸)、Ser(丝氨酸)、Gly(甘氨酸)、His(组氨酸)、Arg(精氨酸)、Thr(苏氨酸)、Ala(丙氨酸)、Pro(脯氨酸)、Tyr(酪氨酸)、Val(缬氨酸)、Met(蛋氨酸)、Cys(胱氨酸)、IIe(异亮氨酸)、Leu(亮氨酸)、Nle(正亮氨酸)、Phe(苯丙氨酸)、Trp(色氨酸)、Lys(赖氨酸)、UPLC、奋进、Endeavorsil C18、异硫氰酸苯酯、柱前衍生、PITC
谱图：。