红景天内生放线菌Hj3发酵条件及其发酵产物抑菌活性初探
四川红景天精油化学成分GC-MS分析及抑菌活性研究
四川红景天精油化学成分GC-MS分析及抑菌活性研究黄晓伟;熊国玺;李星;张辉;吴昭;陈胜【摘要】[目的]分析四川红景天精油的化学成分及其体外抑菌活性,为其深入开发利用提供参考依据.[方法]采用水蒸气蒸馏法提取四川红景天根茎精油,应用气质联用法(GC-MS)分析精油化学成分,通过峰面积归一化法计算各化学成分的相对百分含量;以左氧氟沙星为阳性对照,分别采用滤纸片法和平板连续稀释法测定四川红景天精油对6种供试菌株的抑菌圈直径及最小抑菌浓度(MIC).[结果]从四川红景天精油中鉴定出30种化合物,占精油总含量的95.88％,其中醇类化合物比例最高(17种);精油主要成分有异戊烯醇(31.70％)、香叶醇(28.32％)、正辛醇(14.27％)、芳樟醇(10.02％)和桃金娘烯醇(3.69％).四川红景天精油对黑曲霉、枯草芽孢杆菌和大肠埃希氏菌具有较、强的抑菌作用,抑菌圈直径分别为20.6、18.1和14.2mm,MIC分别为0.625、1.250和1.250μg/mL.[结论]四川红景天精油化学成分种类较多、含量丰富,以醇类化合物为主,且具有较强的抑菌活性,可用于开发天然的植物源防腐剂.【期刊名称】《南方农业学报》【年(卷),期】2015(046)010【总页数】5页(P1867-1871)【关键词】红景天;精油;化学成分;GC-MS;抑菌活性【作者】黄晓伟;熊国玺;李星;张辉;吴昭;陈胜【作者单位】武汉黄鹤楼香精香料有限公司,武汉430040;武汉黄鹤楼香精香料有限公司,武汉430040;湖北中烟工业有限责任公司技术研发中心,武汉430040;武汉黄鹤楼香精香料有限公司,武汉430040;武汉黄鹤楼香精香料有限公司,武汉430040;武汉黄鹤楼香精香料有限公司,武汉430040;武汉黄鹤楼香精香料有限公司,武汉430040;湖北中烟工业有限责任公司技术研发中心,武汉430040【正文语种】中文【中图分类】R284.1【研究意义】红景天（Rhodiola）为景天科红景天属多年生草本或亚灌木植物，种类繁多，是我国传统的药用植物。
红景天药理研究综述
红景天药理研究综述西藏央科生物科技有限公司等红景天是西藏高原珍贵的药用植物之一,经过长期对高寒缺氧等恶劣环境的适应与选择，形成独特生物特性，具有耐缺氧、抗疲劳、增强免疫力等效用，能提高人体抵御恶劣环境的适应能力。
西藏红景天有32种，以生长在海拔4300米以上的大花红景天为正宗极品，其有效成分——红景天苷的含量远远高于其它品种，人们习惯上也将大花红景天称之为“藏域红景天”，谓之为“西藏人参”。
西藏央科生物科技有限公司生产开发的红景天类系列功能食品，均选取大花红景天为原料，经过现代先进的制药提纯技术精致而成，确保产品安全有效。
公司同成都中医药大学等科研院所进行长达7年的研究，对大花红景天的主要药理进行了论证，其主要药理作用研究结果在以下方面：一、对神经系统的作用1 对学习记忆功能的影响：采用一次性训练、回避性条件反射-跳台试验方法观察了大花红景天乙醇提取液对正常及记忆障碍小鼠学习记忆功能的作用。
结果表明，对小鼠记忆获得和记忆再现过程无促进作用，而能对抗东莨菪碱引起的记忆障碍，明显改善乙醇所致记忆再现障碍。
对中度高原健康人予以红景天药物口服30天，并于服药前后用修订后韦氏记忆量表进行记忆测定。
结果表明，红景天能明显改善中度高原人的短时记忆，并能显著提高血氧分压水平。
2 对中枢神经递质的影响以中枢神经递质的变化对红景天属植物作用的机理进行了研究。
发现红景天能使小鼠在游泳条件下5-羟色胺（5-HT）含量正常化，即在红景天药物影响下，已偏离正常水平的中枢神经递质含量得到纠正或达到正常水平，这是机体整体功能健全和对不利因素耐力提高的重要条件。
二、对心血管系统的影响1 对大鼠动脉血压和心率的影响静脉注射红景天醇提取液，观察大鼠动脉血压和心率变化；使用β受体阻断剂心得安和α受体阻断剂酚妥拉明进一步探讨红景天醇提取液对心血管活动影响的机理。
结果表明：（1）红景天提取液可使大鼠动脉血压明显升高，并呈现一定的剂量效应关系；（2）静脉注射红景天的升压作用不能被心得安所阻断；（3）可翻转酚妥拉明所引起的血压降低的药理学作用；（4）对心率的影响无一定规律性变化，以不变或升高为主，证明红景天有一定的强心缩血管作用。
放线菌HJ1-2菌株发酵液抑菌谱及稳定性的研究
放线菌HJ1-2菌株发酵液抑菌谱及稳定性的研究冯俊涛;张锦恬;韩立荣;李进;张兴【期刊名称】《西北农业学报》【年(卷),期】2009(018)006【摘要】采用菌丝生长速率法、管碟法和活体组织法测定发酵液的抑菌活性,在不同条件下测定发酵液的稳定性,捷克溶剂系统纸层析法鉴别发酵液中抗生素类型.发酵液的抑菌活性测定结果表明,放线菌HJ1-2菌株发酵液对20种供试病原真菌均具有不同程度抑制作用,其10倍稀释液对其中10种病原真菌菌丝生长的抑制率达到80%以上;供试7种细菌中放线菌HJ1-2菌株发酵液对白菜软腐病菌的抑制作用最强,抑菌圈直径为17.75 mm;放线菌HJ1-2菌株发酵液对油菜菌核病和番茄灰霉病的抑制率分别为100 %和71.39 %.发酵液的稳定性测定结果表明,发酵液对热、酸和紫外线均较稳定,发酵液在80℃处理后抑菌活性开始下降,发酵液在pH3～9条件下抑菌活性稳定.捷克溶剂系统纸层析法测定表明,发酵液中主要抑菌活性物质为大环内酯类抗生素.该菌株的代谢产物具有广谱抑菌活性和较强的稳定性,具有一定开发价值.【总页数】5页(P280-284)【作者】冯俊涛;张锦恬;韩立荣;李进;张兴【作者单位】西北农林科技大学,无公害农药研究服务中心/陕西省生物农药工程技术研究中心,陕西杨凌,712100;西北农林科技大学,无公害农药研究服务中心/陕西省生物农药工程技术研究中心,陕西杨凌,712100;西北农林科技大学,无公害农药研究服务中心/陕西省生物农药工程技术研究中心,陕西杨凌,712100;西北农林科技大学,无公害农药研究服务中心/陕西省生物农药工程技术研究中心,陕西杨凌,712100;西北农林科技大学,无公害农药研究服务中心/陕西省生物农药工程技术研究中心,陕西杨凌,712100【正文语种】中文【中图分类】S482.2+92;S481+.9【相关文献】1.放线菌G30菌株发酵液抗菌谱及稳定性的研究 [J], 侯勇;许凤春2.放线菌菌株1a发酵液抗菌谱及抗菌物质稳定性研究 [J], 王琳;姜云;马贵龙3.拮抗放线菌ZZ-9菌株发酵液的抑菌谱及稳定性测定 [J], 范万泽;薛应钰;张树武;徐秉良4.一株拮抗放线菌ZY105菌株发酵液抗菌谱及稳定性的研究 [J], 董美玉;许凤春;张玲玲;黄剑5.一株拮抗放线菌GLP-27菌株发酵液抗菌谱及稳定性的研究 [J], 侯勇;赵文华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
放线菌G30菌株发酵液抗菌谱及稳定性的研究
放线菌G30菌株发酵液抗菌谱及稳定性的研究摘要研究土壤放线菌G30次生代谢产物的抗菌谱及其发酵液的稳定性，采用抑制菌丝生长速率法、管碟法测定发酵液的生物活性，在不同条件下测定发酵液的稳定性。
结果表明：在对12种供试病原真菌的抑制效果中，6种菌丝生长的抑制率达到80%以上；在连续传代10代过程中，4 ℃及常温保存条件下，G30菌株的培养特征和抑菌活性基本没有变化；发酵液在60~100 ℃的温度梯度下没有丧失活性，在强酸（pH值2）、强碱（pH值12）条件下也都比较稳定。
G30菌株的代谢产物具有广谱抗菌活性和强稳定性，具有一定的开发价值。
AbstractAntimicrobial spectrum and stability of the fermentation extracts produced by actinomycete strain G30 were studied，by means of mycelium growth rate and cup-plate method，the fungicidal activity of bioassay was studied，the stability of the fermentation extracts in different condition was measured. The results showed that six kinds of pathogens with an inhibitory rate more than 80% in twelve kinds of pathogens；The cultural characteristics and bacteriostatic activity of strain G30 were not altered by ten serial subcultures or modifying the preserved temperature in 4 ℃or normal temperature；The fermentation liquid didn′t lose activity in high temperature（60～100 ℃），it was also been steady under the condition of strong acid （pH 2）and strong base（pH 12）. Metabolic products of actinomycete strain G30 had broad-spectrum antibacterial actirity and strong stability. The actinomycete strain G30 was worthy of develop.Key wordsactinomycete；strain G30；fermentation liquid；antimicrobial spectrum；stability农用抗生素是能够用来杀虫、灭菌、除草以及调节植物生长等的微生物活体及其代谢产物。
红景天内生真菌发酵产物对肺癌细胞Huh7生长抑制情况的研究
的癌 变 ， 根 据 全 国肿 瘤 登记 中， Ｌ ， ２ ０ １ ４ 发 布 的数 据 ， 我们 可 以 取 自中国 农业 科 学 院 兰 州 兽 医 研 究 所 ； 胎牛血清： 杭 州 四季
知 道我 国肺 癌 死亡 人 数 达 到 ４ ８ ． ６ ６ 万 …， ２ Ｏ １ ２ 年， 美 国新 增 清 生 物 制 品 公 司 ； Ｍ ＴＴ： Ｓｏ ｌ ａ ｒ ｂ ｉ ｏ ＤＭＳＯ： ＶＥ ＴＥ Ｖ。 肺癌患者２ ２ ． ６ 万左 右 ， 因 为肺 癌 死 亡 人 数 为 １ ６ ． ０ 万左 右 ， 调 １ 。 ２ 方法 查显示 ， 肺 癌 也 将成 为 我 国肿 瘤 死 亡 主要 原 因之一 。目前 治 疗肺 癌 的 医 疗 方 法 依 然 是 通 过 外科 手 术 切 除 早 期 肺 癌 肿 １ ． ２ ． １ 液体 Ｐ ＤＡ培 养 基制作 新 鲜 去皮 马 铃薯 ２ ０ ０ ｇ ， 切碎， 加 蒸馏 水 煮 沸３ ０ ｍｉ ｎ， 然
关于 肺 癌 治 疗 的 天 然 药物 、 特 效 药 物 的 研 发报 道 ， 但 是 没有
哪 一种 药物 是 非 常 有 效 且 无 不 良反 应 的。对 治 疗 肺 癌 的 新 型天 然 药物 的 探索 依 然 有许 多 困难 亟待人 们去 解 决 。 红 景 天 是 景 天 科 多年 生 草本 植 物 ， 红 景 天具 有 抗 氧 化 、 疗 多 种 疾 病 …。 近年 来的研 究证 明， 红 景 天 的 有 效 成 分具
长的 抑 制效 果 。 结 果 实验 初 步找 到４ 株 虹景天 内生 真 菌其发 酵产物对 肺 癌细 胞 生长 的抑 制 率达 到或 超 过 ５ ０ ％ ， ３ 株 红景天 内生真
茵其发酵产物对Ｂ Ｈ Ｋ 细胞生长的抑制率不超过１ ０ ％。 结论 缸景天 内生真 菌发酵产物对肺癌细胞有抑制作 用， 有待 于我们更多次的 实验来验证此结论， 在验 证过程中需要做 到更加规范的实验操作以及避 免实验过程中造成的污染 问题 。 关键 词： 虹景天 内生真茵 肺癌细胞 Ｂ Ｈ Ｋ细胞 ＭＴ Ｔ
鱼腥草内生放线菌F03培养条件的优化及抑菌活性物质的初步研究
于 哲 。张 爽 （陕 西 国际商 贸学 院 医药 学院 ，陕西 咸 阳 ７１２０００）
摘 要 ：Ｆ０３是 分 离 于秦 岭 野 生鱼 腥 草 根 部 的 一 株 抗 茵 活 性 较 强 的 内生 放 线 菌 。以 金 黄 色 葡 萄 球 菌 为 指 示 菌 ，采 用
单 因素 实验 和 正 交 实验 对 鱼 腥 草 内 生放 线 菌 Ｆ０３培 养 基 的碳 源 、氮 源和 发 酵 条 件 进 行 优 化 ，并 对 发 酵 液 抑 菌 活 性 物 质 进
Ｋ ｅｙｗｏｒｄｓ：Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ａｃｔｉｎｏｍ ｙｃｅｔｅ；ｏｐｔｉｍ ａｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍ ｅｄｉｕｍ ；ｆｅｒｍ ｅｎｔａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ；ｏｐｔｉｍ ｉｚａｔｉｏｎ；Ｈ ｏｕｔ ｔｕｙｎｉａ ｃｏｒｄａｔａ ；ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｃｔｉｖｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ
行 初 步研 究 。优 化 后 的 最佳 培 养基 为 ：葡 萄 糖 ３Ｏ ｇ，蔗 糖 １Ｏ ｇ，黄 豆 粉 １Ｏ ｇ，蛋 白胨 １Ｏ ｇ，Ｋ ＨＰＯ ０．３ ｇ，ＮａＣＩ １ ｇ，ＣａＣＯ。
２ ｇ，蒸馏 水 １ ０００ ｍＬ；最 优发 酵 条 件 为 ：发 酵 液 初 始 ｐＨ 值 ８，发 酵 时 间 ７ ｄ，发 酵 温度 ２８℃ ，摇 床 转 速 １４０ ｒ·ｍｉｎ ，接
红景天内生放线菌拮抗菌株的筛选及抗药性标记
红景天内生放线菌拮抗菌株的筛选及抗药性标记史晓晶;王铁霖;于春艳;高磊【摘要】[目的]从红景天中挖掘出具有抑菌效果的内生放线菌,为植物病害的生物防治开发新的成员.[方法]从红景天根茎接合部位分离内生放线菌,并采用对峙培养法和菌丝生长速率法筛选对植物病原真菌具有拮抗活性的菌株,测定拮抗活性最强的菌株的16S rRNA基因序列和抑菌谱;同时,为了评估活性最强的菌株与杀菌剂混配使用的可能性,研究了其对常见杀菌剂的抗性.[结果]分离出的19株红景天内生放线菌中有7株具有拮抗活性,其中,Hj3的活性最强且对多数植物病原真菌具有拮抗作用,经16S rRNA基因序列比对初步鉴定为变异链霉菌(Streptomnycesvariabilis);Hj3在高浓度的啶酰菌胺、多抗霉素、萘啶酸和氨苄西林下均可正常生长.[结论]Hj3在防治常见植物病害方面表现出了一定的优势.%[Purpose] In order to explore new potential biocontrol member for controlling plant disease,the endophytic actinomycetes from Rhodiola rosea with fungistasis were researched.[Method] In this study endophytic actinomycetes from the joint position of root and stem of Rhodiola rosea were isolated and screened the antagonistic activity to plant pathogens using confrontation culture method and mycelial growth ratemethod.Then,the 16S rRNA gene sequence and antifungal spectrum of the strain with the best fungistasis were also determined.And to assess the possibility the strain used with fungicide,the resistance of the strain with the best fungistasis to commonly-used fungicides were tested.[Results] The result showed that 7 isolates possessed the antagonistic activity among 19 endophytic actinomycetes,and the fungistasis of Hj3(Streptomyces variabilis) was the strongest and could inhibit all plant pathogens provided by the experiment.Also,Hj3 could grow well above the highly dose of boscalid,polyoxin,nalidixic acid,andampicillin,respectively.[Conclusion] There is certain advantage for Hj3 to control usual plant disease.【期刊名称】《云南农业大学学报》【年(卷),期】2017(032)005【总页数】6页(P805-810)【关键词】红景天内生放线菌;拮抗;抑菌谱;抗药性【作者】史晓晶;王铁霖;于春艳;高磊【作者单位】忻州师范学院生物系,山西忻州034000;中国中医科学院中药资源中心,道地药材国家重点实验室培育基地,北京100700;忻州师范学院生物系,山西忻州034000;忻州师范学院生物系,山西忻州034000【正文语种】中文【中图分类】S482.292植物内生放线菌是可在植物的整个或部分生长周期中稳定定殖于植物内部的微生物菌群之一[1]。
内生放线菌和寄主植物的抑菌活性及其关系
内生放线菌和寄主植物的抑菌活性及其关系钟莉;田新莉;周敏;王韬;成秋香;陈振华;范云;覃重军【期刊名称】《中国抗生素杂志》【年(卷),期】2008(33)9【摘要】从68种中草药植物中分离了560株内生放线菌菌株,其中84株(约占15%)对金葡菌有抑菌活性,36株(约6%)对白念珠菌有抑菌活性,提示中草药植物的内生放线菌可能是抗菌新药的一个来源.检测了9种中草药植物的水或乙醇抽提液对金葡菌的抑菌活性,发现内生放线菌菌株的抑菌活性与其寄主植物没有明显的对应关系.【总页数】3页(P528-530)【作者】钟莉;田新莉;周敏;王韬;成秋香;陈振华;范云;覃重军【作者单位】中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所,上海,200032;中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所,上海,200032;中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所,上海,200032;中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所,上海,200032;中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所,上海,200032;中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所,上海,200032;中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所,上海,200032;中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所,上海,200032【正文语种】中文【中图分类】Q945.79【相关文献】1.红景天内生放线菌Hj3发酵条件及其发酵产物抑菌活性初探 [J], 史晓晶;于春艳;韩佳音;王华杰2.鱼腥草内生放线菌 F03培养条件的优化及抑菌活性物质的初步研究 [J], 于哲;张爽3.一株植物内生放线菌次级代谢产物的提取及抑菌活性研究 [J], 李增政;林滕;常永芳;周琴;刘俊林4.东乡野生稻内生放线菌Streptomyces sp.PRh5抑菌活性次级代谢产物研究 [J], 包建莹;张志斌;肖依文;汪涯;颜日明;朱笃5.臭椿内生放线菌分离与抑菌活性检测 [J], 闵长莉; 汪学军; 闵运江; 张珍林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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红景天内生放线菌Hj3发酵条件及其发酵产物抑菌活性初探史晓晶;于春艳;韩佳音;王华杰【摘要】[目的]探究红景天内生放线菌—变异链霉菌Hj3 (Streptomyces variabilis)的发酵条件、抑菌机制及对采后番茄早疫病的防治效果,为该潜在生防菌的开发利用奠定重要的理论与实践基础.[方法]采用菌丝生长速率法筛选Hj3抑菌物质产生的最佳培养液、接种量,利用正交试验设计探讨培养温度、培养转速、培养液初始pH值等条件,测定Hj3的生长曲线、抑菌物质产生曲线、Hj3抑菌物质对番茄早疫病菌产孢和孢子萌发的影响及对采后番茄早疫病的防治效果.[结果]在4号培养液(乳糖15 g、玉米粉4 g、K2HPO4 0.8 g、KC1 0.2 g、CaCO4 1.6 g、水1 000 mL、pH7)中接人8％ Hj3种子液,28℃150 r/min震荡培养,在第4天时培养液中的活菌数最大,在第5天时Hj3发酵液的抑菌率达到最高;Hj3抑菌物质可明显抑制番茄早疫病菌孢子的产生和萌发,对采后番茄早疫病的防治也有一定效果.[结论]探讨出的发酵条件有利于H j3抑菌物质的后续研究及应用,进一步明确其抑菌机制为H j3的实际应用提供了更加充分的理论支持.【期刊名称】《云南农业大学学报》【年(卷),期】2018(033)003【总页数】6页(P422-427)【关键词】红景天内生放线菌;番茄早疫病菌;发酵条件;抑菌活性【作者】史晓晶;于春艳;韩佳音;王华杰【作者单位】忻州师范学院生物系,山西忻州034000;忻州师范学院生物系,山西忻州034000;忻州师范学院生物系,山西忻州034000;忻州市食品药品监督管理局,山西忻州034000【正文语种】中文【中图分类】S476.91化学农药在长期使用后会带来农药残留、环境污染、植物病原菌产生抗性及药效下降等问题；因此，生物因子作为新的防治角色在农业生产上发挥着越来越重要的作用。
逐步用安全、无毒的生物防治代替化学防治是植物病虫害防治的目标之一，寻找合适的生防菌株投入防治就显得尤为重要[1]。
目前，许多植物内生菌可作为潜在的生物防治菌株[2-3]，植物内生放线菌是重要的类群之一。
由于放线菌本身可产生许多具有抑菌活性的次级代谢产物，故在生物防治中植物内生放线菌有着独特的优势[4]，在抑菌、杀虫等方面都发挥着重要的作用[5-7]。
红景天内生放线菌——变异链霉菌Hj3 (Streptomyces variabilis)对番茄早疫病菌具有较强的抑制作用，作为生防因子投入生产实践具有一定的可行性[8]，但对于Hj3的抑菌机制、防治效果尚未进行探究。
赵淑莉等[9]在分离出玉米大斑病的生防放线菌后，进一步筛选出了该菌的最佳发酵培养液；魏松红等[10]筛选出了具除草活性放线菌DN5的最佳发酵培养液；张红丹等[11]不但筛选了放线菌769的最佳培养液，还研究了该菌的生长规律及产抑菌物质的规律，为放线菌769的开发利用提供了理论指导。
可见，生防菌在投入生产实践前需要探究其最佳发酵培养液、了解其生长规律及产生抑菌物质的规律等问题，为生防菌高效产生抑菌物质提供保障。
因此，本研究以变异链霉菌Hj3作为研究对象，探究其抑菌物质发酵条件、抑菌机制及对采后番茄早疫病的防治效果，为Hj3的开发利用奠定重要的理论与实践基础。
1 材料与方法1.1 供试菌种变异链霉菌Hj3 (S.variabilis)和番茄早疫病菌(Alternaria solani)由忻州师范学院生物系微生物实验室提供。
1.2 菌株的培养及种子液的制备Hj3的培养：采用平板划线法将Hj3接种在高氏一号培养基上，28 ℃培养5 d后，制备直径5 mm的菌碟，备用。
种子液的制备：在50 mL种子培养液(葡萄糖5 g，可溶性淀粉24 g，酵母膏5 g，蛋白胨5 g，牛肉膏3g，玉米面4g，CoCl2 0.002 g，CaCO33g，蒸馏水1 000 mL)中接入2块Hj3菌碟，28℃ 160 r/min培养5 d，备用。
番茄早疫病菌的培养：在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)上接种番茄早疫病菌，25 ℃下培养5 d，在近菌落边缘1/3处用打孔器制备直径5 mm的菌碟，备用。
1.3 Hj3产抑菌物质的最佳培养液的筛选将1～5号培养液(表1)与种子液分别按照9：1的体积比混合，28℃ 160 r/min振荡培养5 d，0.22 μm微孔滤膜过滤除菌，即得发酵液，4℃下保存备用。
按照9：1的体积比将PDA与发酵液混合，制成平板；以相同体积的1～5号培养液替代发酵液为对照。
在平板上接种番茄早疫病菌菌碟，25 ℃培养4 d，采用十字交叉法测量菌落直径，依据下式计算抑制率，试验重复3次。
抑制率=(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-菌碟直径)×100%。
1.4 接种量对Hj3抑菌物质产生的影响分别以2%、4%、6%、8%、10%的接种量将Hj3种子液接种于最佳培养液中，28 ℃ 160 r/min振荡培养5 d，0.22 μm微孔滤膜过滤除菌，分别测定各过滤液对番茄早疫病菌的抑制率。
试验重复3次。
表1 培养液成分Tab.1 Component of fluid mediums序号code成分component1 淀粉 (starch)：14 g，乳糖 (lactose)：16 g，黄豆粉 (soybean meal)：10 g，KH2PO4：3 g，KCl：0.4 g，水 (water)：1 000 mL2 玉米粉(corn meal)：35 g，黄豆粉 (soybean meal)：20 g，KNO3：5 g，CaCO3：4 g，水 (water)：1 000 mL3 玉米粉(corn meal)：30 g，淀粉(starch)：10 g，葡萄糖(glucose)：20 g，黄豆粉(soybean meal)：20 g，酵母粉(yeast meal)：1 g，NaCl：2 g，MgSO4：0.3 g，(NH4)2SO4：2 g，CaCO3：6 g，KH2PO4：0.2 g，水 (water)：1 000 mL4 乳糖(lactose)：15 g，玉米粉(corn meal)：4 g，K2HPO4 0.8 g，KCl 0.2 g，CaCO4 1.6 g，水(water)：1 000 mL5 蛋白胨(peptone)：5 g，蔗糖 (cane sugar)：30 g，MgSO4：0.5 g，K2HPO4：1 g，FeSO4 0.01 g，水 (water)：1 000 mL1.5 温度、转速、初始pH值对Hj3抑菌物质产生的影响以温度、转速、初始pH值3因素为变量，设计三因素三水平正交试验(表2)。
按照最佳接种量将Hj3种子液接种于最佳培养液中，按表2中的条件培养5 d后测量抑制率，分析并确定3因素的最佳组合。
试验重复3次。
表2 发酵条件的正交试验设计Tab.2 Elements and levels of orthogonal experiment水平levels初始pH initial pH126 130 6228 150 7330 170 8温度/℃temperature转速/(r·min-1)revolving speed1.6 Hj3生长曲线及抑菌物质产生曲线的测定准备若干份最佳培养液与种子液(1.4中得到的最佳接种量)的混合液，采用1.5节中得到的最优培养条件培养，每隔1 d取10 mL培养液进行梯度稀释，采用平板菌落计数法测定菌密度(cfu/mL)。
将剩余的培养液用0.22 μm微孔滤膜过滤除菌，测定滤液对番茄早疫病菌的抑制率，然后绘制Hj3的生长曲线和抑菌物质产生曲线。
试验重复3次。
1.7 Hj3发酵液对番茄早疫病菌产孢和孢子萌发的影响将0.2、1、2 mL发酵液分别与9.8、9、8 mL PDA混合，制平板，然后接种番茄早疫病菌菌碟，25 ℃培养，待菌丝长满后继续培养至产生大量分生孢子，以加入相应体积无菌水为对照。
在每皿中加入5 mL相应稀释倍数(50倍、10倍和5倍)的发酵液，对照中则加入5 mL无菌水，用涂布器轻擦菌落表面，4层纱布过滤后定容至5 mL。
采用血球记计数法测定分生孢子悬浮液的密度(mL-1)，试验重复3次。
将以上孢子悬浮液稀释至显微镜下每视野50～100个孢子，取50 μL置于凹玻片上，并置于铺有湿润滤纸的培养皿中，25 ℃培养10 h，观察并记录孢子萌发的情况，试验重复3次。
孢子萌发率=萌发的孢子数/孢子总数×100%。
1.8 Hj3发酵液对采后番茄早疫病的防治采用段军娜等[12]的方法。
将健康的番茄用75%酒精消毒处理，用接种针在果实腰部刺1个直径为3 mm、深4 mm的伤口，然后将伤口晾干。
预防作用：在伤口中加入10 μL Hj3除菌发酵液，以无菌培养液为对照，自然晾干，24 h后接种105 mL-1番茄早疫病菌孢子悬浮液10 μL。
治疗作用：在伤口加入10 μL密度为105 mL-1番茄早疫病菌孢子悬浮液，24 h后加入10 μL Hj3除菌发酵液，以无菌培养液为对照。
果实晾干后置于25 ℃ 95%相对湿度下培养。
每处理20个番茄，3次重复。
5 d后测定番茄上的病斑面积，分析Hj3发酵液对采后番茄早疫病的预防和治疗作用。
防治效果=(对照病斑面积-处理病斑面积)/对照病斑面积×100%。
1.9 数据分析数据采用SPSS 16.0软件进行处理，差异显著性采用Duncan氏新复极差检验法分析。
2 结果与分析2.1 Hj3抑菌物质产生的最佳培养液筛选5种不同成分的培养液培养Hj3后所产的发酵产物对番茄早疫病菌的抑制作用存在一定差异，其中4号培养液的抑制率最高，为82.18% (P＜0.05，图1)。
故选4号培养液作为Hj3的最佳发酵培养液进行后续试验。
图1 Hj3产抑菌物质的培养液的筛选Fig.1 Screening of fluid medium for antifungal substance produced by Hj32.2 接种量对Hj3抑菌物质产生的影响将2%、4%、6%、8%和10% Hj3种子液分别接种在4号培养液培养后，测定Hj3抑菌物质对番茄早疫病菌的抑制率发现：接种量为8%时较为合适(P＜0.05)，抑制率为84.37%，且再加大接种量对Hj3抑菌物质的产生并无显著提高(图2)。
图2 接种量对抑菌物质产生的影响Fig.2 Effect of inoculation dose on antifungal substance produced by Hj32.3 温度、转速、初始pH对Hj3抑菌物质产生的影响通过对温度、转速和初始pH3因素进行正交分析发现：温度均值(2)、转速均值(2)和初始pH值均值(2)最高，因此当温度为28℃，转速为150 r/min，初始pH为7时对Hj3抑菌物质的产生最有利。