小鼠乳鼠心肌细胞的原代培养

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细胞生物学：小鼠心肌细胞原代培养

细胞生物学：小鼠心肌细胞原代培养㈠、概述整体动物心肌细胞的增殖能力在出生后仅能维持一个短时期，小鼠在出生3周后DNA合成所需的酶的活性及心肌细胞的增殖能力就明显降低至成年鼠水平。

小鼠心肌细胞的原代培养，一般选用生后1-10d的乳鼠心脏，尤以出生1-4d的较好，此时心肌细胞已分化充分，适于作各种研究，而出生4d以后的乳鼠心脏中分离出来的心肌细胞较慢发育成为有自律性搏动的心肌细胞。

㈡、[试剂]1、培养液：1：1混合的DMEM/F12培养液，添加终浓度为10%小牛血清（FCS）、100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素。

2、消化液：胰酶（效价为1：250）0.08%、胶原酶II（活力为150U/mg）0.05%，用pH7.2-7.8的D-Hanks溶液配制，-20℃保存。

3、D-Hanks溶液（pH7.2-7.8）：KCl0.4g，KH2PO40.06g，NaCl8.00g，NaHCO30.35g，Na2HPO4？7H2O0.09g，酚红0.01g1L㈢、[实验步骤]1、取生后1-4d的乳鼠，用75%乙醇消毒皮肤，再用大头针固定乳鼠的头及四肢，剪开胸部皮肤，用75%乙醇消毒皮下组织，更换镊子及剪刀，开胸取出心脏，将心脏放入盛有D-Hanks溶液的平皿（或青霉素瓶）中，剪去心房，剪开心室，用D-Hanks溶液冲洗三次，去除残留积血后，将心脏剪成1mm3大小的碎片，再将心脏碎片转移至离心管中，加5ml左右消化液，37℃消化5min，自然沉淀，弃上清，再加5ml左右消化液，37℃消化20min（每隔2min 振摇几下），用吸管吹打1min后，将未消化完全的心脏碎片吸出至另一离心管中，加入2ml冷的培养液终止消化，1000rpm5min，弃上清，沉淀中加入D-Hanks溶液2ml，1500rpm10min，弃上清，沉淀中加入培养液2ml，用吸管吹打制成细胞悬液。

（为节约时间，以下步骤省略）上述未消化完全的心脏碎片补加5ml左右消化液后继续消化，同样操作，合并细胞悬液后放入培养瓶中置二氧化碳培养箱中（37℃5%CO2）培养。

原代乳小鼠心肌细胞的分离培养及鉴定

原代乳小鼠心肌细胞的分离培养及鉴定＊程阔菊，黄河，杜智勇，李洪，杨天德△【摘要】目的建立原代乳小鼠心肌细胞的培养方法，评价心肌细胞的存活状况并鉴定心肌细胞纯度。

方法应用胰酶联合胶原酶共同消化3d内C57乳小鼠心脏，台盼蓝染色判断心肌细胞存活率，α－actin免疫荧光染色鉴定心肌细胞纯度。

结果利用3d内乳鼠心脏可成功培养原代小鼠心肌细胞，台盼蓝染色显示细胞存活率大于95%，α－actin免疫荧光染色显示心肌细胞纯度达95%以上。

结论严格控制实验条件，可成功培养高存活率和高纯度的小鼠心肌细胞。

【期刊名称】重庆医学【年(卷),期】2013(000)022【总页数】3【关键词】乳小鼠；心肌细胞；分离；纯化；培养；鉴定各种基因敲除及转基因小鼠已广泛应用于心血管疾病动物模型的建立，已为心血管疾病机制的研究作出了巨大贡献。

体外心肌细胞培养作为一种体外实验研究模型，可以排除神经、体液的干扰而独立地从细胞和分子水平研究心血管疾病的发生、发展机制，但由于小鼠心肌细胞的分离和培养比较困难，所以一直限制了医学科研工作者在细胞生物学水平上对心血管疾病方面的深入研究。

本实验室在以往的经验基础上，摸索出了一套成熟可行、简单可靠的小鼠心肌细胞培养方法，获得的心肌细胞存活率高且纯度高。

本文对此培养方法做一简单介绍，并对其中的关键影响因素做详细的探讨。

1 材料与方法1.1 材料1.1.1 实验动物1～3d龄野生型C57新生乳鼠，SPF级，由第三军医大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK（渝）2007－0003。

1.1.2 主要仪器与试剂显微眼用镊、眼科剪、显微镊、显微剪（上海医疗器械有限公司），器械使用前清洗干净并经高压灭菌（121℃，20min）。

二氧化碳培养箱、倒置显微镜（OLYMPUS）、超净工作台（苏净安泰）、低温台式离心机（Sigma）。

小牛血清、DMEM／F12、胰酶、胶原酶Ⅱ（GIBCO），BrdU－溴脱氧尿苷（Sigma），青霉素、链霉素（华美生物工程公司），anti－α－actinin（Millipore），组织固定液（Alphelys），Triton X－100（Amresco），SlowFade Gold antifade reagent with DAPI（Invitrogen），Alexa goat anti－mouse IgG（H＋L）（Invitrogen）。

乳鼠原代心肌细胞培养方法

乳鼠原代心肌细胞培养方法
实验动物
出生1~3天的健康乳鼠（Wistar），雌雄不分。

药品与试剂
DMEM/F12基础培基，Brdu ，胰蛋白酶（1:250），Ⅱ型胶原酶（sigma)，胎牛血清（hyclone），双抗（青霉素-链霉素）
原代心肌细胞培养
1．出生后1~3天的乳鼠，雌雄不分。

将乳鼠在75%乙醇中浸泡5秒左右，于无菌条件下取出心脏，置于平皿中，用PBS溶液反复洗涤3次，并除去大血管及脂肪组织，眼科剪剪碎至约1mm3。

2．用0.1%的Ⅱ型胶原酶和0.06%的胰蛋白酶在37℃恒温摇床中震荡消化5~7次，每次5min。

收集除第一次之外各次所得的消化液，并及时加入到含10%胎牛血清的DMEM培养液中终止消化。

（第一次的消化液中含较多血细胞，故弃去，也可视清洗的情况而定）
3．终止后的消化液用200目筛过滤去除未消化组织块，1000rpm离心10min 收集细胞。

4．离心后弃上清，用全培基将细胞沉淀充分而轻柔地吹打成单细胞悬液，接种于培养瓶中，CO2培养箱差速贴壁1.5小时。

5．收集未贴壁的细胞悬液，重新接种于培养瓶中，前3天加用0.1 mmol/L Brdu抑制非心肌细胞的生长。

6．培养2~3天，待贴壁心肌细胞连成片状同步搏动后，消化接种于不同的培养板中，供进一步实验用。

细胞工程实验三：乳鼠心肌细胞的原代培养-治

将细胞混悬液1 000 r/min离心10 min
去上层，收获细胞
实战程序第四大步骤：清洗细胞，培养细胞
细胞沉淀用PBS溶液和DMEM清洗3次弃上清液加4ml含20%小牛血清的DMEM培养液制成细胞悬液，置于培养瓶中培养24 h后即可见细胞贴壁和细胞收缩
【注意事项】
组织块必须漂洗 2~3 次以除去组织的钙离子、镁离子和血清对胰蛋白酶和 EDTA的抑制作用。胰蛋白酶浓度不宜过高，作用时间不能太长，以避免毒性作用。消化后组织不仅要尽量弃去消化液，以避免毒性产生，而且动作要轻，以避免蓬松的细胞随漂洗而失去。
【实验结果与分析】
记录心肌细胞的培养及动态观察。
实验三动物细胞的原代培养
【实验目的】
掌握实体组织材料的原代细胞培养的基本思路。掌握动物组织中细胞的分离和原代培养的方法。
【实验原理】（参考教材P128）
原代细胞培养是从供体取得组织细胞在体外
进行的首次培养
是一项基本技术
是建立细胞系的第一步
【实验原理】
原代细胞的分离和制作常采用的方法
用镊子小心剥离心包膜
剪去心房（心脏上半部分）及主动脉
PBS溶液清洗心室组织3次（至没有血时）
将心室组织剪成1~3 mm3碎块后，转移至
离心管
用PBS清洗3遍
实战程序第三大步骤：消化组织，获得细胞
加0.125%胰蛋白酶（2ml）
37℃水浴中旋摇消化10 min 吸上层（细胞在悬液中，未消化好的组织块在底层）细胞悬液转至小烧杯加等体积无血清培养基终止反应，反复3-5次
【实验材料与器材】
本实验用品
每组1个：乳鼠、解剖器械、小烧杯、细胞培养瓶、移液枪（1ml）及枪头每组2个：离心管、培养皿

心脏成纤维细胞原代细胞培养

乳鼠心肌成纤维细胞分离与培养一、实验动物1~3日龄C57小鼠乳鼠10只。

二、试剂及配制高糖DMEM( gibco)、Ⅰ型胶原酶（MP）、0.25%胰蛋白酶(solarbo公司), 胎牛血清（gibco 160000-044）、青霉素-链霉素混合液（solarbo）。

培养液: DMEM培养基：FBS：双抗 100：10：1（45ml：5ml：0.5ml）酶消化液:将胰蛋白酶用PBS缓冲液(pH 7.2 ～ 7.4)稀释, 配成0.1%胰蛋白酶消化液;将Ⅰ型胶原酶溶于PBS缓冲液(pH 7.2 ～ 7.4)中, 配成0.1%的胶原酶消化液。

0.1%胰蛋白酶及01% Ⅰ型胶原酶以2∶1混合, 现配现用。

三、实验仪器超净工作台、CO2培养箱、光学倒置显微镜、离心机……四、组织消化和分离细胞1、将乳鼠于75%乙醇缸中浸泡5ｓ, 转移至超净台。

用大头针将其固定在无菌的泡沫板上, 用聚维酮碘消毒胸、腹部皮肤。

2、取2把弯镊子撕开皮肤, 充分撕拉开, 再用乙醇棉签消毒。

用眼科虹膜剪在剑突处正中线稍偏左向上开胸后用剪子压住胸骨右缘, 使心脏自然跳出, 用弯镊子勾住心脏根部, 取出心脏, 置于盛预冷PBS液的培养皿中。

3、将鼠心脏全部取出后, 剪去心房、剔除心脏上结缔组织、脂肪及血管, 预冷ＰＢＳ液清洗3次, 去除血污。

4、将心脏剪成约1mm ×1mm×1mm的组织块, 刮入加有搅拌子的锥形瓶中, 酶消化液冲洗剪刀及培养皿, 转移至锥形瓶中。

5、加入孵育过的酶消化液为心肌组织的5倍, 37 ℃水浴, 打开磁力搅拌器, 60r/min搅拌10min, 吸管轻轻吹打组织块1min分散细胞, 自然沉降2min后遗弃上清液。

6、再次加入消化酶液8～15ml消化8min。

五、培养细胞1、吸取上清液入离心管, 加入预冷培养液2ml, 吹打均匀后, 1 200r/min离心4min, 弃上清, 细胞沉淀加预冷的培养液吹打后成细胞悬液用封口膜封口放于冰中备用。

小鼠心肌细胞的原代培养注意事项

小鼠心肌细胞的原代培养注意事项
一、实验前准备
1.1 材料准备
1.2 设备准备
1.3 环境要求
二、小鼠心肌细胞的原代培养操作步骤
2.1 小鼠心肌细胞的分离和培养基的配制
2.2 小鼠心肌细胞的原代培养
三、培养基的更换和维护
3.1 培养基的更换
3.2 细胞状态观察和维护
四、实验中常见问题及解决方法
4.1 细胞污染问题及解决方法
4.2 细胞生长不良问题及解决方法
4.3 细胞死亡问题及解决方法
五、实验安全注意事项
5.1 实验室安全措施要求
5.2 实验过程中个人防护措施要求
六、实验结果的分析和记录方式
6.1 实验结果的观察和记录方式
6.2 数据处理和结果分析方法
七、实验结束后处理方式
7.1 培养皿、试管等废弃物处理方式要求7.2 试剂废弃物处理方式要求。

乳鼠心肌细胞和心脏成纤维细胞的原代培养

１３实验仪器超净工作台（海浦东物理光学．上
仪器厂）Ｃ培养箱（国ＳＥＬＬＢ公司）普、Ｏ美ＨＬＡ、
通光学显微镜（日本Ｏｙｕ）离心机（大利ＡＣｌｍｐｓ、意Ｌ公司）。等
胎牛血清为接种培养液，加入１％新生牛血清为交０
换培养液。酶消化液：将胰蛋白酶溶于ＰＳ缓冲液Ｂ（Ｈ７２～．），ｐ．７４中配成０１．％胰蛋白酶消化液；将
Ｉ型胶原酶溶于ＰＳ缓冲液（Ｈ７２～７４中，Ｂｐ．．）配成００％的胶原酶消化液。０１胰蛋白酶及．８．％
１４方法．
维细胞培养常存在污染、消化不全和纯度不够等现象。为此，们参照Ｓｍｓｎ等的培养方法并作我ｉｐｏ
了改进，摸索出一种简便、可靠，且同时能培养出心肌细胞和心脏成纤维细胞的方法，心肌细胞和心为脏成纤维细胞的体外研究提供了更有效Байду номын сангаас的技术手段，作报道。现
００％Ｉ型胶原酶以２１．８：混合，配现用。现１２实验动物１～Ｆ龄Ｓ．３ｔＤ大鼠１２０～５只，由本院实验动物中心提供。
［收稿日期］２０－６３０９０－０［作者单位］１蚌埠医学院药理学教研室，．安徽蚌埠２３３２蚌３００；．埠医学院第一附属医院心血管内科，安徽蚌埠２３０３０４［作者简介］张乃菊（９１一）女，士研究生．１８，硕［通讯作者］祝晓光，研究生导师，教授．

原代心肌细胞-原代心成纤维细胞培养方法

原代心肌细胞-原代心成纤维细胞培养方法实验准备：昆明乳鼠25~30只；生物安全柜；巴氏吸管2支；培养皿2个；原代器械盒；15ml 离心管；50ml离心管各一支；胰酶；PBS；1%双抗；封口膜；酒精灯；Dhanks；实验主要分为两大步骤进行：第一天晚上1、培养皿内加入预冷的PBS+1%双抗。

2、取乳鼠酒精喷全身取心脏放到提前准备的培养皿中无需剪碎稍抖动清洗。

3、所有心脏取完，用巴氏吸管将培养皿中的心脏吸到15ml离心管中，稍等沉降，吸去液体。

4、加入Dhanks冲洗心脏，吸出弃去，将心脏上沾有的血尽量冲洗干净。

5、加入3mlDhanks和5ml胰酶。

封口膜封好，放到饭盒里，四度摇床8-12小时。

第二天上午1、配置二型胶原酶（16.8mg二型胶原酶+21mL DMEM,配好后放到水浴锅预热，微孔滤膜过滤，现用现配）2、8-12小时后，向装有心脏的15ml离心管中加入5ml DMEM完全培养基中和胰酶。

之后小心吸去液体，加入7ml提前准备好的二型胶原酶。

放到37度摇床摇10min转速160r，摇10min后将上清吸到新的50ml离心管中。

这个过程重复3次，基本上心脏全部溶解，只有少量组织。

（每次可以少加二型胶原酶4-5ml多消化几次）3、将50ml离心管中3次收得的上清滤网过滤，离心1000r5min，弃上清，沉淀加入DMEM完全培养基，逐层吹起，加入到细胞培养瓶中。

5只鼠铺一个培养瓶。

4、1.5-2小时后差速，将培养瓶中的培养液转移到六孔板里。

心肌细胞10只鼠一个6孔板即可。

注：用心肌细胞的取6孔板中细胞培养48小时；用成纤维细胞的将培养瓶中差速的瓶用1000ul的枪冲洗30次得到的成纤维细胞相对较纯。

小鼠乳鼠原代心肌细胞的改良培养

通讯作者：黄莺，博士，
副主任医师，副教授，新
疆医科大学第一附属医院
心脏中心，冠・，１２病木
齐市８３ＯＯ５４
中图分类号：Ｒ３１８
文献标识码：Ａ
组织Ｉ程：飘镪瞻心畦：小鼠
Ｍｏｄｉｆｉｅｄｐｒｉｍａｒｙｃｕｌｔｕｒｅｏｆｎｅｏｎａｔａｌｍｏｕｓｅｍｙｏｃａｒｄｉａｌｃｅｌｌｓ
ＭｅｎｇＬｉｎ — Ｉｉｎ ’ ＨｕａｎｇＹｉｎｇ’ ＭａＹｉ．ｔｏｎｇ ’ＬｉｕＦｅｎ，ＣｈｅｎＢａｎｇ— ｄａｎｇ。ＣｈｅｎＸｉａｏ．ｃｕｉ，ＧａｉＭｉｎ．ｔａｏ
基金资助：
国家自然科学基金资勃项目【毽１２６００２２）：额疆维吾尔自治区自然科学基金资助项￣（２０１４２１１Ｃ０４０）
摘要
文章编号：２０９５４３４４
（２０１５）３７－０５９９３－０５
稿件接受：２０１５－０８－０７
ｈｔｔｐ：／／ＷＷＷｃｒｔｅｒ．ｏｒｇ
背景：大鼠心肌细胞原代培养技术日渐成熟，但小鼠心肌细胞在同样实验条件下不易获得，而小鼠基因组与人类基因组有更多相似之处，具有更高的研究价值。目的：改进小鼠乳鼠原代心肌细胞的培养方法，得到纯度高、活力强、保持心肌细胞原有结构和功能的心肌

小鼠乳鼠心肌细胞的原代培养

小鼠乳鼠心肌细胞的原代培养娜几娜;王凌鹏;马艳;侯月梅【摘要】目的:观察原代培养的小鼠乳鼠心肌细胞的形态特征.方法:Ⅱ型胶原酶、胰蛋白酶消化心脏组织,差速贴壁分离法.结果:12 h心肌细胞基本贴壁,第2天可长成单层,第3～4天细胞伸出伪足相互接触交织成网,逐渐形成细胞簇或细胞单层,搏动呈同步性,收缩明显有力,搏动频率为30～120次/min.结论:用Ⅱ型胶原酶、胰蛋白酶分离培养小鼠乳鼠心肌细胞可获得形态、活力良好的心肌细胞.【期刊名称】《新疆医科大学学报》【年(卷),期】2008(031)007【总页数】2页(P786-787)【关键词】乳鼠;心肌细胞;培养【作者】娜几娜;王凌鹏;马艳;侯月梅【作者单位】新疆医科大学第一附属医院,心脏中心,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学第一附属医院,心脏中心,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学第一附属医院,干细胞移植研究中心,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学第一附属医院,心脏中心,新疆,乌鲁木齐,830011【正文语种】中文【中图分类】R-332心肌细胞培养已成为心血管研究的基本方法和手段之一，目前在心肌细胞的生长发育、生理、代谢、病理、药理等方面已开展了多项基础研究。

其中体外培养的心肌细胞可保持结构及功能上的某些特点,并具有自发性节律搏动,且心肌细胞的培养具有简便、定量、重复性好以及不受神经体液因素的影响等特点。

利用培养的心肌细胞在探索非血液动力学因素所致的心肌肥厚的调节,研究心肌细胞的生物力学、凋亡、受体下调、缺血预处理、信号通路、对作用于心脏的新药进行筛选并对其安全性进行评价以及从培养的心肌细胞中提取有价值的生物因子等方面具有广阔的应用前景,故引起了人们的高度重视并竞相进行与心肌细胞培养有关的研究[1]。

心肌细胞培养的常见动物是大鼠,常用的细胞培养方法包括新生大鼠心肌细胞的培养和成年大鼠细胞的培养。

为观察原代培养小鼠乳鼠心肌细胞的形态特征，本研究用Ⅱ型胶原酶、胰蛋白酶分离培养小鼠乳鼠心肌细胞。

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ｏｓｄ：ＴｈｅｒｓｗｅｅｄｇｓｅｙｃｌｇｎｓｙｅＩｅｈａｔｒｉｅｔｄｂｏｌｅａｅｔｐＩ，ｔｙｓｎａｄＤＮａｅＩ．Ｔｈｅｌｕｐｎｉｎｗａｒ－ａｒｐｉｎｓｅｃｌｓｓｅｓｏｓｐｅ
Ｕｒｍｑ０ｕｉ８３０１１，Ｃｈｉａ）ｎ
Ａｂｔａｔｓｒｃ：０ｂｅｔｅｊｃｉ：Ｔｏｏｓｒｅｔｅｍｏｐｏｏｉａｈｒｃｅｉｔｃｆｔｅｃｌｕｅａｄｏｏｙｅ．Ｍｅｈｖｂｅｖｈｒｈｌｇｃｌｃａａｔｒｓｉｓｏｈｕｔｒｄｃｒｉｍｙｃｔｓｔ－
ｗｅｌｍｏｐｏｏｙａｄｓｏｔｎｏｓｂａｉｇｗｉｈｃｌａｅａｅｔｐＩ，ｔｙｓｎｎＤＮａｅｌｒｈｌｇｎｐｎａｅｕｅｔｎｔｏｌｇｎｓｙｅＩｒｐｉａｄｓＩ．
Ｋｅｒ：ｎｗｎｔ１ｒｔｃｒｉｍｙｃｔｓｃｔｒｙｗｏｄｓｅａａａ；ａｄｏｏｙｅ；ｕｌｕｅ
病理、药理等方面已开展了多项基础研究。其中体外培养的心肌细胞可保持结构及功能上的某些特
点，并具有自发性节律搏动，且心肌细胞的培养具有简便、定量、复性好以及不受神经体液因素的影响重等特点。利用培养的心肌细胞在探索非血液动力学
维普资讯
７６８
新疆医科大学学报
ＪＯＵＲＬＯＩＪＡＤＣＬＵＶＲＩ２０ｕＮＡＦＸＮＩＮＧＭＥＩＡＮＩＥＳＴＹ０８Ｊ１
．
。
３１７）（
小鼠乳鼠心肌细胞的原代培养
胰蛋白酶分离培养小鼠乳鼠心肌细胞可获得形态、力良好的心肌细胞。活关键词：鼠；肌细胞；培养乳心
中图分类号：－３Ｒ３２文献标识码：Ａ文章编号：０９５５（０８０ — ７６０１０ —５１２０）７０８—２
ｐｌｔｄｔｅｕｃｈｅｆｂｒｂｌｓｏｔｎｔＲｅｕｔ：Ｔｈｅｃｌｓｐｒａｖｅｈｉｓｄｙａｄｄｅｌｅｔｅｒａｅｏｒｄｅｔｉｏａｔｃｎｅ．ｓｌｓｅｌｓｅｄｏｒｔｅｆｒｔａｎｖｅｏｐｄｈｉ
心肌细胞培养已成为心血管研究的基本方法和
ｌ材料与方法
１１动物和主要试剂１．０窝出生后３ｄ以内的小鼠乳鼠（明种小白鼠）昆。每窝乳鼠为（２５－．１１．４２２）＿
手段之一，目前在心肌细胞的生长发育、生理、代谢、
ｃｌｓＴｈｅｃｌｓｂａｐｏａｏｕ１ｔ３ｅｌ．ｅｌｅｔｓｎｔｎｅｓｙａ０～１０ｐｒｍｉｔ．Ｃｏｃｕｉｎ：Ｉａｔｉａｄｏ１ｅｎｕｅｎｌｓｏｔｃｎｏｂａｎｃｒｉｍｙｏｙｔｓｗｉｈｃｅｔ

Ｔｈｅｐｒｍａｙｃｌｕｅｆｎｅａａａｆｍｏｓａｄｉｃｙｃｔｓｉｒｕｔｒｓｏｗｎｔｌｒｔｏｕｅｃｒａｍｏｙｅ
Ｎａｉａｊｎ，ＷＡＮＧｎ－ｅｇＬｉｇｐｎ，ＭＡｎ，ｅｌＹａｔａ（ｒｉｒｓｕａｎｅＣａｄｏａｃｌｒＣｅｔｒ，ＦｉｓＡｆｌａｅｓｉａ，ＸｉｊａｇＭｅｉａｉｅｓｔｒｔｆｉｉｔｄＨｏｐｃｌｎｎｄｃｌＵｎｖｒｉｙ，ｉ
娜几娜，王凌鹏，马艳，侯月梅 “
（疆医科大学第一附属医院脏中心，干细胞移植研究中心，疆新心新乌鲁木齐８０１）３０１
摘要：的：察原代培养的小鼠乳鼠心肌细胞的形态特征。方法：目观 Ⅱ型胶原酶、蛋白酶消化心脏组织，胰差速贴壁分离法。结果：２ｈ心肌细胞基本贴壁，２天可长成单层，３４天细胞伸出伪足相互接触交织成网，１第第～逐渐形成细胞簇或细胞单层，动呈同步性，缩明显有力，动频率为３～１０次／ｎ结论： Ⅱ型胶原酶、搏收搏Ｏ２ｍｉ。用