农药生物测定实验指导书资料
农药生物测定(1)
1、标准目标昆虫：是指被普遍采用的，具有一定代表性和经济意义，以及抗药力稳定均匀的农药杀虫毒力和毒效指示试虫群体。
2、毒力：是指药剂本身对不同生物发生直接作用的性质和程度。
3、药效：是在田间或接近田间的条件下所测定的药剂对生物的作用效果。
4、致死中量的置信限：即致死中量的可靠范围，亦即供试昆虫种群致死中量真值的波动范围。
5、内吸杀虫剂：凡是可以通过植物根茎叶以及种子等部位渗入植物内部组织，随着植物体液传导植株，不妨碍植物的生长发育，而对害虫具有很高毒效的化学物质，称为内吸杀虫剂。
6、内吸杀虫作用：昆虫由于受内吸杀虫剂的毒杀作用而致死亡的过程，称之为内吸杀虫作用。
7、杀菌剂室内生物测定：将杀菌物质作用于细菌、真菌或其它病原物（包括线虫）,根据其作用效果的大小来判断药剂毒力。
8、除草剂的生物测定：利用生物体（作物试材、杂草试材，主要指有害生物）对除草剂的反应，来测定除草剂的毒性及其效果的基本方法。
9、杀虫剂室内生物测定：在实验室条件下，以昆虫（包括螨类）对杀虫剂的反应来鉴别某一种农药或某一类化合物的生物活性测定的一种基本方法。
1、杀虫剂生物测定存在的问题（1）评判标准单一（2）人为地固定检查时间（3）无统一的标准试虫（4）一般用校正死亡率表示核心是没有系统评判生物测定结果的方法和标准。
2、影响杀虫剂毒力测定的主要因素分析（1）杀虫剂和溶剂杀虫剂：其理化性质是决定毒力的根本原因。
溶剂：对药剂本身的理化性质一般不产生影响，但不同溶剂会影响昆虫表皮。
（2）环境条件温度：影响到处理前---养虫；影响到处理过程中---挥发、吸收等；影响到处理后---昆虫的死亡率。
湿度：一般不影响杀虫剂的穿透性及作用速度，也不影响解毒过程，通常它只影响昆虫对杀虫剂的忍受力。
光照条件以及昆虫在药剂处理前后的食物供应，营养条件等也会影响到测定结果。
（3）供试昆虫：不同种类的昆虫敏感性不同；同种昆虫不同品系对杀虫剂的敏感性也不同；昆虫不同发育阶段对杀虫剂的敏感性也不同（卵期通常对杀虫剂的敏感性比较低，通常以为有杀虫卵作用的杀虫剂，有很多主要是杀了初孵幼虫）；昆虫的性别与生殖对杀虫剂的敏感性（一般雌性昆虫对杀虫剂的敏感性比雄性昆虫低，但对有机磷杀虫剂来讲，则雌性个体比雄性个体感受性低。
最新生物农药实验教案上课讲义
《生物农药》实验指导书金晨钟主编谭显胜湖南人文科技学院生命科学系农学教研室20XX年9月前言生物农药（biopesticides），按照Copping和Menn的定义包含活体微生物（病毒、细菌、真菌），昆虫致病线虫，植物源农药，微生物农药，微生物次生代谢物质（抗生素），昆虫信息素，用于表达抗虫、抗病、抗病毒、耐除草剂的基因以及昆虫天敌。
生物农药的独特优点是对人类健康威胁小，对环境安全。
这正是全社会最关心的问题之一。
进入21世纪以来，各国政府和民众更加重视生物农药的开发和应用，生物农药在整个农药市场的份额正在逐年上升。
我国的天然药物资源十分丰富，为了发现新的活性成分，寻找新的药物，就必须首先从复杂的药物成分中提取出有活性的单体成分，以期为新农药合成提供先导化合物。
因此，正确掌握提取分离的实验操作以及熟悉快速、有效的新的提取分离技术在分离目的化合物中就显得尤为重要。
本实验指导书书共分三部分。
第一部分是有效成分的提取。
内容主要包括溶剂提取法（回流提取、索氏提取）和水蒸气蒸馏法，重点介绍了溶剂提取法的原理和如何选择溶剂，要求掌握回流提取、索氏提取装置和水流气蒸馏装置的正确应用。
第二部分主要介绍有效成分的初步分离及其化学成分预测试。
内容主要包括薄层层析分离法和有效成分化学预试验方法，要求掌握薄层层析板的制备和正确应用各种分离方法。
第三部分是有效成分的生物测定。
内容包括生物杀虫剂的生物测定方法（为了突出与化学农药的区别，这里主要介绍驱避、拒食等作用方式的测定方法）、生物农药杀菌剂生物测定方法（孢子萌发法和生长速率测定法）、生物农药抗植物病毒剂（以抗烟草花叶病毒TMV为例）和生物农药除草剂生物测定方法。
生物农药是一门专业性很强的学科交叉课程，学好生物农药，需要同时具备农学、生物学和化学等方面的知识。
根据此门课程的特点，结合本科生教学特点的需要，我们编写了此实验指导书。
编者20XX年9月实验须知一、牢固树立“安全第一”的思想1、实验前应充分预习实验内容，了解实验所用药品的性能及危害和注意事项。
农药生物活性测定实验指导(精)
农药生物活性测定实验指导游红编实验一供试目标昆虫的饲养——棉铃虫的饲养一、实验目的：1、明确标准目标昆虫饲养在生物测定中的意义；2、了解常见目标昆虫的饲养条件及方法；3、学习棉铃虫的饲养方法。
二、实验原理：杀虫剂生物测定必须使用大量、群体整齐、健康程度一致，龄期一致的标准目标昆虫，才能保证对杀虫剂毒力的反应准确。
因此，进行杀虫剂生物测定必须采用人工饲养标准目标昆虫，以保证供试昆虫的充分供应，这是农药毒力试验工作中的最基本的组成部分。
饲养目标昆虫的种类，除采用农作物害虫外，仓库害虫、卫生害虫及其他繁殖力强，便于饲养的昆虫也可采用，通过饲养条件的控制，促使供试目标昆虫尽量达到生理状况一致，以减少试验中的误差。
棉铃虫（Helicoverpa armigera H.）属鳞翅目夜蛾科。
食性杂，可长年饲养。
但因幼虫在三龄期以后有相互残杀习性，故必须单头饲养。
对该虫可采用天然植物饲料，如棉蕾铃、青豌豆、新鲜玉米和辣椒等。
若连续大量饲养，须用人工饲养。
三、主要仪器及试材：1、试虫：棉铃虫；2、饲养用具：养虫室，培养皿（15cm），培养皿（5cm）,养虫缸，纱布等。
3、饲料：（1）、饲料组成：熟大豆粉（g）20.0 玉米粉（g）30.0大麦粉（g）30.0 抗坏血酸（g） 1.0干酵母（g）8.0 琼脂（g） 3.5苯甲酸钠（g）0.8 棉油(ml) 0.536％醋酸(ml) 6.0 10％甲醛(ml) 1.0水(ml) 200(2)、配制方法：取总水量30％的水，加入玉米粉等成分搅拌；另取70％的水，以溶解琼脂，冷却至70℃时与上述成分混合搅拌；饲料均匀倒入培养皿（15cm）内，厚度1.0——1.5cm，冷却后备用。
四、实验方法与步骤：1、饲养条件：养虫室温度保持26——28℃，相对湿度60%——70%，12小时光照。
2、饲养方法：（1）、在培养皿（16cm）放入约0.3——0.5mm厚的饲料若干块，将附有卵块的纱布放入皿内，用黑布将皿口封住，布上压玻璃板，缸下部对着光源，孵化的幼虫可很快到饲料上取食。
本科生农药生物测定
药剂：一般要求纯度在95%以上，至少是含量较高原药、原粉
作为毒力测定用的杀虫药剂最好是化学纯的化合物， 不是制剂，不是工业制品，不是加有其他辅助剂的成品， 因为任何杂质的存在都会影响到毒性，增效或减效 溶剂 不同溶剂对昆虫表皮的穿透率不同，单位时间内渗入虫体 内的虫量也不同，在体内的代谢速率也不同，最后到达 靶标部位的药量也不同，测得结果就有明显差异。因此， 配制药液的溶剂一致，一般以丙酮为宜。
是在分类上和使用价值上有一定意义。 3. 群体的生活力和抗药力要稳定和均匀一致。
筛选新农药时，应选择抗药力和生活力较强、自然死亡率低的 试虫群体，才不致影响筛选结果。测定农药残留量时，最好选用 敏感的群体，才容易得出试验结果。
4.选用合适的虫期、龄期、年龄的试虫群体或混合群体供作测试对 象。
选用原则是试虫群体间的虫期比例、虫龄、年龄用虫体大小比 较接近一致，虫龄不宜过大或过小，新羽化的或年龄过大的试虫 群体不宜采用。
一、标准目标昆虫概念 被普遍采用的，具有一定代表性和经济
意义以及抗药力稳定均匀的农药杀虫毒力 和毒效指示试虫群体。
二、标准目标昆虫的要求
1．易饲养，繁殖力强。 不互相残杀，不受季节和寄主限制，能保证周年充分供应。
2．具有一定的代表性和经济意义。 如代表重要农业害虫的目、科或不同的取食特性和敏感性，或
三、饲养中的环境条件
1、温度：最适温度是20－25℃ 温度过低，昆虫死亡；温度过高，对很多成虫的繁殖力有不利的
影响，对饲养质量也受到影响。 虫架上装日光灯时，不要使饲养容器靠近日光灯，否则会使温度
农药生物测定一至三章
. .农药生物测定绪论一、农药生物测定的含义•广义的生物测定为：来自物理、化学、生理或心理的刺激，对生物整体〔living organism〕和活体组织〔tissue〕产生效力大小的度量〔如：机械刺激、电刺激、各种射线的照射等〕。
•即：生物测定是研究作用物、靶标生物和反响强度三者关系的一项专门技术。
•狭义的生物测定为：以生物的整体或离体的组织、细胞，对某些化合物的反响，作为评价这些化合物生物活性的量度，运用特定的实验设计，以生物统计为工具，测定供试对象在一定条件下效应，即为生物测定。
农药生物测定：运用特定的试验设计，利用生物整体或离体的组织、细胞对农药〔或某些化合物〕的反响并以生物统计为工具，分析供试对象在一定条件下的效应，来度量某种农药的生物活性。
二、农药生物测定的简史第一时期：19世纪末~1920至1923年间•事件：法国学者埃利希〔R. C. Ehrlich〕研究出测定白喉抗毒素含量的标准方法–特点：都是用单个动物体作直接的效力测定，将待测的药剂与标准药剂相比拟来估计其相对药效。
–缺点：由于生物个体从受药到中毒死亡需要一个过程，因而以生物中毒死亡为反响标准测出的致死剂量总比实际反响所需剂量大。
第二时期：20世纪30年代至20世纪70年代•事件：–1937年欧文〔J.O.Irvin〕首先提出了系统的生物测定方法报告；–1947年芬尼〔D.J.Finney〕出版了系统的生物测定统计方法；–1950年芬尼及古德温〔L.G.Goodwin〕出版"生物测定标准化"一书；–1957年布斯维纳〔J.R.Busvine〕出版"杀虫剂生物测定评述"；–1959年X宗炳在其"昆虫毒理学"一书中，以专章对杀虫剂生物测定及统计分析作了系统的论述；–1963年X泽薄等出版"杀虫剂及杀菌剂的生物测定"；•特点：研究出以生物群体为反响根底的生物测定方法，提高了测定的准确度。
农药生物测定田间试验
农药生物测定田间试验一个新药物的发现, 必须两个系统的同时运转一个系统是化学系统, 一个系统是生物学系统农药生物测定与田间药效试验西南大学植保学院丁伟教授一、农药室内生物测定1．生物测定（bioassay ）是由biological 和assay 组合而成，通常是指具有生理活性的物质对某种生物产生效应的一项测定技术。
但是，从更广的范围来理解生物测定，则可概括为：“对生物的任何刺激所产生的效应的测定, 包括来自物理、化学、生物、生理及心理等方面的刺激对生物活体产生的反应。
”总之，生物测定是研究作用物、靶标生物和反应强度三者关系的一项专门技术。
2．生物测定的一般模式3．农药生物测定（pesticidebioassay ）指在一定条件下利用靶标生物测定其对某些化合物的反应的量度，进而鉴别某种化合物生物活性的基本技术与方法。
靶标生物：通常指有害生物，包括昆虫、螨类、病菌、杂草、鼠类等。
包括这些生物的整体或离体的组织、细胞等。
待测化合物：可以是已经成为农药的化合物，包括杀虫（杀螨）剂、除草剂、杀菌剂、杀鼠剂、杀线虫剂乃至卫生杀虫剂等；也可以是待筛选的化合物（已知物和未知物）。
生物反应：指靶标生物对杀虫、杀菌、除草等作用的反应，可以延伸为凡是干扰破坏有机体正常生长、发育、行为、代谢等效应的反应，如植物生长调节、昆虫生长调节、信息传递物质等。
生物反应用死亡率、抑制率、反应率等指标来表示。
量度：指反应的强度或者大小的指标。
要运用特定的实验设计，以生物统计为工具，借助于数学的方法，来给生物反应以量化表达。
生物活性：指药物或某一个化合物对生物体产生的效应。
如果有，则这个药物或化合物有生物活性，如果不产生效应，则这个药物或化合物就没有生物活性。
4．农药生物测定的知识体系（1）供试对象的准备（包括靶标生物的饲养技术和待测化合物的选择）；也包括组织培养、细胞培养、药剂配制、剂量计算等内容（2）生物测定的操作技术与方法（包括室内生测、小区实验和田间药效实验三个方面）；（3）影响农药生物测定的因素分析；（药剂、生物体、环境、操作方法）（4）农药生物测定结果的评价与表达。
农药生物活性测定实验指导
农药生物活性测定实验指导游红编实验一供试目标昆虫的饲养——棉铃虫的饲养一、实验目的：1、明确标准目标昆虫饲养在生物测定中的意义；2、了解常见目标昆虫的饲养条件及方法；3、学习棉铃虫的饲养方法。
二、实验原理：杀虫剂生物测定必须使用大量、群体整齐、健康程度一致，龄期一致的标准目标昆虫，才能保证对杀虫剂毒力的反应准确。
因此，进行杀虫剂生物测定必须采用人工饲养标准目标昆虫，以保证供试昆虫的充分供应，这是农药毒力试验工作中的最基本的组成部分。
饲养目标昆虫的种类，除采用农作物害虫外，仓库害虫、卫生害虫及其他繁殖力强，便于饲养的昆虫也可采用，通过饲养条件的控制，促使供试目标昆虫尽量达到生理状况一致，以减少试验中的误差。
棉铃虫（Helicoverpa armigera H.）属鳞翅目夜蛾科。
食性杂，可长年饲养。
但因幼虫在三龄期以后有相互残杀习性，故必须单头饲养。
对该虫可采用天然植物饲料，如棉蕾铃、青豌豆、新鲜玉米和辣椒等。
若连续大量饲养，须用人工饲养。
三、主要仪器及试材：1、试虫：棉铃虫；2、饲养用具：养虫室，培养皿（15cm），培养皿（5cm）,养虫缸，纱布等。
3、饲料：（1）、饲料组成：熟大豆粉（g）20.0 玉米粉（g）30.0大麦粉（g）30.0 抗坏血酸（g） 1.0干酵母（g）8.0 琼脂（g） 3.5苯甲酸钠（g）0.8 棉油(ml) 0.536％醋酸(ml) 6.0 10％甲醛(ml) 1.0水(ml) 200(2)、配制方法：取总水量30％的水，加入玉米粉等成分搅拌；另取70％的水，以溶解琼脂，冷却至70℃时与上述成分混合搅拌；饲料均匀倒入培养皿（15cm）内，厚度 1.0——1.5cm，冷却后备用。
四、实验方法与步骤：1、饲养条件：养虫室温度保持26——28℃，相对湿度60%——70%，12小时光照。
2、饲养方法：（1）、在培养皿（16cm）放入约0.3——0.5mm厚的饲料若干块，将附有卵块的纱布放入皿内，用黑布将皿口封住，布上压玻璃板，缸下部对着光源，孵化的幼虫可很快到饲料上取食。
《农药生物测定》课程教学大纲
《农药⽣物测定》课程教学⼤纲《农药⽣物测定》课程教学⼤纲⼀、课程差不多信息课程代码：课程名称：农药⽣物测定英⽂名称：Bioassay of Pesticide课程类不：专业选修课学时：30学分：1.5适⽤对象:植物爱护考核⽅式：考试(期末考试占70%、试验占20%、平常占10%)先修课程：《植物化学爱护》、《农业昆⾍学》、《农业病理学》、《杂草学》、《⽥间试验和统计⽅法》、《⼀般化学》、《有机化学》、《仪器分析》等。
⼆、课程简介农药⽣物测定是度量农药对动植物群体、个体、活体组织或细胞产⽣效应⼤⼩的⽣物测定技术，是制药⼯程专业重要的必修课之⼀。
三、课程性质与教学⽬的学习本课程的要紧⽬的是使学⽣学习并把握杀⾍剂、杀菌剂、除草剂及杀线⾍剂的室内⽣物测定和⼤⽥药效试验的差不多理论和差不多技能。
把握各类农药⽣物测定结果的评判和统计分析⽅法。
通过本课程的学习，要求学⽣把握杀⾍剂的室内毒⼒测定原理、触杀毒⼒、胃毒毒⼒、内吸毒⼒、熏蒸毒⼒、拒⾷活性等⽣物活性测定的⽅法；把握杀菌剂室内孢⼦萌发法，含毒介质培养法及盆栽试验等的测定⽅法；把握除草剂⽣物测定原理及种⼦发育、植株⽣长量、⽣理⽣化指标的测定⽅法；把握⼤⽥药效试验的设计原理和统计分析⽅法。
四、教学内容及要求第⼀章绪论⽬的与要求教学内容1.要紧内容：论述农药⽣物测定的概念、进展历史、农药⽣物测定的内容及地位。
2.差不多概念和知识点：3．咨询题与应⽤（能⼒要求）：正确明⽩得⽣物测定、农药⽣物测定的定义，了解农药⽣物测定的进展历史，把握农药⽣物测定研究内容，领会农药⽣物测定的地位和作⽤。
(三)课后练习查阅资料，了解农药⽣物测定的现状及要紧技术。
（四）教学⽅法与⼿段本课程采纳课堂教学与课堂讨论的形式开展教学。
第⼆章杀⾍剂的⽣物测定（⼀）⽬的与要求：1．正确明⽩得和熟练把握杀⾍剂（包括特异性昆⾍抑制剂）差不多理念和概念和具体⽅法；2．把握农药室内⽣物测定的评判和统计分析⽅法；3．熟悉标准⽬标昆⾍的饲养。
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（制药、植保专业用）
河南农业大学农药学研究室 2013.05.13
前言
农药生物测定实验是本课程教学过程中的一个实践性很强的教学环节。通过 对该课程学习，使学生通过学习理论和实践，掌握杀虫剂、杀菌剂、除草剂、植 物生长调节剂及杀线虫剂的室内生物测定的基本理论和基本技能，掌握各类农药 生物测定结果的评判和统计分析方法，以便在农药研究、生产和应用中能够正确 合理地评价农药的活性，为科学合理使用农药提供依据。
入表中。
每头试虫受药量（微克）=每微升药液中含药剂微克数×每头试虫受药微升
数
单位试虫受药量（ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱg 克药量/g 虫体 每头试虫受药量（μg）
重）=
试虫平均体重（g）
四、计算致死中量（LD50） 根据测定结果，在座标纸上以单位体重受药量（或每头受药量）为横座标。
以校正死亡率为纵座标，定出各单位体重受药量（或每头受药量）的校正死亡率
度：0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0μg/μL 等。
2．称重：将选好的试虫，在分析天平上称重，每个浓度为一个处理，每处
理 10 头试虫，重复 3 次，将每 10 头试虫放在干净培养皿内，待处理。
3．点滴：根据试虫大小确定点滴药液量，一般以试虫接受药液不从体壁上
流失为宜。黄斑皮蠹 4 令幼虫每虫点滴 0.5 uL 于幼虫胸部背板处，各处理试虫
的点药液量应一致。先做对照（点滴丙酮）再从药剂浓度低浓度至高浓度依次点
滴，处理完毕后，给一定量新鲜饲料，置于 25-27 ℃恒温条件下培养。
4．结果观察与统计：24h 后观察记载试虫死活反应，计算死亡率及校正死亡
率，将结果记入表中。
为求得供试药剂的致死中量，需要根据用药浓度及体积求出每头试虫受药量
（μg），并换算出单位虫体重的受药量（μg 药量/g 虫体重），将换算结果一并填
1
为确定合适的施药浓度（或剂量）（要求试虫死率亡分布在 16-84%范围内），
在正式试验前，必须先用几个浓度或剂量（范围较大）进行试点滴，根据 24 h
观察的死亡结果，确定最合适的点滴浓度，预备试验所用试虫可减少一半左右。
（三）正式试验步骤
1．药液的配制：根据预试结果，将容量瓶中的母液，用丙酮稀释成 5 个浓
本实验指导书共有 10 个实验，计划 20 学时，主要涉及农药室内活性测定、 数据统计分析方法及报告撰写方法等。为了减少与教课书的重复和强调学生的动 手能力，在内容的编写上，重点突出试验操作部分，理论知识设计相对较少。同 时为了培养学生独立完成实验的能力，不仅在课堂上要求每位学生都要动手实 验，而且在试验报告中要进行总结和分析。
各点，连接各点。得药量——死亡率毒力曲线，呈 S 形。为了准确的求出致死中
本实验指导书是在过去实验教学的基础上，参照一些新的实验技术编写的， 但由于时间仓促，难免有不妥和不完善之处，有待实践过程中进一步改进和提高。
I
目录
实验一 杀虫剂触杀毒力精密测定（微量点滴法）................................................ 1 实验二 杀虫剂触杀毒力精密测定——玻片浸渍法................................................ 5 实验三 杀虫剂胃毒毒力精密测定——夹毒叶片法................................................ 7 实验四 杀虫剂熏蒸毒力测定（三角瓶熏蒸法）.................................................. 10 实验五 杀虫剂拒食活性测定................................................................................ 12 实验六 杀菌剂生物活性测定-生长速率法............................................................ 14 实验七 杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法.................................................... 17 实验八 孢子萌发法杀菌剂毒力测定.................................................................... 19 实验九 除草剂生物活性测定（种子发芽测定法-培养皿滤纸法） ...................... 21 实验十 除草剂生物活性测定方法——植株生长量测定法.................................. 23
i
实验一 杀虫剂触杀毒力精密测定（微量点滴法）
室内比较精确的触杀毒力测定方法是点滴法和药膜法。本实验采用点滴法 （topical application）。是将一定量农药丙酮液点滴在虫体的一定部位上，药剂自 体壁进入体内。
一、实验目的： 学习和掌握触杀毒力精密测定技术——微量点滴法：绘制药量（或浓度）—— 死亡率毒力曲线，再转换成药量（或浓度）对数——死亡率机率值直线。求出致 死中量（LD50）或致死中浓度（LC50）；明确杀虫剂杀虫毒力表示方法的意义和 应用。 二、实验材料： 试虫：黄斑谷蠹 4 令幼虫。 药剂：辛硫磷、丙酮等。 仪器及用具：分析天平、培养皿、容量瓶、镊子、小试管及试管架、移液管、 微量点滴器等。 三、实验方法及步骤： （一）试验前的准备工作 1．试虫的移取： 取大小均匀一致 4 令黄斑皮蠹幼虫放入培养皿，每皿 10 头，为一个处理。 每个处理重复 3 次，分别在分析天平称重，求出平均体重。备用。 2．称药配药： 将待测药剂小心地移入洁净干燥的称量瓶中，在分析天平上准确称取一定量 药剂，放入小烧杯内，加少许丙酮溶解，再移入容量瓶中摇动，然后加入丙酮准 确至刻度。摇匀即为药液，备用。 3．微量点滴器的质量检定，根据说明书检查点滴仪是否服合质量要求。并 按试验要求的容量放到适当刻度，练习使用，或用毛细管微量点滴器，检查是否 畅通。 （二）预备试验