猪圆环病毒病2型灭活疫苗LG株资料工艺规程完整
编号: SC-TS-02-218猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺规程上海海利生物药品有限公司目录1. 主题内容 (2)2. 适用范围 (2)3. 引用标准 (2)4. 规程内容 (2)4.1 品名 (2)4.2 剂型 (2)4.3 规格 (2)4.4 菌（毒）种 (2)4.5 批准文号 (2)4.6 工艺流程图 (2)4.7 质量控制点 (4)4.8 活性物质制备工艺过程 (5)4.9 活性物质生产技术经济指标和原料利用率计算 (8)4.10油乳剂灭活疫苗制造工艺过程 (8)4.11油乳剂剂制造技术经济指标 (10)4.12设备一览表 (10)4.13生物安全及劳动保护 (11)4.14物料 (12)4.15成品质量标准 (15)4.16贮藏和有效期 (16)4.17包装材料要求 (16)4.18标签、说明书 (17)1.主题内容本标准规定猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）达到的技术要求。
2.适用范围本标准适用于猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）3.引用标准国家标准(猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）制造及检验试行规程)。
4.规程内容4.1品名通用名称：猪圆环病毒2型灭活疫苗(LG株)英文名：Porcine Circovirus Type 2 Vaccine,Inacitvated（Strain LG）汉语拼音：Zhu Yuanhuanbingdu Erxing Miehuoyimiao(LG Zhu)4.2剂型水包油剂型4.3规格20ml/瓶、40 ml/瓶、100ml/瓶、250 ml/瓶4.4菌（毒）种1.来源：中国农业科学院哈尔滨兽医生物研究所保存2.毒株：猪圆环病毒LG株3.代次：56～60代4.保存温度：-80℃以下保存4.5批准文号兽药生字（2010）0902010714.6工艺流程图猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺流程图4.7 质量控制点4.8活性物质制备工艺过程4.8.1 PK-15细胞系标准：1.细胞形态：用含10%的小牛血清的MEM培养液培养细胞，置37℃、含5%CO2培养箱中培养，2～3小时可貼壁，培养48小时应在1/2以上的瓶面出现细胞岛，并有部分相连、镜检时细胞形态是椭圆形或梭状上皮细胞，明朗、轮廓清晰、胞浆内可见小颗粒，72～96小时形成单层。
2.细胞纯净性：应无菌、无霉菌、无支原体、无外源病毒污染。
3.细胞致瘤性检验：不致瘤。
4.细胞核学检查：不同代次的细胞与基础细胞库的细胞相比，所有细胞的染色体模式数不得高出15%，核型必须相同。
5.制苗的细胞代次：第20～40代之间。
6.细胞保存：液氮保存，保存期为36个月。
4.8.2生产用毒种要求◆病毒含量：每毫升病毒含量应不低于105.5TCID50霉菌支原体其它外源病毒◆特异性与PCV2阳性血清中和后接种PK15细胞，中和细胞孔IPMA检测无明显着色反应，病毒对照孔呈棕红色染色。
◆毒种保存与毒种继代1）在-20℃以下保存，应不超过1年。
2）继代应不超过3代。
4.8.3 细胞的传代➢工艺过程选生长2—3天已形成致密单层的细胞种按常规法进行细胞分散，37℃培养，2～3天传代一次。
传代细胞传代时的分种率一般1：3即1瓶分3瓶，也可1：5。
可根据生产和试验的需要和细胞生长的情况增殖和扩大细胞。
每次传代应在细胞瓶上（中方瓶、扁瓶、圆瓶）注明细胞代次、日期。
◆生长不良、形态不好的细胞不能用。
➢工作条件工作环境洁净级别：100级温度：18～26℃相对湿度：30～65%压差：大于5Pa工作器械121℃高温灭菌◆高温蒸汽灭菌工艺应进行验证4.8.4接种制备细胞同步接种5%LG毒种，置37℃温室的转瓶机上培养，转速10～12转/小时。
4.8.5观察和收获➢工艺过程接种后每天逐瓶观察细胞病变，并做好记录，接毒后36～48小时用无血清的MEM培养基换液1次，继续培养72～96小时收获病毒液，置–20℃以下冰箱冻结保存，保存期不得超过12个月。
细胞培养物需冻融3次，检验无菌后，将数瓶圆瓶的病毒液混合后，无菌吸取病毒液小样，进行中间检验。
➢工作条件工作环境洁净级别：100级温度：18～26℃相对湿度：30～65%压差：大于5Pa工作器械121℃高温灭菌◆高温蒸汽灭菌工艺应进行验证4.8.6. 灭活工艺过程➢工艺过程病毒液导入灭活罐后，将甲醛溶液缓缓导入灭活罐使其终浓度为0.2%，37℃灭活24小时。
灭活结束后用10%亚硫酸钠加入病毒液，使其终浓度为0.05%终止灭活。
➢工作环境工作条件 洁净级别：10000级 温度：18～26℃ 相对湿度：30～65% 压差：大于5Pa工作器械 121℃高温灭菌◆ 高温蒸汽灭菌工艺应进行验证4.8.7半成品检验4.8.7.1 按照现行《中国兽药典》附录进行检验，应无细菌 霉菌 支原体 外源病毒4.8.7.2 病毒含量检验IPMA(免疫过氧化物酶单层细胞染色法)1) 将毒种用无血清MEM 培养基做10倍系列稀释。
2) 取10-3、10-4、10-5、10-6 4个稀释度各接种96孔细胞培养板，每个稀释度接种4孔，每孔100UL,同时设不接毒的空白对照4孔；3) 每孔再加入100uL 加入新消化的PK15细胞悬液 4) 37℃、含5%CO2培养箱中培养72小时5) 用33%丙酮-PBS 固定，用PCV2阳性血清进行IPMA 试验，测定各孔中病毒感染情况，按照Reed-Muench 法计算TCID50，每ml 病毒含量应不低于105.5TCID 50。
4.8.7.3 抗原灭活检验后检验◆ 按现行《中国兽药典》附录进行检验，应无菌◆ 灭活检验 灭活后的病毒液10倍稀释后取10-1、10-2、10-3 3个稀释度，每个稀释度各取1ml 接种到新消化的PK15细胞培养瓶中， 37℃、含5%CO2培养箱中培养96小时，盲传2代，按照病毒含量检验法检验，应均为阴性结果。
4.8.8岗位定员和生产周期岗位 人员 生产周期制细胞 3 每批共7 天配液 2 接种 2 收获34.8.9原材料：PK15细胞，其质量标准应符合PK15细胞系的要求。
4.9活性物质生产技术经济指标和原料利用率计算4.10 油乳剂灭活疫苗制造工艺过程4.10.1配方灭活液水相9份15 A VG 油相1份4.10.2 油相制备为法国SEPPIC提供的Montanide TM ISA 15A VG佐剂，4.10.3水相制备为已灭活的病毒液4.10.4乳化按照上述比例，先将水相加之乳化容器中进行搅拌，然后缓慢加入油相，以800r/min搅拌30分钟，再静止30分钟。
4.10.5分装4.10.5.1内包装容器➢名称：西林瓶或药用高密度聚乙烯瓶、丁腈橡胶塞➢药用高密度聚乙烯瓶由符合GMP要求的厂家直接提供。
➢丁腈橡胶塞灭菌：121℃，蒸汽灭菌20分钟。
➢西林瓶清洗：用超声波清洗机清洗2-3次；121℃，干热灭菌60分钟。
4.10.5.2分装生产：生产好的疫苗产品，移至分装生产线上，进行分装，有20ml/瓶、40 ml/瓶、100ml/瓶、250 ml/瓶四种规格。
4.10.5.3 工作环境工作条件洁净级别：100级温度：18～26℃相对湿度：30～65%压差：大于5Pa工作器械121℃高温灭菌◆高温蒸汽灭菌工艺应进行验证4.10.6轧盖贴签装箱➢压盖：分装完毕的产品，立即进入压盖生产线，加上铝盖，进行压盖。
➢贴签：贴签机调整设置好相应的产品批号及有效期限，进入贴签程序。
➢装盒：20ml每10瓶一盒，盒内放置说明书，用条形码封小盒口；装箱。
100ml每一瓶装入纸箱，盒内放置说明书，再每10瓶装入一盒；用条形码封小盒口。
➢装箱：外箱用泡沫箱外套纸箱，20ml每箱放入49盒疫苗，并在包装箱外侧贴一张该产品的标签。
100ml每箱放入9盒疫苗，并在包装箱外侧贴一张该产品的标签。
➢入库。
注：批号设置、贴签印刷应符合《兽药瓶签、说明书的管理规定》4.10.7岗位定员和生产周期岗位人员生产周期分装 4 1/2天压盖 3 1/2天贴签装箱 3 2天4.11油乳剂剂制造技术经济指标4.12 设备一览表4.13生物安全及劳动保护4.13.1技术安全1.上岗工人必须经过“生物安全及自我防护”培训。
2.生产过程中，各岗位必须严格按照工艺规程、岗位标准操作程序及设备标准操作程序操作，不得违反。
3.生产时必须在符合兽药GMP要求环境条件下进行。
4.每次生产更换批号（或品种和规格），各工序须清洗工具容器和场地，达到清场要求。
5.各工序半成品容器加盖密封存放，放至半成品贮存间规定的地方，防止异物混入，并有明显标志（有卡片），按品名、规格、批号存放或设棚栏隔开。
6.机器设备有专人管理、维护、保养。
严格执行安全用电规定，经常检查电源、线路，防止漏电短路，电源要接地线，禁止湿手开掣；机电设备严禁带病运转，机器运行时，严禁用手伸入转动部位；禁止用水洗电机转轴及皮带轮防护安全罩，操作时不能站在与皮带轮同一线上。
7.随时检查燃气系统，应保持完好无损，以免发生事故，设备、设施应定期检查完好情况。
8.管道标志明显：水管涂绿色，药液管涂黄色，蒸气管涂红色，严防漏气漏液。
高压容器、管道系统等应经劳动技术安全部门检测合格方能使用。
9.各工序均应配备防火设施和其他意外应急设施，每个员工都要学会使用灭火器材。
10.各岗位操作人员须经严格岗位培训并经考核合格，凭岗位合格证才能上岗独立操作。
非本岗位人员不能顶替上班。
当班人员不能随意离开岗位，严禁窜岗，必需离开时要有本岗位人员接替方能离开。
交接班应交接清楚，认真填写交接班记录。
11.各岗位上岗须按规定穿戴工作服、帽、鞋、手套。
特别是接触强酸、强碱，要穿戴防护衣、胶手套、水鞋及防护镜，避免酸、碱液溅到身上。
万一被溅上皮肤，立即用大量水冲洗。
4.13.2劳动保护1．上班人员均要按规定穿戴工作服、帽、鞋、防护手套等劳保用品。
2．使用显微镜的人员严格执行中休、班休制度，每年检查视力一次。
员工每年进行健康检查一次。
建立健康档案。
4.14物料4.14.1 注射用水的质量标准及检验1）性状：本品为纯化水经蒸馏所得的无色的澄明液体；无臭，无味。
2）检查a :pH值 :应为5.0～7.0（附录ⅥH）。
b :氨取本品50ml，照纯化水的方法检查，注：对照用氯化铵溶液改为1.0ml，应符合规定（0.00002％）。
c :细菌内毒素取本品，依法检查（附录ⅪE），每1ml中含内毒素量应小于0.25EU。
d :氯化物、硫酸盐与钙盐、硝酸盐与亚硝酸盐、二氧化碳、易氧化物、不挥发物与重金属照纯化水的方法检查，应符合规定。
4.14.2小牛血清名称：牛血清质量标准：2005年版《中华人民共和国药典》三部附录供应商：上海微科生化试剂有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）4.14.3营养液名称：MEM质量标准：HG/T 3935-2007供应商：清大天一生物科技有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）4.14.4磷酸钠名称：磷酸钠质量标准：HG/T2968-1999供应商：国药集团化学试剂有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）4.14.5磷酸氢二钾名称：磷酸氢二钾质量标准：HG-T3487-2000供应商：国药集团化学试剂有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）4.14.6磷酸氢二钠名称：磷酸氢二钠质量标准：GB 1263—2006供应商：国药集团化学试剂有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）4.14.7 胰酶名称：胰酶质量标准：GB/T 21498-2008供应商：国药集团化学试剂有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）4.14.8 D-氨基葡萄糖名称：D-氨基葡萄糖供应商：Sigma（或经公司批准的其他符合规定的厂家）4.14.9无水氯化钙名称：无水氯化钙质量标准：HG/T2327-92供应商：国药集团化学试剂有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）4.14.10苯酚红名称：苯酚红质量标准：GB/T 15351-94供应商：国药集团化学试剂有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）4.14.11佐剂名称：15A VG 佐剂质量标准：供应商：法国SEPPIC公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）4.14.12 EDTA名称：乙二胺四乙酸二钠(250g)质量标准：GB12593-2007供应商：国药集团化学试剂有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）4.14.13 乙醇名称：乙醇质量标准：中国药典，2000年版。
猪圆环病毒2型灭活疫苗(LG株)的研制与应用
猪圆环病毒2型灭活疫苗(LG株)的研制与应用刘长明;危艳武;陆月华;黄立平;吴洪丽;张朝霞;温士刚;姜凤娟【摘要】@@ 猪圆环病毒2型(PCV2)感染引起的以患猪全身性淋巴结肿大为特征的多系统功能衰竭性疾病,临床上表现有断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎与肾炎综合征、猪呼吸道疾病综合征、母猪繁殖障碍、坏死性淋巴结炎、肉芽肿性肠炎和渗出性表皮炎等症状,统称为猪圆环病毒病.我国猪群中PCV2抗体阳性率达80%以上,发病率为25%～40%,死淘率10%左右.病毒感染猪后破坏免疫系统,产生免疫抑制,增强了对多种病原体的易感性,引发难以控制的严重疾病.【期刊名称】《畜牧兽医科技信息》【年(卷),期】2010(000)009【总页数】2页(P29-30)【作者】刘长明;危艳武;陆月华;黄立平;吴洪丽;张朝霞;温士刚;姜凤娟【作者单位】中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,哈尔滨,150001【正文语种】中文【中图分类】S8猪圆环病毒2型(PCV2)感染引起的以患猪全身性淋巴结肿大为特征的多系统功能衰竭性疾病，临床上表现有断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎与肾炎综合征、猪呼吸道疾病综合征、母猪繁殖障碍、坏死性淋巴结炎、肉芽肿性肠炎和渗出性表皮炎等症状，统称为猪圆环病毒病。
我国猪群中PCV2抗体阳性率达80%以上，发病率为25%～40%，死淘率10%左右。
病毒感染猪后破坏免疫系统，产生免疫抑制，增强了对多种病原体的易感性，引发难以控制的严重疾病。
1 PCV2感染引起的相关疾病1.1 断奶仔猪多系统衰竭综合征发生于5～12周龄保育猪，临床表现为进行性消瘦、呼吸急促、呼吸困难、黄疸、下痢、皮肤苍白和中枢神经失调等症状。
病理变化为全身淋巴结肿大，淋巴器官的肉芽肿性炎症和不同程度的淋巴细胞缺失，解剖还可见肺斑点状出血。
1.2 猪皮炎肾病综合征发生于2～4月龄生长猪，临床表现为多处局限性微凸出的暗红色病灶，此后迅速发热，直肠温度可达41℃以上，出现皮下水肿、厌食、体重减轻和抑郁等。
猪圆环病毒2型(PCV2)灭活疫苗(LG株)在规模猪场的应用效果观察
，
（ ）空 白对照组 ：选取未免疫疫苗 的繁殖母 ２ 猪、 哺乳仔 猪 各 ３ 。 ０头 试 验 过 程 中繁 殖 母 猪 疫 苗 免 疫 组 记 录 母 猪 生 产成绩 如 ： 总产仔数 、 产活仔数 、 死胎 、 平均产 活仔 数 、 均 出生 重 ， 猪 ２ ｌ 平 均 重 和 ２ 平 仔 ８Ｅ龄 ８日龄 断 奶窝活数 ； 猪疫苗免疫组记录 ５ ｌ 、０ １龄 、 ｆ ０Ｅ龄 ９ ３ １０日龄各阶段成活率 、 ５ 发病情况。 分别在 ２ １日龄 ， ２ ８日龄 ，２Ｅ龄 、９Ｅ龄 、６ １龄进 行 Ｐ Ｖ ４ ｌ ４ ｌ ５ ３ Ｃ ２抗 体 检测。并按下列公式计算猪群免疫保护率。 猪群 免 疫 保 护率 ＝（ 免疫 组 死 胎 弱 仔 率 一免 非 疫组死胎弱仔率） ／ 非免疫组死胎弱仔率 Ｘ１０ ％ ０ ２ 结果 与分 析
察 １周有无异常反应 ， 如无异常即开展下面的试验。 １ 试验褚 群 ． ４ 繁殖母猪疫苗免疫组 ： ３ 将 批受试疫苗随机选择 母猪 ３ 群进行疫苗免疫 ， 每批免疫母猪 １ ３ 。分 群 ０头 别在产前一个月颈部肌肉注射疫苗 ２ Ｌ头。 ｍ／ （ ）仔 猪疫 苗免 疫 组 ：将 ３批 受试 疫 苗 随 机 １ 选择仔猪 ３ 群进行疫苗免疫 ， 每批免疫 １ ３ 头 ， 群 ０ 分别 以颈 部肌 肉注射 方 式 在 １ ４日龄一 免 ｌ Ｌ 头 ， ｍ／
２１ 安全 试验 ．
１ 材 料 与方 法 １ 疫 ． １ 苗
Ｐ Ｖ 灭活疫苗（ Ｃ２ Ｌ Ｇ株 ） 由哈尔滨维科生物技术 开发公司提供 ， 批号为 ２ １０ ３ ２ １０ ４ ２ １０ ５ ００ ０ ，００ ０ ，００ ０ 。
１ Ｅ ＩＡ抗 体检 测 试剂 盒 ． ２ ＬＳ
试 验结 果表 明 ，Ｃ ２疫 苗免 疫 ２ ＰＶ ８日龄 断奶 仔 猪 未见 异常 反应 ， 明疫苗 是安 全 的 。 说 ２２ 母 猪免 疫后 的生产 成绩 ．
猪圆环病毒病型灭活疫苗LG株工艺规程
编号: SC-TS-02-218猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺规程上海海利生物药品有限公司工艺规程生产管理上海海利生物药品有限公司编号: SC-TS-02-218生效日: 1/ 16 页标题: 猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺规程起草?:起草日期?: 部门审核?:审核日期?:QA审核?:审核日期?:批准?:批准日期?:分发部门?:质管部、技术研发部、生产部目录题目?:猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺规程编号:SC-TS-02-2182/ 16 页1.主题内容本标准规定猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）达到的技术要求。
2.适用范围本标准适用于猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）3.引用标准国家标准(猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）制造及检验试行规程)。
4.规程内容4.1品名通用名称：猪圆环病毒2型灭活疫苗(LG株)英文名：Porcine Circovirus Type 2 Vaccine,Inacitvated（Strain LG）汉语拼音：Zhu Yuanhuanbingdu Erxing Miehuoyimiao(LG Zhu)4.2剂型水包油剂型4.3规格20ml/瓶、40 ml/瓶、100ml/瓶、250 ml/瓶4.4菌（毒）种1.来源：中国农业科学院哈尔滨兽医生物研究所保存2.毒株：猪圆环病毒LG株3.代次：56～60代4.保存温度：-80℃以下保存4.5批准文号兽药生字（2010）04.6工艺流程图猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺流程图4.7质量控制点4.8活性物质制备工艺过程4.8.1 PK-15细胞系标准：1.细胞形态：用含10%的小牛血清的MEM培养液培养细胞，置37℃、含5%CO2培养箱中培养，2～3小时可贴壁，培养48小时应在1/2以上的瓶面出现细胞岛，并有部分相连、镜检时细胞形态是椭圆形或梭状上皮细胞，明朗、轮廓清晰、胞浆内可见小颗粒，72～96小时形成单层。
猪圆环病毒2型WH株灭活疫苗效力...
资助项目国家生猪产业技术体系项目（nycytx-009）公益性行业（农业）科研专项（nyhyzx07034）猪圆环病毒2型（WH株）灭活疫苗效力的研究——PCV2在肠、肾的分布变化目录摘要 (I)Abstract (III)缩略语表 (V)第1章文献综述 (1)1.1 PCV的分子生物学特征 (1)1.2 PCV的流行病学现状 (2)1.3 PCV2的相关性疾病 (4)1.3.1断奶仔猪多系统衰竭综合症 (4)1.3.2猪皮炎与肾病综合症 (5)1.3.3猪呼吸道综合征 (6)1.3.4繁殖障碍性疾病 (6)1.3.5肉芽肿性肠炎 (7)1.3.6 渗出性表皮炎 (7)1.3.7新生仔猪先天性震颤 (7)1.4 PCV2的致病机理 (7)1.4.1 PCV2在体内的分布与靶细胞 (7)1.4.2 PCV2与免疫系统的相互作用 (8)1.4.3 PCV2与其它病原的相互作用 (9)1.4.4免疫刺激对PCV2感染的作用 (10)1.5 PCV2检测技术的研究 (10)1.5.1免疫学检测技术 (10)1.5.1.1酶联免疫吸附技术 (11)1.5.1.2免疫组织化学技术 (11)1.5.1.3 间接免疫荧光技术 (11)1.5.2分子生物学检测技术 (12)1.5.2.1 多重PCR技术 (12)1.5.2.2巢式PCR技术 (12)1.5.2.2 原位杂交技术 (13)1.6 PCV2的疫苗研究 (13)1.6.1灭活疫苗 (14)1.6.2弱毒疫苗 (14)i华中农业大学2010届硕士研究生学位论文1.6.3基因工程疫苗 (14)1.6.3.1核酸疫苗 (14)1.6.3.2重组疫苗 (15)1.6.3.3活载体疫苗 (16)第2章本研究的目的和意义 (17)第3章材料与方法 (18)3.1试验设计与总体方案 (18)3.2试验材料 (19)3.2.1试验动物 (19)3.2.2主要药品与试剂 (19)3.2.3主要仪器设备 (20)3.2.4主要溶液的配制 (20)3.3 试验方法 (21)3.3.1样品采集与处理 (21)3.3.2 HE染色 (21)3.3.3 免疫组化（SABC法） (22)3.3.4 TUNEL法 (22)3.3.5 电镜技术 (22)第4章结果与分析 (25)4.1 HE染色 (25)4.2免疫组化 (25)4.3电镜 (26)第5章讨论与结论 (27)5.1 讨论 (27)5.1.1 PCV2（WH株）灭活疫苗对肾的作用效力 (27)5.1.2 PCV2（WH株）灭活疫苗对肠的作用效力 (27)5.1.3 PCV2（WH株）在肾脏、肠道中所引起的凋亡的变化 (28)5.2 结论 (28)5.3 下一步研究计划 (29)5.4 本课题创新之处 (29)参考文献 (30)致谢 (41)附录1 (42)附录2 (48)ii猪圆环病毒2型（WH株）灭活疫苗效力的研究——PCV2在肠、肾的分布变化摘要猪圆环病毒2型（PCV2）感染能够引起包括断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）在内的多种疾病。
猪圆环病毒2型疫苗研究进展
９９
表１ 国内批准销售的 ＰＣＶ２商业化疫苗 Ｔａｂｌｅ１ ＰＣＶ２ｖａｃｃｉｎｅａｐｐｒｏｖｅｄｓａｌｅｓｉｎＣｈｉｎａ
序号 Ｎｕｍｂｅｒ
通用名 Ｃｏｍｍｏｎｎａｍｅ
商品名 Ｔｒａｄｅｎａｍｅ
生产企业 Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅｓ
批准文号 Ａｐｐｒｏｖａｌｎｕｍｂｅｒ
贵州 福 斯 特 生 物 科 技 有 限 公 司
１９９１年猪圆环病毒 病 首 次 在 加 拿 大 被 发 现，之 后迅速在各养 猪 国 家 流 行，严 重 影 响 全 球 养 猪 业 健 康发展。国内猪 群 感 染 圆 环 病 毒 最 早 于 ２０００ 年 由 郎洪武等 报 ［３］ 道，在北京、河北、山东、天津、江西、吉 林、河 南 ７ 省 ２２ 个 猪 群 采 集 血 清 样 品 ５５９ 份， ＥＬＩＳＡ 检测猪 圆 环 病 毒 抗 体 阳 性 率 为 ４２．９％。 随 后陆续有报道 对 ＰＣＶ２ 进 行 抗 原 抗 体 检 测，阳 性 检 出率居高不下。
ｅｎｇＺｉ２２００５１１２１
５
猪圆环 病 毒 ２ 型 灭 活 疫 苗 （ＷＨ 株 ） ＰＣＶ２Ｖａｃｃｉｎｅ，Ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ（Ｓｔｒａｉｎ ＷＨ）
Байду номын сангаас圆满 Ｙｕａｎｍａｎ
中 牧 实 业 股 份 有 限 公 司 成 都 药 械 厂 兽 药 生 字 （２０１６ ）
Ｃｈｉｎａ ａｎｉｍａｌ ｈｕｓｂａｎｄｒｙ ｉｎｄｕｓｔｒｙ ＳｈｏｕＹａｏＳｈｅｎｇＺｉ
Ｃ）
齐 鲁 动 物 保 健 品 有 限 公 司 Ｑｉｌｕａｎｉ 兽药 生 字 ＳｈｏｕＹａｏＳｈ
ｍａｌｈｅａｌｔｈｐｒｏｄｕｃｔｓｃｏ．，ｌｔｄ．
ｅｎｇＺｉ１５０２５１０８８
一种猪圆环病毒2型毒株的灭活方法及猪圆环病毒疫苗[发明专利]
![一种猪圆环病毒2型毒株的灭活方法及猪圆环病毒疫苗[发明专利]](https://360docs-1393072327.cos.ap-beijing.myqcloud.com/9130c21886c24028915f804d2b160b4e767f8189.webp)
专利名称：一种猪圆环病毒2型毒株的灭活方法及猪圆环病毒疫苗
专利类型：发明专利
发明人：岳丰雄,林艳,刘汉平,夏嘉鑫,郑勤琴,陈莉群,项聪英申请号：CN202111538698.9
申请日：20211215
公开号：CN114317456A
公开日：
20220412
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种猪圆环病毒2型的灭活方法，它是用二乙烯亚胺(BEI)和甲醛联合灭活猪圆环病毒2型毒株抗原液。
本发明猪圆环病毒2型毒株的灭活方法，稳定性好、成本低、灭活周期短，易于大生产应用。
用本发明灭活的猪圆环病毒2型毒株制备的疫苗，免疫应激少、免疫效果好，适宜市场推广使用。
申请人：成都史纪生物制药有限公司
地址：610000 四川省成都市经济技术开发区灵池街358号
国籍：CN
代理机构：成都高远知识产权代理事务所(普通合伙)
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猪圆环病毒病型灭活疫苗LG株工艺规程
猪圆环病毒病型灭活疫苗L G株工艺规程公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N]编号: SC-TS-02-218猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺规程上海海利生物药品有限公司工艺规程生产管理上海海利生物药品有限公司编号: SC-TS-02-218生效日: 1/ 16 页标题: 猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺规程起草?:起草日期?:部门审核?:审核日期?:QA审核?:审核日期?:批准?:批准日期?:分发部门?:质管部、技术研发部、生产部目录1.主题内容本标准规定猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）达到的技术要求。
2.适用范围本标准适用于猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）3.引用标准国家标准(猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）制造及检验试行规程)。
4.规程内容4.1品名通用名称：猪圆环病毒2型灭活疫苗(LG株)英文名：Porcine Circovirus Type 2 Vaccine,Inacitvated（Strain LG）汉语拼音：Zhu Yuanhuanbingdu Erxing Miehuoyimiao(LG Zhu)4.2剂型水包油剂型4.3规格20ml/瓶、40 ml/瓶、100ml/瓶、250 ml/瓶4.4菌（毒）种1.来源：中国农业科学院哈尔滨兽医生物研究所保存2.毒株：猪圆环病毒LG株3.代次：56～60代4.保存温度：-80℃以下保存4.5批准文号兽药生字（2010）04.6工艺流程图猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺流程图4.7质量控制点4.8活性物质制备工艺过程4.8.1 PK-15细胞系标准：1.细胞形态：用含10%的小牛血清的MEM培养液培养细胞，置37℃、含5%CO2培养箱中培养， 2～3小时可贴壁，培养48小时应在1/2以上的瓶面出现细胞岛，并有部分相连、镜检时细胞形态是椭圆形或梭状上皮细胞，明朗、轮廓清晰、胞浆内可见小颗粒，72～96小时形成单层。
猪的疾病 猪圆环病毒2型感染 的知识和防治
猪的疾病猪圆环病毒2型感染的知识和防治一、概述：猪圆环病毒2型感染(Porcine circovirus type 2 infection)是由猪圆环病毒2型所引起的一系列疾病的总称，包括猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)、猪皮炎-肾病综合征(PDNS)、繁殖障碍、肺炎、肠炎、先天性震颤等。
1991年加拿大首次爆发该病，随后世界上许多国家和地区都有该病的报道。
在我国，2000年通过血清学调查证实了北京、河北、天津、江苏、上海等地的猪群中存在PCV2感染抗体。
2001年，与PCV2感染相关的猪断奶后多系统衰竭综合征开始在南方地区流行，2002年全国各地规模化猪场暴发猪断奶后多系统衰竭综合征，给我国养猪业造成了相当大的经济损失。
目前，本病已经遍及世界各养猪国家，已成为养猪生产中突出的问题之一。
近期研究表明，PCV2与猪皮炎与肾病综合征(PDNS)、猪的流产和繁殖障碍、猪增生性坏死性肺炎(PNP)和猪先天性脑震颤(CT)等的发生密切相关。
PCV2常与猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRRSV)或猪细小病毒(PPV)并发感染或继发细菌感染，使患病猪病情加重，死亡率升高。
二、病原：猪圆环病毒2型(PCV2)属圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属(Circovirus)。
是一种小而无囊膜、二十面体、共价闭合、环状的单股DNA病毒，病毒粒子直径平均为17nm，分子量为0.58×106Da。
PCV2在氯化铯中浮密度为1.37g/cm3，蔗糖梯度离心的沉降系数为52S，对pH 3的酸性环境、氯仿作用或高温环境(70℃)有较强的抵抗力。
不凝集牛、羊、猪、鸡等多种动物和人的红细胞。
PCV2完整的基因组大小多数为1768bp，少数为1767bp。
各分离株之间核苷酸序列的同源性大于96％，而与PCV1分离株之间的核苷酸序列的同源性小于80％。
PCV1和 PCV2的ORF1的核苷酸和推导氨基酸序列的同源性分别为83％和86％，而ORF2的仅为67％和65％。