哺乳动物细胞培养基的基本要求
细胞培养的最佳生长条件和培养基配方
细胞培养的最佳生长条件和培养基配方细胞培养是一种很重要的实验技术，它可以帮助我们了解和研究细胞的生命活动过程。
在进行细胞培养之前，我们需要明确和了解细胞培养的最佳生长条件和培养基配方。
这些因素直接影响着细胞的生长和繁殖，因此选择合适的生长条件和培养基配方对于获得高质量的细胞培养是至关重要的。
细胞培养的最佳生长条件受到多个因素的影响，其中最重要的是温度、湿度和二氧化碳浓度。
对于大多数哺乳动物细胞而言，理想的生长温度往往在37摄氏度左右。
较低的温度会减缓细胞代谢活动，而过高的温度则会导致细胞脱水、代谢异常甚至死亡。
此外，细胞培养的湿度也非常重要。
过低的湿度会导致细胞脱水，而过高的湿度则可能引发细菌或霉菌的生长，对细胞培养产生不利影响。
通常情况下，细胞培养时会在培养器内加入一定浓度的二氧化碳，以维持细胞培养的最佳PH值。
大多数情况下，使用5% CO2浓度可以满足细胞的生长需求。
除了生长条件外，培养基配方也是细胞培养中不可或缺的因素。
通常情况下，培养基可以分为基础培养基和补充物两部分。
基础培养基提供了细胞所需的基本营养物质，如氨基酸、糖类、无机盐和维生素等。
常用的培养基包括DMEM （Dulbecco's Modified Eagle Medium）、RPMI-1640和MEM (Minimum Essential Medium)等。
这些培养基在组成和配方上略有区别，根据细胞的类型和需求，选择合适的基础培养基是十分重要的。
除了基础培养基外，补充物也是细胞培养中必不可少的。
补充物可以提供特定的生长因子、激素、细胞黏附因子和补充物等，以满足不同细胞的特殊需求。
常见的补充物有胎牛血清、人血清、胰岛素、转铁蛋白和脯氨酸等。
胎牛血清（Fetal Bovine Serum，FBS）是一种广泛使用的培养基补充物，它提供了丰富的生长因子、激素和营养物质，可以促进细胞的快速生长和繁殖。
然而，由于FBS来源和成分的不确定性，一些研究也开始使用人血清作为替代品，以减少动物血清对实验结果的可能影响。
动物细胞的培养条件和培养基
• 2、合成培养基：优点是成分明确，组分稳定，可 大量生产供应。动物细胞培养中常用的有BME、 MEM、DMEM、HAM F12、RPMI 1640以及 ISOCOV、199和McCoy等。
• 缺点：无法替代一些未知成分。 • 解决途径合成培养基中添加小牛血清，彼此互补
的胎牛血清。
• 血清的作用机制可能为：（1）提供有利于细胞生 长增殖所需要的各种生长因子和激素；（2）提供 有利于细胞贴壁所需要的贴附因子和伸展因子； （3）提供可识别金属、激素、维生素和脂类的结 合蛋白；（4）提供细胞生长所必须的脂肪酸和微 量元素。
• 3、无血清培养基
• 无血清培养基的优点如下：①提高了细胞培养的可 重复性，避免，避免了由于血清批之间差异的影响； ②减少了由血清带来的病毒、真菌和支原体等微生 物污染的危险；③供应充足、稳定；
动物细胞的培养条件和培养基
• 为了使细胞培养在体外培养成功，需要一些 基本条件：
（1）绝对无菌操作； （2）足够的营养供应，排除有害物质包括极其
微量的离子掺入； （3）适量氧气供应；
（4）随时清除细胞代谢中产生的有害产物； （5）有良好的适于生存外界环境，包括pH、渗透
压和离子浓度等； （6）及时分种，保持合适的细胞密度。
6、空气
二、动物细胞培养基的 种类和组成
• 细胞种系不同对培养基的要求亦有差异，主要 有三类：天然培养基、合成培养基和无血清培 养基。 1、天然培养基：在细胞培养的早期阶段使用的 培养基，主要为来自天然的材料如血浆凝块、 血清、淋巴液、胚胎浸液以及羊水、腹水等。
• 优点：营养价值高 • 缺点：成分复杂、来源有限、成本较高
动物细胞培养及胚胎培养培养基的要求
动物细胞培养时对培养基的要求：培养基按其来源可分为天然培养基和合成培养基。
天然培养基的营养成分与细胞在体内所需条件比较接近，但就细胞在体外生存的环境来说，合成培养液也有其独特之处，譬如成分便于控制和标准化。
体外培养的细胞直接生活于培养基中，无论何种培养基都应该能满足细胞生长所需的营养与生理的基本要求。
(1)营养成分：1）氨基酸合成培养液中的氨基酸以12种必需氨基酸为主，这些氨基酸不能由细胞自身合成，必需由培养液供给。
在氨基酸的成分中谷氨酰胺的作用特别重要，细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，在配制各种培养液中应补加一定量的谷氨酰胺。
2）单糖葡萄糖是最常用和最好的单糖3）维生素维生素在细胞代谢过程中必不可少，主要可以提供辅酶和辅基。
生物素、叶酸、泛酸、核黄素、维生素B12等等4）其他成分：细胞生长过程中除需钠、钾、钙、镁、氮和磷等基本元素外，还需要一些微量元素，如铁、锌、硒、铜、锰、钼等。
此外，为优化细胞生存环境，合成培养基中有时还添加些其他成分，包括核酸降解物、抗氧化剂等。
（2）促生长因子及激素各种激素、生长因子对于促进细胞生长、维持细胞功能、保持细胞的状态具有十分重要的作用。
如胰岛素能促进细胞利用葡萄糖和氨基酸，泌乳素可促进乳腺上皮细胞生长的作用。
各种生长调节因子的作用更加明显并具有特异性。
（3）pH大多数细胞的适宜pH为7.2-7.4，偏离此范围对细胞将产生有害影响。
造成培养基pH 波动的主要物质是细胞代谢产生的二氧化碳。
解决这一问题可采取两种方法：一是用具有一定缓冲能力的培养基，如使用NaHCO3-CO2缓冲系统，二是采用开放式培养的方法，使细胞代谢产生的二氧化碳及时逸出培养皿。
（4）渗透压细胞必须生活在等渗的环境中，大多数培养细胞对渗透压有一定的耐受性。
注：天然培养基主要指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基，如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等。
合成培养基是人工配制的培养基，给细胞提供一个近似体内生存的环境，又便于控制和标准化的体外生存环境，但合成培养基尚未成为十分完全的培养基。
dmem培养基说明书
dmem培养基说明书引言：DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）是一种常用的细胞培养基，被广泛应用于生物医学研究和药物开发领域。
它是由美国科学家Eagle于1959年根据鹰氏基础培养基改良而成，具有高度灵活性和广泛的使用范围。
本篇文章将介绍DMEM培养基的组成成分、适用细胞类型以及培养条件等相关内容。
一、组成成分DMEM培养基主要由以下成分组成：1. 高糖：DMEM含有较高浓度的葡萄糖（通常为4500 mg/L），以提供细胞所需的能量。
2. 氨基酸：DMEM中含有完整的氨基酸，满足细胞在培养过程中的蛋白质合成需求。
3. 维生素：DMEM中包含维生素，有助于促进细胞的正常生长和代谢。
4. 胎牛血清：DMEM中通常添加10-15%的胎牛血清，提供生长因子和其他必需的营养物质。
5. 缓冲液：DMEM中含有缓冲液，可以维持培养基的稳定pH值。
二、适用细胞类型DMEM培养基适用于多种不同类型的细胞，包括：1. 哺乳动物细胞：DMEM培养基适用于多种哺乳动物细胞的培养，如人类肺细胞、小鼠胚胎成纤维细胞等。
2. 癌细胞株：DMEM培养基也广泛应用于癌细胞的培养。
它提供了细胞生长所需的基本营养物质，使癌细胞在体外中保持其生长和繁殖的能力。
3. 神经细胞：DMEM培养基还可用于神经细胞的培养。
通过添加适当的神经生长因子，可以促进神经细胞的生长和分化。
三、培养条件1. 温度：DMEM培养基需要在37℃的恒温箱中培养，以模拟体内温度条件。
2. 湿度：细胞在培养过程中需要适当的湿度保持，可以通过在培养箱中添加水盘或湿化器来实现。
3. CO2浓度：大多数细胞在体外培养时需要适当的CO2浓度来维持酸碱平衡。
DMEM培养基通常在5% CO2的气氛下培养。
4. 培养时间：培养时间根据不同的细胞类型和实验设计而定。
有些细胞需要频繁的传代，而有些细胞可以长时间稳定培养。
结论：DMEM培养基是一种优质的细胞培养基，具有成熟的配方和广泛的适用范围。
动物细胞培养及胚胎培养培养基的要求
动物细胞培养及胚胎培养培养基的要求动物细胞培养时对培养基的要求：培养基按其来源可分为天然培养基和合成培养基。
天然培养基的营养成分与细胞在体内所需条件比较接近，但就细胞在体外生存的环境来说，合成培养液也有其独特之处，譬如成分便于控制和标准化。
体外培养的细胞直接生活于培养基中，无论何种培养基都应该能满足细胞生长所需的营养与生理的基本要求。
(1)营养成分：1）氨基酸合成培养液中的氨基酸以12种必需氨基酸为主，这些氨基酸不能由细胞自身合成，必需由培养液供给。
在氨基酸的成分中谷氨酰胺的作用特别重要，细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，在配制各种培养液中应补加一定量的谷氨酰胺。
2）单糖葡萄糖是最常用和最好的单糖3）维生素维生素在细胞代谢过程中必不可少，主要可以提供辅酶和辅基。
生物素、叶酸、泛酸、核黄素、维生素B12等等4）其他成分：细胞生长过程中除需钠、钾、钙、镁、氮和磷等基本元素外，还需要一些微量元素，如铁、锌、硒、铜、锰、钼等。
此外，为优化细胞生存环境，合成培养基中有时还添加些其他成分，包括核酸降解物、抗氧化剂等。
（2）促生长因子及激素各种激素、生长因子对于促进细胞生长、维持细胞功能、保持细胞的状态具有十分重要的作用。
如胰岛素能促进细胞利用葡萄糖和氨基酸，泌乳素可促进乳腺上皮细胞生长的作用。
各种生长调节因子的作用更加明显并具有特异性。
（3）pH大多数细胞的适宜pH为7.2-7.4，偏离此范围对细胞将产生有害影响。
造成培养基pH 波动的主要物质是细胞代谢产生的二氧化碳。
解决这一问题可采取两种方法：一是用具有一定缓冲能力的培养基，如使用NaHCO3-CO2缓冲系统，二是采用开放式培养的方法，使细胞代谢产生的二氧化碳及时逸出培养皿。
（4）渗透压细胞必须生活在等渗的环境中，大多数培养细胞对渗透压有一定的耐受性。
注：天然培养基主要指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基，如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等。
合成培养基是人工配制的培养基，给细胞提供一个近似体内生存的环境，又便于控制和标准化的体外生存环境，但合成培养基尚未成为十分完全的培养基。
动物细胞培养管理制度
动物细胞培养管理制度一、培养基的准备和管理1.1 培养基的准备1.1.1 培养基成分的准备应严格按照配方进行，精确称量各种成分，尽量避免因操作不当或器皿受到污染导致成分比例出错。
1.1.2 培养基成分的保存应在密封、阴凉、干燥、无异味的条件下，避免受到阳光直射和高温影响。
1.1.3 开启新瓶或新袋的培养基前，应先用无菌液体将外包装表面消毒，避免外包装受到污染，然后在洁净无菌的操作台上打开瓶盖，尽量避免让空气中的微生物进入培养基内。
1.2 培养基的管理1.2.1 包装好的培养基应有清晰的标签，标注成分、配制日期、有效期等信息，并存放于适当的温度下，避免受到阳光直射和高温影响。
1.2.2 一旦发现培养基外观发生变化，如颜色、透明度等明显异常，应停止使用，并将问题培养基送至实验室进行分析检测。
1.2.3 使用的培养基应记录每次使用的日期、批号、制备者等信息，以便后期的追踪和管理。
二、细胞的培养和传代2.1 细胞的培养2.1.1 在细胞培养前，应先对工作台、培养箱等培养环境进行必要的消毒处理，保证操作环境的无菌。
2.1.2 培养细胞前，应仔细查看细胞培养饲养瓶或培养皿，检查是否有异物或污染，如有，应立即处理或更换合适的饲养瓶或培养皿。
2.1.3 细胞培养进程中，应定期检查细胞的状态，如细胞的形态、密度、生长速度等，一旦发现异常应及时进行处理。
2.2 细胞的传代2.2.1 传代前，应先对饲养瓶或培养皿中的细胞进行观察和计数，掌握细胞的状态和数量，以确定需要传代的细胞数目。
2.2.2 传代操作时，应注意操作的轻柔、迅速和无菌，避免对细胞造成机械性损伤或污染。
2.2.3 传代后，应对培养皿或饲养瓶进行标记，记录传代的日期、次数等信息，以便后期的追踪和管理。
三、细胞的冻存与解冻3.1 细胞的冻存3.1.1 冻存前应检查细胞的状态、数量和培养基的成分是否符合冻存要求，然后进行冻存液的配置和标记，避免出错。
3.1.2 冻存过程中，应确保细胞在冻存容器内的均匀分布，避免出现细胞团或细胞沉积现象，影响细胞的存活率。
哺乳动物细胞培养技术
哺乳动物细胞培养技术一、前言哺乳动物细胞培养技术是生物学研究中的重要分支，它可以为生物医学研究提供大量的细胞材料，从而促进了细胞生物学、免疫学、药理学等领域的发展。
本文将介绍哺乳动物细胞培养技术，包括培养基的配制、无菌操作、细胞分离与传代、冷冻保存和复苏等方面。
二、培养基的配制1. 基础培养基哺乳动物细胞培养最常用的基础培养基是DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）和RPMI-1640（Roswell Park Memorial Institute 1640），这两种培养基都是以含有必需氨基酸和维生素的高糖量液体为基础，添加适当浓度的人血清或牛血清作为营养来源。
2. 补充因子除了上述基础成分外，还需要添加多种补充因子，如抗生素（青霉素和链霉素）、重组人胰岛素、转铁蛋白等。
抗生素可以有效地抑制细菌和真菌的生长，保证培养物的无菌性；胰岛素是细胞增殖和分化所必需的营养物质，可以提高培养细胞的存活率和增殖能力；转铁蛋白则可以促进铁离子的转运，保证细胞正常代谢。
3. pH值调节pH值对于细胞生长和代谢具有重要影响，因此需要在培养基中添加缓冲液来调节pH值。
最常用的缓冲液是HEPES（4-（2-羟乙基）-1-哌嗪乙烷磺酸），其pH范围为7.0~8.0。
三、无菌操作无菌操作是哺乳动物细胞培养过程中最为关键的环节之一。
以下是无菌操作需要注意的几个方面：1. 实验室环境实验室环境应该保持清洁、干燥、通风，并且应该经过消毒处理。
实验人员应该穿戴干净、整洁、合适的实验服，并戴上口罩和手套。
2. 器皿消毒所有用于培养细胞的器皿都需要在高压蒸汽灭菌器中进行消毒处理，以杀死其中的所有微生物。
3. 操作流程无菌操作应该按照一定的操作流程进行，包括洗手、穿戴实验服、准备实验器具和培养基、开展操作等步骤。
在操作过程中要注意不要碰触到非无菌区域和非无菌器具。
四、细胞分离与传代1. 细胞分离细胞分离是指将原始细胞群体中的单个细胞分离出来，使其成为一个独立的单元。
动物细胞培养的基本条件
动物细胞培养的基本条件
1. 培养基，动物细胞培养需要使用含有营养物质的培养基，如DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）或RPMI 1640等。
培养基中通常含有氨基酸、糖类、维生素、无机盐、生长因子和血清等成分，以支持细胞的生长和增殖。
2. 温度，动物细胞通常在37摄氏度的温度下培养，这是因为这个温度符合动物体内的生理条件，有利于细胞的正常生长和代谢活动。
3. pH值，培养基的pH值通常在7.2-7.4之间，这个范围有利于细胞的生长和代谢，维持细胞内外环境的稳定性。
4. 湿度，细胞培养需要在恒定的湿度下进行，通常采用5%二氧化碳培养箱来维持适当的湿度和CO2浓度，以维持培养环境的稳定。
5. 无菌条件，动物细胞培养需要在严格的无菌条件下进行，以避免细胞受到外源微生物的污染，通常在无菌工作台或生物安全柜中进行操作。
6. 细胞密度，在培养过程中，需要控制细胞的密度，避免细胞
过度增殖或过度稀释，通常通过离心和重新悬浮来调节细胞密度。
总的来说，动物细胞培养的基本条件包括适当的培养基、温度、pH值、湿度、无菌条件和细胞密度等因素，这些条件的合理控制对
于维持细胞的生长和稳定的培养环境至关重要。
通过严格控制这些
基本条件，可以有效地进行动物细胞培养实验，为细胞生物学和生
物医学研究提供可靠的实验基础。
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哺乳动物细胞培养基的基本要求
(一)营养成分
细胞生长繁殖所需要的营养成分包括氨基酸、单糖、维生素、无机离子和H
2
O。
氨基酸和维生素的添加量是有限的，某些氨基酸和维生素的添加量往往是凭经验的，通常与某个细胞系的建立过程有密切关系。
例如，Fisher’s培养基含有高浓度的叶酸，这是因为L5178Y对叶酸的依赖性，在这种培养基的发展过程中，叶酸就被沿用下来了。
大多数细胞的培养基都含有葡萄糖作为能量来源，葡萄糖的主要代谢途径是通过无氧酵解产生丙酮酸，丙酮酸可转化为乳酸盐或乙酰乙酸盐，然后进入柠檬
酸循环被氧化成CO
2和H
2
0。
培养基中乳酸的累积在培养胚胎及转化细胞时尤为
明显，提示体外培养时柠檬酸循环不能像多细胞机体内那样完全进行。
有证据表明，碳源的大部分来自谷氨酰胺而非葡萄糖。
这也解释了为何某些培养的细胞对谷氨酰胺和谷氨酸盐的需求异常高。
(二)促生长因子及激素
促生长因子及激素在商品干粉培养基或液体培养基中一般都不添加，含血清培养液的来源正是血清本身。
在无血清培养基中+经常需要添加这些组分。
自然凝集的血清，与利用物理方法如离心法去除细胞得到的血浆相比，对于刺激细胞的增殖，效果更好。
原因是，自然凝集的血清保留了更多的生长因子，如血小板生长因子。
(三)渗透压和pH
培养基中基础平衡盐溶液组成的盐类是维持渗透压平衡的主要化合物，这些
盐类主要包括Na一、K+、Mg2+、Cl一、SO
42-、Ca2+、POi 和HCO
3
-等。
大部分培养基的盐浓度是依据Eargle’s和Hank’s平衡盐溶液而来，
Eargle’s平衡盐溶液的Hank，s浓度高，适合5％CO
2
的气体环境。
Hank’s平
衡盐溶液的HCO
3
-浓度低，适
用于空气环境。
5％CO
2
的气体环境中，培养液的pH稳定及调节依赖于溶解在培
养液的CO
2
气体和组成培养基基础平衡盐溶液的缓冲作用。
酚红是常用的pH指示剂，一般培养液中都有添加，pH7．4呈红色，pH7．O 变橙色，pH6．5变黄色，而pH7．6呈红色中略带蓝色．pH7．8呈紫色。
由于对颜色的观察有很大的主观性，因而建议操作者用无菌平衡盐溶液和同样浓度的酚红配一套标准色标，密封放在与存放培养液相同材质的瓶子中。
NaHCO
3的浓度取决于气相中的CO
2
浓度，NaHCO
3
除了具有pH缓冲能力以外，
还有显著的营养作用。
Ca2+是某些细胞黏着能力所必需。
如在悬浮培养时，减少Ca2+可以减少细胞的聚集和附着。
(四)无毒、无污染残留
培养液可以直接购买商品培养液，也可在购买商品干粉培养基后自行配制。
谨慎使用配制用水是避免细胞毒性二价离子、有毒有机物和微生物污染的关键措施。
细胞毒性二价离子一般指ca”、Mg’以外的二价金属离子，它们往往属于微量元素，过量了容易导致细胞中毒，细胞培养时出现诸如细胞生长分裂受阻、细胞坏死、细胞凋亡等现象。
保存这些培养液的试剂瓶是否干净无菌也显得非常重要，并且试剂瓶是否在常温下会溶出细胞毒性物质也是选择何种试剂瓶的原则之一。
一般建议使用玻璃试剂瓶或无细胞毒性的工程塑料制造的试剂瓶。
由于塑料试剂瓶反复使用时容易释放出有害物质，故不建议反复使用。
玻璃试剂瓶在反复使用过程中，清洗时尤其注意排除清洗剂残留和金属离子残留。
某些清洗剂不宜用于玻璃试剂瓶的清洗，如洗洁精含芳香类有机物、洗衣粉含酶类物质，这些物质在器皿清洗过程中，很难清除彻底，容易导致二次污染。
一般建议使用玻璃清洗剂、洗衣皂、去污粉等一类清洁剂。
(五)抗生素
常用的细胞培养用抗生素中，可以只使用一种，如单一使用庆大霉素或卡那霉素都比较实用便利。
多数情况下，抗生素的添加都源于习惯，因此，对于受过专业、系统训练的操作者而言，可以不需要直接添加抗生素到培养液中。
换言之，在培养液购买或利用干粉配制液体培养基时，添加抗生素不是必需的，主要依据操作者的熟练程度和操作习惯决定。
不建议添加的理由主要有以下几个方面：
①无菌操作的客观条件和无菌操作技术日臻成熟，在超净工作台内进行严格的无菌操作，通常不太容易带来微生物污染。
②大多数时候，某些抗生素的抗菌谱是有限的，某些环境微生物如果属于抗药菌，则添加的抗生素无效。
经常使用某些抗生素，容易诱导产生培养环境的抗药菌。
使用某些抗生素对培养细胞的生长与分裂也会产生一定的影响。
③抗生素在低浓度下，其生物活性的半衰期更短，需要频繁添加，增加操作难度。
④使用抗生素可以掩盖低程度的微生物污染。
⑤霉菌和酵母的污染很难使用抗生素控制。
在体外细胞培养中使用抗生素，类似于在超净工作台内使用酒精灯作辅助消毒或灭菌一样，不利于掌握严格的无菌操作技术，对于初学者而言，特别提请注意。