新生儿溶血病血清学检查标准操作规程
新生儿溶血病血清学检查标准操作规程
新生儿溶血病血清学检查标准操作规程(一)检验目的检测孕妇产前与其丈夫ABO及Rh血型相容性、孕妇IgG 抗体效价、产后新生儿体内不相容抗体存在情况、新生儿与产妇之间血型相容性，为新生儿溶血病的预防、诊断及治疗提供可靠的实验室依据。
(二)检验原理新生儿溶血病是由母婴血型不合，母亲体内与新生儿红细胞抗原不配合的IgG性质的血型抗体进入新生儿体内，破坏新生儿或胎儿红细胞而引起，可发生在胎儿期和新生儿早期，溶血严重者可出现死胎而流产，存活者则有不同程度的新生儿黄疸。
新生儿溶血病产前诊断方法主要包括检测胎儿父母的ABO及Rh血型、孕妇不规则抗体筛查、外周血抗A ／抗B或Rh抗体效价来判断新生儿溶血病发生的可能性及严重程度；新生儿溶血病产后诊断主要包括母子ABO及RhD 血型鉴定试验、新生儿标本三项试验，为临床诊断及进一步采取治疗手段提供可靠的依据。
(三)适用范围适用于新生儿溶血病产前、产后血型血清学试验。
(四)设备性能参数参见血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、强生Ortho BioVue离心机及各全自动血型／配血系统使用说明书。
(五)器材与试剂1.器材血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、强生Or-tho BioVue离心机、塑料软试管、塑料硬质试管(75mmXl2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔、移液枪、一次性移液枪头。
2.试剂DiaMed ABO／RhD血型卡、OrthoBioVueABO ／RhD血型卡、抗A、抗B血清、Rh分，型血清、生理盐水、抗球蛋白试剂(市售单克隆)、抗体筛查试剂红细胞、抗体鉴定试剂红细胞、致敏的阳性对照细胞(自制)。
(六)标本要求1.夫妇标本EDTA-K2或EDTA-K3抗凝全血≥3ml(手工操作时也可以使用不抗凝标本)，经B600-A型离心机在 1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血及明显乳糜。
2.患儿标本EDTA-K2或EDTA-K3抗凝全血≥3ml(手工操作时也可以使用不抗凝标本)，经B600-A型离心机在 1 760g条件下，离心5分钟，离心后无明显乳糜。
新生儿溶血病产前产后检测操作步骤
产前血型血清学检查标本要求：夫妻双方抗凝血2ml（尽量要求父亲抗凝血2ml，非必要），母亲促凝血3-5ml（血清）。
第一步：取两个试管分别标记 A 和BA管 700 μL生理盐水 B管（从A管取200 μL混合液+100 μL母亲血清混匀再加入200 μL血浆IgM稀释液）混匀 B管封口绑紧37℃温育1小时。
第二步:紧接着做父母ABO血型、RH型和母亲的不规则抗体。
第三步：取六个试管，分别标记123456，每管里面加200 μL盐水（父亲AB型需要同时做IgG抗A效价和IgG抗B,各做1次）。
第四步：等B管温育时间到了，从B管吸200微升到1管，混匀后从1管吸200 μL到2管........从5管吸200 μL到6管，依次添加稀释（倍比稀释）。
第五步：取不规则卡标记好 6 5 4 3 2 16 5 4 3 2 11.所有孔先分别加入50 μL父亲（与父亲同型）的0.8%红细胞悬液。
2.然后每孔再依次加入相对应管号里面的稀释液50 μL（防止交叉污染，从浓度最低往最高依次加）。
第六步：1.放到37℃温箱温育15分钟。
2.离心5分钟，取出判读结果。
注：判读结果往前推一位（例如6号孔是阳性，就报5号管是阳性）。
母亲RhD阴性血型，不用加入血浆IgM稀释液，不用37℃温育1小时。
直接第二步同上。
产后血型血清学鉴定标本要求：新生儿抗凝血2-3ml第一步：1.收到标本之后离心2分钟，取两个空试管，标记红细胞1和血浆2。
红细胞1 血浆22.将离心好的血样中血浆全部吸入空试管2中，剩余的红细胞吸入另一空试管1中。
3.向试管1中加3000μL生理盐水，进行洗涤，洗涤红细胞三次后，取压积红20μL+2480μL盐水加入新的试管中配制成0.8%红细胞。
（剩余的压积红留着做放散液）。
第二步;直抗试验、血型试验取0.8%红细胞50μL分别加入血型卡和不规则抗体卡中（只加一个孔）做好标记，直接离心五分钟看结果。
第三步：游离试验、放散试验1.取试管1中压积红1000μL+盐水1000μL（1:1适量配比）。
新生儿溶血病检测标准操作规程
新生儿溶血病检测标准操作规程1.检验原理：本试验为将排阻层析和抗人球蛋白试验（COonIbS试验）相结合，即在微柱凝胶介质中，红细胞抗原与相应的不完全抗体在抗人球蛋白的作用下发生凝集反应，形成红细胞免疫复合物，在一定离心力下，该复合物不能通过凝胶间隙而浮于胶表面或悬于胶中；如无相应的不完全抗体结合，则不能形成红细胞免疫复合物，在一定离心力下，分散的红细胞可以通过凝胶间隙沉于微柱腔底部。
2.主要组成部分：本品系在聚丙烯塑料透明卡片上的六支微柱型管中填充葡聚糖凝胶和抗人球蛋白（多抗），制成抗人球蛋白检测卡，凝胶微管分为反应腔和凝胶分离柱两部分。
3.样本要求：3.1红细胞样本：采集被检对象静脉血，用EDTA抗凝，配制成红细胞悬液（直接抗人球蛋白试验配制成红细胞生理盐水悬液，间接抗人球蛋白试验配制成红细胞低离子溶液悬液（只适用于交叉配血和不规则抗体筛检）），红细胞最终浓度0.5%-0.8%o3.2血清样本：采集被检对象静脉血，放入含有兔脑粉或者其他促凝剂的试管中，10分钟后离心，取上清；或者静脉血采入无抗凝剂试管中，4℃放置12小时，或者37℃放置2小时后离心，20OrPmlO分钟，取上清该上清不得有絮状物或沉淀。
血清标本必须充分去蛋白，否则标本中析出的或红细胞悬液中残余的纤维蛋白可阻碍红细胞沉降，使非凝集细胞离心后在胶表面形成一条红线，呈假阳性反应。
4.检验方法4.1.准备工作1）微柱凝胶检测卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡平衡至室温（18—25℃）,再用专用离心机离心5分钟。
2）标本采集：用EDTA抗凝管采集被检对象脐带血或静脉血，制备成红细胞标本和血浆标本。
3）红细胞悬液的制备：将被检者红细胞标本至少洗涤4次，取被检者压积红细胞10微升，加入1毫升红细胞稀释液或生理盐水，外观应为均匀淡红色,无絮状物和血块。
4）血浆标本的处理:将被检者血浆标本进行离心,采用3000r∕min离心3min或3500r∕min离心2min（不得有絮状物或沉淀）。
新生儿溶血病(HDN)免疫血液学试验标准检测流程
HDN换血治疗中血液及血型选择标准
❖ 二、ABO、Rh（D）血型鉴定
❖⒈ 选用经国家批准且批批检测合格的 单克隆抗-A、抗-B、抗-D(IgM)和A、B 型标准试剂红细胞。
❖⒉ ABO血型鉴定：母亲血样做正反定型； 患儿血样只做正定型。推荐使用试管法 和微柱凝胶血型卡，不推荐使用纸片或 玻片法。
HDN换血治疗中血液及血型选择标准
HDN产前免疫血液学试验检测标准
❖ （1）第一次检测，一般可在妊娠第1216周进行，以此作为抗体基础水平。如 果检测到ABO以外抗体，或高效价的IgG 抗A（B）抗体，建议每月复查一次。
❖ （2）第二次检测在妊娠28-30周做，以 后每隔2-4周重复测定一次，了解抗体 增加速度。抗体效价上升快，提示HDN 的可能性大。
❖ 二、证实患儿血清中是否有来自于 母亲的抗体；
❖ 三、患儿红细胞是否被来自母亲的 免疫性抗体所致敏。
HDN产后免疫血液学试验检测标准
❖ 一、标本要求 ❖ ⒈ 采样时间建议： ❖ （1）可疑ABO不合HDN患儿血清学
检查最好在出生后1-7天之内； ❖ （2）可疑Rh等其他血型系统血型
不合应在出生后尽早为好。
❖ 二、试剂与设备（查看Word文件） ❖ 三、检测方法 ❖ ⒈ 产妇血样检测： ❖ 同《HDN产前免疫血液学试验》孕妇血
样检测条目。 ❖ ⒉ 患儿血样检测： ❖ （1）红细胞：ABO正定型、RhD血型
HDN产后免疫血液学试验检测标准
❖ 说明：新生儿ABO定型，多数专家 认为反定型没有意义。
❖ （2）红细胞直接抗人球蛋白试验 （DAT）：
国内外进展 ❖⒉ 研讨：
（1）研讨内容： ① 样本采集 ② 实验项目及操作 ③ 结果判定或解释
新生儿溶血病检测操作SOP
新生儿溶血病检测操作SOP一、产前诊断1、夫妇血型检测（微柱凝胶检测法：ABO、Rh（D）血型定型检测卡）1、1 将红细胞稀释至1% 红细胞生理盐水悬液；1、2 撕开微胶卡得封膜，于正定管蓝A、黄B、灰D、Control 微柱管反应腔中加入1% 待检RBC生理盐水悬液各50μl ；于反定管白色A、B、O、自身管分别对应加入1、0% A1、B、O 型试剂红细胞与待检红细胞生理盐水悬液50μ l ，再分别加入待检血浆（血清）50μl ；1、3 将检测卡室温反应≥ 10 min, 取出，置离心机1000r/min 2min，1800r/min 3 min 离心；1、4 取出，判定结果（凝集强度判断详见结果判定示图）。
ABO RhD2、孕妇抗体效价得测定（微柱凝胶检测法：抗人球蛋白检测卡）2、1孕妇IgG（抗A/抗B）效价2、1、1 取待检血清与2-Me（二巯基乙醇）应用液各0、2ml，充分混匀，37℃水浴 2 小时（以充分破坏血清中得IgM 类抗体）。
2、1、2取 4 支干净试管排于试管架上；将第一管加入50微升中与血清与1、6 毫升低离子介质（原液为1:1 稀释，此时稀释倍数为原液得64 倍）。
2、1、3 第2－4 管中分别加入400微升低离子介质；从第一管中吸出400微升得液体加入第二管，混匀，在从第二管吸出400 微升加入第三管混匀，依次倍比稀释。
2、1、 4 取抗人球蛋白检测卡，撕去铝箔，在 4 管中个依次加入倍比稀释好得灭活血清50微升与1％得标准红细胞（或父亲红细胞）低离子介质（LIM）悬液50 微升。
2、1、5 将加好样得检测卡入生科孵育器中孵育15分钟。
2、1、6将孵育好得检测卡放入生科离心机中离心5分钟（1000r/min 2 min ，1800r/min 3 min），（离心必须在加样后30 分钟内进行）2、1、7 取出，判定结果（凝集强度判断详见结果判定示图）临床参考值：孕妇IgG（抗A/抗B）效价≤ 64。
新生儿溶血性疾病产前血型血清学检测标准操作规程
新生儿溶血性疾病产前血型血清学检测标准操作规程一、目的为规范新生儿溶血性疾病（HDN）产前血型血清学检测的技术操作，准确评估胎儿发生HDN 的危险程度，从而辅助临床正确的诊断和治疗。
二、适用范围输血科进行新生儿HDN产前血型血清学检测。
三、原理通过鉴定孕妇及其胎儿父亲的血型，推测胎儿可能的血型，进一步检测孕妇体内是否有针对胎儿红细胞血型抗原的抗体及其效价来评估胎儿发生HDN的危险程度。
四、步骤和方法1、检测孕妇ABO、RhD血型，红细胞不规则抗体及其丈夫ABO、RhD血型。
根据夫妇ABO 血型组合来推测母婴ABO血型是否相合：如果母婴血型配合则不需检测孕妇ABO血型IgG 抗体效价；如果母婴血型不配合（可能不配合）则需检测孕妇可能致敏胎儿红细胞的ABO 血型IgG抗体效价。
2、由于抗-A或者抗-B主要为IgM类，ABO血型不合极少发生胎儿HDN，故除有死胎史或者新生儿黄疸史的孕妇外，不需检测IgG抗-B及抗-A的效价。
3、如果孕妇为RhD阴性，丈夫RhD为阳性，孕妇不规则抗体阴性，建议孕妇以后每个月复检不规则抗体直至分娩。
4、如果孕妇不规则抗体为阳性，则需鉴定其特异性、Ig类型、37℃反应情况及其效价和丈夫红细胞是否表达对应的抗原，来评估抗体引起的HDN危险程度。
5、结果判定：效价>143有临床意义。
五、质量控制1、用于试验的试剂都在有效期内使用。
2、严格试验操作，设置阴、阳对照，结果符合预期才可判定试验结果。
六、注意事项1、HDN产前血型血清学检测结果只能为评估胎儿发生HDN的风险提供依据，并不能确定HDN 。
母婴ABO血型不合且孕妇IgG类ABO血型抗体效价在妊娠期持续升高或者检出了IgG类红细胞不规则抗体都是HDN的风险因素。
2、传统认为ABO血型系统IgG抗体效价高于64具有临床意义。
随着检测水平得的提高，其作为临床参考意义不大。
3、抗体效价与HDN的发生有一定的相关性，但是抗体效价的高低与HDN的严重程度并不完全一致，可能与IgG抗体亚类不同有关。
输血科新生儿溶血病血型血清学检查标准操作规程
输血科新生儿溶血病血型血清学检查标准操作规程1、目的：规范血液免疫学产前检查操作，确保试验过程及结果的准确性与可靠性。
2、范围：本规程适用于实验室血液免疫学产前检查试验操作。
3、职责：经授权的血型实验室试验人员负责血液免疫学产前检查试验过程及报告的发出。
4、原理孕妇和丈夫ABO血型不合（O/A、O/B、O/AB、A/B、A/AB、B/A、B/AB）时，孕妇体内的IgG抗A（B）可能会引起新生儿溶血病的发生。
本试验通过检测孕妇血清中有无IgG性质的抗A（B）抗体及其效价（应用巯基试剂破坏IgM抗体，检测IgG抗体效价）即可预测ABO系HDN发生的可能性。
应用筛选红细胞可检测孕妇血清中是否存在不规则抗体，如果存在，应用谱细胞进行抗体鉴定，确定抗体的特异性，进一步检测非ABO系新生儿溶血病。
5、所需设备、材料或试剂：37℃恒温水浴箱、细胞洗涤离心机、抗-A抗-B血型定型试剂（单克隆抗体）、抗-D RH血型定型试剂（单克隆抗体）、凝聚胺介质试剂、抗人球蛋白试剂（抗-IgG、C3d）、（A、B、O）型标准红细胞悬液（2—5%）、商品化筛选细胞、谱细胞、2—ME试剂、12×75mm试管、塑料滴管。
6、检测环境条件：温度：18—25℃；湿度：30—70%7、标本要求7.1标本接收在接收标本时，应尽可能的了解、核对、记录患者的相关资料，包括受血者姓名、年龄、性别、临床诊断、输血史、用药史、妊娠史、标本编码等；7.2检验人员收到被检者产前检查申请按照申请单内容在试管上做标记(用记号笔在试管上标明被检者姓名、性别)，保留申请记录。
7.3按照要求进行血液采集。
将采好的血液沿试管壁注入已标识的抗凝试管中，反复颠倒混匀，放入2-8℃冰箱待用。
并填写《外来标本交接记录》及相关记录。
7.4标本的种类与数量：产前检查需送夫妇血样，血样均需抗凝（EDTA抗凝），女（母）5ml，男3ml。
7.5标本的保存与处理：完成所有试验内容后，要仔细核对实验结果，发出实验报告后，将实验所用的标本原始送检管存于2-8℃冰箱内至少7天以便进行查找和核对，之后交由单位相关部门统一处理。
新生儿溶血病检测作规程
新生儿溶血病检测操作规程一、项目名称、检验方法名称1.项目名称：新生儿溶血病检测（包括直接抗人球蛋白试验、游离试验和放散试验三项）2.检验方法名称：柱凝集二、方法学原理该试剂卡是基于柱凝集的原理而设计。
正常具有抗原的人红细胞将与相应的抗体发生凝集反应，BioVue血型诊断试剂卡的微柱中含有玻璃珠介质和试剂。
加入红细胞并将试剂卡离心后，发生凝集的红细胞会被阻挡在玻璃珠的上面，而未凝集的游离红细胞则会在离心力的作用下通过玻璃珠之间的间隙到达微柱的底部。
三、试剂卡品牌、代号、包装规格、内含物1.试剂卡品牌：美国强生奥索2.代号：BioVue-po1yCassettes3.包装规格：400卡/箱试剂卡（707300）；100卡/箱试剂卡（707350）4.试剂成分:抗人球蛋白（1gG,C3b∕C3d）检测卡有6根微柱组成，每一柱中含有缓冲液,其成分为牛血清蛋白，大分子增强剂以及0.1%叠氮钠,0.0IM的EDTA.成分描述第1〜6柱：抗人球蛋白、抗抗一IgG（兔）-IgG.-C3d；多特异性抗一C3b（鼠单克隆）（克隆F7G3）抗一C3d（鼠单克隆）（克隆C4C7）FD&C1#蓝色染料FD&C5#黄色染料5.试剂的储存与效期：储存条件：2〜25。
C环境保存。
请勿将试剂存放在自动除霜的冰箱中，也不要冷冻保存。
并且不要放在离热源（如孵育箱、辐射器、大型设备、冰箱、冰柜等）很近或阳光直射的地方。
效期：试剂盒上有记载四、仪器品牌、型号BioVUe专用离心机；BiOVUe专用孵育器五、样本的采集与准备：在采集标本前对病人/献血者无特殊要求。
含有或不含有抗凝剂的标本均可使用。
标本采集后应尽快进行检测。
如果实验不能立即进行，应将标本置于2—8。
C保存。
六、试剂准备：抗人球蛋白（IgG,C3b∕C3d）检测卡为即用型产品。
试剂卡应在铝箔开启后一小时内使用。
试剂卡经过运输颠簸后，需倒置一下，然后重新离心以备用。
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新生儿溶血病血清学检查标准操作规程(一)检验目的检测孕妇产前与其丈夫ABO及Rh血型相容性、孕妇IgG 抗体效价、产后新生儿体内不相容抗体存在情况、新生儿与产妇之间血型相容性，为新生儿溶血病的预防、诊断及治疗提供可靠的实验室依据。
(二)检验原理新生儿溶血病是由母婴血型不合，母亲体内与新生儿红细胞抗原不配合的IgG性质的血型抗体进入新生儿体内，破坏新生儿或胎儿红细胞而引起，可发生在胎儿期和新生儿早期，溶血严重者可出现死胎而流产，存活者则有不同程度的新生儿黄疸。
新生儿溶血病产前诊断方法主要包括检测胎儿父母的ABO及Rh血型、孕妇不规则抗体筛查、外周血抗A ／抗B或Rh抗体效价来判断新生儿溶血病发生的可能性及严重程度；新生儿溶血病产后诊断主要包括母子ABO及RhD 血型鉴定试验、新生儿标本三项试验，为临床诊断及进一步采取治疗手段提供可靠的依据。
(三)适用范围适用于新生儿溶血病产前、产后血型血清学试验。
(四)设备性能参数参见血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、强生Ortho BioVue离心机及各全自动血型／配血系统使用说明书。
(五)器材与试剂1.器材血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、强生Or-tho BioVue离心机、塑料软试管、塑料硬质试管(75mmXl2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔、移液枪、一次性移液枪头。
2.试剂DiaMed ABO／RhD血型卡、OrthoBioVueABO ／RhD血型卡、抗A、抗B血清、Rh分，型血清、生理盐水、抗球蛋白试剂(市售单克隆)、抗体筛查试剂红细胞、抗体鉴定试剂红细胞、致敏的阳性对照细胞(自制)。
(六)标本要求1.夫妇标本EDTA-K2或EDTA-K3抗凝全血≥3ml(手工操作时也可以使用不抗凝标本)，经B600-A型离心机在 1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血及明显乳糜。
2.患儿标本EDTA-K2或EDTA-K3抗凝全血≥3ml(手工操作时也可以使用不抗凝标本)，经B600-A型离心机在 1 760g条件下，离心5分钟，离心后无明显乳糜。
(七)校准步骤参照血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、OrthoBioVue离心机及各全自动血型／配血系统使用说明书中的校准要求执行。
’ (八)操作程序1.产前血清学检查(1)取夫妇全血标本分别测定ABO血型及RhD血型，具体操作参照《ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程》。
(2)夫妇ABO血型不配合时，做孕妇血清抗体检查。
①IgG抗A(B)或Rh血型抗体效价测定：参照《ABO及Rh血型抗体效价测定试验标准操作规程》。
②中和孕妇血清做交叉试验：用DTT或2-Me破坏母血清中IgM抗体，以此处理后血清与其丈夫细胞做凝聚胺法或IAT的交叉配血试验，如果出现阳性则可能引起HDN。
2.产后血清学检查(1)ABO新生儿溶血病血型血清学检查。
①母子标本的ABO血型鉴定：分别取产妇、新生儿的洗涤红细胞鉴定ABO血型，具体操作参照《ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程》。
②新生儿标本的三项试验。
a.直接抗人球蛋白试验：将新生儿红细胞用生理盐水充分洗涤3遍，最后1遍将上清控干，然后加1滴抗人球蛋白试剂，经血清学专用离心机在1 000g条件下，离心15秒，在显微镜下观察结果，有凝集为阳性，无凝集为阴性。
也可以采用卡式抗人球法检测。
参见《手工抗人球蛋白试验标准操作规程》。
b.游离IgG抗体测定：取试管3支，分别标记Ac、Bc、Oc，每管中各加2滴新生儿血清及相应A、B、O型试剂红细胞各1滴，置37℃水浴30分钟取出，用生理盐水洗涤3次，最后1次控干上清液，然后在各管中加1滴抗人球蛋白试剂，使用血清学专用离心机在1 000g条件下，离心15秒，判读结果(表14-2)。
也可采用凝聚胺法或卡式抗人球法检测。
再取3系抗体筛查细胞检测新生儿血清中是否存在ABO系统以外的不规则抗体，可以使用卡式抗人球法检测。
c.放散试验：用生理盐水将新生儿红细胞充分洗涤4-6次，取1体积洗涤后压积红细胞加等体积的生理盐水，置56℃水浴10分钟，其间不断振摇，然后在预温的离心管中在1 760g条件下，离心1分钟，立即将上层红色放散液转移到另一试管中。
取上清放散液分成3份，于标有A、B、O的试管中，分别加入相应的A、B、O试剂红细胞各1滴，置37‘C水浴30分钟，用生理盐水洗涤3次，最后1次控干上清，然后在各管中加1滴抗人球蛋白试剂，使用血清学专用离心机在1 000g条件下，离心15秒，判读结果(表14-3)。
也可采用凝聚胺法或卡式抗人球法检测。
③产妇标本的检查：破坏产妇血清(或血浆)做交叉试验：用DTT或2-Me破坏产妇血清(或血浆)中IgM抗体，以此处理后血清分别与新生儿红细胞及与新生儿ABO同型的标准试剂红细胞做凝聚胺法或IAT的交叉试验；产妇血清中ABO 系统以外的抗体筛选：用处理后产妇血清做不规则抗体筛查，可采用凝聚胺法或卡式抗人球法检测；测定产妇血清中IgG抗A(B)效价：母亲是O型，新生儿是A型时，测IgG 抗A的效价，新生儿是B型时，测IgG抗B的效价。
方法参照《ABO及Rh血型抗体效价测定试验标准操作规程》。
(2)Rh新生儿溶血病血清学检查①母子标本的血型鉴定：分别取产妇、新生儿的洗涤红细胞鉴定Rh血型，具体操作参照《RL血型分型试验(试管法)标准操作规程》。
②新生儿标本的三项试验。
a.直接抗球蛋白试验：将子细胞用生理盐水充分洗涤3遍，最后1遍将上清液控干，然后加1滴抗人球蛋白试剂，使用血清学专用离心机在1 000g 条件下，离心15秒，判读结果，有凝集为阳性，无凝集为阴性。
参见《手工抗人球蛋白试验标准操作规程》。
b·游离IgG抗体测定：取试管3只，标记1、2、3号，每管中各加2滴子血清，并分别加入1滴抗筛试剂红细胞悬液，离心看结果，看好结果后，置37℃水浴30分钟取出，用生理盐水洗涤3次，最后1次控干上清液，然后在各管中加1滴抗人球蛋白试剂，使用血清学专用离心机在1000g条件下，离心15秒，判读结果。
也可采用凝聚胺法或卡式抗人球法检测。
如果结果为阳性，应鉴定其抗体特异性，用10系细胞或10系细胞以上谱细胞做IAT法或凝聚胺法检测，结合谱细胞反应格局，确定抗体特异性。
c.放散试验(乙醚或氯仿放散法)：参照《吸收-放散试验标准操作规程》。
③产妇标本的检查。
测定产妇血清与新生儿细胞的交叉反应：用新生儿红细胞与2-Me处理后产妇血清(或血浆)做凝聚胺法或IAT交叉配血试验，以确定母血清中是否存在针对子细胞抗原的IgG抗体。
产妇血清中ABO系统以外抗体的检测：用产妇血清(或血浆)做不规则抗体筛查，可采用凝聚胺法或卡式抗人球法检测。
如果存在ABO系统以外的同种抗体，则测定此抗体的特异性及效价，具体操作参照《不规则抗体筛查试验标准操作规程》和《ABO及Rh血型抗体效价测定试验标准操作规程》。
3.检验结果的输入与确认(1)启动“检验程序”，输入用户名及口令后，进入检验程序。
(2)单击“检验”菜单，选择“检验结果录入＼修改”，通过申请序号进行检验结果的录入及修改。
(3)检验结果的确认：检验结果应由实验室负责人或授权人员进行确认，方法为单击“结果处理”菜单，选择“报告确认”进入结果确认，通过选择“工作单元”“报告日期”“单张”或“批量”后，按“提取”键提取已经传输或录入的检验结果，经两人核对无误后按“确认”键进行确认。
(九)质量控制1.室内质量控制(1)ABO血型、Rh血型鉴定：参照《ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程》。
(2)抗体效价测定：参照《ABO及Rh血型抗体效价测定试验标准操作规程》。
(3)不规则抗体筛查及鉴定：参照《不规则抗体筛查试验标准操作规程》。
(4)产妇与新生儿之间交叉配合试验：参照《交叉配血标准操作规程》。
2.室间质量评价新生儿溶血病血型血清学检查目前尚无统一的室间质量评价活动。
(十)干扰因素已经发生新生儿溶血病的患儿血清一般呈红色可能会干扰对结果的判断。
(十一)结果计算及测量不确定度不适用。
(十二)生物参考区间不适用。
(十三)检验结果可报告区间不适用。
(十四)警告／危急值1.ABO血型不合时孕妇产前ABO抗体效价一般以64作为临界值，效价≥64认为可能有临床意义，需要进行动态观察抗体效价的变化，如果两次检测效价增加2倍或更多，被认为是发生新生儿溶血病的指征，应该进行更紧密的监测，以便及时采取治疗措施。
2.RhD血型不合时孕妇产前Rh抗体效价一般以16作为临界值，效价≥16认为有临床意义，需要进行动态观察抗体效价的变化。
3.新生儿标本的三项试验出现阳性结果时，提示新生儿溶血的存在。
(十五)实验室解释孕妇体内血型抗体效价的升高提示发生新生儿溶血病的概率增大，需要进行连续动态监测。
新生儿标本的三项试验出现阳性结果，提示新生儿溶血的存在，应根据严重程度进行相应的处理。
(十六)安全性预警措施1.实验室及工作人员一般安全防护措施参见《实验室安全与卫生管理制度》。
2.发生血液标本溢出时，应参照《实验室消毒与清洁管理制度》对污染的环境进行消毒处理。
3.操作人员发生职业暴露时，应参照《实验室职业暴露预防与处置管理制度》及时进行相应处理。
4.在仪器运转过程中，勿触及样品针、移动的传输装置等，避免造成人身伤害。
禁止触摸仪器密封面板内的电路，防止造成电击损伤。
5.对突发传染性疾病的血液标本应启动特殊的安全防护程序。
(十七)变异潜在来源不适用。
(十八)新生儿溶血病血型血清学检查特别注意事项1.ABO血型不合的新生儿溶血病一般用热放散法，Rh 系统及其他系统的用乙醚放散法，放散液用抗人球蛋白法或其他检测IgG抗体的方法检测。
2.新生儿三项试验的结果之间有一定关联，有游离抗体的，直抗应该阳性，放散试验也应该阳性；直抗阳性的，放散试验也应该是阳性，但不一定有游离抗体。
直抗阴性的其他两项试验应该是阴性，但ABO系统除外。
一般认为任何一项出现阳性都可以支持新生儿溶血病的诊断。
也有实验结果与临床症状不完全符合的情况。
3.有研究报告提出有的母亲在胎儿娩出24小时以后，IgG抗A或抗B的效价可有明显的下降。
(十九)报告时间新生儿溶血病血型血清学检查相对复杂，需要多重试验组合来得出最后结论，检测相对耗时，一般检测结果出来后立即上传HIS系统，住院患者的检验报告单由卫生员于次日上午发回申请单所在的临床科室，门诊患者次日于门诊楼一层挂号大厅化验单领取处取检验报告单。
(二十)相关文件1.相应试剂使用说明书。
2.临床输血技术规范.北京中华人民共和国卫生部医政司(2000)。
3.中国输血技术操作规程(血站部分).天津：中华人民共和国卫生部医政司(1997)。