全蛋白提取试剂盒

全蛋白提取试剂盒
Tissue or Cell Total Protein Extraction Kit
产品编号：C510003 包装规格：50 Assays 产品简介
本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取全蛋白，用含有蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液Lysis Buffer 匀浆裂解组织或细胞，作用温和，提取过程简便高效,可以提取出培养细胞或动物组织中的决大多数蛋白质。

获得的全蛋白可
用于Western Blot 、免疫共沉淀，酶活性分析，Pull down 和EMSA 等后续研究，但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀
的研究，因本试剂盒中包括这两种酶的抑制剂，可以每次从107
个培养细胞或200 mg 动物组织提取蛋白质，本试剂盒可以
使用50次。

产品特点 1. 提取的蛋白质包括膜,核,核基质和胞质蛋白,而且最大限度保持蛋白质活性 2. 整个操作过程只需要30分钟左右
3. 即可以用于培养细胞（50x107
个），有可以用于动物组织（50x200 mg ）蛋白质的提取 4. 避免蛋白酶和磷酸酶对蛋白质的降解，保持蛋白质的完整性和天然活性 5.
不需要超速度离心，可以同时处理多个样品
运输和保存条件
常温运输，收到后请将磷酸酶抑制剂，蛋白酶抑制剂和PMSF 于 -20℃保存，其余2-8℃保存，保质期一年。

试剂盒组成 成分 C510003 Lysis buffer 50 mL 蛋白酶抑制剂 50 μL 磷酸酶抑制剂 250 μL PMSF
500 μL
操作步骤
A. 实体组织蛋白的提取 1. 在每1 mL 预冷的Lysis Buffer 加入5 μL 磷酸酶抑制剂,1 μL 蛋白酶抑制剂和10 μL PMSF 混匀。

冰上保存数分钟待用。

2.
将100-200 mg 固体组织置于培养皿中，手术剪剪碎成3 mm ×3 mm 左右的小块，尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织，用PBS 洗涤两次，离心取沉淀后加入0.5～1 mL 上述配制好的预冷的Lysis Buffer ，4℃玻璃匀浆器上下手动匀浆15-30次。

或超声破碎细胞，每次30s ， 3～4次，每次间隔1 min ，置于冰上冷却。

均质匀浆或超声破碎细胞后应镜检，细胞破碎率不小于90％，同时没有明显的组织小块。

3. 取组织匀浆液转移到1.5 mL 预冷的离心管，冰上放置10 min 左右, 期间取出剧烈震荡2-3次；
4. 15000 g （13000 rpm)，4℃离心10 min ，取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，进行蛋白定量和其他蛋白质相关实验。

5.
分装保存于-70℃，避免反复冻融。

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B. 培养细胞蛋白提取 1. 贴壁培养的细胞，吸去培养基后，加入10 mL/150 mm 培养板的预冷的一倍PBS 洗两次，每次振摇数次以尽量去除培养液。

2. 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞，将细胞及培养液移至离心管中，500g 离心10 min ，再用10 mL/150 mm 培养板的预冷PBS ，1000 rpm 5 min 洗两次。

3. 在每1 mL 预冷的 Lysis Buffe 加入5 μL 磷酸酶抑制剂，1 μL 蛋白酶抑制剂和10 μL PMSF 混匀。

冰上保存数分钟待用。

4.
在上述培养板或离心管的细胞中，加入上述配制好的预冷的Lysis Buffer ，加入量如下表所示：
细胞数量 培养瓶或培养板的规格 Lysis Buffer 加入量 5×106
个 60 mm 培养板或75 cm 2
培养瓶 0.5 mL ～1.0 mL 1×107个 100 mm 培养板或150cm 2培养瓶
1.0 mL ～
2.0 mL
5. 冷室或冰上操作，贴壁细胞用细胞刮子刮下，连Lysis Buffer 一同转移至新的预冷的离心管中；悬浮培养或裂解前刮下的贴壁细胞连Lysis Buffer 一同转移至新的预冷的离心管中。

6. 置于4℃摇床平台上，中速（100-150rpm) 振荡10 min 。

7. 14000 rpm （15450 g ），4℃离心15 min ，取上清为全蛋白提取物，蛋白定量和其他蛋白质相关实验。

8.
分装保存于-70℃，避免反复冻融。

注意事项 1. 所有的试剂及器具均需预冷后使用,以保持蛋白质的完整性和活性。

2. 一般常规提取的蛋白样品，进行后续试验不需要透析，但如果需要较大量的提取蛋白或后续试验结果不理想，则需要将
提取的蛋白样品进行透析脱盐。

3. 可以使用（C500090）Sephadex 重力型脱盐柱脱盐或将缓冲液替换为实验所需要的目的蛋白质的合适缓冲液。

4. 对于提取的蛋白质可以采用我公司生产的BCA 蛋白质浓度定量试剂盒（C503021）或非干扰型蛋白质浓度定量试剂盒（C503071）或微量BCA 蛋白质浓度定量试剂盒（C503061）对提取样品中的蛋白质进行定量。

5.
如果用于蛋白质质谱研究，请用请用我公司生产的铜染（C510017）或锌染（C510019）或质谱用快速银染试剂盒(C500021)对胶上的蛋白质进行染色，这些染色方法对蛋白质没有修饰作用，所以对质谱图没有影响。

对于一般的染色，
可以采用无毒型考马氏亮蓝染色液（C503011）或高灵敏考马氏亮蓝染色液（C510041）来染色。

6. 使用后，请旋紧瓶盖，防止溶液挥发和与空气的物质发生化学反应。

7.
本试剂盒只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果，概不承担责任。

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