中药何首乌中二苯乙烯苷的含量测定(HPLC法)(精)

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关于制何首乌的提取工艺

关于制何首乌的提取工艺作者：牛志刚于海丽来源：《健康必读·下旬刊》2010年第11期【中图分类号】R932 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783（2010）11-0117-01【摘要】目的:以制首乌中二苯乙烯苷的含量为考察指标，优选出最佳且适合大生产的工艺条件。

方法:采用高效液相色谱(HPLC)法检测样品中的二苯乙烯苷含量，对提取、浓缩及干燥工艺条件进行比较，使二苯乙烯苷尽可能少地被破坏。

结果:采用70%的乙醇回流提取3次，第1次10倍量提取2 h，第2次8倍量提取2 h，第3次8倍量提取1 h，在碱性条件真空浓缩后喷雾干燥即可。

结论该工艺科学、可行、稳定，适合大生产。

【关键词】制何首乌;干燥;工艺制何首乌具有补肝肾、益精血、乌须发、强筋骨之功效，制首乌颗粒具有增强免疫功能、抗氧化作用、延缓大脑衰老、提高 DNA修复功能、延长寿命、能促进肠蠕动、抑制甘油三酰(TG)及胆固醇在肠道中的吸收,从而降低血脂，降低胆固醇,改善脂肪代谢等多项功能，其有效成分为二苯乙烯苷类化合物。

临床用于血虚萎黄，眩晕耳鸣，须发早白，腰膝酸软，肢体麻木，崩漏带下，高血脂等。

本实验主要对制首乌的提取、浓缩及干燥工艺进行了筛选。

1 仪器与试药Agilent 1100 型高效液相色谱仪。

制何首乌药材，购于河北安国市场，经鉴定为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的干燥块根炮制加工品;流动相所用甲醇为色谱纯试剂,水为重蒸水,其他试剂均为分析纯;二苯乙烯苷对照品：购自中国药品生物制品检定所(批号：110844-200404)。

2 方法与结果2.1 二苯乙烯苷含量测定方法(１）色谱条件与系统适用性试验色谱柱：C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-水(22∶78);柱温30℃，流速1.0 ml/min;检测器为紫外检测器;检测波长320 nm。

(2）对照品溶液的制备精密称二苯乙烯苷对照品15.20 mg，置50 ml容量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.304 mg/ml的二苯乙烯苷对照品溶液。

RP-HPLC法测定生、制首乌中二苯乙烯苷和大黄素的含量

ｒｓｅｔｖｌ．ＣｎｌｓｏＴｈｅｕｔａｅｐｏｉｅｓａｒｌｂｅｒｆｒｎｅｆｒｔｅｑａｉｏｔｏｎｈｒｃｓｉｇｅｐｃｉｅｙｏｃｕｉｎｅｒｓｌｓｃｎｂｒｖｄｄａｅｉｌｅｅｅｃｏｈｕｌｙｃｎｒｌａｄｔｅｐｏｅｓｎａｔｓａｄｒｉａｉｎｆｒｔｅｐｏｅｓｄａｄｕｐｏｅｓｄｐｌｇｎｍｈｉｏｕ．ｔｎａｄｚｔｏｈｒｃｓｅｎｎｒｃｓｅｏｙｏｕｍｕｆｒｍｏｌ
为Ｍｉｉ纯化水。ｌ－ｌＱ
ＨＰＬＣ．ＭｅｈｏＴｈｅｃｎｔｎｓｏｔｕｅｎｄｒｈｅｎｏｌｏｎｕｕｌｉｌｕｍｅｅｄｅｅｍｉｅｂＨＰＬＣ．Ｒｅｕｔｔｄｏｅｔｆｏｌｙｌｎｅａａｃｎｉｐｙｇｍｍｔｆｏｒｗｒｔｒｎｄｙｓｌｓ
【中图分类号】Ｒ３．；８．９１６Ｒ２２６【献标识码】Ａ文【章编号】１７ — ５１２１）６１０ — ３文６２３１（０００ —０１０
ＤｅｅｍｉｔｏｆｔｌｙｅｎｄａｃｅｎｐｌｇｎｍｕｔｆｏｕｔｒｎａｉｎｏｏｕｌｎｅａｒｈｎｉｏｙｏｕｍｌｉｌｒｍｔｗｉｈＲＰ— ＰＬＣＨ
西部医学２１００年６月第２２卷第６期ＭｅｓＣｉａＪｎ００Ｖ１２，ｏ６ｄＪＷｅｔｈｎ，ｕｅ２１，ｏ．２Ｎ．

HPLC法测定何首乌中二苯乙烯苷的含量

ｃｎｒｌｔｅｑａｉ．ｏｔｏｈｕｌｙｔ
［ｙｗｒｓＲａｉｏｙｏｉｈｆｒ；，，，＂ｔｔｈｄｏｙｔｂｎ－－－ｇｕｏｉｅＨＬ；ｓｓｍｅｔＫｅｏｄ］ｄｘｐｌｇｎｍｕｉｏｉ２３５４－ｅｒｙｒｘｓｌｅｅＯ１Ｄ— ｌｃｓ；ＰＣＡｓｅｓｎｌａｉ３ｄ
ｄｔｒｎｔｎｏｏｔｎｆ２３５４－ｅｒｈｄｏｙｔｂｎ－１－ｇｕｏｅｅｍｉａｉｆｃｎｅｔｏ，，，ｔｔａｙｒｘｓｉｅｅＯ－３Ｄ－ｌｃ－ｏｌ
ｓｄｎｒｄｉｏｙｏｕｌｉｏｉｉｅｉａｘｐｌｇｎｉｍｔｆｒｌ
ａｅｒｃｖｒｎｅｉｉｎｗｅｅ９９％．Ｃｏｃｕｉｎ：Ｔｈｔｏｓｓｍｐｅｃｕａｅａｄｃｎｂｆｃｉｅｍｅｈｄｔｇｅｏｅｙａｄｒｃｓｏｒ９。６ｎｌｓｏｅｍｅｈｄｉｉＬ，ａｃｒｔ，ｎａｅａｅｆｔｔｏｏｅｖ
［章编号】１７ — ７１２１）６ｃ一４ — ２文６４４２（０００（）０１０
ＨＰＬＣｔｒｉｔｏｏｔｌｎｅｇｕｃｓｄｅｉｌｇｎＤｅｅｍｎａｉｎｆｓｉｂｅｌｏｉｎｐｏｙｏｕｍｕｌｉｏｕｍｏｔｎｔｍｔｆｒｌｃｎｅ
３５ｎＴｅｆｏｒｔｓ１０ｍｌｎａｄｔｅｃｌｍｎｔｍｐｒｔｒｓ３２ｍ．ｈｗａｅｗａ．／ｎｈｏｕｅｅａｕｅｗａ０℃ ．Ｒｅｕｔ：Ｔｅｍｅｈｄｐｏｅｏｂｉｅｒｉｌｍｉｓｌｓｈｔｏｒｖｄｔｅｌｎａｎｔｅｒｎｅａ．０ — ．０ｇｗｉｏｒｌｔｏｏｆｃｅｔｏ．９．ｈｉｅｒｆｒｌｓＹ＝１２９Ｘ＋５６．ｅａｅ－ｈａｇｔ０２０４００Ｉｔｃｒｅａｉｎｃｅｉｎｆ０９９７Ｔｅｌａｏｍｕａｗａｘｈｉｎ５．２４．７Ｔｈｖｒ

野生与栽培何首乌中二苯乙烯苷含量测定

（．５０４ｍ）滤过，即得供试溶液。
２４标准曲线绘制．精密吸取对照品溶液０５２０３５．，．，．，５０６５８０，０ｌ置于１ｍｌ量瓶中，．，．，．１ｍ，０容用稀乙醇稀释至
为探索何首乌的栽培条件及栽培技术提供参考依据。
（．９４／１。０２６ｍｇｍ）
２３供试品溶液的制备取何首乌粉末（四号筛）．过约
０２，密称定，．ｇ精置于烧瓶中，密加入稀乙醇２ｍ，密精５ｌ精称定重量，加热回流３ｍｎ放冷。再精密称定重量，０ｉ，用稀乙醇补足减失的重量，匀，上清液用微孔滤膜摇取
１３对照品．１４药材．
制品检定所，批号为０４－２００）８４００３。
栽培品由贵州省中药材种植指导中心、施秉县中药材办公室提供，生品由作者自己采集。何首乌野生野品和栽培品各４种样品，贵阳中医学院药学系生药教研经室杨锦纲副教授鉴定，为蓼科植物何首乌（ｏｇｎｍｍｕＰｌｏｕｌｙ — ｔｏｕｈｎ．的干燥块根。ｌｆｉｒｍＴｕｂ）本实验所用药材在４ ℃ 一００５ ℃条件下干燥４，ｈ粉碎过４号筛备用。２实验方法与结果Ｊ２１色谱条件与系统．用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：腈一水（５：７）为流动相ＷＧ — Ｃ８谱柱乙２５Ｙ。色
１０．４１０．８ｘ＝１０．１ＲＤ＝．５（５。１８５，１７２：１６０；Ｓ０７％ｎ：）

何首乌不同部位二苯乙烯苷含量测定

× ｍ）５，流动相：乙腈一（５５）水２：７，柱温：室温，流速：１ｌｎｍＭｍｉ，检测波长：３０ｍ。２ｎ
２１２对照品溶液的制备．．
Ａｉｎｌ０ｇｅｔ１０高效液相色谱仪（国Ａｉｎ公ｌ美ｇｌｔｅ
２１３系统适用性试验．．
Байду номын сангаас
司）ｅｏｈｌ转蒸发仪（国Ｈｉｏｈ公、Ｈｉｌｂ２旋ｄｐａ德ｅｌｄｐ司）Ｓ一１２０、Ｈ０６Ｄ超声波清洗器（津市恒奥科天
技发展有限公司）Ｚ、ＤＦ一６５Ｂ真空干燥箱（００上
羟基二苯乙烯一一 — 一萄糖苷（，，，’ｅａ２ＯＢＤ葡２３５４一ｔ— ｔｒ
ｈｄｏｙｓｌｅｅ２ＯＢＤｇｃｓｅｙｒｘ—ｔｂｎ一一 — — —ｌｏｉ，简称ＴＧ）自ｉｕｄＳ
分析纯，甲醇、乙腈为色谱纯（ｉｅ公司产）Ｆｈｒｓ，
地上部分二苯乙烯苷含量较低不能作为提取二苯乙烯苷的原料开发利用。认为在中医临床上将何首乌与何首乌藤分别使用有一定依据。关键词：何首乌；不同部位；二苯乙烯苷；含量测定
中图分类号：Ｒ８２４文献标识码：Ａ文章编号：１０－２２（０８叭 —０Ｏ — ３００７３２０）ｏ７
基金项目：国家自然科学基金资助（Ｏ：３７０１）Ｎ０６３２
收稿日期：２ｏ — １—２０７０２

《中药学专业知识(一)》基础习题

《中药学专业知识（一）》基础习题1.在七情配伍中，黄芪与茯苓同用的配伍关系是 [单选题] *A.相须B.相使(正确答案)C.相畏D.相杀E.相恶答案解析：相使即性能功效有某种共性的两药同用，一药为主，一药为辅，辅药能增强主药的疗效。

如以补气利水的黄芪为主，配以利水健脾的茯苓为辅，茯苓能增强黄芪的补气利水效果等。

故选B。

2.根据方剂的组方原则，关于佐药在方中所起作用的说法，错误的是 [单选题] *A.协助君、臣药加强治疗B.消除或减缓君、臣药的毒性或烈性C.直接治疗次要兼证D.与君药药性相反而又能在治疗中起相成作用E.针对兼病或兼证起治疗作用(正确答案)答案解析：佐药意义有三：一为佐助药，即协助君、臣药加强治疗作用，或直接治疗次要兼证的药物；二为佐制药，即用以消除或减缓君、臣药的毒性或烈性的药物；三为反佐药，即根据病情需要，使用与君药药性相反而又能在治疗中起相成作用的药物。

佐药的药力小于臣药，一般用量较轻。

故选E。

3.采用炒黄法炮制时，宜用中火炒制的饮片是 [单选题] *A.炒王不留行(正确答案)B.炒牛蒡子C.炒槐花D.炒芥子E.炒莱菔子答案解析：取净王不留行，投入预热容器内，中火拌炒至大部分爆花即可得炒王不留行。

故选A4.含有吡咯里西啶类生物碱，具有肝、肾毒性和胚胎毒性的中药是 [单选题] *A.雷公藤B.防己C.千里光(正确答案)D.苦参E.王不留行答案解析：解析：千里光中所含有的生物碱主要为吡咯里西啶类生物碱，主要化学成分有千里光宁碱、千里光菲宁碱及痕量的阿多尼弗林碱等；同时含有黄酮苷等成分。

千里光具有肝、肾毒性和胚胎毒性，在使用时应该严格注意。

故选C。

5.以下不属于氧苷的是 [单选题] *A.酚苷B.氮苷(正确答案)C.酯苷D.醇苷E.吲哚苷答案解析：解析：氧苷根据苷元的不同可以分为醇苷、酚苷、氰苷、酯苷和吲哚苷。

氮苷的苷键原子为N，不属于氧苷。

故选B。

6.主要含醌类化合物的是 [单选题] *A.人参B.紫草(正确答案)C.细辛D.斑蝥E.蟾酥答案解析：紫草的主要化学成分为萘醌类化合物，包括乙酰紫草素、欧紫草素、紫草素等；人参中含有皂苷、多糖和挥发油等多种化学成分；细辛中的主要化学成分为挥发油、木脂素类和黄酮类；斑蝥中主要含单萜类成分：斑蝥素，还含脂肪、树脂、蚁酸及多种微量元素等。

HPLC法测定生发乌发口服液中二苯乙烯苷的含量

量控制。
关键词
生发鸟发口服液；二苯乙ｏ７１９（２０１２）０ｌ一００５７ — ０３
中图分类号：Ｒ２８４．１
ＣｏｎｔｅｎｔｓｏｆＳｔｉｌｂｅｎｅＧｌｕｃｏｓｉｄｅｉｎＳｈｅｎｇｆａＷｕｆａＯｒａｌＬｉｑｕｉｄＤｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＨＰＬＣ
Ａｇｏｏｄｌｉｎｅａｒｉｔｙｆｏｒｓｔｉｌｂｅｎｅｇｌｙｃｏｓｉｄｅｗａｓｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ１．５２￣７５．７６ｇ／ｈｄ，ｒ＝Ｏ．９９９９，ａｎｄｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｆｏｉｔｗａｓ９９．２３％ｗｉｔｈＲＳＤｆｏ１．９８％（ｎ＝６）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ｅｍｅｔｈｏｄｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｃｏｎｔｅｎｔｓｆｏｓｔｉｌｂｅｎｅ
ＨＰＬＣ法测定生发乌发口服液中二苯乙烯苷的含量
刘倩黄权芳广西中医药大学第一附属医院５３００２３南宁市东葛路８９ — ９号摘要目的：建立生发乌发口服液中二苯乙烯苷含量测定的方法。方法：采用ＨＰＬＣ法进行测定，色谱柱为ＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ。８柱（４．６ｍｍｘ２５０ａｒｍ．，５ｍ），流动相为乙腈一水（１６：８４），柱温为室温，检测波长为３２０ｎｍ。结果：二苯乙烯苷在１．５２ — ７５．７６ＩＴｌｌ的范围内有良好的线性关系（ｒ＝Ｏ．９９９９），平均加样回收率为９９．２３％，ＲＳＤ为１．９８％（ｎ＝６）。结论：本实验建立的二苯乙烯苷含量测定方法简便，准确，重复性好，可用于生发乌发口服液的质

近红外漫反射光谱法快速测定首乌丸中二苯乙烯苷的含量

中国药房2017年第28卷第18期China Pharmacy 2017V ol.28No.18首乌丸由制何首乌、熟地黄、桑椹等中药组成，具有补肝肾、益精血、乌须发的功效，可用于治疗肝肾两虚、头晕目花、耳鸣、腰酸肢麻、须发早白、高血脂等症[1]。

该制剂现收载于2015年版《中国药典》（一部），采用高效液相色谱法（HPLC ）作为测定首乌丸中二苯乙烯苷含量的标准方法，但该方法操作较为烦琐，不仅费时费力，而且易破坏样品[2]。

近红外漫反射光谱法（Near infrared diff-use reflectance spectroscopy ，NIDRS ）作为一门绿色分析技术，通过扫描样品的近红外光谱，可以得到样品中有机分子含氢基团的特征信息[3]，在药物的定性、定量分析方面具有广泛的应用前景[4-7]。

鉴于此，本课题组采用NIDRS 法建立了快速测定首乌丸中二苯乙烯苷含量的方法，以期为完善该制剂的质量标准提供参考。

1材料1.1仪器1120型全自动HPLC 仪，配备SIL-20A 自动进样器、SPD-20A 紫外检测器、LC solution 工作站（日本Shim-adzu 公司）；Nicolet 6700型傅里叶变换近红外光谱仪，配有漫反射积分球、样品旋转器和石英样品杯、OMNIC 光谱采集软件和TQ 8.0分析软件（美国Thermo 公司）；BIY 211b 型万分之一电子分析天平和AY 120型十万分Δ基金项目：广东省科技计划项目（No.2009B 030801044）＊硕士研究生。

研究方向：中药资源与质量。

E-mail ：xila_1990@#通信作者：教授，博士。

研究方向：中药资源、中药质量标准及中药新药研究。

E-mail ：shengguo_ji@ 近红外漫反射光谱法快速测定首乌丸中二苯乙烯苷的含量Δ刘喜乐＊，贾灿潮，姬生国#（广东药科大学中药学院，广州510006）中图分类号R 917文献标志码A 文章编号1001-0408（2017）18-2539-04DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2017.18.26摘要目的：建立快速测定首乌丸中二苯乙烯苷含量的方法。

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洗时间约20～30分钟。再用高浓度甲醇（含甲醇
85%以上）溶液冲洗，约30～60分钟（注：不能直
接用有机溶剂冲洗，盐类易析出，堵塞色谱柱，
造成色谱柱永久性损坏；所用水最好是重蒸馏的
水。必须抽滤和脱气）。最后用纯甲醇冲洗约10 分钟，以保存色谱柱。
（2）不含盐的流动相的冲洗方法：操作结束
后，先用流动相冲洗约10～15分钟，再用
泵”电源、检测器电源和工作站。
2.稳定柱压：换上流动相，将滤头放入流动相中，
开始下列操作：脱气、清洗、调流速。
（1）脱气：打开放空阀，按仪器前面板的[冲洗]
功能键，用大流量冲洗系统，直到流出的液体连
续，证明气泡已经排除；按[冲洗]功能键，关闭
放空阀。
（2）调流速：根据检品要求调“流速”，未
明确“流速”的检品，调流速使柱压在适宜范围内（不得超过40MPa）。具体操纵：按“△”或“▽”键，屏幕显示“MENU1”后按“△”或“▽”输进数
对照品溶液的制备：取2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D一葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取本品粉末(过四号筛)约 0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25m1，称定重量，加热回流30分钟，放冷，
再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，
流动相的配制
1. 根据各药品项下规定的配制方
法，配制各种流动相，用微孔滤
膜（φ0.45μm）过滤。水系溶液用水膜过滤，有机溶剂（或混合溶剂）用有机膜过滤。 2. 脱气：配好的流动相需要洗脱排气泡。方法：用超声波清洗器超声排气泡，时间约10～20分钟。
开
机
1.打开电源，待电压稳定后，依次打开“高压输液
字至所需流速和最高和最低压力,再按“确
认”键。然后启动泵看压力是否超过范围。

（3）调波长：根据检品要求调“波长”。方法：打开“检测器”电源，按“操纵菜单”键,屏幕显示 “MENU1”后按“△”或 “▽”键进行波长设定,设定是按数字键后按 “确认”。
打开色谱工作站[ONLINE]
1.设置分析方法：根据检品所需设置分析方法（或直接调出本检品已保存的方法）等待进样。 2.进样：待色谱工作站中的基线平稳后，进样。用仪器配备的进样器，或用一次性注射器（进样器使用之前要用纯化水及供试品润洗2-3次），吸取一定量的待检液（不少于 20ul。因进样器定量环自动控制在20ul。），进样阀处于
含5%甲醇的水冲洗10～20分钟。最后用高
浓度甲醇（含甲醇85%以上）溶液或纯甲醇冲洗，时间约20～30分钟（注：不能直接用纯水冲洗，易造成压力过高，活动停止。所用水最好是重蒸馏的水。必须抽滤和脱气）。
关闭计算机和检测器
实验完毕及时关闭检测器（便于保护检测
器，甚至可延长检测器的寿命）；根据提示依次关闭桌面，最后关闭工作站，泵系
用流动相或样品的溶剂，3～5次，再用甲
醇冲洗，3～5次；再旋动进样阀按上法冲
洗，3～5次；最后把进样器上的进样针拔
掉，安上配备的冲洗头（白色的圆形配件）用甲醇冲洗3～5次，即可。将进样针插到进样器上保存，盖好红色保护盖。
2.色谱柱的冲洗
（1）含盐的流动相的冲洗方法：操纵结束后，先用
纯化水或含甲醇5%（最高浓度不超过20%）的水冲
静置，上清液滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
注：本品按干燥品计算，含2，3，5，4’四羟基二苯乙烯-2-O-β-D一葡萄糖苷
(C20H22O9)不得少于1.0％。
依利特 P230/UV230+/EC2000型效液相色谱仪操作规程
2．试药：何首乌、2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D一葡萄糖苷对照品、乙腈、稀乙醇。
三、实验内容
避光操作。照高效液相色谱法(附录ⅥD)测定。
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键
合硅胶为填充剂；以乙腈一水(25：75)为流动相；
检测波长为320nm。理论板数按2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D一葡萄糖苷峰计算应不低于 2000。
LODE处，进样，然后快速扳动进样阀手柄，到INJECT状态，
仪器自动启动数据采集。注意：进样前基线要走平稳，且检测器已预热半个小时。
3.等样品分析完毕后基线平稳，方能结束数
据采集。
4.打印结果：点“报告”项下的打印信息设置选项，进行信息设置后。点击“文件” 菜单先预览，再打印。
冲
洗
1.进样阀的冲洗：将进样针插进进样器，先
统。
清
理
每次操作完毕后，应及时清理所用物品，
废液倒到废液容器内，所用的玻璃仪器及
时送到洗刷池。实验台面、仪器表面用柔
软的抹布擦拭干净，时刻保持实验台和仪
器的整洁。
药物分析与检验技术实训讲义
实训十六
中药何首乌中二苯乙烯苷的含量测定（HPLC法）
一、目的要求
1．掌握中药有效成分的HPLC法测定方法及一
般操作规程。
2．熟悉高效液相色谱仪的使用方法及其操作
注意点。
二、仪器与试药
1．仪器：高效液相色谱仪、容量瓶、具塞
锥形瓶、移液管、电子分析天平、球形冷凝
管、电热套。