细胞产物分析技术-3细胞产物分离方法-2011.
2011年天津大学分子生物学考研模拟试题一、二、三及答案
天津大学2011年攻读硕士学位研究生入学考试模拟试题（一）科目代码：科目名称：分子生物学考生注意：所有大题务必书写在考场提供的答题纸上，写在本试题单上的答题一律无效（本题单不参与阅卷）。
一、名词解释（每小题3分，共30分）1.Immunoprecipitation2.RNA in situ hybridization3.Genome4.FISH5.Viral-like retrotransposons6.Riboswitch7.photoreactivation8.CAP9.Palindrome10.gene therapy二、简答题（每小题10分，共60分）1.简述转基因动物的概念、原理及应用2.简述模式生物及其相关信息3.在DNA复制过程中会形成一种复制体（replisome）的结构，它是由哪几部分组成的？4.描述cDNA文库构建原理与方法：（1）cDNA获得方法，（2）克隆方法，（3）文库质量定义。
5.请描述述端粒(Telomere)的结构、功能及复制过程。
6.什么是基因突变？并说明产生基因突变有哪些途径三、论述题（每小题15分，共60分）1.真核生物转录水平的调控机制？2.生物大分子之间的相互作用是生命现象的具体表现，试以蛋白质之间以及蛋白质与核酸分子之间的相互作用为例加以说明。
3.请举例说明在细菌中RNA的二级结构可以调控基因的表达。
4.生物体存在大量的mRNA前体的选择性剪切(alternative splicing)过程。
什么是选择性剪接，有几种方式？可变剪接的生物学意义是什么？天津大学（评分参考卷）2011年攻读硕士学位研究生入学考试模拟试题（一）科目代码：科目名称：分子生物学一、Immunoprecipitation免疫沉淀是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。
是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。
其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。
2011年高考生物真题及详解(广东卷)
2011年普通高等学校招生全国统一考试(广东卷)理科综合（生物部分100分）本试卷共11页，36小题，满分300分。
考试用时150分钟。
一、单项选择题：本大题共16小题，每小题4分，共64分。
在每小题给出的四个选项中，只有一个选项符合题目要求，选对的得4分，选错或不答的得0分。
1. 小陈在观察成熟叶肉细胞的亚显微结构照片后得出如下结论，不正确．．．的是 A. 叶绿体和线粒体都有双层膜 B. 核糖体附着在高尔基体上2. 艾弗里和同事用R 型和S 型肺炎双球菌进行实验，结果如下表。
从表可知A. ①不能证明S 型菌的蛋白质不是转化因子B. ②说明S 型菌的荚膜多糖有酶活性C. ③和④说明S 型菌的DNA 是转化因子3. 华南虎是国家一级保护动物，可采用试管动物技术进行人工繁殖，该技术包括的环节有 ①转基因 ②核移植 ③体外受精 ④体细胞克隆 ⑤胚胎移植A. ①③B. ①④C. ②⑤D. ③⑤实验组号接种菌型 加入S 型菌物质 培养皿长菌情况 ①R 蛋白质 R 型 ②R 荚膜多糖 R 型 ③R DNA R 型、S 型 ④ R DNA （经DNA 酶处理） R 型4. 短跑运动员听到发令枪声后迅速起跑，下列叙述正确的是A. 起跑动作的产生是非条件反射的结果B. 调节起跑动作的神经中枢是听觉中枢5. 以下关于猪血红蛋白提纯的描述，不正确．．．的是A. 洗涤红细胞时，使用生理盐水可防止红细胞破裂B. 猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少C. 血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过程的监测6. 某班同学对一种单基因遗传病进行调查，绘制并分析了其中一个家系的系谱图（如图1）。
下列说法正确的是A. 该病为常染色体显性遗传病B. II-5是该病致病基因的携带者C. II-5和II-6再生患病男孩的概率为1/2D. III-9与正常女性结婚，建议生女孩二、双项选择题：本大题共9小题，每小题6分，共54分。
在每小题给出的四个选项中，有两个选项符合题目要求，全部选对的得6分，只选1个且正确的得3分，有选错或不答的得0分。
大学细胞生物学考试(试卷编号1111)
大学细胞生物学考试(试卷编号1111)1.[单选题]MPF 的分子组成是（ ）。
A)CDK2和cyclinBB)CDK1和cyclinBC)CDK4和cyclinDD)CDK2和cyclinD答案:B解析:2.[单选题]下列关于细胞分化潜能的说法错误的是( )A)干细胞在一定条件下可以分化成多种功能的细胞B)终末分化的体细胞的细胞核具有全能性,在一定条件下具有可以发育为正常个体的潜能C)细胞全能性的维持在于细胞核中的基因组,而非细胞质D)细胞全能性的维持在于细胞质,而非细胞核中的基因组答案:C解析:3.[单选题]平滑肌、心肌、神经末梢间的电紧张突触属于 （ ）A)间隙连接B)化学突触C)胞间连丝D)隔状连接答案:B解析:4.[单选题]有丝分裂中期最重要的特征标志是（ ）。
A)染色体排列在赤道板上B)纺锤体形成C)核膜破裂D)姐妹染色单体移向两极答案:A解析:5.[单选题]一般情况下，下列的细胞中分化的程度由高到低的顺序依次是a卵原细胞 b受精卵 c胚胎干细胞 d造血干细胞 e神经细胞（ ）A)eabcdB)ecabdC)eadbc6.[单选题]下列成分中，参与收缩环形成的为( )A)微管蛋白B)肌动蛋白C)中间纤维蛋白D)微管结合蛋白答案:B解析:7.[单选题]下列错误的是（ ）A)体外培养的细胞不是不死的B)体外培养的细胞的增殖不是无限的C)体外培养的细胞不可能是永生化的D)体外培养的细胞可以是永生化的答案:C解析:8.[单选题]在叶绿体中，与光合作用的光反应正常进行相适应的结构是（ ）。
[湖南大学2007研]A)叶绿体外膜B)叶绿体内膜C)基粒中囊状结构的薄膜D)基质答案:C解析:光反应是在类囊体膜上由光引起的光化学反应，通过叶绿素等光合色素分子吸 收、传递光能，并将光能转换成电能，进而转换为活跃的化学能，形成ATP和NADPH的过程。
暗反应是在叶绿体基质中进行的不需光（也可在光下）的酶促化学反应，利用光反应产生的ATP和NADPH，使CO2还原为糖类等有机物，即将活跃的化学能最后转换为稳定的化学能，积存于有机物中。
生物学案：22动物细胞工程(第2课时)
2。
2动物细胞工程（第2课时）1．举例说出动物细胞融合技术的原理和应用。
2．举例说出单克隆抗体技术的原理和应用。
一、动物细胞融合1．概念动物细胞融合也称细胞杂交，是指______或多个动物细胞结合形成__________的过程。
融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为__________。
2．动物细胞融合的基本原理和方法(1）原理:膜的________。
（2）方法:与植物原生质体融合的方法类似，常用的诱导因素有聚乙二醇、____________、电激等。
二、单克隆抗体1．原理每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体,B淋巴细胞在体外__________增殖，而肿瘤细胞具有________增殖的特点，将________B淋巴细胞与____________融合，可以使杂交细胞具有两个亲本的遗传特性，既能______增殖又能产生______抗体.2．单克隆抗体的制备（1）过程：错误!错误!错误!错误!错误!____细胞错误!杂交瘤细胞错误!错误!―→单克隆抗体（2)杂交瘤细胞的特点：既能迅速大量______，又能产生______的抗体。
（3)单克隆抗体的特点:________强、________高、产量大。
3．单克隆抗体的应用（1）作为诊断试剂:能准确识别各种______物质的细微差异,并与一定抗原发生特异性结合。
（2）用于治疗疾病和运载药物：制成“生物导弹”。
思考:治疗癌症时,能否让治疗癌症的药物只杀癌细胞，不杀正常体细胞?答案：一、1.两个一个细胞杂交细胞2．（1）流动性(2）灭活的病毒二、1.不能无限无限单个骨髓瘤细胞无限单一2．(1）B瘤（2）繁殖专一（3)特异性灵敏度3．（1）抗原思考:把单克隆抗体与放射性同位素、化学药物或细胞毒素相结合，制成“生物导弹”，使之专杀癌细胞。
1．植物体细胞杂交和动物细胞融合的区别2.（1）受精作用是在同种生物之间进行的，精子与卵细胞的融合不需要任何诱导剂,就能形成受精卵，受精卵内具备同种生物的两个亲本的遗传物质。
细胞物质出入细胞的方式
细胞物质出入细胞的方式细胞物质出入细胞的方式2011年08月06日1细胞内的吸能反应和放能反应a 吸能反应指产物分子中的势能比反应物分子中的势能高。
如人体细胞中葡萄糖合成糖元就是一种吸能反应。
放能反应指产物分子中的势能比反应物分子中的势能低。
所有细胞中最重要的放能反应是糖的氧化也称为细胞呼吸。
2ATP的化学组成和特点a ATP的化学组成ATP由一个核糖、一个腺嘌呤和三个磷酸基团组成的。
其中A代表腺苷由一个核糖和一个腺嘌呤组成T代表3个P代表磷酸基团。
所以ATP也叫做腺苷三磷酸。
ATP的特点一个ATP含一个腺苷和三个磷酸基团这是它的组成特点同时ATP还含有高能磷酸键一分子ATP中含有两个高能磷酸键其中远离腺苷的高能磷酸键易水解和重新形成。
当远离腺苷的那个高能磷酸键水解时则ATP就变成了ADP当ADP得到能量时又能重新形成高能磷酸键形成ATP。
ATP 在细胞内含量很少但在细胞内的转化速度很快。
ATP和ADP相互转化的过程和意义这个过程储存能量这个过程释放能量ATP与ADP的相互转化ATP 酶ADP Pi能量1molATP水解释放30.54KJ能量方程从左到右时能量代表释放的能量用于一切生命活动。
方程从右到左时能量代表转移的能量动物中为呼吸作用转移的能量。
植物中来自光合作用和呼吸作用。
注在ATP 和ADP转化过程中物质是可逆能量是不可逆的意义能量通过ATP分子在吸能反应和放能反应之间循环流通ATP是细胞里的能量流通的能量“通货” 9物质出入细胞的方式1扩散和渗透的过程b 扩散是指分子或离子从高浓度处向低浓度处运动的现象。
扩散达到平衡时分子仍继续运动且维持着平衡状态。
渗透是指水分子通过膜的扩散称为渗透。
水分子总是从分子数相对较多的一侧进入水分子相对较少的一侧。
即水分子扩散总是从较低浓度→较高浓度。
扩散和渗透都是物理现象。
渗透作用的条件①有半透膜存在②半透膜两边均为液态且存在浓度差半透膜的特点大分子物质不可以透过小分子物质如水可以透过。
分子生物学实验(任峰)2011
实验二 PCR克隆目的基因
一 实验原理
PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链式反应)是一种选择性体外 扩增DNA 的方法.它包括三个基本步骤: (1) 变性(Denature):目的双链DNA 片段在94℃下解链; (2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(56℃左右)下与模板上 的目的序列通过氢键配对; (3) 延伸(Extension):在TaqDNA 聚合酶合成DNA 的最适温度下,以目的 DNA 为模板进行合成. 由这三个基本步骤组成一轮循环,理论上每一轮循环将使目的DNA 扩 增一倍,这些经合成产生的DNA 又可作为下一轮循环的模板,所以经 25-35 轮循环就可使DNA 扩增达待扩目的基因扩增放大几百万倍。
4 种 dNTP
浓度适当，避免反复冻融 • dNTP 原液配成10mM或者2.5mM分装,20oC贮存。 • 一般反应中每种dNTP 的终浓度为20200μM。当dNTP 终浓度大于50mM 时可 抑制Taq DNA 聚合酶的活性. • 4 种dNTP 的浓度应该相等,以减少合成中 由于某种dNTP 的不足出现的错误掺入。
2. 引物
• PCR 反应产物的特异性由一对上下游引物所决 定。引物的好坏往往是PCR 成败的关键 • 引物影响因素： 特异性： 长度适当、避免二级结构和二聚体 完整性： 避免反复冻融 浓 度： 应适当,过高导致非特异性增加,过低则 扩增产物太少
引物设计原则
(1) 引物长度： 约为16-30b (2) G+C含量： G+C含量通常为40%-60%, 较短引物 可粗略估计Tm＝4(G+C)+2(A+T). (3) 四种碱基随机分布，在3‘端不存在连续3 个G 或 C,因这样易导致错误引发。 (4) 在引物内及两引物之间, 尤其在3‘端应不存在二 级结构。 (5) 引物5‘端对扩增特异性影响不大, 可在引物设计 时加上限制酶位点。 (6)引物不与模板结合位点以外的序列互补
单细胞测序的细胞核的分离和纯化方法
单细胞测序的细胞核的分离和纯化方法
单细胞测序的细胞核的分离和纯化方法主要包括以下步骤：
1. 酶解：使用胶原酶和胰蛋白酶等酶将组织样本消化，将细胞间的连接分解，使细胞分散成单个细胞。
2. 离心：通过离心将单个细胞收集到管底部，形成细胞沉淀。
3. 洗涤：去除细胞沉淀中的组织残留物和杂质。
4. 重悬浮：将单个细胞重新悬浮在适量的缓冲液中，以便后续处理。
5. 过滤：通过过滤膜或滤器将细胞核与其他细胞成分分离，收集细胞核。
需要注意的是，上述步骤仅为一种参考方法，实际操作可能因实验条件、样本类型等因素而有所不同。
因此，在进行单细胞测序实验前，请详细阅读相关文献，了解并优化适合自己实验的细胞核分离和纯化方法。
同时，务必遵循实验室安全规范，确保实验过程的安全性。
大学细胞生物学考试(习题卷1)
大学细胞生物学考试(习题卷1)第1部分：单项选择题，共227题，每题只有一个正确答案,多选或少选均不得分。
1.[单选题]新生肽链的折叠与装配是在下列哪种细胞器内完成的？A)溶酶体B)粗面内质网C)高尔基体D)滑面内质网答案:B解析:2.[单选题]下列哪种物质不参与氨基聚糖的组成( )A)N-乙酰氨基半乳糖B)N-乙酰氨基葡萄糖C)N-乙酰葡萄糖胺D)葡萄糖醛酸E.艾杜糖醛酸答案:C解析:3.[单选题]用特异性药物细胞松弛素B可以阻断下列哪种小泡的形成( )A)胞饮泡B)吞噬泡C)分泌小泡D)包被小泡答案:B解析:4.[单选题]下列哪一项不是凋亡细胞的特点（ ）A)细胞膜破裂B)细胞膜保持完整C)不引起炎症D)DNA ladder答案:A解析:5.[单选题]下列关于再生能力的比较，正确的是（ ）。
A)幼体强于成体B)动物强于植物C)高等动物强于低等动物D)器官强于组织答案:A解析:6.[单选题]矽肺、痛风和下列哪种细胞器的异常有关？D)滑面内质网答案:A解析:7.[单选题]线粒体作为半自主细胞器，下列论述有误的是（ ）A)线粒体具有环状双链DNA，可以自我复制B)线粒体可以像细菌一样自我增殖分裂C)线粒体具有核糖体，可以合成蛋白质，但线粒体核糖体与胞质中核糖体并不相同D)线粒体蛋白质均靠自身合成，且不受细胞核的调控答案:D解析:8.[单选题]在哪个阶段，去甲基酶清除DNA上几乎所有从亲代遗传下来的甲基化标记？（ ）A)受精时B)受精后卵裂最初几次分裂时期C)受精后卵裂后期D)胚胎植入子宫时答案:B解析:在受精卵的最初几次分裂时期，去甲基酶清除DNA上的甲基，在胚胎植入子宫的时候，建立新的甲基化模式。
9.[单选题]结构较稳定的细胞骨架是( )A)微管B)微丝C)中间纤维D)微梁网络答案:C解析:10.[单选题]以下可用于外源蛋白质分子导入细胞的方法是（ ）A)分子筛层析B)直接扩散法C)Western blotD)琼脂糖电泳答案:B解析:11.[单选题]从受精卵到成熟个体需进行( )A)细胞分裂B)细胞分化C)二者均有D)二者均无答案:C解析:12.[单选题]下列中哪种是由微丝为主要成分构成的细胞结构？A)肌肉的细肌丝，肌肉的粗肌丝，微绒毛，stress fiberB)肌肉的细肌丝，微绒毛，纤毛，细胞皮层C)肌肉的粗肌丝，微绒毛，stress fiber，胞质分裂环13.[单选题]以下哪一类组织中细胞外基质（ECM）含量较高？A)上皮组织B)肌肉组织C)神经组织D)结缔组织答案:D解析:14.[单选题]下面描述不属于密度梯度离心的是（ ）A)溶液介质本身不会形成密度梯度B)细胞各组分按照密度分离C)离心速度恒定D)大分子量组分位于离心管底部答案:A解析:15.[单选题]在单细胞凝胶电泳实验中，凋亡细胞（正常细胞的核为球形）的实验结果是（ ）。
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不再返回（或减少返回）液相，就会大大提高分
离效率。
经典分离方法——分子蒸馏技术
Bronsted和Hevesy在1922年设计了世界上第一套
经典分离方法
液相微萃取法
经典分离方法——液相微萃取法
中空纤维液相微萃取(HF-LPME) 以多孔的中空纤 维为微萃取溶剂(接收相)的载体，将有机萃取溶剂 固定到中空纤维壁内的微孔里，通过有机溶剂在纤 维壁孔中形成的液膜进行传质，在多孔的中空纤维 腔中进行微萃取。根据接受相与微孔中溶剂的异同， HF-LPME 分为两相和三相液相微萃取。 优点：避免了单滴液相微萃取溶剂容易损失、移位、 无法提高搅拌速度等缺点；具有突出的样品净化功 能，扩大了分析底物范围，可用于复杂基质样品的 直接分析；具有较高的富集倍数和灵敏度。
经典分离方法——液相微萃取法
单滴液相微萃取( SD-LPME)是将萃取用的有机溶 剂液滴悬挂在微量进样器的针端。同液-液萃取一 样，单滴液相微萃取也是基于分析物在不同相中分 配系数不同而达到萃取的目的。有机相液滴体积一 般为1-5微升，远远小于样品体积，所以可以达到 对待测物的富集。
经典分离方法——液相微萃取法
经典分离方法——液相微萃取法
影响因素
萃取溶剂的影响
盐效应和pH 值的影响
萃取温度的影响
搅拌速度的影响
应用
环境分析：水样、土壤、大气 药物分析：血样、尿样、唾液、乳汁 食品分析：饮用水、酒、饮料、蔬菜
经典分离方法——蒸馏和分馏法
利用提取成分具有不同沸点的性质，可使用蒸馏
和分馏法对植物成分进行分离。 在分离毒芹总碱中的毒芹碱和羟基毒芹碱时，以 及分离石榴皮中的伪石榴皮碱、异石榴皮碱和甲 基异石榴皮碱时，均可利用常压或减压分馏方法
经典分离方法——液相微萃取法
连续流动液相微萃取法（CFME）是在直接液相 微萃取方法上改进而来。先用泵将被萃取的水溶 液充满PEEK管以及萃取单元的玻璃容器中，再将 所需体积的有机溶剂用微量注射器从玻璃容器的 注射口注射到样品水溶液中，并在针尖形成液滴 悬挂，在蠕动泵的作用下，不停流动的水溶液不 断与有机液滴接触，分析物不断被富集到微滴中， 萃取完成后将有机液滴吸回，直接进样分析。
进行初步分离，然后再精制纯化。
经典分离方法——分子蒸馏技术
一种特殊的蒸馏分离技术
在通常的蒸馏（精馏）过程中，存在着两股分子
流向：一股是被蒸液体的气化，由液相流向气相 的蒸气分子流；另一股是蒸气返回至液相的分子 流。当气液两相达到平衡时，表观上蒸气分子不 再从液面逸出。假若采用某种措施，使蒸气分子
经典分离方法——液相微萃取法
经典分离方法——液相微萃取法
举例 测定乳制品中的三聚氰胺：将中空纤维 切成2.3～2.5cm 小段，放入有机溶剂磷酸三丁 酯(TBP) 中超声10s，使中空纤维壁孔充满TBP， 再将其套在微量进样器(已经吸入25μL 接受相) 针尖上，接受相推入中空纤维，两端用热钳子 封住，使中空纤维保持约2 cm 长度。放入给出 相内，在恒温磁搅拌仪上以一定速率搅拌，萃 取一定时间后取出，剪开封口，用进样针抽回 接收相，用5μL 进行高效液相色谱测定。
经典分离方法——液相微萃取法
与液液萃取法比较
适应了绿色分析技术发展的需要（液液萃取消耗 mL 级有机溶剂，液相微萃取仅需μL 级）
富集倍数大，萃取效率高（富集倍数达1000 倍）， 可使分析方法的灵敏度提高两个数量级以上 便于与具有微量进样方法的特定仪器联用。 样品溶液用量少(l~10mL 左右)
直接液相微萃取：萃取溶剂液滴直接浸渍于样品中， 对分离富集洁净样品中的低浓度分析物效果较好， 但对含固体颗粒或含有能乳化有机溶剂的复杂基质 样品的萃取效果较差。 顶空液相微萃取：萃取溶剂液滴与样品基质不直接 接触，适用于复杂基质中微量挥发性或半挥发性成 分的萃取。
经典分离方法——液相微萃取法
经典分离方法——液相微萃取法
经典分离方法——液-液萃取法
用一种强极性溶剂直接提取后再用极性不同的溶剂 与强极性溶剂的提取液进行液／液两相梯度萃取
经典分离方法——液相微萃取法
根据液滴状态的不同可分为单滴液相微萃取( SDLPME) 和中空纤维液相微萃取(HF-LPME) ； 根据悬挂液滴位置的不同可以分为直接液相微萃取 (D-LPME) 和顶空液相微萃取(HS-LPME) ； 根据操作方式的不同可以分为静态液相微萃取( SLPME) 、动态液相微萃取(D-LPME) 和连续流动 液相微萃取(CFME) ； 根据作用相的多少可分为两相液相微萃取和三相液 相微萃取(LLLME )
第三章 细胞产物分离技术
经典分离方法 色谱分离方法
样品的预处理
细胞产物的提取经典分离方法来自细胞产物的分离色谱分离法
紫外可见光谱
产物的分析鉴定
红外光谱
核磁共振谱 质 谱
经典分离方法——液-液萃取法
利用组分在两个互不相溶的液相中的溶解度差异而 将其从一个液相转移到另一个液相的分离过程称为 液液萃取，也叫溶剂萃取，简称萃取。 待分离的一相称为被萃相，萃取后成为萃余相，用 做分离剂的相 称为萃取相。
经典分离方法——液-液萃取法
被萃取组分在萃取相中的溶解度要大于被萃取 相。 一般一相为水相，一相为有机相。在水相中增 加盐离子浓度可以降低有机相在水中的溶解度。 萃取应采用少量多次原则。 从水相中萃取有机物质时，单级萃取时一般选 择该物质的最佳溶剂。多级萃取溶剂选择一般 从弱极性→强极性。 密度：石油醚、乙醚、乙酸乙酯、丁醇、苯 <水 <二氯甲烷、氯仿
静态模式萃取：将有机溶剂液滴悬挂于微量进样器 的针头上，萃取一定时间后将溶剂抽回针头中，直 接进样分析。操作简单，但易受溶剂的溶解或挥发 损失以及脱落的影响，且富集效果相对较差。 动态模式萃取：用微量进样器抽取一定量溶剂，置 于萃取位置后抽取空气或水样进入针头，停留一定 时间，萃取被吸入微进样器的试样中的目标分析物， 而后推出空气或水样但不推出溶剂，如此反复数次， 最后将有机溶剂相直接进样分析。动态萃取通过变 溶剂微滴为溶剂薄膜，大大增加了萃取的表面积， 使萃取效率更高。