实验4 动物组织中DNA的提取
动物基因提取实验报告
一、实验目的1. 掌握动物组织基因组DNA提取的操作方法。
2. 理解并应用琼脂糖凝胶电泳技术检测DNA的方法。
3. 学习DNA纯度与含量的测定方法。
二、实验原理动物组织基因组DNA提取的原理主要是通过破碎细胞膜和核膜，释放出DNA分子，然后通过特定的方法去除杂质，最终获得高纯度的DNA。
实验中，常用的破碎细胞膜和核膜的方法有：- 使用十二烷基磺酸钠（SDS）和蛋白酶K等试剂，使蛋白质变性并溶解细胞膜中的脂质，导致细胞裂解。
- 利用溶菌酶、蜗牛酶等酶类，水解细胞壁和细胞膜，释放DNA。
获得细胞裂解物后，通过加入苯酚和氯仿等有机溶剂，使蛋白质变性并形成有机相和水相，从而分离核酸和蛋白质。
由于DNA不溶于有机溶剂，因此可以通过离心分离获得含有DNA的上清液。
上清液中加入无水乙醇，DNA会从溶液中沉淀出来。
将沉淀的DNA溶解于TE缓冲液中，即可获得高纯度的DNA。
琼脂糖凝胶电泳是检测DNA纯度和大小的重要手段。
DNA分子在琼脂糖凝胶中，在电场的作用下，根据分子大小和所带电荷的不同，在凝胶中移动的速度不同，从而实现分离。
DNA纯度可以通过紫外吸收法测定，根据DNA在260nm处的吸光度值计算DNA的纯度。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：动物肝脏组织样本2. 试剂：- DNA提取试剂盒- 十二烷基磺酸钠（SDS）- 蛋白酶K- 溶菌酶、蜗牛酶- 苯酚、氯仿、异丙醇- 无水乙醇- TE缓冲液- 琼脂糖- 电泳缓冲液- 标准DNA分子量标记物四、实验器材与仪器1. 器材：离心管、移液器、电泳槽、凝胶成像系统、PCR仪等2. 仪器：超净工作台、恒温培养箱、高速离心机、微波炉等五、实验步骤1. 取动物肝脏组织样本，称重后加入适量提取试剂，进行细胞破裂和蛋白质水解。
2. 加入苯酚和氯仿，混合均匀，离心分离，取上清液。
3. 上清液中加入无水乙醇，混合均匀，离心分离，收集沉淀。
4. 将沉淀溶解于TE缓冲液中，即为提取的DNA。
动物组织核酸的提取实验报告
动物组织核酸的提取实验报告
动物组织细胞中的核糖核酸(RNA)与脱氧核糖孩酸(DNA)大部分与蛋白质结合形成核蛋白。
核蛋白可被三氯醋酸沉淀，再用95%乙醇加热可以除去附着在沉淀上的脂类杂质，然后用10%NaCl溶液提取出核酸的钠盐，加入醇可使核酸钠沉淀析出。
先用水由动物肝中提出核蛋白，再籍酚将核酸与蛋白质之间的结合键断裂，并用乙醚抽提去蛋白质及其它杂质，最后用乙醇将核酸沉淀。
核酸(RNA、DNA)可被硫酸水解产生磷酸。
有机碱和戊糖。
此三类化合物可用下列方法鉴定之。
1、磷酸:能与钼酸试剂作用生成磷钼酸，后者在还原剂的作用下。
还原成兰色的钼兰。
常用的还原剂有氨基苯磺酸、氯化亚锡，维生素C等。
H3PO4＋12H2Mo04→H3PO4·12Mo03+12H20H3P04·12Mo03
H3P04·6Mo03·3Mo205
2、嘌呤碱:能与苦味酸作用形成针状结晶
3、戊糖:
(⑴)核糖:经与强酸(盐酸与硫酸)共热生成糠醛，后者可与3;5二羟甲基苯缩合成绿色化合物。
(2)脱氧核糖:在强酸中加热，可生成o一羟基y一酮基戊醛，后者再与二苯胺作用生成一蓝色化合物。
提取动物dna 实验报告
提取动物dna 实验报告
提取动物DNA实验报告
在生物科技领域，提取动物DNA是一项重要的实验技术，它不仅可以帮助科学家们研究动物的遗传信息，还可以为动物保护、医学研究等领域提供重要的数
据支持。
本文将介绍一项提取动物DNA的实验报告，以展示这一技术的重要性和应用价值。
实验目的：通过提取动物DNA，分析动物的遗传信息，为相关研究提供数据支持。
实验材料：实验所需的材料包括动物组织样本（如血液、组织等）、DNA提取
试剂盒、离心机、PCR仪等。
实验步骤：
1. 收集动物组织样本，如血液、皮肤组织等。
2. 将样本放入离心管中，使用离心机离心，分离出细胞。
3. 使用DNA提取试剂盒，按照说明书中的步骤进行DNA提取。
4. 将提取得到的DNA样本进行质量检测，确保提取的DNA质量符合实验要求。
5. 使用PCR技术对提取的DNA进行扩增，以获得更多的DNA样本。
实验结果：通过实验，成功提取了动物DNA样本，并进行了质量检测和PCR
扩增。
最终获得了足够的DNA样本，可以用于后续的遗传分析、基因测序等研究工作。
实验结论：提取动物DNA是一项重要的实验技术，它为科学家们研究动物的遗传信息提供了重要的数据支持。
通过这一技术，我们可以更深入地了解动物的
遗传特征，为动物保护、医学研究等领域提供有力的支持。
总结：提取动物DNA的实验技术在生物科技领域具有重要的应用价值，它为动物遗传信息的研究提供了重要的数据支持，为相关领域的科学研究和应用提供了有力的支持。
希望通过这一技术的不断发展和完善，能够更好地为动物保护和医学研究等领域提供更多的数据支持和科学依据。
动物基因组DNA的提取
动物基因组DNA的提取[实验原理]在EDTA和SDS等去污剂存在下，用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提，可以得到哺乳动构基因组DNA，用此方法得到的DNA长度为100-150 kb，适用于L嘴菌体构建基因组文库和Southern分析。
通过本实验了解并掌握提取基因组DNA的原理和步骤，以及相对分子质量较大的DNA 的琼脂糖凝胶电泳技术。
[仪器、材料与试剂](一)仪器1.台式离心机2.玻璃匀浆器3．高压灭菌锅4．恒温水浴(二)材料1．1.5mL微量离心管2．微量取样器和吸头3．无菌过滤器(一次性)4．10 mL注射器5．鼠肝6．三羟甲基氨基甲烷(Tris)7.十二烷基硫酸钠(SDS)8．乙二胺四乙酸(EDTA)9．蛋白酶K10．RNA酶11．DNA相对分子质量标准物，DNA／EcoRI+HindⅢ相对分子质量标准物(三)试剂1、1.5 mol／L NaCl2、0.5 mol／L Tris·HCI pH8.03．0.5 mol／L EDTA pH8.04．3 mol／L NaAc pH5.2以上均高压灭菌。
5．蛋白酶K 10mg／mL配好后用一次性过滤器过滤，-20 保存(教师配制)6.组织匀浆液100mmol／LNaCI，10mmol／LTris·HCl(pH 8.0)，0.25mmol／LEDTA(pH8.0)7．酶解液200mmol／LNaCI，20mmol／L Tris·HCI(pH 8．O)，50mmol／LEDTA(PH 8.0)，200~g／mL蛋白酶K，1％SDS8．无DNA酵的RNA酶：将胰RNA酶溶解于10mmol／L Tris.HCI(pH7.5)、15 mmol ／L NaCl溶液中，浓度l0mg／mL，于100℃水浴处理15min，以降解DNA酶，缓慢冷却到室温，-20℃保存9．TE缓冲液：10mmol／LTris·HCl(pH8.0)，25 mmol／LEDTA(pH8.0)10．平衡酚(pH8.0)：氧仿：异戊醇=25：24：1<体积比)11．氧仿：异戊醇=24：l(体积比)12．5xTBE 5．4gTris，2．75g硼酸2mL 0.5mol／L EDTA(pH8.0)，加水到100mL；13．6x上样缓冲液o．25％溴酚蓝，40％(W／V)蔗糖水溶液14．λDNA／EcoRI+／HindⅢ相对分于质量标准物片段(bP)21 227，5148，4 973，4 268，3 530，2 027，1 904，1 584，1 315，947，831，564，125[实验步骤]本实验在无液氮的条件下，铡备鼠肝DNA，与有液氮条件下相比，产量和质量都有所下降。
动物dna的提取实验报告
动物dna的提取实验报告
动物DNA的提取实验报告
实验目的：
本实验旨在通过提取动物组织中的DNA，探究动物个体的遗传信息，并为后续的分子生物学研究打下基础。
实验材料与方法：
1. 实验材料：动物组织样本（如鸡肉、鱼肉等）、细胞裂解液、蛋白酶K、异丙醇、氯仿、异丙醇、乙醇、盐酸、磷酸盐缓冲液等。
2. 实验步骤：
（1）取动物组织样本，将其放入离心管中；
（2）加入细胞裂解液和蛋白酶K，使细胞膜破裂，使DNA释放；
（3）加入异丙醇，使DNA与蛋白质分离；
（4）加入氯仿，使DNA与异丙醇分离；
（5）加入乙醇，沉淀出DNA；
（6）用盐酸和乙醇洗涤DNA，最后用磷酸盐缓冲液溶解DNA。
实验结果：
通过上述步骤，成功从动物组织样本中提取出了DNA。
在紫外光下，DNA呈现出明显的条带状，证明提取的DNA质量较高。
实验结论：
本实验成功提取了动物组织中的DNA，为后续的分子生物学研究提供了可靠的基础。
通过对提取的DNA进行进一步分析，可以了解动物个体的遗传信息，为动物遗传育种、种群遗传结构等研究提供重要的数据支持。
同时，提取DNA的
方法简单、快速、高效，具有较高的实用价值。
在未来的研究中，我们将进一步利用提取的DNA，开展相关的分子生物学实验，探究动物遗传信息的更多奥秘，为生物多样性保护和遗传资源利用提供更多的
科学依据。
动物组织基因组DNA提取
动物组织DNA提取1样品预处理取新鲜组织25-50mg（组织不宜过多，否则裂解不完全堵塞离心柱），组织剪碎或者切成小块，放入预冷研钵，快速加入液氮用力研磨，或直接放入匀浆器中匀浆。
冻存组织同样使用研钵研磨或匀浆器快速用力研磨或匀浆（冻存组织避免反复冻融，使细胞破碎，内源酶外泄影响基因组DNA提取）2.加入100ulPBS到研磨好的样品中，样品均匀悬浮于PBS3.加600ul的Lysis Buffer，颠倒混匀，如需消化RNA，可加入20ulRNase A，颠倒混匀，室温放置5min4.加入10ul ProteinaseK，混匀，56度水浴45-60min，（颠倒混匀数次，裂解完全液体则清亮粘稠，此步骤可过夜）5 .12000rpm 离心10min，上清转入新的离心管，加800ul无水乙醇，混匀6.液体分次转入离心柱（一次加不完可分次加入），12000rpm 离心1min，弃废液。
7.加入700ulWash bufferA（用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm 离心30s-1min，弃废液。
8. 加入700ulWash bufferB（用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm 离心30s-1min，弃废液。
9.加入500ulWash bufferB，12000rpm 离心30s-1min，弃废液。
10.再次12000rpm 离心2min，将离心柱置于心得离心管中，打开离心柱盖，于室温或37度恒温箱放置5-10min，直至无明显乙醇味。
11.在硅基质膜中央加入50-200ulTEbuffer（事先预热55-65度）置于室温2-5min，12000rpm 离心30s。
12. 离心得到的溶液再次加入离心柱中，室温放置2min，12000rpm 离心2min，所得溶液为纯化后的基因组DNA.纯化效果检测：取2-5ulDNA产物，0.7%agarose电泳检测DNA分子的完整性和紫外分光光度计检测浓度和纯度。
动物组织细胞基因组DNA提取
动物组织细胞基因组DNA提取一、实验原理真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都能用来制备基因组DNA。
真核生物的DNA 是以染色体的形式存在于细胞核内，因此，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。
提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。
蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA（乙二胺四乙酸二钠）存在下保持很高的活性。
在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与DNA分离，EDTA则抑制细胞中Dnase的活性；而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA 分子完整地分离出来。
二、仪器及试剂1. 仪器：恒温水浴锅、台式离心机、紫外分光光度计（GeneQuant）、移液器、玻璃匀浆器、离心管（灭菌）、吸头（灭菌）2. 试剂：（1）细胞裂解缓冲液：Tris (pH8.0) 100 mmol/LEDTA (pH 8.0) 500 mmol/LNaCL 20 mmol/LSDS 10%胰RNA酶20ug/ml（2）蛋白酶K：称取20mg蛋白酶k溶于1ml灭菌的双蒸水中，?C20℃备用。
（3）TE缓冲液（pH 8.0）：高压灭菌，室温贮存。
（4）酚?氯仿?异戊醇（25:24:1）、（5）异丙醇、冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水。
三、操作步骤1. 取新鲜或冰冻动物组织块0.1g（0.5cm3），尽量剪碎。
置于玻璃匀浆器中，加入1ml的细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织块，转入1.5ml 离心管中，加入蛋白酶K （500ug/ml）20μl，混匀。
在65℃恒温水浴锅中水浴30min，也可转入37℃水浴12～24h，间歇振荡离心管数次。
于台式离心机以12000 rpm离心5min，取上清液入另一离心管中。
动物组织DNA提取
动物组织DNA提取方案1：1.液氮研磨组织2.加入10ml分离缓冲液3.加1ml10%SDS混匀4.加50ul 或1mg蛋白酶K，37℃保温1-2h.5.加1ml 的5mol/l NaCl ,混匀5000r/min ×10s6.取上清液于新离心管中，加等体积苯酚/氯仿/异戊醇抽提，待分层，12000r/min ×5min7.去上层水相于干净离心管，加2体积乙醚抽提8.移去上层乙醚，保留下层水相9.（加5ul 10mg/ml Rnasea ,37℃保温30min,用苯酚抽提）10.加1/10体积3mol/lNaAc(pH 5.2)，及2倍体积无水乙醇颠倒混合沉淀DNA。
室温静止10-20min,DNA沉淀形成白色絮状物11.用玻璃棒勾出DNA，70%乙醇中漂洗，吸干。
12.溶解于1ml TE中，储存于4℃冰箱。
方案2：1．液氮研磨组织2．加入10ml分离缓冲液3．加1ml10%SDS混匀4．加50ul 或1mg蛋白酶K，55℃保温2h.5．加等体积苯酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）抽提，混匀5min,待分层，12000r/min ×5min 6．取上层水相于干净离心管，加2体积无水乙醇—20℃放置2h或液氮放置5min 7．12000rmp ×5min 沉淀DNA，倾去上清液8．沉淀中加入75%乙醇500ul 轻轻混匀，12000r/min ×5min，倾去上清液，晾干。
9．在沉淀中加入200ulTE缓冲液，—20℃保存。
储液：1ml/L NaCl For 100ml 5.844g10×TE Buffer(for 100ml)1M Tris-HCl pH8.0 Tris-HCl 12.114g1M EDTA pH=8.0 EDTA 29.214g分离缓冲液：for100ml10mml/LTris-HCl(pH7.4) 1M Tris-HCl pH7.4 1ml10mml/L NaCl 1ml/L NaCl 1ml25mml/L EDTA 1M EDTA pH=8.0 2.5ml2×抽提缓冲液for100ml6mol/L NaCl 1ml/L NaCl 0.6ml100mmol/Tris-HCl(pH7.4) 1M Tris-HCl pH7.4 10ml40 mml/L EDTA(pH8.0) 1M Tris-HCl pH7.4 4ml1%SDS SDS 1g1×抽提缓冲液for100ml0.5%的2×抽提缓冲液2×抽提缓冲液0.5ml5mol/L尿素尿素30.025g10mml/L巯基乙醇巯基乙醇70ul5%苯酚苯酚5ml1×TE Buffer for 5ml组成浓度：10mM Tris-HCl pH8.0 1M Tris-HCl 50ul 1mM EDTA pH=8.0 1M EDTA PH=8.0 5ul至5ml。
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实验步骤
2)纯度检查含量测定及鉴别
沉淀的离心管中加入蒸馏水2mLeabharlann 。振摇至沉淀溶解， 得DNA溶液；
取1ml核酸提取液，置50ml容量瓶中，用纯化水定容， 摇匀。测定260、280nm吸光度，计算A260/A280。 剩余1ml，加入二苯胺试剂1ml，摇匀，于沸水浴中加 热25分钟后，观察颜色之变化
实验4 动物组织中DNA的提取
1、任务背景
为了研究DNA分子在生命代谢中的作用，常常需要从不同的生物材料中提取DNA。由于 DNA分子在生物体内的分布及浓度不同，要选择适当的材料提取DNA。动植物中小牛胸 腺、动物肝脏、脾脏、鱼类精子、植物种子的胚中都含有丰富的DNA。微生物中，谷氨 酸菌体含7%～10%，面包酵母含4%，啤酒酵母含6%，大肠杆菌9%～10%。 从各种材料中提取DNA方法不同，分离提取的难易程度也不同。对于低等生物，如从病 毒中提取DNA比较容易，多数病毒DNA相对分子量较小，提取时易保持其结构完整性。 从细菌及高等动植物中提取DNA难度大些。细菌DNA相对分子质量较大，一般达 2×109Da。因此易被机械张力剪短。细菌DNA，除核DNA外，还有质粒DNA等 2、任务目标 学习并掌握动物组织总DNA的提取方法及其原理。 3、工作原理 利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将两者分离，常用的方法是用1mol/L氯化钠 提取抽提，得到的DNP粘液与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡，使之乳化，再离心除去蛋 白质，此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中，用2倍体积 95%乙醇可将ＤNA钠盐分离出来。也可用0.15MNaCl液反复洗涤细胞破碎液除去RNP， 再以1mol/L NaCl提取脱氧核糖蛋白，再按氯仿-异戊醇法除去蛋白。两种方法比较，后 种方法使核酸降解可能少一些。以稀盐溶液提取DNA时，加入适量去污剂，如SDS可有 助于蛋白质与DNA的分离。在提取过程中为抑制组织中DNase对DNA的降解作用，在氯 化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的络合剂。通常用1.5mol/L NaCl，0.015mol/L 柠檬酸钠，并称为SSC溶液，提取DNA。
实验步骤
1）DNA提取 取新鲜动物肝，称取1g，切成小块，置10ml离心管中，加入4ml 0.14mol ／L NaCl－0.1mol／L EDTA溶液，用匀浆机匀浆，以4000r／min的转速离 心 10min，倒掉上清；用4ml 0.14mol／L NaCl－0.1mol／L EDTA溶液洗 涤一次。 在上述沉淀物中加入0.14mol／L NaCl－0.1mol／L EDTA溶液，使总体积 为 2mL，然后在60℃下，滴加 20％SDS溶液2－3滴，边加边摇动，再摇动 10min，使核酸与蛋白质分离。 加固体氯化钠0.2g混匀，使其最终浓度达到l.4mol／L，水浴30min。 加等体积的氯仿一异戊醇，混匀，摇动5min以4000r／min的转速离心 10min。离心管内的物质分为三层，上层为含DNA的水相层，下层为氯仿 一异成醇混合物，中间层为变性蛋白凝胶。 吸出上清液，加入2倍体积95％乙醇溶液（预冷），产生沉淀。 再以4000r／min的转速离心溶液10min，弃去上清液 (沉淀用80％乙醇溶液 离心洗涤)。