SOP-P-IF-002-03 菌种岗位标准操作规程

深圳市蓝安琪生物工程股份有限公司

菌种岗位标准操作规程

1.目的

建立菌种岗位标准操作规程。

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2.范围

菌种岗位种子液的制备操作。

3.职责

菌种岗位制备操作人员、车间负责人及QA生产区检查员对本规程的实施负责。

4.规程

4.1.操作前准备：

4.4.1.根据生产指令开出领料单。领取时，核对物料名称、数量、批号、有效期等，然后将其送到传递窗。

4.1.2.岗位生产操作人员按照《进出十万级洁净区更衣标准操作规程》进入操作间。

4.1.3.岗位生产操作人员检查设备、设施完好性，设备、容器、工具、管道、室内卫生是否有清洁合格证，清洁合格证是否在有效期内，如不合格按其清洁标准操作规程重新清洁。

4.2种子液的制备

4.2.1种子液培养基的配制和灭菌

4.2.1.1LB琼脂培养基按比例配制（100ml）

蛋白胨10g/L

酵母提取物5g/L

氯化钠10g/L

纯化水100ml

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调PH至6.8-7.2

4.2.1.2培养基灭菌：按《YXQ-SG46-280SA型手提式灭菌锅标准操作规程》灭菌，灭菌温度121，灭菌时间30min。

4.2.2菌种活化

领取工作种子批菌种管，室温融化，用接种环在LB培养基平板上划线，按《生化培养箱标准操作规程》放置于30℃恒温箱倒置培养过夜。

4．2.3.一级种子液培养基的配制和灭菌

4.2.3.1一级种子液培养基按比例配制

蛋白胨10g/l

酵母提取物5g/L

氯化钠10 g/L

调PH至6.8-7.2

4.2.3.2一级种子液培养基的灭菌：：按《YXQ-SG46-280SA型手提式灭菌锅标准操作规程》灭菌，灭菌温度121，灭菌时间30min。

4.2.4 一级种子液制备

将活化后的单个菌落用接种环从平板上刮取，接种在装有100ml一级种子培养基的三角瓶中，按《SHZ-82型恒温振荡器标准操作规程》放置入30℃、150rpm恒温空气摇床培养约12小时，培养物取5ml转接到含300ml LB培养基三角瓶中，共4瓶。30℃、150rpm培养约8小时。

4.2.

5.二级种子液培养基的配制和灭菌

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4.2.

5.1二级种子液培养基按比例配制（10L）

蛋白胨16g/l

酵母提取物10g/l

氯化钠5g/l

调至PH至6.8-7.2

4.2.

5.2二级种子液培养基的灭菌：：按《BTOSTAT-C型发酵罐标准操作规程》灭菌，灭菌温度121，灭菌时间30min。

4.2.6二级种子液的制备

将三角瓶中培养好的菌液接种在含10L二级种子培养基的种子罐中，30℃、150rpm、溶氧35%，PH6.8—7.2，培养6小时；当OD值达到2左右时，接种

到发酵罐中。

4.3物料平衡的计算按《物料平衡管理规程》计算。

4.4.清场：

4.4.1.每次操作完成后，按照《清场标准操作规程》和《菌种岗位清洁标准操作规程》进行清场、清洁。

4．4.2.清场结束填写清场及设备清洁记录,并由QA检查员检查确认清场合格后, 贴挂《清洁合格》标志。

4.5.注意事项：

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4.4.1.种子液的接种及培养基的转移全部操作，应按无菌操作要求进行；

4.4.2.岗位操作人员在生产操作过程中发现异常情况按《紧急情况处理管理制度》处理。

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