肺炎支原体及其快速培养法
快速液体培养法检测呼吸道标本中的肺炎支原体
１ ． ４ 统计学处理
数据收集整理后 ， 采用 ２ Ｘ２表 的 ３ ｃ 检 验 ，
袁应 华 ， 刘 瑾 ， 成 洁 ， 朱 敏 ， 孙奋 勇 ，罗 兰 （ １ ． 上 海 同济大 学 附属 第 十人 民 医院检验 科 ， 上海 ２ ０ ０ ０ ７ ２ ； ２ ． 苏州 大学 ， 江 苏苏州 ２ １ ５ ０ ０ ６ ）
摘 要 ： 目 的 探 讨 快 速 液 体 培 养 法 检 测 肺 炎 支原 体 （ ＭＰ ） 的临床应用价值 ， 分 析 其假 阳 性 的 情 况及 原 因。方 法 对 ９ ３例 呼 吸 道 标 本 进 行 ＭＰ快 速 液 体 培 养 培 养 液 用 荧光 定 量 Ｐ Ｃ Ｒ （ Ｆ Ｑ — Ｐ Ｃ Ｒ ） 检 测 肺 炎 支原 体 核 酸 ， 同 时测 定 血 清 中 肺 炎 支 原 体 抗 体 ， 进 行 统计 学 分 析 。 结 果 在 ９ ３ 例检测 标本 中， 肺 炎 支原 体 快速 培 养 阳 性 １ ６例 ， 检 出率是 １ ７ ． ２ （ １ ６ ／ ９ ３ ） ； Ｆ Ｑ－ Ｐ Ｃ Ｒ法阳性 １ Ｏ例 ， 检 出率 １ Ｏ ． ７ ９ ／ （ 】 ０ ／ ９ ３ ） ； 血 清 学 检 测 阳性 ２ ２例 ， 捡 出率 ２ ３ ６ （ ２ ２ ９ ３ ） 。３种 方 法检 测 结 果 无 显 著 差 异 。结 论 快 速 液 体 培 养 法 干
炎的 １ ５ 一 一 ２ ０ ｑ ＜ ， 人群发病率约为 ２ ‰， 平 时散 在 发 病 ， 流 行 周期 为 ３ ～ ５年 ｆ 。 引 起社 区 获 得性 肺 炎 的 病 原 体 的错 误 和 延
５ ｍｉ ｎ ， 取上清 液行 Ｐ Ｃ Ｒ扩 增 ， 反 应 体 系及 扩 增 条 件 严 格 按 试
小儿肺炎支原体的快速培养法临床应用
小儿肺炎支原体的快速培养法临床应用人类呼吸道感染的常见病原体肺炎支原体(mp),增加引起多系统疾病的可能性。
比如占肺炎发病率15%～30%的间质性肺炎和急性支气管炎，近些年来呈上升趋势。
一般伴有，头痛、咳嗽、发热、咽喉疼痛和肌肉酸痛的临床表现。
个别患者还出现了如神经症状和心血管以及皮疹的呼吸道以外的并发症。
同时，一般抗生素对mp 感染的治疗没有效果。
现在用患者咽部分泌物进行快速培养试验。
1.对象和方法1.1 对象：我院小儿科就诊的有呼吸道感染症状的儿科发热咳嗽患儿246例。
每例均采集咽拭子做肺炎支原体快速培养。
1.2 试剂：以肺炎支原体的快速检试剂作为肺炎支原体(mp)的检测试剂盒，该试剂为武汉菁华时间科技有限公司制作生产。
1.3 检测方法：严格按说明书操作，将患儿呼吸道咽拭子置于培养基瓶内搅动数次，靠瓶壁挤尽残液，取出咽拭子弃之，旋紧瓶盖，置37℃温箱培养，6-12h内观察结果。
若试剂颜色由红色变成清凉黄色为阳性，红色和淡红色为阴性。
2.结果疑似mp感染的246例小儿患者中60例mp阳性，阴性186例，阳性率为24.39%。
3.讨论支原体肺炎一般起病隐匿，缺乏特异性症状和体征，临床诊断较为困难，又因病程长、肺外并发症多，使病情更加复杂，易造成漏诊、误诊、延误治疗，因此早期进行mp检查，对及时诊断及指导临床用药具有重要意义。
目前，临床上用于mp感染的实验室诊断方法主要有血清学mp特异性抗体检验测试［1］。
mp感染临床症状出现7天左右，血清中igm可被检出，12-26周消失，10-30天达到高峰，而mp-igg出现则较晚，效价在30天左右达到高峰，持续时间较长。
所以，igg抗体阳性也可能不是mp现症感染，但是它可用于行病学调查和回顾性诊断，因为mp特性抗体受到检测时机的限制，对于mp感染早期诊断价值是很有限的。
pcr免疫荧光用于临床mp感染检测，虽灵敏度高，但设备、技术要求高，且易污染，假阳性率高，一般实验室不宜推广；病原检测是急性感染的重要指标，传统方法耗时长。
两种肺炎支原体快速检测方法的比较研究
【 ｂｔ ｃ】 Ｏ ｊｃ ｖ Ｔ ｘｌ ｅｔ ｌ ｉ ｌ ａ ｅ ｆ ｙｏｌ ｍ ｎｕ ｏｉ Ｍ ）ｒ ｉ ｃｌ ｒ ｍ ｔ ｄａｄ Ｄ ｔ ｍ ｕ — Ａ ｓ ａｔ ｒ ｂ ｔ ｅ ｏｅｐ ｒ ｈ ｃ ｎ ａ ｖｌ ｃｐ ｓ ａ ｅｍ ｎ ｅ（ Ｐ ａ ｄ ｕ ｕｅ ｅ ｏ ｎ ｏ Ｉ ｍ ｎ ｅｉ ｏ ｅ ｉｃ ｕ ｏ Ｍ ａ ｐ ａ ｐ ｔ ｈ
ｇｇｌ ｅｈｄ （ Ｉ ｏｏｄｍ ｔｏ Ｄ Ｍ）ｆｒａｔ ｅ ｃｏ ｆ ｆｃｉ ．Ｍｅｈ ｄ Ｉｔ ｋ５ ２ｐ ｔｎｓ ｉ ｃｔ ｒｓｉ ｔ ｙｉｆ ｔｎｉ ｒｓｉｔｒ ａｄ ｏ ｆｓｄｔ ｔ ｎｏ ｉ ｅｔｎ ｅｉ ＭＰ ｎ ｏ ｔｏ ｓ ｔｏ ２ ａｉ ｔｗｔ ａｕｅ ｅｐｒ ｏ ｅ ｉ ｐｒ ｏ ｗ ｒ ｏ ｅ ｈ ａｒ ｎ ｃｏ ｎｅ ａ ｙ
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均较方便 、 快速 ， 但快速培养法能在发病早期就得到结果 ， 有更 好的Ｉ 晒床应用价值 。
【 关键词】 快速培养法 ； 胶体金免疫斑点法 ； 快速检测 ； 肺炎支原体
Ｃｏ ｐａｒ ｔｖｅ ｓ ｕ ｎ ｗｏ ｍ ｅｔ ｍ ａ ｉ ｔ ｄｙ ｏ ｔ ｈｏｄｓｏ ａ ｔｄｅ ｅ ｔｏ ｏ ｙｃ ｐｌ ｍ ａ Ｐｎ ｕｍ ｏ ａ ＬＩＹ — ｕ ｆｆ ｓ ｔ ｃｉ ｎ ｆＭ ｏ ａｓ ｅ ｎｉｅ ｕｅｙ ｅ ＷＡＮＧ
小儿肺炎支原体的快速培养法临床应用
小儿肺炎支原体的快速培养法临床应用概述肺炎支原体是引起小儿上呼吸道感染及肺炎的主要病原体，目前诊断肺炎支原体感染的主要方法是在患者咽部或肺部分泌物中检测肺炎支原体的核酸。
虽然PCR技术已经能够快速准确地检测肺炎支原体核酸，但是仍然需要快速培养法来定量判断病情和评价治疗效果。
快速培养法是指将患者分泌物加入含有肺炎支原体培养基的培养皿中，使细菌在培养基上生长，根据生长的时间和数量来判断患者感染程度和治疗效果。
近年来，随着technology的不断进步，快速培养法也得到了广泛的应用。
本文主要介绍小儿肺炎支原体的快速培养法临床应用，包括培养基的选择、培养条件和技术操作等方面，旨在为临床医生提供一些帮助和参考。
培养基的选择目前常用于肺炎支原体快速培养的培养基主要有两种：非选择性培养基和选择性培养基。
1.非选择性培养基非选择性培养基包含肺炎支原体生长所需的全部营养物质，能够促进肺炎支原体的快速生长和繁殖。
常用的非选择性培养基包括：PPLO培养基、Hayflick培养基等。
PPLO培养基是一种无血清培养基，可促使肺炎支原体产生典型的“可过筛”现象，对于分离和培养肺炎支原体具有很好的效果；Hayflick培养基是一种富含血清的培养基，对于肺炎支原体的培养也有很好的效果。
2.选择性培养基选择性培养基是指加入了特殊抑制物质，可以抑制其他病原体和菌落的生长，使得肺炎支原体能够更快速更纯净地生长和繁殖。
常用的选择性培养基包括：SP4培养基、BIVS-1培养基等。
SP4培养基是一种富含牛血清的培养基，不同于PPLO、Hayflick等非选择性培养基，该培养基对非支原体菌落的抑制比较弱，对于分离肺炎支原体具有高度的选择性；BIVS-1培养基是一种特殊的选择性培养基，加入了多种抑制物质，对于肺炎支原体的选择性非常高。
培养条件肺炎支原体快速培养的基本条件包括：适宜的温度、适宜的环境气氛和合适的营养物质。
1.温度肺炎支原体的适宜生长温度为35℃左右。
浅谈三种肺炎支原体检测法的临床应用
浅谈三种肺炎支原体检测法的临床应用目的：探讨肺炎支原体（MP）咽拭子快速液体培养法、咽拭子聚合酶链反应（PCR）法和血清MP被动凝集法（MP-Ab）等方法在儿童MP感染诊断治疗过程中的敏感性方法采用3MP检测法对362例临床拟诊呼吸道（非细菌性）感染的患儿的咽拭子和血清标本进行配对研究，每患儿取咽拭子做快速培养和PCR，同时取血清做MP-Ab检测，对3种方法的检测结果与临床诊断治疗病例进行回顾性分析。
结果：回顾临床病例诊断MP感染患儿152例。
MP快速培养法检出阳性78例，阳性率为51.3%，病程为（4.5±2.6）天；PCR法检测出阳性103例，阳性率为67.8%，病程为（6.2±3.5）天；MP-Ab法检测出阳性127例，阳性率83.5%，病程（8.1±4.5）天。
结论3种MP检测法的敏感性与病程有相关性，临床医生应根据患儿病程选取检测方法，以提高阳性检出率和敏感性。
标签：肺炎支原体快速培养法咽拭子聚合酶链反应血清抗体肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae，MP）是婴幼儿、青少年急道感染的主要病原体之，临床上表现为呼吸道感染综合征，其中约3%～10%可发展为支原体肺炎。
但只根据临床症状很难鉴别由MP或病毒、细菌等病原体引起的儿童呼吸道感染，给临床治疗带来一定的困难。
笔者采用3种MP检测法对362例临床拟诊为呼吸道（非细菌性）感染患儿的咽拭子和血清标本进行配对研究，通过病例回顾来探索对支原体肺炎敏感的实验室诊断方法，以协助临床准确做出诊治。
1. 材料和方法1.1 样本收集我院检验科2013年1月1日～8月6日在儿科就诊住院患儿病例，有呼吸道感染症状，已经初诊为非细菌性感染的患儿62例作为研究对象，其中男35例，女27例；年龄为2个月～12岁，病程为1～90天。
1.2 方法具体方法有：（1）用MP快速培养法、PCR法和MP-Ab法等3种MP检测法对362例研究对象同时进行检测，记录结果。
肺炎支原体检测
【方法与原理】1.方法快速培养法。
2.原理肺炎支原体利用试剂中的高营养和快速生长因子迅速增殖，同时分解葡萄糖产酸，使试剂PH值降低，试剂中指示剂的颜色随PH值下降而由原来的红色变为黄色，以此来判断肺炎支原体的感染。
【适用仪器及试剂厂家】1、恒温培养箱或恒温水箱2、武汉菁华时间科技有限公司【标本要求】1、采样部位：咽后部、扁桃体部位的分泌物或痰液2、采样后应立即培养接种【试剂主要组成成份】牛心浸液60% 马血清15% 酵母浸液10% 抑菌剂5% 生长因子5% 其它5%【试剂储存条件及有效期】：-40C以下冷冻储存，有效期24个月。
【检验方法】1、试剂配置及培养条件本品为单一试剂，培养温度37±10C2、操作步骤准备取本试剂一支37±10C孵至恒温。
采样a、分泌物取无菌拭子一支，用生理盐水浸润后甩干，于患者取样部位贴腔壁捻转数圈，粘取咽部或扁桃体部位的分泌物；b、痰液痰液标本采集时嘱病人先漱口，深吸气后用力咳出痰于培养皿或取样瓶中，接种用生理盐水浸润后甩干的拭子或接种环沾取足量标本。
接种将带样棉拭子于试剂瓶中反复搅拌数次于瓶口处挤干后弃之或瓶口处折断置于瓶内，拧紧盖摇匀，在37±10C恒温箱内培养6小时后观察。
3、结果判断取试剂瓶对光观察，试剂颜色由红色变为清亮的黄色为阳性，红色或淡红色为阴性，经培养后试剂变浑或有絮状、片状的黄色为无效。
【检验方法局限性】患者痰液、器官洗液若样本粘稠需先经技术处理。
【产品性能指标】1、pH值：7.3～8.52、特异性：肺炎支原体繁殖生长，抑制其它病菌生长。
3、灵敏性：变色单位≥10-8CCU【参考值】正常人检测结果为阴性。
【参考文献】1、曹玉璞，等，支原体及支原体病，北京；人民出版社，2000，,16～1202、佐佐木正五，等，支原体病3、GB/T 14926.8-2001支原体检验方法【文件授权】检验科主任签字表明他（她）已经审核上述文件并批准。
支原体肺炎的检查方法有哪些？
支原体肺炎的检查方法有哪些？引言支原体肺炎是一种由支原体引起的感染性呼吸道疾病，常见于儿童和成人。
及时的检查可以帮助医生做出准确的诊断，并采取正确的治疗方案。
本文将介绍支原体肺炎的常见检查方法，以及预防、治疗和后期疗养的相关问题。
检查方法1. 培养法培养法是目前最常用的支原体肺炎检查方法之一。
医生会采集患者咽部或者支气管分泌物样本，并将其细菌培养于特定培养基上。
经过一段时间的观察，如果细菌在培养基上生长，医生可以确诊支原体感染。
2. PCR法PCR法是一种通过检测支原体的DNA或RNA来确诊感染的高敏感性检测方法。
医生通常会采集患者咽拭子或者支气管分泌物样本，然后提取其中的核酸。
随后，通过各种酶和引物的作用，扩增目标DNA或RNA序列，最终通过比对核酸序列来确定是否存在支原体感染。
3. 荧光抗体法荧光抗体法是一种通过荧光染色剂与特定抗原结合来检测支原体感染的方法。
医生会采集患者的呼吸道分泌物样本，然后将其与荧光探针结合。
如果样本中存在支原体，荧光染色剂会与其结合并发出荧光信号，医生可以通过荧光显微镜观察到。
4. 血清学检测血清学检测可以通过检测患者血液中的抗支原体抗体来判断感染情况。
医生会采集患者的血样，并通过酶联免疫吸附试验（ELISA）或者免疫荧光抗体试验（IFA）等方法来检测抗体水平。
高水平的抗体通常表示患者曾经感染过支原体。
预防与治疗1. 预防的措施•定期洗手，尤其是在接触咳嗽或打喷嚏的患者后；•切勿与已经感染支原体的患者共享餐具、杯子等；•避免接触病毒携带者的呼吸道分泌物；•改善室内空气通风，保持空气清新；•加强身体锻炼，提高免疫力。
2. 治疗方法•抗生素治疗：根据病情和患者年龄，医生可能会选择青霉素类、四环素类、大环内酯类等抗生素进行治疗；•对症治疗：如退烧药、止咳药等，可缓解症状；•充分休息：适当休息可以帮助身体恢复。
后期疗养1. 饮食•增加维生素摄入：如水果、蔬菜等富含维生素的食物，有助于增强免疫力；•避免辛辣刺激食物：避免食用辛辣、刺激性的食物，以免加重症状。
支原体肺炎的病原体分离和培养方法
支原体肺炎的病原体分离和培养方法支原体肺炎（Mycoplasma pneumoniae）是一种常见的致病原。
为了深入研究该病原体，科学家们开发了多种分离和培养方法。
本文将介绍一些常见的支原体肺炎病原体分离和培养方法，以供相关领域的科研人员参考。
一、支原体肺炎病原体分离方法1.直接培养法支原体肺炎病原体可以通过直接培养法从患者样本中分离出来。
一种常用的方法是通过鼻咽拭子或咳嗽痰液采集样本。
收集到的样本可以直接接种到预先准备好的培养基上，经过一段时间的培养，支原体肺炎病原体会逐渐生长并形成典型的菌落。
2.纤毛刷法纤毛刷法是一种常用的快速分离方法，适用于大规模筛查。
在该方法中，将纤毛刷插入患者的鼻腔收集样本，然后将纤毛刷放入含有蛋白消化酶的液体培养基中。
酶能够消化掉样本中的非细胞组织，并释放出被包裹在细胞内的支原体肺炎病原体。
然后，将液体培养基进行离心，离心过程中支原体肺炎病原体会沉积在离心管底部。
最后，从沉积物中取出支原体肺炎病原体进行后续培养和分析。
3.细胞培养法细胞培养法是一种通过培养细胞来分离支原体肺炎病原体的方法。
在该方法中，将患者样本接种到培养皿中的细胞培养基上，培养一段时间后，支原体肺炎病原体会侵入并感染细胞。
通过观察细胞的形态和特征，可以初步判断支原体肺炎病原体是否存在。
然后，可将感染的细胞进行收集和后续培养，以纯化和进一步研究病原体。
二、支原体肺炎病原体培养方法1.培养基的选择在进行支原体肺炎病原体的培养时，选择适宜的培养基十分重要。
通常，支原体肺炎病原体对一些特定的培养基非常敏感，如Hayflick培养基、PPLO（pleuropneumonia-like organisms）培养基等。
这些培养基中含有支原体肺炎病原体所需的营养物质和生长因子，能够提供良好的生长环境。
2.培养条件的控制支原体肺炎病原体的培养需要严格控制培养条件。
一般来说，适宜的温度是37°C，适宜的气氛是5%二氧化碳和95%空气的混合气体。
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肺炎支原体及其快速培养法
支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型，它既不同于，也不同于病毒，是介于细菌和病毒之间，能在无活细胞的人工培养基上生长繁殖的最小微生物。
它广泛分布于自然界，与人类、动植物的疾病有密切的关系。
支原体的种类繁多，造成的危害非常广泛。
目前证明对人体有致病作用的支原体有肺炎支原体、解脲支原体、人型支原体、生殖支原体等几种，但临床以肺炎支原体最为常见［1］。
肺炎支原体主要以飞沫传播，引起儿童、青少年呼吸道感染、咽炎、气管炎、肺炎等。
近年肺炎支原体感染病例明显增多并有局部流行的趋势，早期诊断极为重要。
1 肺炎支原体的检测方法
目前，肺炎支原体的实验室检测方法有支原体分离培养、PCR法检测质粒核酸、抗体检测、支原体快速培养法、分子生物学方法等。
支原体细胞分离培养可获得肺炎支原体，可以确诊。
由于支原体分离培养要求苛刻，一般医院实验室难以推广。
此法阳性率低，需时3 周甚至更长时间，对临床快速诊断意义不大。
PCR法检测质粒核酸快速、特异、敏感，但需昂贵设备，不易普及，且方法过于敏感，容易受污染。
传统的冷凝集法检测肺炎支原体的IgM 抗体，方法简单、易行，但其敏感性和特异性均较差，易受病程影响。
ELISA 检测支原体抗体法较为简便、可靠。
由于发病初期，机体中尚未产生抗体不能被检出，发病时间较长此法才有意义。
而快速培养法正以其简单、快速、经济、无创伤等优点，被越来越多的临床实验室所推广，也被越来越多的患者所接受。
2 肺炎支原体快速培养法
肺炎支原体快速培养法是利用肺炎支原体的代谢产物使培养基液体中的指示剂颜色发生改变来判断其生长，标本中的其他支原体和细菌则被培养基中的青霉素和醋酸陀抑制［2］。
此法操作简便、快速、无痛苦。
先从冰箱中取出快速培养基，复温，按常规方法采集患者咽拭标本，将标本棉签浸入培养液，沿瓶壁
挤压棉签，取出棉签、丢弃。
旋紧瓶盖，登记标本号，35℃～37℃孵育24～48h，观察结果。
培养基由红色变为绿色、黄色，且仍保持清晰透明，说明有肺炎支原体生长，明显混浊变色者不能视为阳性。
培养液颜色不变，应判为无肺炎支原体生长。
我院检验科是从2007年4月份开始展开此项检测，共检测293 例疑似肺炎支原体感染病例，阳性病例161 例，阳性率54.9%，及早为临床诊断、治疗肺炎支原体感染提供了依据。
3 讨论
近年来，肺炎支原体感染明显上升，危害较大，其临床表现常无特异性，易与一般病毒性感冒相混淆。
临床医生为了尽快缓解患者的症状，需根据患者症状、体征及肺炎支原体的相关检测，及早诊断、治疗。
快速培养法不受病程影响，感染初期就可检测出肺炎支原体。
有资料报道，在肺炎支原体检测的各种方法中，该法阳性病例病程最短，提示病程时间较短的患者选择此法检测的阳性率较高。
快速培养法是诊断肺炎支原体的金标准［2］。
肺炎支原体快速培养法采咽拭标本，采集标本前，用生理盐水漱口。
所采集的标本应迅速接种，若不能及时接种，室温保存不超过2h。
使用前如发现培养基浑浊或变色，不能使用。
肺炎支原体快速培养法采咽拭标本，为非损伤性，无创伤采集标本，患者乐于接受，我科自开展肺炎支原体快速培养以来，受到了患者，临床医生的好评。