花粉生命力的测定与形态观察
实验四 花粉采集及生命力的测定
3 ．染色观察法 （3）氯化三苯基四氮唑（TTC）法 原理：凡具有生活力的花粉，在其呼吸作用过程 中都有氧化还原反应，而无生活力的花粉则无此反 应，因此当TTC渗入有生活力的花粉时，花粉中的 脱氢酶在催化去氢过程中与TTC结合，使无色的 TTC变成三苯基甲（TTF）而呈红色。 步骤和方法：取少量花粉放在载玻片上，在花粉 上滴1～2滴TTC溶液，用镊子使其混匀后，盖上盖 玻片。将此载玻片上置于恒温箱中（35～40℃）约 15～20分钟，在显微镜（100倍）下观察。凡有生 活力的花粉粒呈红色，其次呈淡红色，失去生活力 的和不育的花粉粒表现无色。
六、作业及思考题： １、按下表统计实验结果。 ２、绘一幅花粉粒发芽形态图。 染色法测定结果记载表
各视野中花粉粒数量及生活力
花 粉 来 源 平 均 其中 生 生 活 红 黄 活 力 色 色 力 (％)
其中 花 粉 生 红 黄 总 活 色 色 数 力
花 粉 总 数
其中
红 黄 鲜
培 养 基 法 测 定 结 果 记 载 表
花 粉 来 源
各视野中花粉粒数量及发芽率 培养 基浓 度 1 发芽数/ 总数 发芽 率 2 发芽数/ 总数 发芽 率 3 发芽数/ 总数 发芽 率 平均 生活 力(％)
0% 5% 贮 藏 10% 15% 20%
新 鲜
配制对二萘氧基联苯胺: a．0.2克联苯胺溶于100毫升50%的酒精溶液； b．0.15克a-萘酚溶于100毫升50%酒精溶液； c．0.25克的碳酸钠溶解在100毫升的蒸馏水中。 以上三种溶液分别放入棕色瓶中备用，使用 时将这三种溶液等量配成试剂Ⅰ，放入棕色滴瓶 中备用，在使用前准备好0.3%的过氧化氢水溶 液作为试剂Ⅱ。
２．花粉生活力的测定： （１）染色观察法 ——TTC 和KI染色法 ① 分别配制 TTC 和KI染色液各100ml，装入棕 色瓶中备用。 ② 制片：取少量花粉于载玻片上，滴入 1 ～ 2 滴 0.5 ％ TTC 或KI染色液，用镊子搅拌均匀，盖上 盖玻片，于 35 ～ 40℃ 条件下净置 15 ～ 20min 。 ③ 观察统计：在显微镜下观察三个不同的视野， 凡被TTC染成红色或玫瑰红的都是有生活力的花粉， 黄色或不着色者为没有生活力的花粉；被KI染成蓝色 者表示具有生活力，花粉呈黄褐色者不具有生活力。
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法花粉是植物生殖过程中非常重要的一环，其生活力的测定对于植物繁殖和生长具有重要意义。
花粉生活力测定方法是通过一系列的实验和观察，来评估花粉的生长和发育能力，从而为植物的繁殖提供科学依据。
本文将介绍几种常见的花粉生活力测定方法，希望能够对相关领域的研究者和爱好者有所帮助。
首先，传统的花粉生活力测定方法是通过染色观察花粉管的生长情况。
首先，将采集到的花粉悬浮在含有营养液的培养基中，然后观察花粉管在一定时间内的生长情况，通过显微镜观察花粉管的长度和形态，从而评估花粉的生活力。
这种方法简单直观，但需要显微镜等设备，且操作较为繁琐。
其次，现代的花粉生活力测定方法中，常用的是荧光显微镜观察法。
通过将花粉与特定的荧光染料结合，使花粉在荧光显微镜下呈现出特定的荧光信号，从而可以清晰地观察花粉管的生长情况。
这种方法操作简便，观察效果明显，对于大规模的花粉生活力测定具有很大的优势。
另外，还有一种常见的花粉生活力测定方法是通过花粉萌发率来评估花粉的生活力。
这种方法是将采集到的花粉悬浮在含有营养液的培养基中，然后观察一定时间内花粉的萌发情况，通过统计萌发的花粉数量来评估花粉的生活力。
这种方法简单易行，可以在较短的时间内获取较为准确的结果。
除了上述几种方法外，还有一些新兴的花粉生活力测定方法，如分子生物学技术的应用、电子显微镜的观察等，这些方法在花粉生活力测定领域也取得了一些重要的进展。
综上所述，花粉生活力测定是植物繁殖和生长研究中的重要内容，而花粉生活力的准确测定则需要科学、准确的方法。
不同的方法各有优劣，研究者可以根据具体的实验目的和条件选择适合的方法进行花粉生活力的测定，从而为植物繁殖和生长研究提供可靠的数据支持。
希望本文介绍的几种常见的花粉生活力测定方法对相关领域的研究者和爱好者有所帮助，也希望在未来的研究中能够有更多更准确的花粉生活力测定方法被发展和应用。
花粉形态观察实验报告
一、实验目的1. 了解花粉形态学的基本知识，掌握花粉形态观察的实验技能。
2. 通过观察不同植物花粉的形态结构，加深对植物分类学、系统发育和传粉方式的认识。
3. 培养实验操作能力和科学思维。
二、实验原理花粉是植物的雄性生殖细胞，具有多种形态和结构，对植物的传粉和分类具有重要意义。
通过光学显微镜和扫描电子显微镜观察花粉的形态和结构，可以了解花粉的多样性及其与传粉方式的关系。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：不同植物的花粉样品（如小麦、玉米、大豆等）。
2. 试剂与耗材：冰乙酸、乙酸酐、浓硫酸、甘油、石炭酸、加拿大树胶、蒸馏水、酒精等。
3. 仪器：光学显微镜、扫描电子显微镜、水浴锅、离心机、小试管、镊子、解剖针、细铜网、载玻片、盖玻片、双面透明胶带、酒精灯、目镜测微尺。
四、实验步骤1. 准备花粉样品：将采集到的花粉样品放入干燥器中，待花粉干燥后取出，用解剖针挑取适量花粉，放入装有冰乙酸的试管中。
2. 制片：将花粉样品在冰乙酸中浸泡一段时间，取出后滴加少量加拿大树胶，将花粉粘附在载玻片上，用盖玻片覆盖。
3. 光学显微镜观察：将制片放入光学显微镜下观察花粉的形态、大小、形状、纹饰等特征。
4. 扫描电子显微镜观察：将制片放入扫描电子显微镜下观察花粉的表面结构，如纹饰、突起等。
5. 记录数据：根据观察结果，记录花粉的形态、大小、形状、纹饰等特征，并计算花粉的长度、宽度、面积等参数。
五、实验结果与分析1. 光学显微镜观察结果：小麦花粉为长椭圆形，长度约为30-40微米，宽度约为15-20微米，表面具有网状纹饰；玉米花粉为圆形，直径约为20-30微米，表面具有突起；大豆花粉为长椭圆形，长度约为40-50微米，宽度约为20-30微米，表面具有网状纹饰。
2. 扫描电子显微镜观察结果：小麦花粉表面具有明显的网状纹饰，纹饰大小不一；玉米花粉表面具有突起，突起高度不一；大豆花粉表面具有网状纹饰，纹饰大小不一。
3. 结果分析：通过观察不同植物花粉的形态和结构，可以看出花粉在大小、形状、纹饰等方面存在差异，这些差异可能与植物的传粉方式和适应性有关。
实验一 花粉生活力的测定
2 染色观察法 （1）碘-碘化钾染色法 先称取0.3g碘和1.3g碘化钾溶于100mL的蒸馏水 中，即成碘-碘化钾溶液。取少量花粉振播到用棉 球擦净的普通载玻片上，然后加水一滴，使花粉 散开，再加一滴碘-碘化钾溶液，盖上盖玻片，置 于显微镜下观察不同的三个视野，凡花粉粒被染 成蓝色的表示具有生活力，呈黄褐色为缺少生活 力的花粉（淀粉遇碘变蓝是淀粉的特性）。 （2）氯化三苯基四氮唑（TTC）法 凡具有生活力的花粉，在其呼吸作用过程中都有 氧化还原作用，而无生活力的花粉则无此反应， 因此当TTC渗入有生活力的花粉时，其脱氢酶在 催化去氢过程中与TTC结合，使无色的TTC变成 TTF而成红色。
通常花粉的形态、花粉中酶的活性以及积 累淀粉（淀粉质花粉）的多少与花粉生活 力密切相关，因此可以利用花粉的形态观 察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低、淀 扮的含量以及在人工培养基上花粉管萌发 的情况作为确定花粉生活力高低的标准。
【实验材料、主要仪器及试剂】 1 实验材料 各种园林植物的花粉。如百合、牡丹、凤仙花、 柳树、菊花、月季、凤仙花、紫茉莉等植物的花 粉。 2 主要仪器 载玻片、凹玻片、盖玻片、解剖针、毛笔、棉球、 显微镜、恒温温箱、瓷盘、镊子、培养皿、玻璃 棒、玻璃铅笔、凡士林、标签、冰箱。 3主要试剂 碘-碘化钾、氯化三苯基四氮唑、 Na2HPO4· 2H2O、KH2PO4、蔗糖或葡萄糖溶液、 H3BO3，Ca（NO3）2，MgSO掌握用形态法、染色法、发芽 法测定花粉生活力的具体技术和方法。 2 观察花粉在人工配制的培养基上的萌 发情况，认识花粉萌发形成花粉管的 外形和伸长过程，为理解植物的生殖 过程奠定基础。
【实验原理】 花粉的生活力因植物种类不同而差异很大。在自 然条件下，大多数植物的花粉从花药散出后只能 存活几小时，几天或几个星期。一般木本植物花 粉的寿命比草本植物的长，如在干燥、凉爽的条 件下，柑桔花粉能存活40～50天，椴树45天，苹 果10～70天，樱桃30～100天，麻栎一年。而在 草本植物中，如棉属花粉采下后24小时存活只有 65％，超过24小时很少存活；多数禾本科植物的 存活时间不超过一天，如玉米1～2天，水稻花粉 在田间条件下经3分钟就有50％丧失生活力，5分 钟后几乎全部死亡，是寿命最短的例子。花粉粒 的类型和生活力也表现了相关性，通常三胞花粉 的寿命较二胞花粉短，如水稻等禾本科植物为三 胞花粉，寿命都是比较短的。
花粉生命力的测定与形态观察
实验三花粉生命力的测定与形态观察花期不遇，给杂交工作造成困难，有的树木和园林植物可通过催延花期解决，有的则不得不进行花粉贮藏，为此我们必须掌握花粉贮藏的原理与技术。
为了避免杂交工作失误，在使用远地寄来的花粉或经过一段时间贮藏的花粉之前，必须对花粉生命力进行鉴定，以便对杂交成果进行分析与研究。
一、实验目的掌握了解花粉贮藏及花粉生命力鉴定的方法及原理。
二、实验材料芙蓉花的花粉。
三、仪器及药品载玻片、盖玻片、标签、标记笔、显微镜、蔗糖、蒸馏水、联苯胺、 -萘酚、酒精、碳酸钠、过氧化氢、琼脂。
四、实验原理在园艺植物有性杂交工作中，常因杂交亲本间花期不遇，或父本植株栽在异处(地)而必须预先收集花粉。
花粉贮藏在低温(0～4℃)、干燥(相对湿度0～40％)、黑暗的环境下，代谢降低，可以较长时间地保持花粉生活力，但其贮藏期长短对花粉生活力的影响因品种而不同。
在授粉之前，对贮藏的或外地采来的花粉必须预先测定花粉的生活力，以确定哪些花粉不能用于杂交，这对取得杂交效果有直接影响。
一是将待测花粉直接授粉，然后统计结实率和结子数。
此法的缺点是需时间较长，且实验结果易受气候条件的影响；二是将待测粉受到柱头上，隔一定时间切下柱头，在显微镜下检查花粉的萌发情况，根据萌发率的高低来鉴定花粉的生命力；三是在培养基上进行花粉的人工萌发，检查待测花粉萌发率的高低。
将花粉播种在特定的培养基上，并在一定的环境条件下来测定其发芽能力的方法。
培养基常用蔗糖、琼脂(1％)和蒸馏水配制而成。
不同植物的花粉，对蔗糖浓度要求不同，如柑桔花粉要求25％左右，苹果和梨10～15％，桃10％左右为宜。
蔗糖浓度高低可调节培养基的渗透压，以防止花粉在培养基上破裂。
培养基以微酸性为宜，一般在pH5.2～6之间。
发芽温度在20～25℃左右，并需要空气和湿度，为了促进花粉发芽，在培养基中还可加入少量的硼酸和维生素B1。
利用花粉发芽试验测定花粉生活力是一种直接的测定方法，其结果也最可靠，但操作较麻烦，要有一定设备和一定时间。
实验七花粉生活力的观察
实验七花粉生活力的观察技能目标掌握鉴定花粉生活力的几种常用方法。
一、花粉萌发测定法( 一 ) 原理正常成熟花粉粒具有较强的活力, 在适宜的培养条件下能萌发和生长在显微镜下可直接观察与计数萌发个数, 计算其萌发率, 以确定其活力。
( 二 ) 器材与用具显微镜、恒温箱、培养皿、载玻片、玻棒、滤纸。
培养基（10%蔗糖，10mg·L-1硼酸，0.5%琼脂）：称10g蔗糖，1mg硼酸，0.5g琼脂与90ml水放入烧杯中，在100℃水浴中溶化，冷却后加水至100ml备用。
（三）方法与步骤1．培养花粉。
将培养基熔化后，用玻璃棒蘸少许，涂布在载玻片上，放入垫有湿润滤纸的培养皿中，保湿备用。
采集丝瓜、南瓜或其它葫芦科植物刚开放的成熟花朵，将花粉洒落在涂有培养基的载玻片上，然后将载玻片放置于垫有湿滤纸的培养皿中，在25℃左右的恒温箱(或室温 20 ℃ ) 下培养5～10min。
2. 观察。
用显微镜检查5个视野, 统计萌发花粉个数。
二、碘—碘化钾染色测定法（一 ) 原理大多植株正常成熟的花粉呈圆球形, 积累着较多的淀粉, 用碘—碘化钾溶液染色时,呈深蓝色。
发育不良的花粉往往由于不含淀粉或积累淀粉较少, 碘—碘化钾溶液染色时呈黄褐色。
故可用碘—碘化钾榕液染色法来测定花粉活力。
( 二 ) 器材与用具显微镜、天平、载玻片与盖被片、镊子、烧杯、量筒、棕色试剂瓶。
碘—碘化钾溶液:取2g碘化钾溶于 5～10ml蒸溜水中,加人1g碘,充分搅拌使完全溶解后, 再加蒸溜水300ml时, 摇匀贮于棕色试剂瓶中备用。
( 三 ) 方法与步骤1. 制片与染色。
采集水稻、小麦或玉米可育和不育植株的成熟花药 , 取一花药于载玻片,加1滴蒸溜水,用慑子将花药捣碎, 使花粉粒释放。
再加1-2滴碘—碘化钾溶液 , 盖上盖玻片。
2. 观察。
观察2-3张片子, 每片取5个视野, 统计花粉的染色率, 以染色率表示花粉的育性。
三、氯化三苯基四氮唑法 (TTC 法 )( 一 ) 原理具有活力的花粉呼吸作用较强, 其产生的NADH或 NADPH能将无色的TTC 还原成红色的TTC而使花粉本身着色。
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法
花粉是植物生殖的重要组成部分，其生活力的测定对于植物繁殖和种子生产具有重要意义。
本文将介绍几种常用的花粉生活力测定方法，希望能够对相关领域的研究者和生产者有所帮助。
首先，最常见的花粉生活力测定方法是离体培养法。
这种方法首先需要收集新鲜的花药，然后在适当的培养基上进行培养，观察花粉的萌发情况来判断其生活力。
离体培养法的优点是操作简单，结果可靠，因此被广泛应用于植物育种和种子生产中。
其次，荧光显微镜法也是一种常用的花粉生活力测定方法。
这种方法利用荧光显微镜观察花粉颗粒的形态和结构，通过判断其内部结构的完整性来评估花粉的生活力。
荧光显微镜法对花粉的观察更加直观，能够提供更多的信息，但需要专业的设备和操作技能。
另外，还有一种叫做染色法的花粉生活力测定方法。
这种方法通过在花粉颗粒上涂抹特定的染料，然后观察染色情况来判断花粉的生活力。
染色法简单易行，可以快速得到结果，但对染料的选择和浓度有一定要求。
除了上述方法，还有一些新兴的花粉生活力测定方法，比如电子显微镜法、流式细胞仪法等。
这些方法在技术上更加先进，能够提供更为精细的数据，但也需要更高的成本和专业的操作技能。
综上所述，花粉生活力的测定对于植物育种和种子生产具有重要意义，而不同的方法各有优劣。
在选择具体的测定方法时，需要根据实际情况和研究目的进行综合考虑，以便选择最适合的方法。
希望本文介绍的内容能够对相关领域的研究者和生产者有所启发，推动相关领域的科研工作和生产实践取得更好的成果。
育种技术实验
实验一花粉生命力测定目的在经过一段时间储藏的花粉或使用远地花粉时,则必须测定,便于杂交成果的分析与研究。
通过实验, 要求学生掌握花粉生命力测定的方法。
药品及用具测微尺、显微镜、毛笔、载玻片、盖玻片、恒温箱、玻璃铅笔、蔗糖、蒸馏水、硼酸液、联苯胺、苯酚、酒精、碳酸钠、过氧化氢、琼脂。
方法步骤1、方法可分三类: 间接法、直接法、染色法。
2、直接法（1）原理（2）将花粉直接在清洁的同种植物的柱头上, 并且作好隔离工作, 然后观察其雌花之发育, 如果胚珠能够正常发育成种子, 则说明花粉具有生命力,否则, 就没有生命力。
（3）步骤第一步: 将花粉直接授在清洁的同种另一植株花的柱头上, 并作好隔离。
隔1--3天采集已授过粉的柱头, 固定于开水或F.A.A液中。
第二步：染色剂的配置:配置1%苯胺兰溶液、配置0.5%苯胺兰乳酸酚。
A．染色镜检3、花柱固定在开水中, 并于水中煮烂, 而后放在1%苯胺兰水溶液或0.5%苯胺兰乳酚中染色24小时,把花柱撕开,盖上盖玻片,用大姆指轻压。
镜检,若花粉具有生命力,即可观察到花粉管伸入柱头组织,若花粉不具生命力,即无花粉管伸入柱头组织.4、间接法（1）原理（2）借人为创造的特定条件使花粉萌发, 鉴定花粉生命力。
（3）硼酸液培养法配置10、50PPM的硼酸溶液。
用毛笔取少量花粉播入已盛硼酸的清洁小瓶并加盖, 放入恒温箱内培养。
5、取出小瓶充分摇动均匀, 用吸管吸一滴于载玻片凹槽内, 迅速盖上盖玻片固定花粉粒, 然后至于显微镜下观察。
6、观察2-----4个载玻片, 每凹面随机观察5个视野计算发芽率。
7、染色法过氧化物酶测定法（1）原理（2）这是借助于测定花粉内过氧化氢酶活性强弱来确定花粉生命力的方法, 在活的花粉内过氧化氢酶存在, 它可以促进过氧化物放氧分解, 这些刚被放出来的活性氧容易使还原剂氧化, 在本实验中所用的无色的联苯胺和苯酚都是还原剂, 但它们被氧化后确表现红色或玫瑰红色, 如果花粉是活的, 那么这个反应很快, 则花粉都被染成红色或玫瑰红色, 如果花粉是死的, 则这一反应迟迟不能进行, 花粉也就保持原色。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验三花粉生命力的测定与形态观察花期不遇，给杂交工作造成困难，有的树木和园林植物可通过催延花期解决，有的则不得不进行花粉贮藏，为此我们必须掌握花粉贮藏的原理与技术。
为了避免杂交工作失误，在使用远地寄来的花粉或经过一段时间贮藏的花粉之前，必须对花粉生命力进行鉴定，以便对杂交成果进行分析与研究。
一、实验目的掌握了解花粉贮藏及花粉生命力鉴定的方法及原理。
二、实验材料芙蓉花的花粉。
三、仪器及药品载玻片、盖玻片、标签、标记笔、显微镜、蔗糖、蒸馏水、联苯胺、 -萘酚、酒精、碳酸钠、过氧化氢、琼脂。
四、实验原理在园艺植物有性杂交工作中，常因杂交亲本间花期不遇，或父本植株栽在异处(地)而必须预先收集花粉。
花粉贮藏在低温(0～4℃)、干燥(相对湿度0～40％)、黑暗的环境下，代谢降低，可以较长时间地保持花粉生活力，但其贮藏期长短对花粉生活力的影响因品种而不同。
在授粉之前，对贮藏的或外地采来的花粉必须预先测定花粉的生活力，以确定哪些花粉不能用于杂交，这对取得杂交效果有直接影响。
一是将待测花粉直接授粉，然后统计结实率和结子数。
此法的缺点是需时间较长，且实验结果易受气候条件的影响；二是将待测粉受到柱头上，隔一定时间切下柱头，在显微镜下检查花粉的萌发情况，根据萌发率的高低来鉴定花粉的生命力；三是在培养基上进行花粉的人工萌发，检查待测花粉萌发率的高低。
将花粉播种在特定的培养基上，并在一定的环境条件下来测定其发芽能力的方法。
培养基常用蔗糖、琼脂(1％)和蒸馏水配制而成。
不同植物的花粉，对蔗糖浓度要求不同，如柑桔花粉要求25％左右，苹果和梨10～15％，桃10％左右为宜。
蔗糖浓度高低可调节培养基的渗透压，以防止花粉在培养基上破裂。
培养基以微酸性为宜，一般在pH5.2～6之间。
发芽温度在20～25℃左右，并需要空气和湿度，为了促进花粉发芽，在培养基中还可加入少量的硼酸和维生素B1。
利用花粉发芽试验测定花粉生活力是一种直接的测定方法，其结果也最可靠，但操作较麻烦，要有一定设备和一定时间。
四是用染色方法来鉴定花粉的生命力。
其原理是在活的花粉内有过氧化氢酶存在。
它可以促进过氧化物(如HO)放氧分解。
这些刚被放出的活性氧很容易使还原剂氧化。
在本实验中所用的无色联苯胺 -萘酚都是还原剂，但他们被氧化后却都表现红色或玫瑰红色。
如果花粉是活的，那么这个反应很快，则花粉被染成红色或玫瑰红色；如果花粉是死的，则这一反映迟迟不能进行，花粉也就保持原色。
此色优点是比较快捷，但比较间接。
利用化学药剂染色的方法测定花粉生活力，这是一种间接的测定方法，简便而快速，但比较粗略，有时不能真实反映出有发芽力花粉的数量。
五、实验步骤1、花粉发芽试验（1）培养基的配制：在100ml的蒸馏水中，加入琼脂1g、蔗糖15g，置于烧杯中加热煮沸，然后将该烧杯置水浴锅或盛热水的杯中备用，以防培养基冷却凝固。
（2）发芽床的设置和播撒花粉：在盖玻片上滴一滴培养基，用头发蘸上花粉少许，均匀撒于培养基表面，但应防止花粉埋入培养基中而影响花粉发芽。
播撒花粉后，要在显微镜下检查花粉是否分布均匀，再将载玻片置入用湿纱布或湿滤纸垫底以保湿的大培养皿中，盖上皿盖。
在各载玻片上贴上标签，注明花粉种类、采集时间、蔗糖浓度、播粉时间和操作者，然后置于20～25℃的温箱中。
（3）播花粉后的检查：在播花粉后，根据不同植物，经不同时间，在低倍镜下检查花粉发芽情况。
实验在24h 后观察，三个视野，统计发芽情况。
表3-1花粉发芽力测定记载表2、花粉生活力测定间接测定花粉生活力主要采用化学药剂染色法，通常采用以下几种方法。
（1）碘-碘化钾染色测定法①原理：正常的花粉积累淀粉较多，而不正常的花粉则少，据此可用化学物质染色，根据呈色反应来间接测定花粉的正常与否和花粉生活力的差别。
通常正常花粉用I2-KI染色后呈蓝色，而发育不良畸形的花粉则不积累淀粉，当用I2-KI 染色时呈黄褐色。
②试液的配制碘片 0.5g碘化钾 1.0g蒸馏水 150 ml先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘全溶后，加足水分即成③步骤和方法：取花粉撒于载玻片上，加1滴蒸溜水，用镊子使花粉散开，再加一滴I2-KI溶液，盖上盖玻片置于显微镜下观察，凡被染色呈蓝色者表示具有生活力，呈黄褐色者为发育不良缺少生活力的花粉。
（2）过氧化物酶测定法①原理：具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶，它能使过氧化物放出活性氧，氧是在花粉萌发，进行许多综合反应时必需的，使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生特定颜色。
因此，通过对过氧化物酶测定后的呈色反应来间接判断花粉有无生活力。
+2H2O②试液的配制Ⅰ. 0.20g联苯胺溶于100ml的50％酒精溶液中。
Ⅱ. 0.15gα-萘酚溶于100ml的50％酒精溶液中。
Ⅲ. 0.25g碳酸纳溶于100ml的蒸馏水中。
以上三种溶液分别放入棕色瓶中备用，使用时将这三种溶液等量配成试剂A，放入棕色滴瓶中备用。
使用前配制0.3％H2O2液为试剂B，装入棕色滴瓶中备用。
③步骤和方法：取花粉少量撒于载玻片上，加上试剂A和试剂B各一滴，用镊子使花粉散开，盖上盖玻片，在30℃条件下经10min后置于显微镜下观察。
被染色后呈红色的花粉粒，则表示有过氧化物酶存在，花粉有生活力；能发芽，如呈黄色或无色，则表示无生活力。
（3）氯化三苯基四氮唑(TTC)法①原理：凡具有生活力的花粉，在其呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的花粉则无此反应。
因此，当TTC渗入有生活力的花粉时，花粉中的脱氢酶在催化去氢过程中与TTC结合，使无色的TTC变成三苯基甲(TTF)而呈红色。
②试液的配制Ⅰ.磷酸盐缓冲液。
在100ml的蒸馏水中，溶解0.832g的Na2HPO4·2H2O和0.273g的KH2PO4，调整pH值为7.17。
Ⅱ.TTC溶液。
称取0.02～0.05g的TTC，溶解在10ml的磷酸盐缓冲溶液中，放入棕色滴瓶内，置于暗处。
TTC为有毒性物质，操作时应注意安全。
Ⅲ.步骤和方法。
取少量花粉放在载玻片上，在花粉上滴1～2滴的配制液，用镊子使其混合后，盖上盖玻片。
将此载玻片置于人工气候箱中(35～40℃)约15～20min。
在显微镜(100倍)下观察，凡具有生活力的花粉粒呈红色，其次呈淡红色，失去生活力的和不育的花粉粒表现无色。
本实验用第（1）和第（2）种方法每种每人制片2片，每片观察3个视野，每视野约有50粒花粉，统计每种测定方法中具有生活力花粉的百分率，将观察结果记入表1。
五、实验结果与分析根据试验结果，试比较花粉发芽试验和几种花粉生活力染色测定法的优缺点及其应用价值。
六、关键步骤与注意事项花粉采集时期要适宜，取充分成熟将要开花的花朵带回室内，取其内部的花粉。
七、思考题试比较用2种方法测定的同一花粉的活力百分率是否相同，分析其原因。
备注：花粉生命力的鉴定1 固体培养基法(1) 配置培养基：称取1g琼脂、5g蔗糖(化学纯)，量取94ml的蒸馏水。
先把水加热煮开，倒入洋菜，使之融化，然后到入蔗糖，用玻棒不断搅拌，呈透明状即可。
为保持培养的浓度，可在烧杯上用玻璃铅笔做记号，如水分蒸发应徐徐补充，既配成5%浓度的培养基。
同法配成10%、15%、20%浓度的培养基。
(2) 载平：用玻璃棒蘸少量培养基，趁热滴在载玻片的凹槽，放置片刻，使其冷凝。
（3）播种花粉：将上述处理的载玻片置于黑色纸上然后用解剖针粘少量花粉均匀地撒在培养基上，但不可过多，否则为以后观察带来困难。
(4) 观察：把植被好的片子放在有湿润吸水纸的培养器内，然后盖上盖、放在20~22℃的温箱中培养。
接种1h即可统计萌发率。
随即在显微镜下取3个视野，计算花粉总数及发芽数，算出平均出芽率。
2 悬滴培养法(1) 配培养液：称取5g蔗糖(化学纯)量取95m1蒸馏水，先把水加热烧开，然后到入蔗糖，用玻璃棒搅拌即成5%的培养基。
(2) 载植：用蜡环(或玻璃环)和凡士林在悬滴载片的凹点上做一围墙，蜡环(或玻璃环)上缘涂一层凡士林，并往凹点内滴一滴培养液。
然后均匀地撒上少量花粉，拿好盖玻璃片在往上提的过程中迅速将它翻转过来(利用这个惯性保持其球面)小心地把玻片平放在蜡环(或玻璃环)上并使其周围没有缝隙。
如此便构成了一成密闭的小室。
(3) 观察：把上述制成的片子小心放到培养内(注意在所有悬滴过程中不能使悬滴流跑)然后放到温箱中，保持22~ 22℃的温度。
牡丹花粉接种后1h即可观察。
花粉发芽检查在低倍镜下进行，花粉的长度为花粉粒直径2倍以上才算发芽，1倍以上者算萌芽。
2.3 染色法(1) 配制溶液A. 20g联苯胺溶于10ml的酒精中，盛入棕色瓶中。
B. 0.15g -萘酚溶于100ml的酒精中，盛入棕色瓶中。
C. 0.25g碳酸钠溶于蒸馏水中，盛入白色瓶中。
D. 以上三种溶液等量混合，即成“甲液”，盛入白色瓶中。
E. 将36%过氧化氢，临用前用蒸馏水稀释成0.36%溶液，即成“乙液”。
(2) 制片：取少量花粉放到悬滴载玻片的凹点内，滴入一滴甲液，再滴一滴0.36%的H2O2，3min之后观察。
(3) 统计存活率：在显微镜下观察凡表现红色或玫瑰红色的都有生命的花粉。
黄色或不着色者为没有生命的花粉。