产蛋白酶芽孢杆菌
产蛋白酶波茨坦短芽孢杆菌的鉴定及产酶条件优化

产蛋白酶波茨坦短芽孢杆菌的鉴定及产酶条件优化
梁安健;石沁兰;王金丽;朱成林;邹立扣;朱鹏程;李东亮;唐俊妮
【期刊名称】《现代食品科技》
【年(卷),期】2024(40)5
【摘要】该研究旨在提高一株环境分离菌株的产酶效率,为后续菌株及其蛋白酶的应用提供前期实验基础。
通过水解圈法初步检测菌株S8的产蛋白酶能力,并通过16S rRNA序列比对确认其为波茨坦短芽孢杆菌。
通过单因素试验确定了最佳培养条件和培养基添加成分。
并采用Plackett-Burman设计和最陡爬坡试验对培养条件和培养基进行响应面优化。
优化结果显示,在发酵时间为38.70 h、菌液接种量为1.84%(V/V)、发酵温度为35℃、酵母粉添加量为23.70 g/L、胰蛋白胨添加量为11.70 g/L、MgSO4添加量为20.20 g/L的条件下,菌株的产酶活力可达到114.79 U/mL,相比优化前提升了209.70%。
研究结果为该菌株的后续发酵应用提供了科学数据。
【总页数】11页(P73-83)
【作者】梁安健;石沁兰;王金丽;朱成林;邹立扣;朱鹏程;李东亮;唐俊妮
【作者单位】西南民族大学食品科学与技术学院;四川农业大学资源学院;四川中烟工业有限责任公司
【正文语种】中文
【中图分类】TS2
【相关文献】
1.产几丁质酶侧孢短芽孢杆菌M64的产酶条件优化及部分酶学性质研究
2.产蛋白酶菌的分离鉴定及产酶条件优化
3.耐酸产蛋白酶芽孢杆菌SD48菌株液体发酵豆粕产大豆肽条件的优化
4.一株产胶原蛋白酶细菌的鉴定及产酶条件优化
5.1株产蛋白酶菌株的分离鉴定及其产酶条件的优化
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产蛋白酶菌的筛选及产酶条件优化

大庆师范学院本科生毕业论文蛋白酶产生菌培养条件的条件优化院(部)、专业生命科学学院生物技术研究方向微生物学学生姓名朱琳学号200901122598指导教师姓名张亦婷2013年06月01日摘要采用大庆师范学院生命科学学院花园附近土壤、农田土壤及体育场附近土壤作为样品,并从中筛选分离并得到产蛋白酶能力较高的菌株,经过初步鉴定该菌株属芽孢杆菌。
通过对其产酶条件进行优化,结果显示该菌产酶最佳碳源为质量浓度15g/L的乳糖,最佳氮源为质量浓度20g/L的尿素,最适初始pH值为6.5,最适发酵温度为35℃。
关键词:菌种筛选;鉴定;蛋白酶;条件优化AbstractThe sewage treatment plant soil near east institute, soil and soil samples near farms .Using milk hydrolysis circle screening model separating screening in high ability get protease whr1 strains. Preliminary appraisal of the fungus belong to bacillus. After the optimization of the condition, the capability of whr1 was improved, the optimal condition is: carbon source is sucrose 15g/L; nitrogen source is Yeast extract 20g/L, the pH is 6.5; fermentation temperature is 35℃.Key words:Screening;Identified;Protease;Conditions optimization目录摘要 (1)Abstract (2)1 引言 ...........................................................................................................................................................2 材料与方法 (3)2.2.2 实验材料 (3)2.2.1 菌株筛选 (3)3.1 菌株筛选 (6)3.1.1 菌株的分离筛选 (6)2.3 条件优化 (7)2.3.1 不同碳源对产酶的影响 (7)2.3.3不同氮源对产酶的影响 (8)2.3.4 培养基不同初始pH值对产酶的影响 (9)2.3.5 不同温度对产酶的影响 (10)4 结论 (10)11 引言蛋白酶是催化蛋白质中肽键水解的酶,是一类广泛应用于皮革、毛皮、丝绸、医药、食品、酿造等方面的重要工业用酶,也是目前世界上产销量最大的商业酶,其市场占有率约占整个商品酶销售量的60%,微生物蛋白酶从微生物中提取,不受资源、环境和空间的限制,具有动物蛋白酶和植物蛋白酶所不可比拟的优越性。
高产蛋白酶活性的枯草芽孢杆菌筛选及鉴定

( S c h o o l o f B i o l o g y a n d P h a r ma c e u t i c a l E n g i n e e i r n g , Wu h a n P o l y t e c h n i c U n i v e r s i t y , Wu h a n 4 3 0 0 2 3 , C h i n a )
Ab s t r a c t : T w e n t y e x t r a c e l l u l a r p r o t e a s e s p r o d u c i n g B a c i l l u s s t r a i n s we r e s c r e e n e d a n d i d e n t i i f e d f r o m s o i l u s i n g t r a n s p a r e n t c i r c l e me t h o d .S i x o f t h e m s h o we d l a r g e r t r a n s p a r e n t c i cl r e d i a me t e r a n d o he t r hr t e e c o mme r c i ll a y a v a i l —
r t e e s we r e c o n s t r u c t e d b y ME G A s o f t w a r e . e r e s u l t s s h o we d t h a t t h e s r t a i n C DY- 1 a n d C D Y- 5 w e r e p h y l o g e n e t i —
蛋白酶的发酵及酶活力测定实验报告

蛋白酶的发酵及酶活力测定实验报告学院:生物科学与工程学院专业:生物技术班级: 1班姓名:学号:摘要:蛋白酶是一类重要的工业用酶,广泛应用于食品、医药、洗涤剂、皮革、酿酒等行业。
当前,食品工业用酶主要来自微生物,尤其是蛋白酶的应用最为广泛。
作为一种生物催化剂,它具有催化反应速度快,无工业污染,催化反应条件适应性宽等的性质和优点。
由于从植物和动物中生产蛋白酶具有的局限性,为了满足当今世界市场的需要,人们越来越多地把目光投到微生物蛋白酶上[2] 。
微生物由于具有生长速度快、所需生长空间小、广泛的生化多样性及其遗传可操作性等特点,因而备受人们青睐。
本文主要进行了菌种的生长曲线的绘制与菌种最佳发酵产酶时间等方面的研究。
关键字:蛋白酶生长曲线酶活力第一章前言1.1研究的目的与意义蛋白酶是工业酶中用得最多的一种酶,是催化蛋白质肽键水解的一类酶,它作用于蛋白质,将其分解为蛋白胨、多肽及游离氨基酸[1] ,约占酶总量的 60%,其中碱性蛋白酶就占25%。
有调查显示,酶制剂市场量最大的是洗涤剂用酶,第二位是淀粉加工用酶,以后依次为乳制品加工业、制酒工业、纺织工业和饮料加工业等用酶[2]。
与动、植物来源的蛋白酶相比,利用微生物产的蛋白酶有易于培养、生长快、产量高、易于提取,适于大规模工业化生产,培养基的成本相对较低等优点,使微生物成为生产蛋白酶的重要来源和首选材料。
1.2 国内外研究概况1.2.1 微生物蛋白酶的分类由于从植物和动物中生产蛋白酶具有的局限性,为了满足当今世界市场的需要,人们越来越多地把目光投到微生物蛋白酶上[3]。
当前工业用酶主要来源于微生物,微生物来源的蛋白酶按其作用的 pH 值的不同可分为三类,即碱性蛋白酶、中性蛋白酶及酸性蛋白酶,它们作用的最适 pH 值分别为碱性、中性及酸性。
1.2.2在食品工业中的应用蛋白酶在食品工业上的应用主要是用在制干酪,蛋白质水解调味液,烤焙食品,肉类嫩化,功能性低聚肽和阿斯巴甜的合成等。
02 实验二 产中性蛋白酶芽孢杆菌的诱变育种

第二次实验:
(二)诱变处理:
预热:在正式照射前,应先开紫外线30min,让紫
外灯预热。
搅拌:取5ml制备的菌液加到直径9cm培养皿内,放
入一无菌磁力搅拌子,然后置磁力搅拌器上、15W
紫外线下30cm处。
照射:打开皿盖边搅拌边照射,所有操作必须在黑
暗或红灯下进行。
第二次实验:
(三)培养:
稀释:在红灯下分别取未照射的菌悬液(作为对照)
五、参考文献
一、目的意义
1、通过紫外线诱变的方法,筛选获得一
株高产中性蛋白酶的突变菌株。
二、材料方法
关键技术:
实验原理
技术路线
紫外线诱变
紫外线诱变育种的原理 紫外线的波长在200~380 nm 之间,但对
诱变最有效的波长仅仅是在253~265 nm,一
般紫外线杀菌灯所发射的紫外线大约有80% 是254 nm。
紫外线诱变的主要生物学效应是由于DNA
变化而造成的,DNA 对紫外线有强烈的吸
收作用,尤其是碱基中的嘧啶,它比嘌呤更 为敏感。紫外线引起DNA 结构变化的形式 很多,如DNA 链的断裂、碱基破坏。但其 最主要的作用是使同链DNA 的相邻嘧啶间 形成胸腺嘧啶二聚体,阻碍碱基间的正常配 对,从而引起微生物突变或死亡。
(五)突变株的筛选
1. 初筛(以量为主) 方法需简便、快速
2步
初筛 复筛
(1)利用形态变异:需预先测定形态与产量的相关性 (2)根据平板颜色反应直接挑选 透明圈法(蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶); 抑菌圈法(抗生素); 变色圈法(柠檬酸)、显色圈(氨基酸); 沉淀圈法(外毒素) 透明圈直径(H)/菌落直径(C):产量高低(初筛指标) 2. 复筛(以质为主,定量测定) 摇瓶培养,直接检测所需产物
一株产大豆蛋白酶的芽孢杆菌发酵条件的优化

O i LA GJ gja , A GZn - e UPn , I N n -un‘ P N o gw n g i
( . zo nvri , z o 4 8 0, a g i C ia 2 C l g f i ce c n e h oo y Gu n x U ies y 1He h uU ies y Heh u5 2 0 Gu n x , hn ; . ol e f S in ea dT c n lg , a g i nv ri , t e oL e t
s o d t a r a i i o e s mu h b te o p o t tan D -1 9’ r wt n y t e i f e z me h we h to g n c nt g n i c etr t r moe sr i r 6- S go h a d s n h ss o n y ,
N n ig5 0 0 G a g i C ia a nn 3 0 5, u n x , hn )
Absr c : ec lu eo Ba i u p. ta t Th u t r f c l ss D-1 - r p i z df rtep d ci no o b a r t a e Th e u t l 6 9 weeo t mie h r u to fs y e n p oe s . er s ls o o
蛋白酶产生菌的分离

蛋白酶产生菌的分离、活化选育、发酵及酶活力的测定许多细菌和霉菌产生蛋白酶,细菌中的芽孢杆菌是常见的蛋白酶产生菌。
本实验将土壤样品悬液加热处理,杀死非芽孢细菌及其它微生物后进行划线分离得到芽孢杆菌,将其接种到酪蛋白平板进行培养,根据酪蛋白平板的水解圈做初筛。
也可直接将细菌或霉菌接种到酪蛋白平板进行培养,分离筛选其它蛋白酶产生菌。
本实验主要包括:蛋白酶产生菌的分离纯化、产酶微生物菌种的选育、产酶微生物的发酵与酶活力的测定、蛋白酶产生菌的生长及生长曲线、培养基优化。
通过本实验项目,使学生学会从自然界中分离蛋白酶产生菌的方法,菌种的纯化技术、高产菌的选育技术;了解蛋白酶产生菌的生长情况,学会绘制其生长曲线;学会培养基优化的方法;了解蛋白酶的性质及蛋白酶的测定原理;掌握蛋白酶的发酵及酶活力测定方法。
1 实验材料1.1 实验样品校园内土壤样品1.2实验仪器与材料牛肉膏蛋白胨培养基平板、酪蛋白平板、无菌水(带玻璃珠)、芽孢染色液番红;显微镜、恒温水浴锅、酒精灯、接种针、游标卡尺、无菌移液管、无菌试管、血球计数板、试管、三角烧瓶、烧杯、量筒、,玻棒、电子天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸( pH 5.5—9.0)、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、培养皿、胶头滴管、分光光度计(应符合GB9721的规定)等。
2实验方法与步骤 2.1 培养基的配制方法1.称量按培养基配方比例依次准确地称药品放入烧杯中。
2.溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量,用玻棒搅匀,然后,在石棉网上加热使其溶解。
待药品完全溶解后,补充水分到所需的总体积。
3.调pH4.分装按实验要求,可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。
5.包扎塞好棉花的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆扎,用记号笔注明培养基名称、组别、日期。
6.灭菌将上述培养基以1.02kg/cm2(15磅/英寸2),121.3℃, 15-20min高压蒸汽灭菌。
如因特殊情况不能及时灭菌,则应放入冰箱内暂存。
产蛋白酶芽孢杆菌的筛选及其发酵对豆粕的影响

Keywords: Bacillus; protease; fermented soectron microscopy; X-ray diffraction
DOI:10.7506/spkx1002-6630-20180808-073
中图分类号:TS209
本研究筛选到1 株高产蛋白酶的芽孢杆菌,通过形态 学、生理生化鉴定,以及进化树的构建,结果显示其是 1 株暹罗芽孢杆菌。研究芽孢杆菌发酵对豆粕化学成分的 变化以及对豆粕蛋白的微观结构影响,本实验可为进一步 研究微生物发酵对豆粕蛋白结构影响提供理论支持。
1 材料与方法
1.1 材料与培养基 脱脂豆粕 吉林华展生物工程有限责任公司;脱脂
乳粉 新西兰恒天然集团。 改良LB液体培养基:酵母浸粉3 g/L、蛋白胨
10 g/L、氯化钠10 g/L、葡萄糖3 g/L,121 ℃高压灭菌 20 min。改良LB固体培养基:改良LB液体培养基添加
16 g/L琼脂粉。豆粕发酵培养基:10 g豆粕(过20 目 筛)、0.2 g红糖、10 g蒸馏水,搅拌均匀,115 ℃高压灭 菌15 min。脱脂乳固态培养基:脱脂乳粉50 g/L、琼脂粉 1.5 g/L,115 ℃高压灭菌15 min。 1.2 仪器与设备
24 h at 37 ℃ and at a water content of 50%. Moreover, the SEM images revealed that fermentation significantly changed
the microstructure of soybean meal protein, making it looser. The X-ray diffraction patterns showed that the backbone of
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北方民族大学学生实验论文论文题目:产蛋白酶芽孢杆菌的分离、纯化与选育
院(部)名称:生物科学与工程学院
学生姓名:杨嘉怡
专业:生物工程学号:20103371班级:102班
指导教师姓名:刘雅琴
实验小组成员:高瞻,邢艳东,刘帅,阳波
组别:第五组
实验成绩:
北方民族大学教务处制
产蛋白酶芽孢杆菌的分离、纯化与选育
摘要
酶(英语:Enzyme,又称酵素),指具有生物催化功能的高分子物质。
几乎所有的细胞活动进程都需要酶的参与,以提高效率。
酶作为催化剂,本身在反应过程中不被消耗,也不影响反应的化学平衡。
酶具有高度的专一性,只催化特定的反应或产生特定的构型。
酶是生物体内进行生物化学反应的催化剂,在生物体中已发现的酶有2500多种。
目前已知的可以被酶催化的反应有约4000种。
在生物体内,酶发挥着非常广泛的功能。
由于酶促反应的特异性强,反应条件温和,安全无毒,环境污染少,在洗涤剂、皮革、纺织、造纸、诊断、制药等领域具有广泛的应用价值。
目前,能由工业生产的50多种酶制剂包括蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、果胶酶、纤维素酶、葡萄糖氧化酶,葡萄糖异构酶等,这些酶大部分是由霉菌、细菌、链霉菌和酵母菌产生的。
通过本实验项目,使学生学会从自然界中分离产酶微生物的方法,菌种的纯化技术及其高产菌的选育技术。
许多细菌和霉菌产生蛋白酶,细菌中的芽孢杆菌是常见的蛋白酶产生菌。
本实验将土壤样品(或其他样品)悬液加热处理,杀死非芽孢细菌及其他微生物后进行划线分离得到芽孢杆菌,将其接种到酪蛋白平板进行培养,根据酪蛋白平板的水解圈作初筛。
也可直接将细菌或霉菌接种到酪蛋白平板进行培养,分离筛选其他蛋白酶产生菌。
生物的遗传信息的改变是通过基因突变、基因重组和基因转移来进行的。
基因突变,又称点突变(point mutation),包括自发突变和诱发突变,前者是未经人为施加诱变剂处理而发生的突变,后者是经人为施加诱变剂处理而获得的突变。
两种突变都是由于一个或几个碱基的增加、缺失或置换而引起的,因此本质相同,不同的只是诱发突变的频率比自发突变的频率要高得多。
这一部分的实验是以紫外线和亚硝基胍为例介绍了物理因素和化学因素对微生物的诱变作用。
本实验中,将筛选出的蛋白酶的产生菌株作为出发菌株通过紫外线对微生物诱变作用,对菌株进行选育工作。
关键字:芽孢杆菌,分离,突变,筛选
1.实验仪器和材料
1.1仪器
显微镜,恒温水浴锅,酒精灯,接种针,无菌移液管,无菌涂布器,无菌试管,量筒,1mL无菌吸管,烧杯,磁力搅拌器,培养皿,高压灭菌锅,玻璃涂棒,游标卡尺血,紫外线等(15W),细胞计数板。
1.2材料及试剂
土壤样品,牛肉膏蛋白胨培养基平板,酪蛋白平板,无菌生理盐水,芽孢染色液。
2实验方法
2.1分离
[1]培养基和试剂的配置
酪素培养基:牛肉膏0.3g,Nacl0.5g,酪素1.0g,琼脂2.0g,蒸馏水100ml,PH7.6-8.0。
产蛋白酶发酵培养基:玉米粉6.0g,豆饼粉4.0g,Na2HPO40.4g,KH2PO40.03g,
Na2CO30.1g,自来水100ml,PH9.0(灭菌前)。
[2]制备土壤稀释液
称取土样1g,放入盛10ml无菌水的三角瓶中,振摇约20min,使土样与水充分
混合,将细胞分散,用一支1ml无菌吸管吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水
的大试管中,充分混匀,然后用无菌吸管从此试管中吸取1ml加入另一个盛有9ml
无菌水的试管中,充分混匀,以此类推制成10-1,10-2,10-3,10-4,10-5,10-6不同稀释
度的土壤溶液。
注意:操作时管尖不能接触液面,每一个稀释度换一支试管。
将
稀释度为10-4,10-5,10-6的试管放入80℃的水浴锅中处理10min,以杀死非芽孢杆菌。
[3]倒平板
将灭过菌的培养基分别倒平板,倒入培养皿大约15ml培养液。
[4]涂布
在每个平板底部分别用记号笔写上10-4,10-5,10-6三种稀释度,然后用无菌吸管
分别由10-4,10-5,10-6三种稀释液各吸取0.2ml,小心的滴在对应的平板培养基表
面中央,右手拿无菌涂布器放在平板培养基表面,将菌悬液沿同心圆方向轻轻的
向外扩散,使之分布均匀,室温下静置5-10min,使菌悬液浸入培养基。
[5]培养
将培养基平板倒置于32℃温室中培养3天。
[6]挑菌落
将培养后长出的单个菌落进行编号,选择表面干燥,粗糙,不透明的菌落,挑取少
许菌苔涂片,做芽孢染色,判断是否为芽孢杆菌。
2.2纯化
[1]从判定为芽孢杆菌的菌落处,分别挑取少许菌苔,接种酪素斜面培养基,32℃
培养3d,测定平板上菌苔直径和水解圈直径。
[2]菌苔直径和水解圈直径比值小的菌株对应的斜面培养物可以作为进行诱变选
育的菌株。
2.3选育
(1)菌悬液的制备:①取培养48小时生长旺盛的出发菌株斜面4-5支,用10ml无菌生理盐水将菌苔洗下,倒入盛有玻璃珠的小三角烧瓶中,振荡30分钟,以打碎菌
块。
②用血球计数法计数,调整细胞浓度为每毫升108个。
(2)平板制作:将琼脂培养基溶化后,冷至55℃左右时倒平板18套,凝固后待用。
(3)紫外线处理:①将紫外线灯开关打开,预热约20分钟。
②取直径6cm无菌平皿2套,分别加入上述调整好细胞浓度的菌悬液3ml,并放入一根无菌搅拌棒于
平皿中。
③将上述2套平皿先后置于磁力搅拌器上,打开皿盖,在距离为30cm,
功率为15W的紫外线灯下分别搅拌照射1分钟和3分钟。
盖上皿盖,关闭紫外灯。
(4)稀释:在红灯下,将上述经诱变处理的菌悬液以10倍稀释法稀释成10-1-10-5
(5)涂平板:取10-3、10-4、10-5三个稀释度涂平板,每个稀释度涂平板3只,每只平板加稀释菌液0.1ml,用无菌玻璃刮棒涂匀。
以同样操作,取未经紫外线处理的
菌稀释液涂平板作对照。
(6)培养:将上述涂匀的平板,用黑布(或黑纸)包好,置37℃培养48小时。
注意每个平皿背面要标明处理时间和稀释度。
(7)计数:将培养48小时后的平板取出进行细菌计数,根据对照平板上菌落数,计算出每毫升菌液中的活菌数。
同样计算出紫外线处理1分钟、3分钟后的存活细胞数
及其致死率。
3实验数据与分析
3.1实验结论
3.1.1紫外线诱变结果:
3.1.2诱变效应
3.2实验结论
(1)在含酪蛋白的平板上,产蛋白酶的芽孢杆菌可形成蛋白质水解圈。
(2)由诱变效应记录表的数据知诱变时间为1min稀释度为10-5的菌落的HC比值大于诱变时间为3min稀释度为10-4的菌落的HC比值,故诱变时间为1min 稀释度为10-5的菌株对应的斜面培养物可以作为进行诱变选育的菌株。
(3)由紫外线诱变结果可知对照组的菌落数为94,诱变时间为1min的存活菌落数为624,可算出其存活率为94/624=64.26%,同理诱变时间为3min的存活菌落数为1600,其存活率为94/1600=17.02%。
(4)各诱变时间的不同存活率不同,且诱变时间短的存活率高,诱变时间长的存活率低。