体积排阻色谱峰展宽及拖尾
收藏液相色谱峰拖尾不要怕,我有好办法!

收藏液相⾊谱峰拖尾不要怕,我有好办法!可以采取些什么措施来避免峰形拖尾?⾸先找到峰拖尾的原因:1. ⾊谱柱本⾝被污染,或者塌陷;2. 仪器柱外死体积太⼤。
柱体积越⼩,柱效越⾼的⾊谱柱受柱外死体积影响越⼤;3. ⽬标物本⾝的化学性质导致,⼀般碱性或极性的⽬标物和填料上的⾮特异性吸附位点互相作⽤。
过载或柱外展宽导致的:1. 观察⾊谱图,可以得到很多信息,观察峰⾼,如果是UV检测器,峰⾼在1000mAµ的数量级以上,那么可能是过载造成的峰形拖尾,通常情况下,120A左右孔径的多孔填料,上样量在100µg时就会出现过载导致的峰形不好,这时可能峰⾼不是很⾼,可以进样1/10量来判断,重复进样⼀次;2. 根据⾼低浓度的谱图,观察多个化合物的峰形是否⼤致不变,或者有相同情况的改变,由于峰宽的增加能抵消柱外死体积引起的峰形异常(有可能是前延峰有可能是拖尾峰),那出峰时间越长的峰,峰形越好,那么可能是柱外死体积导致的,柱外死体积考虑两种情况:1. 额外的主展宽效应连接管路,进样器、检测器流通池的扩散展宽会导致在⾊谱图上先出的峰异常,把细内径的⾊谱柱⽤在⼀台常规的分析仪器上,或者最近重新连接过系统,就有可能是这种情况。
如果是后⼀种情况,检查所有的管路长度,内径,是否符合该类型仪器。
链接端是否完好(不同⾊谱柱仪器制造商会使⽤不同深度的接⼝,在使⽤⾦属件链接时尤其要注意),对于接⼝影响有⼀个偏离标准,仅仅15µl偏差在5µm的⾊谱柱上流经3ml提及的流动相就能明显影响到⾊谱峰形;2. ⼯作站采集常数(通常⼯作站上可以设置采集频率)⼯作站的采集频率会影响到峰形,出峰较早的峰形更差,⼀般⼯作站设置的采集数是在1秒,出峰很快,峰形很尖锐,需要增加采集频率以避免⾊谱峰“失真”。
⾊谱图中所有的峰形都出现⼗分明显且相同程度的拖尾,那可能是以下原因导致的:1. 柱床损坏;按照⼚商出⼚检测的⽅法进⾏⾊谱柱检测,如果仍然是相同的峰形,可以采取⼀些合适的溶剂冲洗(参考⾊谱柱异常冲洗流程),冲洗后按照出⼚检测⽅法仍然没有改善,那就是⾊谱柱柱床本⾝变化,那就没有办法修复。
色谱峰的前沿与拖尾问题

1.产生前沿和拖尾的原因一般有哪些?拖尾:1 干扰峰,优化条件分离2 色谱柱塌陷,更换色谱柱 3 流动相pH不合适,调节pH值 4 管路没有接好,存在较大的死体积,可以重新接一下前沿:1 溶剂选择不合适,选择合适的溶剂 2 样品过载,降低进样量 3 柱温太低,升高柱温4 色谱柱损坏,更换色谱柱5 干扰峰,优化色谱条件分离可能的问题:1.柱子问题2.流动相不恰当3.定容样品的溶剂不合适产生峰前沿的原因:柱过载,柱头塌陷,溶剂选择不对产生峰拖尾的原因:存在杂质未分开,柱污染,柱子选择不对。
拖尾峰与柱子有关,可能是过载,稀释样品再做,或换新柱做吧一般产生托尾峰往往是有机性相近杂质没有分开,可以优化分析方法,或更换柱子试一试;也可能由于柱子使用时间太久柱效下降出现塌陷等原因;再有也会根样品本身性质有关,基团需要流动相中添加能与之结合优化峰形的化学物质,要根据具体情况而定。
柱子可能污染了吧,溶剂也可能有,或柱效下降。
图谱前沿和拖尾的原因主要是流动相选择不合适,可以相应调整流动相的极性,或者适当加入酸来调整,可以得到较好的改善。
一般来讲,酸碱在流动相中对于前沿和拖尾影响较大。
柱前沿是可能因为柱超载,拖尾是可能因为样品被污染,选择合适的流动相,调节好PH能够改善这以情况。
液相拖尾峰出现原因及解决办法:1.柱头有空隙。
解决办法:使用填料或玻璃珠填充柱顶部。
2.柱上样品超载。
解决办法:使用更高负载量的固定相。
增加色谱柱内径、减少样品量。
3.单峰- 存在干扰性组分。
解决办法:净化样品;预分离。
4.存在未扫的死体积。
解决办法:减少接头的数量、确保进样器密封垫紧密、确保接头正确固定。
5.碱性化合物- 硅醇相互作用。
解决办法:换成聚合物固定相。
6.碱性基质- 硅醇相互作用。
解决办法:使用更强的流动相或添加竞争碱(例如,三甲胺)。
7.硅胶基- 柱降解。
解决办法:使用特种色谱柱;聚合物柱或空间位阻。
8.溶剂相极性不匹配。
较早流出的峰或靠近溶剂前沿的峰更容易出现拖尾,解决办法:改变样品溶剂。
峰形拖尾的原因及解决方法汇总

技术报告改善反相 HPLC 中的峰拖尾在反相 HPLC 中峰拖尾是一个普遍的现象。
特别是分离碱性化合物和通过HPLC 分析药物成分时是经常产生拖尾缘由。
峰拖尾可以引起分离度降低,灵敏度减弱, 精密度和定量变差。
图 1表明峰之间的分离度和灵敏度与峰拖尾成负相关。
图 2表明准确度和精密度因数据系统无法准确识别峰的起点和终点而受到影响。
图 1 拖尾对分离度和灵敏度的影响当峰拖尾(T ,拖尾因子从 1.0增加到 2.0时,分离度(Rs 从 1.5降到 1.0。
灵敏度(峰高由于峰的体积增大和样品的浓度降低而降低。
图 2 峰拖尾对准确度和精密度的不利影响拖尾峰使数据系统难以准确确定峰的终点, 故而影响准确度和精密度。
在这个例子中,在 B 点测得到峰面积比在 A 点测得的峰面积少约 3%。
峰拖尾的原因,峰拖尾的主要原因有:1、溶解样品的溶剂比流动像更强,2、样品量过载,3、固定相中的硅醇基与胺类物质相结合反应,4、硅胶吸附酸性化合物,5、色谱柱柱床中有空隙。
只要确定了拖尾的原因就可以采取措施减少拖尾并消除之。
(表 1表 1 峰拖尾:原因及解决方案原因解决方案样品溶剂极性强于流动相在流动相中溶解样品, 尽可能降低样品溶剂的强度样品量过载减少进样量, 参考表 2中推荐的不同柱型对应的不同进样体积硅醇基与胺类物质的结合调节流动相的 pH<3.0。
2. 增加流动相的离子强度, 25mM ~ 50mM 。
3. 流动相中增加竞争性的胺类, 10mM的 TEA (三乙胺。
4. 选择低硅醇活性的固定相。
参照图 6 C18柱按固定相硅醇活性分级。
5.酸性物质在硅胶上的吸附增加流动相中盐的浓度, 25mM ~ 50mM 。
2. 调节流动相的 pH<3.03. 增加竞争性的有机酸, 1%醋酸或者是 0.1%TFA(三氟乙酸柱子空隙更换新的色谱柱尝试填充空隙很少能达到较好的效果。
一、由于溶解样品的溶剂极性强于流动相而引起的拖尾如果溶解样品的溶剂极性强于流动相, 就会引起宽的甚至是拖尾的峰。
液相色谱峰形拖尾解决方案

峰形后拖解决方案和实例继前一篇《峰形前拖解决方案》,我们对峰形后拖的情况及其解决方案也进行了总结。
与《峰形前拖解决方案》相同,在这里我们也同样的撇开所有的污染、塌陷、死体积等其它因素,假设系统是好的,柱子是新的、好的,单纯探讨液相方法与峰形后拖之间的关系,通过调整液相方法来解决峰形前拖的问题。
这样有利于厘清拖尾产生的根本原因,对峰形拖尾的问题提供一些经验上解决方案。
首先让我们了解一下峰形后拖的几种常见形式,三种常见的拖尾如下:系统是好的,柱子是好的,为什么会产生后拖?我们还是回顾一下,色谱分离的一般过程,正常的峰形应该是样品在色谱柱上均匀前移的情况下得到的,浓度分布在整个通过色谱柱柱床的过程中任何时候都呈正态分布,如下图所示:色谱分离是一个物理过程,样品分子经过在固定相与流动相之间的多次分配、吸附解吸,由于不同分子与固定相和流动相之间的相互作用力的差异而使它们在色谱柱中的移动速度不同,以此实现分离的目的。
相同色谱条件下,有些化合物容易产生拖尾,有些则不产生拖尾,这说明拖尾的产生跟样品本身的性质是密切相关的,通常非极性和弱极性的化合物能获得良好的峰形,而带有-COOH、-NH2、-NHR、-NR2等极性基团的化合物则比较容易产生拖尾。
可以想象一下,样品分子在分析过程所处的环境,一是流动相,二是固定相,流动相可以自由流动的,均一性比较好,因此可以认为样品分子四周都被相同组成的流动相所包围,其对每个样品分子的相互作用力也是均匀的、对称的,不应该是引起浓度分布发生变化的主要原因。
考虑固定相,固定相中除了C18长链外还有填料键合时残余的硅羟基,由于C18长链是非极性的,其与样品分子的相互作用力也是很微弱的范德华力,而硅羟基则具有一定的极性Si-Oδ-Hδ+,在pH一定的条件下甚至还会发生电离,形成-Si-O-形式的离子态。
Si-Oδ-Hδ+和-Si-O-对于极性化合物之间的作用力则是一种极性的静电作用力,这种作用力比范德华力要强得多,同时,因为硅胶表面键合了C18长链,由于空间位阻作用,样品分子中能接触到残余硅羟基的机会不会很多,只有少部分的分子才能与残余硅羟基产生作用。
色谱峰拖尾的原因

液相色谱峰有拖尾局里是什么本果之阳早格格创做A、峰拖尾1、筛板阻塞(a、反冲色谱柱b、调换进心筛板c、调换色谱柱)2、色谱柱陷落(弥补色谱柱)3、搞扰峰(a、使用更少的色谱柱b、改变震动相大概调换色谱柱)4、震动相PH采用过得(安排PH值.对付于碱性化合物,矮PH值更有好处得到对付称峰)5、样品与挖料表面的凝结面爆收反应(a、加进离子对付试剂大概碱性挥收性建饰剂b、换柱子)B、峰前延1、柱温矮(降下柱温)2、样品溶剂采用不妥当(使用震动相动做样品溶剂)3、样品过载(落矮样品含量)4、色谱柱益坏(睹A1、A2)C、峰分叉1、呵护柱大概分解柱传染图(与下呵护柱再举止分解.如果需要调换呵护柱.如果分解柱阻塞,拆下去荡涤.如果问题仍旧存留,大概是柱子被强死存物量传染,使用适合的复活步伐.如果问题仍旧存留,出心大概被阻塞,调换筛板大概调换色谱柱.)2、样品溶剂不溶于震动相(改变样品溶剂.如果大概采与震动相动做样品溶剂.)D、峰变形1、样品过载(缩小样品载量)E、早出的峰变形1、样品溶剂采用不妥当(a、缩小进样体积b、使用矮极性样品溶剂)F、早出的峰拖尾程度大于早出的峰1、柱中效力(a、安排系统对接(使用更短、内径更小的管路)b、使用小体积的流利池)G、K’减少时,脱尾更宽沉1、两级死存效力,反相模式(a、加进三乙胺(大概碱性样品)b、加进乙酸(大概酸性样品)c、加进盐大概缓冲剂(大概离子化样品)d、调换一维持子)2、两级死存效力,正相模式(a、加进三乙胺(大概碱性样品)b、加进乙酸(大概酸性样品)c、加进火(大概多官能团化合物)d、试用另一种要领)3、两级死存效力,离子对付(加进三乙胺(大概碱性样品))H、酸性大概碱性化合物的峰拖尾1、缓冲分歧适(a、使用浓度50-100mM的缓冲液b、使用Pka等于震动相PH值的缓冲液)I、特殊的峰1、样品中有其余组份(仄常)2、前一次进样的洗脱峰(a、减少运止时间大概梯度斜率b、普及流速)3、空位大概鬼峰(a、查看震动相是可杂洁b、使用震动相动做样品溶剂c、缩小进样体积)J、死存时间动摇1、温控不当(调好柱温) 2、震动相组分变更(预防变更(挥收、反应等))3、色谱柱不仄稳(正在每一次运止之前赋予脚够的时间仄稳色谱柱)K、死存时间不竭变更1、流速变更(沉新设定流速)2、泵中有气泡(从泵中与消气泡)3、震动相采用不妥当(a、调换符合的震动相b、采用符合的混同震动相)L、基线漂移1、柱温动摇,纵然是很小的温度变更皆市引起基线的动摇.常常效率示好检测器、电导检测器、较矮敏捷度的紫中检测器大概其余光电类检测器. (统制好柱子战震动相的温度,正在检测器之前使用热接换器图)2、震动相不匀称,震动相条件变更引起的基线漂移大于温度引导的漂移.(使用HPLC级的溶剂,下杂度的盐战增加剂.震动相正在使用前举止脱气,使用中使用氦气.)3、流利池被传染大概有气体(用甲醇大概其余强极性溶剂浑洗流利池.如有需要,不妨用1M的硝酸.(不要用盐酸))4、检测器出心阻塞,下压制成流利池窗心破裂,爆收噪音基线(与出阻塞物大概调换管子.参照检测器脚册调换流利池窗)5、震动相配比不当大概流速变更(变动配比大概流速,定期查看震动相组成及流速)6、柱仄稳缓,特地是震动相爆收变更时(用中等强度的溶剂举止浑洗,变动震动相时,正在分解前用10-20倍体积的新震动相对付柱子举止浑洗)7、震动相传染、蜕变大概由矮本量溶剂配成(查看震动相的组成.使用下本量的化教试剂及HPLC级的溶剂)8、样品中有强死存的物量(下K’值)以馒头峰样被洗脱出,进而表示出一个逐步降下的基线.(使用呵护柱,如有需要,正在进样之间大概正在分解历程中,定期用强溶剂浑洗柱子)9、使用循环溶剂,然而检测器已安排(沉新设定基线.当检测器能源教范畴爆收变更时,使用新的震动相)10、检测器不设定正在最大吸支波少处.(将波少安排至最大吸支波少处%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%% %%%%%%%%%%%%%%%%HPLC分解中,正在色谱柱仄常,样品敏捷度脚够,分解要领符合,色谱峰正在出峰时间较短的条件下(不包罗梯度),峰型应付于称而尖钝.然而是,正在对付样品相识程度不敷,要领不当,样品处理要领及进样办法分歧理下,会出现百般意念不到的问题,而对付色谱峰易以做出合理的阐明,更加对付于新脚更是如许.色谱单峰指的是明显是共一种物量,然而正在色谱图中出现单峰,而标明含两种物量.那种情况分为四种本果.1 色谱柱如果您分解样品时创制每个色谱峰皆单峰出现(出峰越快,单峰的大概性会缩小),更加采与简单杂物量时,不妨肯定色谱柱出问题-呵护柱传染大概柱头牢固相变净大概流逝,大概颗粒汇集正在色谱柱的出心筛板上.如果进样量少,本去色谱柱仄常,色谱峰的形状多为一大峰戴一小峰,纷歧定拖尾,那普遍应是柱头受堵,将色谱柱反过去接,用震动相浑洗大概酸洗大概其余溶剂,将堵正在柱头的残留物冲掉,再反过去,普遍情况下便止了.天然不反冲,正冲偶尔也会仄常的.如果峰拖尾,单峰强强出进不大,柱头牢固相变净大概流逝大概性更大,那是不妨将进样那头拧启,将微孔滤片超声,柱头刮去一部分挖料,沉新挖上新挖料拧紧,不过那种活,需要一定技能,共时不克不迭老搞那种事,可则用不了频频,色谱柱便会应柱效很矮而报兴.2 溶剂极性及进样量许多HPLC分解者对付此大概不以为然,普遍的hplc的书籍籍战文件皆不会提到那圆里的实量,而那确是单峰爆收的一个很要害的本果.暂时hplc分解多为反相色谱,震动相多为甲醇、乙腈、火,加百般增加剂以革新分散本能.样品普遍用与震动相相溶的溶剂溶解.最好的溶解要领是用震动相溶解,然而是很多情况是纷歧致的.当用溶剂极性强度大的试剂,如杂甲醇、杂乙腈,杂乙醇,而分解体系中以火为主,样品进样量大,如定量管为20ul,此条件下实足不妨肯定,简单的杂物量出单峰,第两峰比第一峰小(屡屡皆不太一般),且拖尾,死存时间会提前(相对付进样量少而止),将进样量缩小一半以上,峰型将形成仄常.那是样品的溶剂与震动相极性出进太大,而震动相去不迭将其密释达到仄稳制成的.那是上头提到进样量制成单峰的一个本果,另一个本果是,进样量纷歧定大,然而千万于量很大,色谱图上的单峰紧靠正在所有,基础上齐下,不拖尾(如果出峰很快,也大概是色谱柱问题).将样品密释再进样便不妨了,那是由于进样量过大,色谱柱过载制成的.如果样品溶剂与震动相不溶大概互溶性短好,当样品注进色谱分散体系中,会析出并接着再溶解的大概,那时相称于两次进样,也非常简单爆收单峰..3 样品的个性及pH值有些样品由于其化教结构的个性,存留互变同构局里,而那种互变同构体无法分启,而是以一个动向仄稳存留.正在色谱分解时,正在一个特定的条件下,一种物量将出现单峰,以至三峰.那时普遍单峰靠的很近,基础齐下,不拖尾,条件稍一变更,更加pH,单峰局里将消得,如白霉素等.有的样品紫中的色谱图上瞅不到单峰,然而正在LC-MS下,用量谱检测器,其量谱的总离子流图上较明隐. pH对付峰形的效率正在缓冲液震动相仄稳历程中非常明隐,当连绝进样时,受pH的连绝变更效率会时常逢到那种单峰的情况.其余,正在样品分解时,震动相的pH尽管近离被分解物的等电面,可则也简单引起单峰的爆收.正在用离子对付试剂分解时,采用短好条件也会简单引起单峰的爆收.4 仪器参数记录的参数普遍皆内定的,不必建改,然而GC 战HPLC的参数是不实足普遍的,比圆C-R3A数据记录仪上的普遍记录时间隔断GC为2ms,HPLC 为5ms,如果记录隔断时间支缩,一个峰将形成两个峰大概更多.另有一种情况是,参比波少树立过得,比圆树立分解波少254nm,参比波少400nm,那个对付于大普遍化合物大概出效率.然而是如果被测化合物,正在400nm处也有强的紫中吸支,比254nm 更下.那样其出峰时,由于背景的抵扣效率,本本一个峰会形成对付称的两个峰,而且如果将两峰之间的峰谷反转180度,恰好是一个完备的峰.那时要将参比波少树立更大,大概者与消.。
色谱峰拖尾的原因

液相色谱峰有拖尾现象是什么原因A、峰拖尾1、筛板阻塞(a、反冲色谱柱b、更换进口筛板c、更换色谱柱)2、色谱柱塌陷(填充色谱柱)3、干扰峰(a、使用更长的色谱柱b、改变流动相或更换色谱柱)4、流动相PH选择错误(调整PH值。
对于碱性化合物,低PH值更有利于得到对称峰)5、样品与填料表面的溶化点发生反应(a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂b、换柱子)B、峰前延1、柱温低(升高柱温)2、样品溶剂选择不恰当(使用流动相作为样品溶剂)3、样品过载(降低样品含量)4、色谱柱损坏(见A1、A2)C、峰分叉1、保护柱或分析柱污染图(取下保护柱再进行分析。
如果必要更换保护柱。
如果分析柱阻塞,拆下来清洗。
如果问题仍然存在,可能是柱子被强保留物质污染,运用适当的再生措施。
如果问题仍然存在,入口可能被阻塞,更换筛板或更换色谱柱。
)2、样品溶剂不溶于流动相(改变样品溶剂。
如果可能采取流动相作为样品溶剂。
)D、峰变形1、样品过载(减少样品载量)E、早出的峰变形1、样品溶剂选择不恰当(a、减少进样体积b、运用低极性样品溶剂)F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰1、柱外效应(a、调整系统连接(使用更短、内径更小的管路)b、使用小体积的流通池)G、K’增加时,脱尾更严重1、二级保留效应,反相模式(a、加入三乙胺(或碱性样品)b、加入乙酸(或酸性样品)c、加入盐或缓冲剂(或离子化样品)d、更换一支柱子)2、二级保留效应,正相模式(a、加入三乙胺(或碱性样品)b、加入乙酸(或酸性样品)c、加入水(或多官能团化合物)d、试用另一种方法)3、二级保留效应,离子对(加入三乙胺(或碱性样品))H、酸性或碱性化合物的峰拖尾1、缓冲不合适(a、使用浓度50-100mM的缓冲液b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液)I、额外的峰1、样品中有其他组份(正常)2、前一次进样的洗脱峰(a、增加运行时间或梯度斜率b、提高流速)3、空位或鬼峰(a、检查流动相是否纯净b、使用流动相作为样品溶剂c、减少进样体积)J、保留时间波动1、温控不当(调好柱温)2、流动相组分变化(防止变化(蒸发、反应等))3、色谱柱没有平衡(在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱) K、保留时间不断变化1、流速变化(重新设定流速)2、泵中有气泡(从泵中除去气泡)3、流动相选择不恰当(a、更换合适的流动相b、选择合适的混合流动相)L、基线漂移1、柱温波动,即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。
色谱峰拖尾的原因及处理方法

色谱峰拖尾的原因及处理方法色谱峰拖尾那可真让人头疼!为啥会拖尾呢?可能是色谱柱受损啦,就像你的宝贝手机屏幕被划了一道,那肯定不好使了呀!也可能是样品过载,哎呀妈呀,这就好比小货车硬要装大卡车的货,能不垮嘛!还可能是流动相不合适,这就跟你穿了不合脚的鞋子去跑步,能舒服嘛!
那咋处理呢?如果是色谱柱受损,赶紧换一根新的呗!要是样品过载,那就减少进样量呀,可别贪心哦!流动相不合适的话,就调整流动相的组成和比例呗,这就跟做饭调味一样,得恰到好处。
这过程中安全性很重要哦!可别不小心碰到那些有毒的试剂,那可不得了。
稳定性也得注意,别一会儿这样一会儿那样,得有个准头。
这在很多场景都能用得上呢!比如药物分析,你想想,要是药物分析不准确,那多吓人呀!优势嘛,能让你的分析更准确,就像有了一双火眼金睛,啥问题都能看出来。
我给你说个实际案例哈,有一次在实验室,大家就遇到了色谱峰拖尾的问题,后来一检查,原来是色谱柱不行了,换了一根新的,嘿,立马就好了。
这效果,杠杠的!
色谱峰拖尾就得赶紧找原因解决,这样才能让我们的实验更顺利,分析更准确。
咱可不能让这小问题影响了大事。
液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因

气相色谱峰拖尾、响应低甚至不出峰的主要原因A) 系统污染、惰性下降系统惰性不好对活性组分峰形及响应的影响尤为明显。
建议选用惰性优异的低流失色谱柱和色谱耗件,如去活的衬管。
如果系统已经被污染,应及时对进样口和检测器进行维护。
恢复被污染色谱柱的方法主要有:将进样口端截去0.5~1 米,根据样品来源做进一步的判断,如果是半挥发污染物,还可以进一步考虑对色谱柱进行老化。
污染严重时可截去更长或用溶剂彻底清洗色谱柱(必需是交联键合固定相)B) 色谱柱安装不正确或系统其他部位存在死体积毛细管柱在进样口和检测器的安装位置不当将影响峰形,请严格按照仪器的使用说明正确安装色谱柱。
其他与毛细管柱相连接的部位也应注意降低死体积。
C) 系统漏气需定期检查系统气密性、更换进样口备件。
使用非纯石墨密封圈时,注意安装后的几次温度升降之后追加一次拧紧。
D) 方法条件不佳对于低挥发性样品,需注意提高进样口和/或检测器、色谱柱、传输管线等处的温度,防止冷凝现象。
有些样品在某些检测器的响应确实不高(甚至没有响应),如果样品不出峰,又没有参考响应值,应加大进样量确认出峰位置,并利用标样考查样品的响应值。
E) 其他可能导致峰拖尾的原因:²不分流模式下,分流放空阀开启过晚(通常应在0.5~1.0 分钟之间)²手动进样速度过慢²检测器尾吹气流量不足² PLOT 色谱柱样品过载²组分共流出²含磷化合物在NPD 白色铷珠上易拖尾,建议使用黑色铷珠。
可以提高传质速率,提高柱效,但柱温过高又会使组分间分离度减小。
采用较低的柱温,减少固定相的用量和适当增加载气的流速,可在短时间内获得良好的分离效果;2汽化温度应以能使试样迅速汽化而不产生分解为准,通常比柱温高20-70℃,柱温应比试样中各组分的平均沸点低20-30℃, 对于沸点范围较宽的试样,宜采用程序升温;增加柱长会提高分离度,但分析时间增长,因此,一般在满足一定分离度的条件下尽可能用短柱子;进样应在1秒以内完成,以减小峰变宽;3点火氢焰气相色谱仪,开机时需要点火,有时因各种原因致使熄火后,也需要点火。
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在体积排阻色谱(SEC)中,色谱峰展宽及拖尾可能由以下原因导致:
1.填料表面惰性不好:如果填料表面有残留硅羟基或金属杂质,它们可能与
待测化合物发生二次作用,导致拖尾。
2.样品过载:如果进样体积过大或样品浓度过高,可能会在柱上形成堆积,
导致峰形变差、柱效下降。
此时可以尝试减小进样体积或稀释样品。
3.样品溶剂过强:如果样品溶剂强度高于流动相洗脱强度,可能会对色谱产
生不良影响。
此时可以使用流动相溶解样品,或使用比初始比例流动相洗脱能力更弱的溶剂溶解样品。
4.组分共流出:如果一个小峰包含在大峰的后面,需要对色谱条件进行优化,
例如调整洗脱液的比例和组成,以改善峰分离效果。
5.流动相pH值在样品pKa附近:当流动相pH值在样品pKa附近时,样品
解离平衡不充分,容易出现前沿峰或拖尾峰,所以流动相pH值应尽量选在样品pKa±1.5以外。
以上是可能会致使体积排阻色谱(SEC)出现峰展宽及拖尾的原因,可以根据实际情况判断并进行调整。