果蝇幼虫唾液腺简易分离法
果蝇幼虫唾液腺观察
果蝇幼虫唾液腺染色体标本的制备与观察【实验目的】练习分离果蝇幼虫唾腺的技术，学习唾腺染色体的制片方法。
观察了解果蝇唾腺学特征。
【实验原理】本世纪初，D Kostoff 用压片法首先在D Melanogaster果蝇幼虫的唾液腺细胞核中发现了特别巨大的染色体——唾液腺染色体。
事实上，双翅目昆虫（如摇蚊、果蝇等）的幼虫期都具有很大的唾腺细胞，其中的染色体就是巨大的唾液腺染色体。
这些巨大的唾液腺染色体具有许多重要特征，为遗传学研究的许多方面，如染色体结构、化学组成、基因差别表达等提供了独特的研究材料。
双翅目昆虫的整个消化道细胞发育到一定阶段之后就不再进行有丝分裂，而停止在分裂间期。
但随着幼虫整体器官以及这些细胞本身体积的增大，细胞核中的染色体，尤其是唾液腺染色体仍不断地进行自我复制而不分开，经过许多次的复制形成约1000～4000拷贝的染色体丝，合起来达5μm宽， 400μm长，比普通中期相染色体大得多（约100～150倍），所以又称为多线染色体和巨大染色体。
唾液腺染色体形成的最初，其同源染色体即处于紧密配对状态，这种状态称为“体细胞联会”。
在以后不断的复制中仍不分开，由此成千上万条核蛋白纤维丝合在一起，紧密盘绕。
所以配对的染色体只呈现单倍数。
黑腹果蝇的染色体数为2n=2×4，其中第II、第III染色体为中部着丝粒染色体，第IV和第I（X染色体）染色体为端着丝粒染色体（图21-1）。
而唾液腺染色体形成时，染色体着丝粒和近着丝粒的异染色质区聚于一起表成一染色中心，所以在光学显微镜下可见从染色体中心处伸出6条配对的染色体臂，其5条为长臂，1条为紧靠染色中心的很短的臂（图21-2）。
由于唾腺细胞在果蝇幼虫时期一直处于细胞分裂的间期状态，所以每条核蛋白纤维丝都处于伸展状态，因而不同于一般有丝分裂中期高度螺旋化的染色体。
唾腺染色体经染色后，呈现深浅不同，疏密各异的横纹。
这些横纹的数目、位置、宽窄及排列顺序都具有种的特异性。
果蝇唾腺染色体
果蝇是双翅目昆虫，幼虫期具有很大的唾腺细胞，其 中的染色体是巨大的唾液腺染色体 唾液腺染色体不断地进行自我复制而不分开，经过许 多次的复制形成约1000～4000拷贝的染色体丝，合起 来达5nm宽，400nm长，比普通中期相染色体大得多 （约100～150倍），所以又称为多线染色体 唾液腺染色体具有许多重要特征，为遗传学研究的许 多方面，如染色体结构、化学组成、基因差别表达等 提供了独特的研究材料
一支解剖针按住 幼虫末端1/3处固 定，另一支解剖 针按住幼虫头部 拉开其身体
找到唾液腺 剥离其脂肪
改良苯酚品红 染5~10分 压片 显微镜下观察
剥离唾腺方法：
在一干净的载玻片上滴一滴生理盐水，选择行动迟缓、 肥大、爬在瓶壁上即将化蛹的三龄幼虫，或者选择经低温 处理的果蝇三龄幼虫置于载玻片上。 每只手各持一个解剖针，在解剖镜下进行操作。果蝇 的唾腺位于幼虫体前1/3-1/4处，左手持解剖针按压住虫体 后端三分之一的部位，固定幼虫，右手持解剖针扎住幼虫 头部口器部位，适当用力向右拉唾腺腺体随之而出。 唾腺是一对透明的棒状腺体，外有白色的脂肪组织 （不透明）。去除幼虫其它组织部分，并把唾腺周围的白 色脂肪剥离干净。
果蝇三龄幼虫唾腺示意图
脂肪
唾液腺
唾液腺
唾腺
脂肪
脂肪
脂肪
唾腺
果蝇唾腺剥离示意图
果蝇唾腺染色体(模式)
果蝇唾腺染色体（显微图象）
果蝇唾腺染色体横纹和疏松区
作业：
绘一个你所看到的唾腺染色体图。 交一张唾腺染色体玻片留做永久封片.
二、实验目的
1. 练习分离果蝇幼虫唾腺的技术，学习唾腺染
色体的制片方法
2. 观察了解果蝇唾腺染色体的形态学及传学
快速获得果蝇唾腺体的技巧和方法
快速获得果蝇唾腺体的技巧和方法周志华（福建师范大学生命科学学院，福建福州350108）摘要：解剖了三龄幼虫，获取唾腺体是果蝇唾腺染色体制片和观察的第一步。
在长期的实验准备中，虽提供大量的三龄幼虫，但在解剖幼虫时因切入点不精确，且操作工具不当，最后较难得到理想的唾腺体，影响后期唾腺的染色体制片和观察。
经过大量的实验，对解剖幼虫时的切入点和操作工具以及操作角度进行探索和改进。
最终证明，改进后的方法不但能够节约时间，节省材料，而且能够快速地获得完整的唾腺体，大大提高染色体制片和观察的效果。
关键词：果蝇唾腺；解剖技巧；遗传学实验中图分类号Q963文献标识码A文章编号1007-7731（2017）21-0039-03Skills and Methods of Quickly Getting Drosophila melanogaster Salivary GlandsZhou Zhihua（College of Life Sciences，Fujian Normal University，Fuzhou350108，China）Abstract：Anatomy of third-instar larvae，obtaining salivary glands，is the first step in the preparation and observa⁃tion of the Drosophila salivary gland chromosomes.In the long-term experimental preparation，although a large num⁃ber of third-instar larvae are provided，inaccuracies in the dissection of larvae and inaccurate handling tools make it harder to obtain ideal salivary glands，chromosomal preparations that affect later salivary glands and observed.After a large number of experiments，the larvae dissecting points and operating tools and operating point of exploration and improvement.Ultimately，the improved method not only saves time，saves materials，but also obtains the complete sal⁃ivary gland quickly and greatly improves the effect of chromosome preparation and observation.Key words：Salivary gland；Anatomy techniques；Genetics experiment双翅目昆虫果蝇饲养条件简单，费用低廉，且繁殖能力极强。
【遗传学实验】果蝇唾液腺制片
果蝇唾腺染色体的特点
巨大性 伸展性
Hale Waihona Puke 体联会横纹的线性排列可以看作与 基因的线性排列是等同的
puff结构:基因在活跃地转录RNA
材料、器具和药品
材料： 大果蝇三龄幼虫
用具和药品： 解剖镜、显微镜、镊子、解剖针、载玻 片、盖玻片、滤纸、洒精灯、1%醋酸 洋红、生理盐水、1MHCl、蒸馏水
经过两次蜕皮到三龄幼虫，体长可达4-5毫米
唾腺
3 ．剥取唾腺：将三龄幼虫放在滴有一滴生理盐 水的载玻片上，把载玻片置于解剖镜下，两手各 持一支解剖针，左手的解剖针压住幼虫后端 1/3 处，固定幼虫。右手的解剖针按住幼虫头部，用 力向后拉，把头部从身体拉开，可看到一对透明 的棒状腺体，即唾腺。将唾腺周围的白色脂肪剥 离干净，去除玻片上的其余组织。
4．在腺体上滴一滴1M HCl，解离10分钟，轻轻用吸 水纸将HC l吸去，再滴一滴生理盐水洗一下，用吸 水纸轻轻吸去。（注意：不要将腺体吸去） 5．染色：在腺体上加2滴染液，染色15分钟。 6．压片法制备玻片标本，要求将唾腺细胞核压破，染 色体伸展开而不破碎为好。
7．镜检：先在低倍镜下找到典型的唾腺染色体，再用 高倍镜观察其特点。
实验步骤：
1．幼虫的培养：对用来观察唾腺的果蝇幼虫， 要给予较好的营养条件，培养瓶内幼虫不应 过多，此外应放在较低的温度下培养（ 1618℃较好），唾腺应 取自发育充足、肥大的 三龄幼虫。 2．唾腺的观察：唾体位于食道两侧，两侧腺 体各延伸出一条细管，向前汇合成三叉形唾 腺管入口腔，位于幼虫体前1/3-1/4处。
实验结果：
绘制果蝇唾腺染色体图
果蝇唾腺染色体制片及观察
目的和要求： 1、练习取出果蝇等幼虫唾腺的技 术和制作唾腺染色体标本的方法； 2、观察多线染色体的特征。
果蝇唾腺教学
脂肪体
解剖针
解剖针
果蝇唾腺教学
第11页
3、腺体解离：
剥离脂肪体及其它杂物，分离出纯净唾腺 ，用吸水纸小心吸去生理盐水。加1滴1N HCl，浸2—3分钟，使组织疏松，方便压片时细胞分散，染色体散开。
果蝇唾腺教学
第12页
4、染色：
用吸水纸吸去盐酸，加1滴蒸馏水轻轻冲洗后吸干，重复3～4次，洗净残留盐酸。加2滴石炭酸品红染液，染色10—20分钟（此过程应保持腺体一直处于染液浸泡中）。
果蝇唾腺教学
果蝇唾腺教学
第1页
一、试验目标 二、试验材料 三、试验原理 四、试验用具药品 五、试验步骤
果蝇唾腺教学
第2页
一、试验目标
了解果蝇唾液腺染色体形态学及遗传学特征；学习分离果蝇幼虫唾液腺技术
果蝇唾腺教学
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二、试验材料
图1 果蝇生活史1.卵 2.一龄幼虫 3. 二龄幼虫 4.三龄幼虫 5.蛹 6.成虫
野生型果蝇三龄幼虫
果蝇唾腺教学
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果蝇不一样生活周期形态观察
蛹
果蝇唾腺教学
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三、试验原理
果蝇唾腺染色体特点：巨大，是多线染色体； 正常：间期DNA复制 两条染色单体 着丝点裂开 子染色体 核分裂 胞质分裂 果蝇：有丝分裂停顿在分裂间期，DNA不停自我复制，着丝点不 裂开同源染色体紧密配对：体细胞联会，所以染色体只展现单倍数； 形成染色中心，从染色体中心处伸出5条长臂，1条短臂；染色后，出现一系列宽窄不一样、染色深浅不一横纹；
果蝇唾腺教学
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五、试验步骤
1、选取幼虫；2、腺体剖取 ；3、腺体解离 ；4、染色；5、压片；6、观察；
果蝇唾腺教学
滴加一滴生理盐水，观察幼虫结构：具一钝尾和带黑色口器尖头端
果蝇唾液腺
果蝇唾腺染色体制片技术PB12207007 王思雨一、背景知识1、实验对象介绍：黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）昆虫纲，双翅目，果蝇科，果蝇属。
2、选择原因：①饲养容易。
在常温下，以玉米粉等作饲料就可以生长，繁殖。
②生长迅速,产量大。
十二天左右就可完成一个世代，每个受精的雌蝇可产卵400～500个，因此在短时间内就可获得大量的子代，便于遗传学分析。
（25℃下，卵→幼虫5天，幼虫→成虫4天）③染色体数少。
只有4对。
④唾腺染色体制作容易。
横纹清晰，是细胞学观察的好材料。
⑤突变性状多，而且多数是形态突变，便于观察。
饲养简便：形体小，食物简单⑥实验处理方便，易于重复实验，便于观察分析结果。
3、成虫雌雄的鉴别4、果蝇染色体模式图染色体的带间带异染色质染色中心胀泡5、实验实例6、实验目的和要求①练习分离果蝇幼虫唾腺的技术，掌握唾腺染色体的制片方法。
②观察了解果蝇唾腺的形态学及遗传学特征。
③认识黑腹果蝇的形态学特征；了解果蝇在遗传学研究中的突出贡献。
7、唾液腺的分离效果图8、道德9、注意事项①染色十分钟时最好盖上盖玻片②敲片时染色液稍多些，或用物垫着盖玻片，轻轻敲打③剥离好唾液腺请让老师帮助确定④在四倍物镜下解剖果蝇⑤在前一个虫子没确定失败之前不要进行下一个虫子的解剖⑥晚七点之前必须全部离开教室10、实验结果果蝇唾液腺分离（显微镜下直接观察4*10）果蝇唾液腺分离（显微镜下直接观察4*10）果蝇唾液腺染色体压片观察（40*10）果蝇唾液腺染色体压片观察（40*10）果蝇唾液腺染色体压片观察（40*10）果蝇唾液腺染色体压片观察（40*10）11、实验反思实验中遇到的比较大的问题是果蝇唾液腺的分离。
经过体验发现，解剖时的手法比较重要，要分别按压住头部与尾部，使得果蝇幼虫在相应的位置断开，记得滴加清水。
然后认真寻找，要有耐心，因为显微镜下操作与肉眼操作正好相反。
故开始有些不喜欢，可以先用一个解剖针在肉眼下确定大致位置，然后在显微镜下缓慢移动。
实验二、果蝇唾液腺染色体的制备与观察
实验二：果蝇唾液腺染色体的制备与观察一、实验目的1、练习果蝇唾液腺的分离方法2、掌握唾液腺染色体的制片技术3、观察了解果蝇唾液腺染色体的形态特征二、实验原理1、双翅目昆虫（果蝇）幼虫期的唾液腺细胞很大，其中的染色体称唾液腺染色体，相当于一般普通染色体的100－150倍，又称巨大染色体。
2、在幼虫发育过程中，唾液腺染色体仍进行复制，但细胞只生长不分裂，从而产生多线染色体。
多线染色体经染色后，出现深浅不一、宽窄不同的横纹，这些横纹的数目和位置是恒定的，代表着果蝇等昆虫的种的特征。
如果染色体缺失、重复、倒位、易位等结构变异时，很容易在唾腺染色体上识别出来。
3、多线染色体的特征：a 巨大；b体细胞配对，所以染色体只有半数（n=4）；c 各染色体的异染色质多份额着丝粒部分相互靠拢形成染色中心；d 横纹有深浅、疏密的不同，各自相应排列，这意味着基因的排列。
三、实验材料和用品实验材料：黑腹果蝇的三龄幼虫（选择行动迟缓、肥大、爬上管壁、就要化蛹了的三龄幼虫观察最佳）实验用品：显微镜、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、滤纸。
0.9%生理盐水、1％醋酸洋红。
四、实验步骤1、载玻片置于显微镜下，上面滴加一滴生理盐水，放上果蝇幼虫（有一钝尾和带黑色口器的尖头，可根据其在盐水中爬行方向确定头部），两手各拿一枚解剖针，左手解剖针按住幼虫的后端1/3, 右手解剖针按住头部(尽量靠近口器)用力后拉，把头部从身体拉出，唾液腺随之而出。
（一对双叉形透明的囊状腺体）。
2、除去幼虫其他组织部分，把唾液腺周围脂肪组织（不透明）剥离干净，然后将多余生理盐水吸走，滴一滴醋酸洋红在载玻片上。
3、染色10 分钟，盖上盖玻片，用滤纸轻压一下吸去多余的染色液，然后平放在桌子上，用大拇指适当均匀用力压住，并横向揉几次（勿使盖玻片移动，用力和揉动是一个方向，不能来回揉！）。
4、显微镜观察，先在低倍镜下观察，找到分散好的染色体图像，再高倍镜观察。
用显微镜可以看到四对染色体，第一对染色体（X-）组成一个长条，第二和第三对各自组成了具有左右两臂的染色体对，它们都以中部的着丝区聚集，而第四对染色体很小，分布在着丝区呈点状或盘状。
实验五：果蝇唾液腺实验
实验五果蝇唾液腺染色体的观察及制备一、目的1．掌握剖离果蝇幼虫唾液腺的技术。
2．掌握制作果蝇唾液腺染色体玻片标本的方法。
3．观察果蝇唾液腺染色体的形态特征。
4.了解体细胞染色体联会现象。
二、原理1.双翅目昆虫（摇蚊、果蝇等）幼虫期的唾液腺细胞巨大，其中的染色体称为唾液染色体（salivary chromosome）。
这种染色体比普通染色体大的多，宽约5μm,长约400μm，相当于普通染色体的100～150倍，因而又称为巨型染色体。
唾液腺染色体经过多次复制而不分开，大约有1 000～4 000根染色体丝的拷贝，所以又称多线染色体（polytene chromosome）。
多线染色体染色后，出现深浅不同、疏密各别的横纹，这些横纹的数目和位置往往是恒定的，代表着果蝇等昆虫的很多特征。
例如染色体有缺失、重复、到位、易位等，很容易在唾液腺染色体上识别。
2.黑复果蝇的唾液腺染色体是2n=2*4=8(图一)，但因体细胞配对，又因短小的第4染色体和X染色体的着丝粒在端部所以染色体的一端在染色中心上，看上去，各自只形成一条线状和点状染色体。
只有第2和第3染色体的着丝粒在中央，它们从染色中心以V字形向外伸出（2L，2R，3L，3R），因此共有6条（图二）图一图二在显微镜下，短小的第4染色体有时不易观察到，所以最容易识别的是第5（图三）雄果蝇的Y染色体几乎包含在染色中心里，因为是异染色质，看起来很淡。
唾液染色体上的横纹宽窄、浓淡是一定的，但在果蝇的特定发育时期，它们会出现的膨胀，这称为疏松区（puff），目前人们认为这是这部分基因被激活的标志。
图三3.唾液腺染色体的另一特点是体细胞中同源染色体处于紧密配对状态，这种状态称为“体细胞联会”。
在以后不断的复制中仍不分开，由此成千上万条核蛋白纤维丝唾液腺染色体（salivary gland chromosome）是一类存在于双翅目昆虫，如果结合在一起，紧密盘绕。
所以细胞中染色体只呈单倍数。
果蝇唾液腺染色体制片与观察
三、实验材料
野生果蝇
四、实验步骤
1、剥离果蝇幼虫的唾液腺
取一洁净的载玻片，滴上1滴0.75%生理盐水。在瓶壁 上挑选肥大的充分发育的三龄幼虫放在的生理盐水中，唾 液腺位于幼虫食道的两侧，长度约占身体总长的1/3—— 1/4左右。
解剖时把载玻片放在解剖镜或放大镜下,一手用解剖针压住头部 (外型似一个黑色小点)，压住的地方越小越好，同时，用镊子夹住幼 虫身体1/2处， 轻轻地将幼虫的头部自身体拉开。唾液腺随同内脏一 起拉出。如果头部拉断,腺体没有拉出,可以用解剖针从镊子附近的腹 部缓缓地向头端挤压,也可压出唾液腺。然后在镜下细心分离，理出双 叉形半透明的囊状腺体即为唾液腺，在生理盐水中无论怎样触动它都 不会发生形状改变。
同源染色体的两条臂紧密结合，自由伸展。因 此唾液腺细胞染色体数看不出2n的染色体数， 只能观察到从染色中心向空间伸展的染色体臂。 与其它细胞染色体相比的另一个特点是，唾液 腺染色体上有深浅不同、宽窄不一的带纹，这 些带纹的数目和位置是恒定的，代表着种的特 征和一些基因的位置。
由于这些带纹的存在，染色体上发生缺失、重 复、倒位、易位等很容易在唾液腺染色体上识 别出来。
在显微镜下观察，由单层细胞构成，细胞形状不规则，细胞轮廓 清晰，细胞大，细胞核也大，甚至可以看清细胞核是由染色体卷缩在 一起形成的。唾液腺拉出后，剔除腺体周围乳白色的脂肪组织和身体 的残留部分，只留唾液腺在载玻片上。
2、解离 用滤纸条吸净唾液腺周围的其它物质，然后将唾 液腺放入1N HCl，解离2—3分钟，以松软组织利于 细胞破裂，使染色体散开。 3、水洗 解离后的唾液腺用蒸馏水洗3—4次（或0.4%的 生理盐水），水洗时要注意不要把唾液腺弄丢，水洗 要彻底，目的是洗去盐酸，以免影响染色效果。另外 水洗过程也是细胞低渗过程，使唾液腺细胞膨胀。
果蝇唾腺染色体标本的制备与观察
果蝇唾腺染色体标本的制备与观察摘要本次实验以果蝇三龄幼虫唾腺为实验材料，为掌握果蝇三龄幼虫唾腺的剖离技术、掌握唾腺染色体标本的制备方法，并且为对唾腺染色体的形态结构特征进行了观察研究。
实验过程中取果蝇三龄幼虫唾腺进行装片制作，并且于显微镜下观察。
由于在幼虫消化道或消化腺中存在大体积的多线染色体，并且腺体易剥离，故为实验材料。
理想状况下应为唾腺染色体从染色体中心向四周放射状地伸出5长1短的6条臂，但是在实际操作中很难实现分散均匀。
所以实验最终得到的染色体多为臂与臂相互纠缠重叠或未伸展完全，除染色中心，可较容易观察到横纹结构。
1.引言染色体（Chromosome）由脱氧核糖核酸、蛋白质和少量核糖核酸组成的线状或棒状物，是生物主要遗传物质的载体。
因是细胞中可被碱性染料着色的物质，故名。
其形态和数目具有种系的特性，在细胞间期核中，以染色质丝形式存在，在细胞分裂时，染色质丝经过螺旋化、折叠、包装成为染色体，为显微镜下可见的具有不同形状的小体。
染色体的发现历程：早在1883年，鲁克斯（W·Roux）就观察到细胞核内能被染色的丝状体。
1888年，德国人沃尔德耶（W·Waldeyer）称这种丝状体为“染色体”（英语：chromosome；希腊语：chroma=颜色，soma=体），意即可染色的小体，并猜测染色体与遗传有关。
1902年，博韦里（T·Boveri）和萨顿（W·S·Sutton）指出，染色体在细胞分裂中的行为与孟德尔的遗传因子平行：两者在体细胞中都成对存在，而在生殖细胞中则是成单的；成对的染色体或遗传因子在细胞减数分裂时彼此分离，进入不同的子细胞中，不同对的染色体或遗传因子可以自由组合。
因而，博韦里和萨顿认为，染色体很可能是遗传因子的载体。
染色体研究通常面临两个困难：一是染色体很小，二是除极少数动植物，如玉米粗线期的染色体上具有染色粒这样的结构可以作为识别或定位的标志外，大多数生物的染色体都没有标志，由此提出了多线染色体的概念。
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果蝇幼虫唾液腺简易分离法
1.准备工具：显微镜、显微镜光源、显微钳、显微刀、细胞刮刀、96孔板。
2.培养果蝇，待果蝇卵孵化后，将果蝇幼虫移至培养皿中，用含有适量食物的蛹化培养基进行培养，并放置在摇床上摇晃培养。
3.在培养2~3天后，将幼虫捞出，放在一张准备好的腹部朝上的玻片上。
4.用显微钳夹住幼虫的顶部，轻轻拉起幼虫，将它的腹部伸出来。
5.用显微刀沿幼虫的腹部割开，将唾液腺暴露出来。
6.用细胞刮刀轻轻刮取唾液腺，将唾液腺细胞收集到96孔板中。
7.加入所需的缓冲液或酶解液，进行后续实验。