2018-隐球菌抗原胶体金检测的临床应用
胶体金荚膜多糖抗原检测方法在隐球菌脑膜炎中的诊断价值
作者简介：杨柳（１９８２— ），女，湖北省天门市人，学士学位，主管技师，主要从事检验科工作。 文章编号：１６７１－８６３１（２０１８）１１－０８４４－０３
胶体金荚膜多糖抗原检测方法在隐球菌脑膜炎中的诊断价值
杨顺利
（山西省结核防治中心，太原市第四人民医院，山西 太原 ０３００５３）
摘要 目的：评价胶体金荚膜多糖抗原检测、墨汁染色及真菌培养方法在隐球菌脑膜炎中的诊断价值。方法：选 取 ２０１６年 １月—２０１７年 １２月感染科和 ＩＣＵ住院患者 ５２例，其中单纯隐球菌脑膜炎患者 ２例，人类免疫缺陷疾病 （ＨＩＶ）感染并发隐球菌脑膜炎 ２４例，共 ２６例，非隐球菌脑膜炎患者 ２６例作为对照，比较三种方法的敏感性、准确性 和 特异性。结果：胶体金荚膜多糖抗原检测（简称胶体金）在脑脊液检测中敏感性１００％，准确性９４．２３％，特异性 ８８．４６％；真菌培养敏感性 ９０．９０％，准确性 ９６．１５％，特异性 １００．００％；墨汁染色敏感性 ９５．６５％准确性 ９８．０８％，特异 性 １００．００％。在血清标本中胶体金敏感性 １００．００％，准确性 ９２．３１％，特异性 ８４．６２％；真菌培养敏感性 ７８．２６％，准 确性 ９０．３８％，特异性 １００．００％。结论：隐球菌荚膜多糖抗原检测方法是一种简便快速的新型隐球菌诊断方法，阳性 样品 １∶２０稀释后可显著提高检测的特异性。
［５］ 李波，杨晨曦．储血冰箱、送血箱及血袋消毒效果监 测分析［Ｊ］．职业与健康，２００８，２４（８）：７２０．
［６］ 陈文婷，卢军，沈辛酉，等．三种消毒剂对体检中心物 体表面消毒 效 果 与 使 用 成 本 的 比 较 研 究 ［Ｊ］．护 理 学杂志，２０１５，３０（３）：３５－３７． 收稿日期：２０１８－０５－０３ （本文编辑：张红）
兔肺隐球菌感染模型制作及荚膜多糖胶体金免疫层析法的诊断价值
㊃论 著㊃D O I 10 3760 c m a ji s s n 1673-436X 2018 10 002作者单位:350009福建医科大学附属福州市第一医院呼吸内科(李小华㊁包宇旺㊁林新㊁余天兴㊁徐礼裕)㊁检验科(陈文㊁方跃华㊁蔡立志);350025福州,南京军区福州总医院呼吸内科(赖国祥);350005福州,福建医科大学附属第一医院高血压研究所(许昌声);350001福州,福建省立医院微生物实验室(胡辛兰)通信作者:徐礼裕,E m a i l l a n g z h o n gx u @163 c o m 兔肺隐球菌感染模型制作及荚膜多糖胶体金免疫层析法的诊断价值李小华 赖国祥 许昌声 包宇旺 林新 陈文 方跃华 蔡立志余天兴 胡辛兰 徐礼裕ʌ摘要ɔ 目的 探讨兔肺隐球菌感染模型制作方法及隐球菌荚膜多糖(C r a g )胶体金免疫层析法(L F A )对肺隐球菌感染的诊断价值㊂方法 将36只新西兰大白兔随机分为免疫抑制组20只,免疫正常组10只和对照组6只㊂采用气管穿刺法对免疫抑制组及免疫正常组进行隐球菌菌种接种,对照组气管内注射生理盐水,免疫抑制组于实验第1~5天每日静脉注射阿糖胞苷,之后隔日1次维持免疫抑制状态;第4日起,每日1次万古霉素㊁头孢他定静脉注射,隔日1次庆大霉素静脉注射,预防细菌感染㊂免疫正常组及对照组未注射免疫抑制剂及抗生素㊂接种1周后抽取静脉血行C r a g LF A ㊁1-3-β-D -葡聚糖检测(G 试验)㊁半乳甘露聚糖(GM 试验),并行胸部C T 扫描,之后处死取肺灌洗液行隐球菌荚膜抗原胶体金试验㊁肺组织进行病原菌培养㊁肺组织病理检查㊂结果 胸部C T 检查免疫抑制组阳性率75%(15/20),免疫正常组阳性率20%(2/10),而且免疫抑制组出现磨玻璃影及斑片影㊁血管支气管束增粗㊁结节等多种表现,免疫正常组主要表现为结节影;隐球菌培养免疫抑制组阳性率100%(20/20),免疫正常组阳性率30%(3/10);病理检查免疫抑制组阳性率80%(16/20),免疫正常组阳性率30%(3/10);空白对照组6只兔子全部检查均阴性㊂免疫抑制组新型隐球菌组模型建立成功率为80 00%(16/20),免疫正常组的成功率为30 00%(3/10),两组差异有统计学意义(P <0 05);血清C r a g L F A 敏感度为89 47%,特异度为100%;灌洗液C r a g L F A 敏感度为100%,特异度为82 35%㊂G 试验及GM 试验均为阴性㊂结论 免疫功能抑制宿主更容易感染肺隐球菌㊂血清及肺泡灌洗液C r a g LF A 对诊断肺隐球菌病均有较高的应用价值,特别是两者联合应用时㊂G 试验㊁GM 试验在肺隐球菌感染中多为阴性㊂ʌ关键词ɔ 隐球菌;肺隐球菌病;动物模型;隐球菌荚膜多糖胶体金免疫层析法;G 试验;GM 试验基金项目:福建省医学创新基金(2014-C X -33);福建省自然科学基金(2015J 01497);福州市临床重点专科项目[榕卫医(2016)57号]B u i l d i n g o fa na n i m a l m o d e lo f p u l m o n a r y c r y p t o c o c c o s i si n f e c t i o na n dd i a g n o s t i cv a l u eo fc r y p t o c o c c a l a n t i g e n l a t e r a l f l o w a s s a y 1-3-b e t a -d -gl u c a nt e s t G l a c t o m a n n a nt e s t L i X i a o h u a * L a i G u o x i a n g X u C h a n g s h e n g B a oY u w a n g L i nx i n C h e n W e n F a n g Y u e h u a C a iL i z h i Y u T i a n x i n gH u X i n l a n X u L i y u *D e p a r t m e n t o f R e s p i r a t o r y M e d i c i n e t h eF u z h o uF i r s tH o s p i t a lA f f i l i a t e do f F u ji a n M e d i c a l U n i v e r s i t yF u z h o u350009 C h i n a C o r r e s p o n d i n g a u t h o r X uL i y u E m a i l l a n g z h o n gx u @163 c o m ʌA b s t r a c t ɔ O b je c t i v e T ob u i l d of a n a n i m a lm o d e l o f p u l m o n a r y c r y p t o c o c c o s i s i n f e c t i o n a n d a s s e s s t h e v a l u eo f t h ec r y p t o c o c c a l a n t ig e n C r a g l a t e r a l f l o wa s s a y L F A 1-3-b e t a -d -g l u c a nt e s t G -t e s t g l a c t o m a n n a n t e s t GM -t e s t t o p u l m o n a r y c r y p t o c o c c o s i s M e th o d s T hi r t y-s i x a d u l tN e wZ e a l a n dw h i t e ㊃527㊃国际呼吸杂志2018年5月第38卷第10期 I n t JR e s p i r ,M a y 2018,V o l .38,N o .10Copyright ©博看网. All Rights Reserved.r a b b i t s w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o t h e t h r e e g r o u p i mm u n o s u p p r e s s e d g r o u p n=20 i mm u n o c o m p e t e n t g r o u p n=10a n d c o n t r o l g r o u p n=6T h e i mm u n o s u p p r e s s e d a n d i mm u n o c o m p e t e n t g r o u p i n o c u l a t e s o l i q u o i d o f c r y p t o c o c c u s n e o f o r m a n s v i a t r a c h e a b y t r a c h e a l i n t u b a t i o n T h e c o n t r o l g r o u p i n j e c t e d t h e s a m e d o s e o f s a l i n e b y t h e s a m ew a y I n t h e i mm u n o s u p p r e s s i v e g r o u p c y t a r a b i n ew a s i n j e c t e d i n t r a v e n o u s l y o n t h e d a y o f1~5t h e nm a i n t a i n e d i mm u n o s u p p r e s s i v e s t a t e o n e t i m e e v e r y o t h e r d a y O n t h e f o u r t hd a y v a n c o m y c i n a n d c e p h a l o s p o r i nw e r e g i v e n o n e t i m e a d a y a n d o n et i m e g e n t a m i c i n w a sa d m i n i s t e r e di n t r a v e n o u s l y e v e r y o t h e rd a y t o p r e v e n tb a c t e r i a li n f e c t i o nI mm u n o c o m p e t e n t g r o u p a n d c o n t r o l g r o u p a n i m a l s d i d n't i n j e c t a n y d r u g T h e n C Ts c a nw a s p e r f o r m e da t o n e w e e ka f t e ri n o c u l a t i o no rb e f o r ee x ec u t i o n W ed r a w ve n o u sb l o o df r o m t h ef r i ng eo fe a rf o r c r y p t o c o c c a l a n t i g e n l a t e r a l f l o wa s s a y G-t e s ta n d GM-t e s tb e f o r eth er a b bi t sk i l l e d G e t t i n g l u n g f r o m r a b b i t s f o r t i s s u e c u l t u r e t i s s u e p a t h o l o g y a n db r o n c h o a l v e o l a r l a v a g e f l u i d B A L F C r y p t o c o c c a l a n t i g e n c o n c e n t r a t i o no fB A L F w a sd e t e c t e db y l a t e r a l f l o wa s s a y R e s u l t s T h e p o s i t i v er a t eo fC h e s tC T w a s 75%1520i ni mm u n o s u p p r e s s e d g r o u p a n d20%210i ni mm u n o c o m p e t e n t g r o u p m e a n w h i l et h e i mm u n o s u p p r e s s e d g r o u p s h o w e d a v a r i e t y o fm a n i f e s t a t i o n s s u c h a s g r o u n d g l a s s a n d p o r p h y r y s h a d o w t h i c k e n i n g o ft h eb r o n c h o b r o n c h i a lb u n d l e s a n dn o d u l e s a n dt h e m a i n p r e s e n c eo fi mm u n o c o m p e t e n t g r o u p w a sn o d u l e s A l l i mm u n o s u p p r e s s e dr a b b i t s'l u n g t i s s u ec u l t u r es h o w e d p r e s e n c eo f c r y p t o c o c c u s n e o f o r m a n w h i l e i mm u n o c o m p e t e n t g r o u p s h o w e d t w o t h r e e o f t e n p r e s e n c e o f c r y p t o c o c c u sn e o f o r m a n P a t h o l o g i c a l c h a n g e sw e r ed e t e c t e d i n80%1620o f i mm u n o s u p p r e s s e d g r o u p a n di n30%310o f i mm u n o c o m p e t e n t g r o u p A c h i e v e m e n t r a t i oo f m o d e l i n g i ni mm u n o s u p p r e s s e d g r o u p w a s80%a n di n i mm u n o c o m p e t e n t g r o u p w a s30% A l l t e s t s i n t h e c o n t r o l g r o u p w e r en e g a t i v e T h e s p e c i f i c i t y o f s e r u m a n dB A L Fo f t h e l a t e r a l f l o wa s s a y w e r e100%a n d8235%r e s p e c t i v e l y m e a n w h i l e t h e s e n s i t i v i t y w e r e 8947%a n d100% I t s h o w e ds i g n i f i c a n t d i f f e r e n c eb e t w e e nt h e t w o g r o u p s A l l o f t h e r e s u l t so fG-t e s t a n d GM-t e s t w e r e n e g a t i v e C o n c l u s i o n s I mm u n o s u p p r e s s e d i n d i v i d u a l s a r e m o r e s u s c e p t i b l e t o p u l m o n a r y c r y p t o c o c c o s i s i n f e c t i o n t h a n t h o s ew h o a r eh e a l t h y i n d i v i d u a l s T h e d i a g n o s t i cv a l u eo f l a t e r a l f l o wa s s a y b o t hi n s e r u m a n d B A L F a r e v e r y h i g h b o t h s e n s i t i v i t y a n d s p e c i f i c i t y i n p u l m o n a r y c r y p t o c o c c o s i s e s p e c i a l l y w h e nt h et w ou s e dt o g e t h e r G-t e s ta n d GM-t e s ta r en e g a t i v ei n p u l m o n a r y c r y p t o c o c c o s i sʌK e y w o r d sɔ C r y p t o c o c c u s P u l m o n a r y c r y p t o c o c c o s i s A n i m a lm o d e l C r y p t o c o c c a l a n t i g e nl a t e r a l f l o wa s s a y1-3-b e t a-d-g l u c a n t e s t G l a c t o m a n n a n t e s tF u n d p r o g r a m F u j i a n M e d i c a lI n n o v a t i o n F u n d2014-C X-33F u j i a n N a t u r a l S c i e n c e F u n d 2015J01497F u z h o u C l i n i c a l k e y s p e c i a l i s t p r o j e c t r o n g w e i y i2016N o57肺隐球菌病是由隐球菌引起的一种比较常见的侵袭性肺真菌感染[1],且有逐年增加的趋势[2]㊂目前肺隐球菌病缺乏早期㊁敏感㊁特异的诊断方法,因此漏诊率和误诊率都很高[3],隐球菌抗原胶体金检测法是一种简便㊁快速㊁有效诊断隐球菌感染的实验室方法㊂本文通过兔隐球菌肺部真菌感染的动物模型分析隐球菌荚膜多糖(c r y p t o c o c c a l a n t i g e n,C r a g)胶体金免疫层析法(l a t e r a l f l o w a s s a y,L F A)㊁1-3-β-D-葡聚糖检测(1-3-b e t a-d-g l u c a n t e s t,G试验)㊁半乳甘露聚糖(g l a c t o m a n n a nt e s t,GM试验)对肺隐球菌病的诊断价值,为临床隐球菌病的早诊断㊁早治疗提供诊疗价值㊂1材料和方法11材料111菌株实验所用新型隐球菌标准菌株购自美国菌种保藏中心,编号:A T C C10235㊂112试验动物清洁级成年雄性新西兰大白兔,体质量18~25k g,购自上海市松江区松联实验动物场㊂113主要试剂和仪器真菌1-3-β-D-葡聚糖检测试剂盒(光度法),湛江安度斯有限公司,中国,以1005为临界值;曲霉菌抗原检测试剂盒(酶联免疫法),B I O-R A D公司,法国,以05为临界值;隐球菌抗原检测试剂盒(胶体金免疫层析法), I MMY公司,美国;L KM-02-32动态试管检测仪; T A L-80E型试管恒温仪;B I O-R A D酶标仪等㊂所有试验都严格按照说明说进行操作㊂12方法121动物分组将36只雄性新西兰大白兔随机分为20只免疫抑制组㊁10只免疫正常组及6只空白对照组㊂㊃627㊃国际呼吸杂志2018年5月第38卷第10期I n t JR e s p i r,M a y2018,V o l.38,N o.10Copyright©博看网. All Rights Reserved.1 2 2 肺部感染动物模型制作 免疫抑制组兔子于实验第1~5天每日耳缘静脉注射阿糖胞苷440m g/m 2,5d 后隔日1次维持免疫抑制状态;第4日起,每日1次万古霉素15m g /k g ㊁头孢他定150m g /k g 静脉注射,庆大霉素隔日1次5m g/k g 静脉注射,预防细菌感染㊂免疫正常组不注射任何药物㊂于实验第1天㊁第6天抽耳缘静脉血做血常规检查,记录中性粒细胞数(将中性粒细胞数小于0 5ˑ106个/L 作为免疫抑制状态的标准[4-5])㊂第6天抽血后行经皮气管内穿刺法给免疫抑制组和免疫正常组兔子接种用生理盐水配置好的新型隐球菌标准菌株0 4m l (浓度2 5ˑ105个/L )悬浮液㊂空白对照组给予注射等量的生理盐水㊂1 2 3 胸部C T 扫描 菌种接种1周时行第一次胸部C T 扫描,如果阳性,则处死;如果阴性,1周后再次行第2次扫描,如果仍为阴性仍处死,实验观察期2周㊂空白对照组处死前也行胸部C T 扫描㊂注:A 为免疫抑制组,可见右肺大片斑片影;B 为免疫正常组,可见右肺下叶小结节影;C 为空白对照组,未见异常图1 肺部C T 胸窗结果1 2 4 标本留取 隐球菌菌接种1周后选取肺部C T 阳性的兔,从耳中央动脉采血,备于行C r a g L F A ㊁G 试验㊁GM 试验,氯胺酮经耳缘静脉注射处死取出肺组织,实验末期随机处死表现正常的兔㊂取出完整的肺组织用2m l 生理盐水灌洗两遍,留取灌洗液置于4ħ冰箱备用,行C r a g L F A ,然后用肉眼观其病理变化,根据C T 检查所示找到病灶部位(如C T 所示正常,则随机选取正常部位),取部分病灶放入沙氏真菌培养基内培养3~5d ,之后再取部分病灶放入福尔马林液中固定,病理切片进行H E 染色㊁过碘酸雪夫(pe r i o d i ca c i d -s c h if f ,P A S )染色,观察镜下病理变化,再将剩余的肺组织置于福尔马林液中固定备用㊂1 2 5 建模情况的判断标准[6]①接种菌液成功;②肺标本真菌培养有隐球菌菌生长,无其他菌落;③胸部C T 扫描发现病灶;④病灶部位肺标本H E ㊁P A S 染色发现病变;满足条件①及③或④者视为建模成功,满足①和②但不具备③和④者视为隐球菌肺部定植状态(潜伏感染),仅满足①而不满足其他条件者视为建模失败㊂1 3 统计学分析 应用S P S S 软件进行统计学处理,采用单因素的方差分析,配对t 检验㊁卡方检验㊁f i s h e r 确切概率法,P <0 05为差异有统计学意义㊂2 结果2 1 动物模型2 1 1 免疫抑制组免疫抑制状态建立 三组兔子实验前和接种前中性粒细胞数如表1所示,实验前各组中性粒细胞数差异无统计学意义(P >0 05)㊂免疫抑制组前后两次中性粒细胞计数差异有统计学意义(P <0 01),说明免疫抑制组成功建立免疫抑制状态㊂免疫正常组和空白对照组两次中性粒细胞计数两组差异无统计学意义(P 值均>0 05)(表1)㊂表1 实验前和接种前中性粒细胞的比较(x -ʃs )组别只数实验前(ˑ106/L )接种前(ˑ106/L )空白对照组62 11ʃ0 412 32ʃ0 57免疫抑制组202 71ʃ0 930 29ʃ0 13a c免疫正常组102 83ʃ0 752 73ʃ0 59b F 值1 72247 71P 值0 190 00注:与空白对照组比较,a P <0 05;与免疫抑制组比较,b P <0 05;与同组实验前比较,cP <0052 1 2 胸部C T 检查表现 免疫抑制组有5只兔子胸部C T 表现为阴性,其余15只兔均在接种后的出现不同程度的阳性表现,包括磨玻璃影及斑片影㊁实变㊁血管支气管束增粗㊁结节㊁网格或线样影,病灶累及双肺的有5只;免疫正常组2只兔子出现了胸部C T 阳性表现,2只都表现为单侧的肺组织结节影,其余8只兔实验过程中未出现胸部C T 异常表现;空白对照组所有兔子胸部C T 均表现为阴性(图1㊁2,表2)㊂2 1 3 肺组织H E ㊁P A S 染色病理变化 免疫抑㊃727㊃国际呼吸杂志2018年5月第38卷第10期 I n t JR e s p i r ,M a y 2018,V o l .38,N o .10Copyright ©博看网. All Rights Reserved.制组15只C T 阳性兔和1只肺C T 阴性兔共16只肺标本病理检查均可见隐球菌及不同程度的阳性改变:如炎性细胞浸润,支气管壁增厚,间质细胞增生,肺泡渗出(图3A ㊁图4),其余4只兔子病理检查阴性;免疫正常组2只C T 阳性兔和1只肺C T 阴性兔出现病理异常改变:间质细胞增生㊁炎性细胞浸润改变(图3B ),其余7只兔子病理检查阴性;空白对照组所有兔子H E 染色为正常肺组织,未进行P A S 染色(图3C )(表2)㊂注:A 为免疫抑制组,可见右肺大片斑片影;B 为免疫正常组,可见右肺下叶小结节影;C 为空白对照组,未见异常图2 肺部C T纵膈窗结果注:A 为免疫抑制组,可见炎性肉芽肿;B 为免疫正常组,可见炎性肉芽肿;C 为空白对照组,未见异常染色图3 肺组织H E 染色 ˑ400表2 各组采用不同检查方法阳性数和阴性数的统计[例(%)]组别只数C T阳性阴性病理阳性阴性培养阳性阴性隐球菌性肺炎空白对照组60(0)6(100)0(0)6(100)0(0)6(100)0(0)免疫抑制组2015(75)5(25)a 16(80)4(20)a 20(100)0(0)a 16(80)a 免疫正常组102(20)8(80)a b 3(30)7(70)a b 3(30)7(70)a b 3(30)a b χ2值14 4314 8029 3031 71P 值0 000 000 000 00注:与空白对照组比较,a P <0 05;与免疫抑制组比较,bP <0052 1 4 肺组织真菌培养 免疫抑制组20只兔隐球菌培养全部培养阳性;免疫正常组7只兔培养阴性,3只兔培养阳性(对应病理阳性的3只);空白对照组6只兔子全部培养为阴性(表2㊁图5)㊂2 1 5 建模成功率 结合肺部C T 及组织病理检查,肺真菌培养的结果,免疫抑制组有16只兔子成功建立肺新型隐球菌感染模型,成功率为80 00%(16/20),剩余4只兔子形成肺隐球菌定植状态;免疫正常组有3只兔子成功建立肺新型隐球菌感染模型,成功率为30 00%(3/10),无肺隐球菌定植状态的兔子两组差异有统计学意义(P <0 05),说明免疫抑制状态更容易受隐球菌感染(表2)㊂2 2 血清及肺泡灌洗液C r a g L F A 以病理检查为金标准,血清及肺泡灌洗液C r a g L F A 阴性及阳性数见表3㊂血清C r a g L F A 的敏感度为89 47%,特异度为100%;灌洗液r a g L F A 的敏感度为100%,特异度为82 35%(表3)㊂病理阴性但C r a g L F A 阳性的兔子均为免疫抑制组定植状态的兔子㊂2 3 G 试验 所有兔子血清G 试验均为阴性,平均值为66 10,说明G 试验不能用于隐球菌诊断㊂2 4 GM 试验 所有兔子血清GM 试验均为阴性,平均值0 33,说明GM 试验不能用于隐球菌诊断㊂㊃827㊃国际呼吸杂志2018年5月第38卷第10期 I n t JR e s p i r ,M a y 2018,V o l .38,N o .10Copyright ©博看网. All Rights Reserved.注:可见炎性肉芽肿中散在的隐球菌(红色箭头所示)图4 肺组织P A S 染色 ˑ40注:A B C 分别代表免疫抑制组㊁免疫正常组和空白对照组;A ㊁B 可见培养基中乳白色菌落形成,C 培养基未见菌落生长图5 肺组织真菌培养表3 病理与胶体金免疫层析法比较(例)诊断方法血清胶体金法阳性阴性灌洗液胶体金法阳性阴性病理 阳性172190阴性017314敏感度89 47%100%特异度100%82 35%3 讨论我们采用薛峰等[3-7]的实验方法成功建立兔肺隐球菌动物模型,本研究表明免疫缺陷个体较免疫正常个体更容易感染肺隐球菌㊂免疫抑制组不仅建模成功率高,而且建模失败的兔子也容易形成了肺部定植,而免疫正常组则没有,说明免疫抑制状态难以清除肺隐球菌,这与自身免疫系统密切相关[8]㊂从这些建模成功的肺C T 表现来看,免疫缺陷个体容易形成混合性的感染,而免疫正常个体以结节影为主,这与王葆青等[9]的研究一致㊂他们对国内728例肺隐球菌病患者进m e t a 分析显示,免疫正常个体以单发或者多发结节影表现的比例在70%以上,而免疫受损个体肺部C T 表现为弥散性混合性改变的比例在50%以上㊂但也有研究报道免疫抑制状态个体表现为单发或多发结节影为主[10-11]㊂G 试验适用于除隐球菌属和接合菌属以外其他侵袭性肺部真菌感染早期诊断的重要方法[12]㊂GM 主要适于侵袭性曲霉菌感染的早期诊断[13-14]㊂大量试验表明它们对念珠菌属㊁曲霉属㊁毛孢子菌等所致侵袭性感染的诊断中具有重要价值,特别是两者联合应用时[15]㊂本实验隐球菌感染中G 试验㊁GM 试验均阴性,与感染情况符合㊂目前肺隐球菌病确诊主要依据病理学检查,但肺组织的获得具有一定的创伤性,且有些标本不易获取㊂故临床需要一种简单有效㊁创伤小㊁敏感度及特异度高的诊断手段㊂隐球菌荚膜抗原乳胶凝集试验具有较高的敏感度和特异度㊂最新的一项荟萃分析显示,隐球菌乳胶凝集试验对隐球菌的诊断敏感度为81%,特异度为99%[16],但步骤繁琐,且实验室条件要求高,而且主观性大[17-18]㊂胶体金法是一种简单有效的方法,且特异度㊁敏感度高[19],甚至优于乳胶凝集试验法㊂2015年国外的一项荟萃分析显示对隐球菌的诊断特异度和敏感度分别达到98 1%和97 6%[20]㊂国内的研究较之敏感度稍偏低㊂付雅捷等[21]对156例肺隐球菌病患者血清进行胶体金法结果敏感度为73 17%,特异度为100 00%;另外,黄佳斯等[22]对10例肺隐球菌病和537例非肺隐球菌患者进行胶体金法检测敏感度为80 0%,特异度为99 4%㊂目前还没有肺灌洗液C r a g L F A 相关的数据㊂本实验表明血清胶体金法具有更好的特异度,而灌洗液具有更好的敏感度㊂灌洗液特异度偏低可能与隐球菌定植有关㊂实验表明C r a g LF A 用于肺隐球菌病的诊断,无论是在血清还是灌洗液中,都具有较高的敏感度和特异度,㊃927㊃国际呼吸杂志2018年5月第38卷第10期 I n t JR e s p i r ,M a y 2018,V o l .38,N o .10Copyright ©博看网. All Rights Reserved.且两者联合应用时将进一步提高肺隐球菌病诊断的特异度和敏感度㊂此结果还有待临床进一步检测㊂总之,免疫受损个体较免疫正常个体更容易受隐球菌感染,而且容易形成肺部多发混合性感染㊂对于怀疑肺部隐球菌病的诊断可首选C r a g L F A,特别是两者联合使用,可进一步提高特异度和敏感度,而G试验㊁GM试验在肺隐球菌病中多为阴性㊂本实验因费用问题未进行滴度检测及治疗后生存率的观察,这是将是我们今后的研究方向㊂参考文献1曹彬蔡柏蔷王辉等肺部真菌感染152例病原谱再评价J中华结核和呼吸杂志2007304279-283D O I103760j i s s n1001-09392007040132曾能永徐云欢孔晋亮肺隐球菌病诊治进展J国际呼吸杂志2016363218-223D O I103760c m a j i s s n1673-436X 2016030133赖国祥张玉华林庆安等国内22年肺隐球菌病回顾性分析J中国实用内科杂志2005252176-1784 G r o l lA H M i c k i e n eD P e t r a i t i e n eR e ta l P h a r m a c o k i n e t i ca n d P h a r m a c o d y n a m i c M o d e l i n g o f A n i d u l a f u n g i nL Y303366R e a p p r a i s a l o f i t s e f f i c a c y i nn e u t r o p e n i c a n i m a lm o d e l s o f o p p o r t u n i s t i c m y c o s e s u s i n g o p t i m a l p l a s m as a m p l i n g J A n t i m i c r o b A g e n t sC h e m o t h e r200145102845-2855D O I101128A A C45102845-285520015 W a l s hT J L e e J W R o i l i d e sE e t a l E x p e r i m e n t a l a n t i f u n g a lc h e m o t h e r a p y i n g r a n u l o c y t o p e n i c a n i m a l m ode l s o fd i s se m i n a t e d c a n d i d i a s i s a p p r o a c h e s t o u n d e r s t a n d i n gi n v e s t i g a t i o n a l a n t i f u n g a l c o m p o u n d s f o r p a t i e n t s w i t hn e o p l a s t i c d i s e a s e s J C l i nI n f e c tD i s199214S u p p l1S139-1476 Y e r s h o v A L J o r d a n B S G u y m o n C H e ta l R e l a t i o n s h i pb e t w e e n t h e i n oc u l u md o s eo fS t re p t o c o c c u s p n e u m o n i a ea n dp n e u m o n i a o n s e t i na r a b b i tm o d e l J E u rR e s p i r J2005254693D O I1011830903193605000919047薛峰免疫抑制宿主肺部感染C T表现临床与动物实验研究D上海第二军医大学20088孟广勋郭彩琴陈明宽天然免疫系统与新生隐球菌感染J中国真菌学杂志2015104193-196D O I103969ji s s n1673-38272015040019王葆青张含之范壁君等中国大陆地区肺隐球菌病临床表现的M e t a分析J中国临床医学2013203351-35410 Y a m a k a w aH Y o s h i d aM Y a b eM e t a l C o r r e l a t i o nb e t w e e nc l i n i c a l c h a r a c t e r i s t i c s a nd c he s t c o m p u t e d t o m o g r a p h yf i n d i ng so f p u l m o n a r y c r y p t o c o c c o s i s J P u l m M e d20152015703407D O I101155201570340711兰长青翁恒李红艳等肺隐球菌病117例回顾分析J中华结核和呼吸杂志20163911862-865D O I103760c m a j i s s n1001-093920161100812 T h e e lE S D o e r n C D β-D-G l u c a n T e s t i n g I sI m p o r t a n tf o rD i a g n o s i s o f I n v a s i v eF u n g a l I n f e c t i o n s J JC l i n M i c r o b i o l201351113478-3483D O I101128J C M 01737-13 13中华医学会呼吸病学分会感染学组中华结核和呼吸杂志编辑委员会肺真菌病诊断和治疗专家共识J中华结核和呼吸杂志20073011821-834D O I103760j i s s n1001-093920071100814 D eP a u wB W a l s hT J D o n n e l l y J P e t a l R e v i s e dD e f i n i t i o n so f I n v a s i v eF u n g a lD i s e a s ef r o mt h eE u r o p e a n O r g a n i z a t i o nf o r R e s e a r c h a n d T r e a t m e n t o f C a n c e r I n v a s i v e F u ng a lI n f e c t i o n sC o o p e r a t i v e G r o u p a n dt h e N a t i o n a lI n s t i t u t eo fA l l e r g y a n d I n f e c t i o u s D i s e a s e s M y c o s e s S t u d y G r o u pE O R T C M S G C o J C l i nI n f e c tD i s200846121813-1821D O I10108658866015于书娴崔学范马婷等G试验和GM试验对侵袭性真菌病诊断价值的M e t a分析J中华肺部疾病杂志电子版201692164-170D O I103877c m a j i s s n1674-690220160201116徐璐妍王可孔晋亮等血清乳胶凝集试验对肺隐球菌病诊断的荟萃分析J中华医院感染学杂志201626153364-3367D O I1011816c n n i2016-15232417王露霞石凌波陈万山等乳胶凝集法检测隐球菌荚膜多糖抗原在隐球菌性脑膜炎和隐球菌肺炎中的早期诊断价值J检验医学200823155-5718 L i n d s l e y M D M e k h a N B a g g e t t H C e ta l E v a l u a t i o no fan e w l y d e v e l o p e dl a t e r a l f l o wi mm u n o a s s a y f o r t h ed i a g n o s i s o f c r y p t o c o c c o s i s J C l i nI n f e c tD i s2011534321-325D O I101093c i d c i r37919 T a n g MW C l e m o n s K V K a t z e n s t e i n D A e t a l T h ec r y p t o c o c c a l a n t i g e n l a t e r a l f l o w a s s a y A p o i n t-o f-c a r ed i a g n o s t i c a t a no p p o r t u ne t i m e J C r i tR e vM i c r o b i o l2016424634-642D O I1031091040841X 201498250920 H u a n g H R F a nL C R a j b a n s h iB e ta l E v a l u a t i o no f an e wc r y p t o c o c c a la n t i g e n l a t e r a lf l o w i mm u n o a s s a y i n s e r u mc e r e b r o s p i n a l f l u id a n d u r i nef o r t h e d i ag n o s i s o fc r y p t o c o c c o s i s A m e t a-a n a l y s i sa n ds y s t e m a t i cr e v i e w JP L o S O n e2015105e0127117D O I101371j o u r n a lp o n e012711721付雅捷杨青隐球菌荚膜多糖抗原胶体金法在肺隐球菌病诊断中的应用J浙江预防医学2017295539-540D O I1019485j c n k i i s s n1007-093120170503322黄佳斯石磊唐爱国等胶体金免疫层析法检测血清隐球菌抗原在肺隐球菌病诊断中的应用价值J临床检验杂志2017357518-519D O I1013602j c n k i j c l s20170710收稿日期2017-10-21㊃037㊃国际呼吸杂志2018年5月第38卷第10期I n t JR e s p i r,M a y2018,V o l.38,N o.10Copyright©博看网. 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隐球菌抗原-胶体金免疫层析法在隐球菌性肺炎诊治中的应用分析
•经验交流•隐球菌抗原-胶体金免疫层析法在隐球菌性肺炎诊治中的应用分析徐萌敏杨国彪孙小军新型隐球菌是较为常见的条件致病性真菌，易发于免疫功能受损的人群,特别是长期使用激素、免疫抑制剂和抗肿瘤药物治疗的患者。
近年来，由于自然气候的变化、隐球菌自身的进化及易感人群的增多等因素，免疫功能正常者该病的患病率也逐年升高［1］。
临床上，由于隐球菌性肺炎的临床表现缺乏特异性，常发生误诊。
传统的隐球菌感染诊断主要依据病原学检查(墨汁染色和培养)和病理检查，费时且敏感度较低，病理检查也具有一定的创伤性，这些因素常在一定程度上延误疾病的诊治。
隐球菌抗原-胶体金免疫层析法(cryptococcal antigen lateral flow assay,CrAg-LFA)是一种无创的新检测方法，可作为临床上隐球菌感染的辅助诊断，具有快速、特异度高、敏感度强等特点叫本研究应用CrAg-LFA检测血清隐球菌荚膜多糖抗原，探讨其在隐球菌性肺炎诊治中的临床价值。
1资料与方法1.1一般资料回顾性分析2017年10月至2019年3月期间在绍兴市立医院诊治的300例疑似隐球菌性肺炎患者的临床资料，男性190例，女性110例，年龄18-60岁。
所有患者均具有下呼吸道感染症状，如咳嗽、咳黏液痰或血痰、发热，部分患者具有呼吸困难、胸背痛等症状。
诊断依据:肺组织病理阳性，或痰培养阳性,并结合药物治疗情况，确诊是否符合隐球菌性肺炎。
本研究经过绍兴市立医院伦理委员会批准。
1.2检测方法1.2.1CrAg-LFA检测常规抽取患者静脉血约4~D0I:10.3877/cma.j.issn.1674-6880.2019.06.011作者单位=312000浙江绍兴，绍兴市立医院呼吸内科通信作者：孙小军,Email:sxj999@ 5mL,置于无菌采血管中,3000#g离心10min,分离血清。
取1滴样本稀释液加入小试管中，另取40!L血清样本与之混合，将隐球菌抗原检测试纸条(美国Immuno-Mycologics有限公司)的插入带没入混合液中，15min后读取结果。
胶体金免疫层析法检测血清隐球菌抗原在肺隐球菌病诊断中的应用价值
胶体金免疫层析法检测血清隐球菌抗原在肺隐球菌病诊断中的应用价值黄佳斯;石磊;唐爱国;胡敏;唐玲丽;梁好;李影【摘要】目的探讨血清隐球菌抗原-胶体金免疫层析法(CrAg-LFA)在肺隐球菌病诊断中的应用价值.方法回顾性研究2016年1至11月中南大学湘雅二医院收治的肺隐球菌病及非肺隐球菌病患者共547例,采用CrAg-LFA筛查血清中隐球菌抗原,分析血清CrAg-LFA对肺隐球菌病诊断的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值.结果10例肺隐球菌病组患者采用CrAg-LFA测定阳性8例,敏感性为80.0％(8/10);非肺隐球菌病组患者537例,CrAg-LFA测定阴性534例,特异性为99.4％(534/537),阳性预测值和阴性预测值分别为72.7％和99.6％.结论 CrAg-LFA是一种简单快速的肺隐球菌病筛查试验,可用于肺隐球菌病的辅助诊断.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2017(035)007【总页数】2页(P518-519)【关键词】肺隐球菌病;隐球菌抗原;胶体金法【作者】黄佳斯;石磊;唐爱国;胡敏;唐玲丽;梁好;李影【作者单位】中南大学湘雅二医院检验科,长沙410011;中南大学湘雅二医院病理科,长沙410011;中南大学湘雅二医院检验科,长沙410011;中南大学湘雅二医院检验科,长沙410011;中南大学湘雅二医院检验科,长沙410011;中南大学湘雅二医院检验科,长沙410011;中南大学湘雅二医院检验科,长沙410011【正文语种】中文【中图分类】R446.5随着免疫功能低下患者增多，肺隐球菌病(pulmonary cryptococcosis，PC)发生率呈增加趋势[1]。
隐球菌在肺组织内呈局限性浸润感染，传统的痰墨汁染色和培养阳性率很低[2]。
血清学隐球菌荚膜抗原检测对隐球菌感染具有较好的辅助诊断价值。
文献报道，隐球菌抗原-胶体金免疫层析法(cryptococcal antigen lateral flow immunochromatographic assay，CrAg-LFA)测定脑脊液样本对隐球菌性脑膜炎的诊断敏感性和特异性达到95%左右[3]，而血清样本CrAg-LFA对PC的诊断效能国内未见报道。
隐球菌肺病的抗原学检测评价
隐球菌肺病的抗原学检测评价隐球菌肺病在我国中部及南部较多见，其临床诊断比较困难。
培养鉴定和组织病理学虽然是诊断肺隐球菌病的金标准，但是前者阳性率低，后者是又创性检查。
相比而言，抗原学检测方法有较大的优势，目前临床上主要依靠抗原检测做内科诊断。
隐球菌荚膜多糖抗原是主要的检测目标抗原，其检测方法具体有乳胶凝集法（LA），酶联免疫法(EIA)和侧向层析法(LFA)。
这些方法各有优势，分述如下。
LA原理是以乳胶颗粒为载体，表面联结有抗新生隐球菌抗体，形成致敏乳胶悬液。
通常在疾病进展期抗原滴度会升高，经积极治疗抗原滴度会下降，若持续阳性提示预后不佳。
LA在过去的诊断共识中常常被推荐使用。
国内外一些关于LA的研究显示其敏感性和特异性的高达93%-100% 。
Dominic RS收集了200个可能有隐球菌感染的HIV 阳性患者的脑脊液，用LA和真菌培养及鉴定与墨汁染色法分别检测隐球菌，发现LA比其他两种更敏感。
但是LA方法还有一些不足：LA存在交叉反应现象，类风湿因子是其假阳性的主要原因。
还有研究发现，毛孢子菌感染患者也可出现交叉反应。
LA检测试剂因厂家不同会有差异，目前市售乳胶凝集反应试剂盒可以检测出10 ng /mL 的荚膜多糖抗原。
Babady NE检测3种市售的乳胶凝集试剂发现在终点滴度上有很大差异。
还有人认为LA需要花费人工，并且判断结果带有主观性，投入产出效率不高。
为了弥补LA检测隐球菌抗原的缺点，很多美国的实验室开始运用EIA。
EIA的优点是可以实现自动化和客观的结果分析，并且不受类风湿因子的干扰。
有一些研究用来比较EIA和LA。
Saha DC收集127份脑脊液样本，分别用LA，EIA和直接培养来检测。
结果是当培养是阳性时，LA和EIA均一致。
当培养是阴性时，两种方法差别很大。
76.3 % EIA and 70.8 % LA与培养一致。
6.3% LA出现假阴性。
所以在培养为阴性时，EIA在诊断隐球菌感染时更为重要。
隐球菌荚膜抗原检测在隐球菌病中的诊断价值
·综述·基金项目：“十三五”国家科技重大专项（2018ZX10302104）；重庆市医学科研重点项目（2019ZDXM012）通信作者：陈耀凯，E-mail: yaokaichen ＠引用格式：陈力，何小庆，陈耀凯.隐球菌荚膜抗原检测在隐球菌病中的诊断价值[J].新发传染病电子杂志，2021，6（1）：58-61. Chen Li, He Xiaoqing, Chen Yaokai.The value of detecting cryptococcal antigen in the diagnosis of cryptococcosis[J].Electronic Journal of Emerging Infectious Diseases,2021,6(1):58-61.陈力1，何小庆2，陈耀凯2（1.重庆市公共卫生医疗救治中心急诊科，重庆 400036；2.重庆市公共卫生医疗救治中心感染科，重庆 400036）隐球菌荚膜抗原检测在隐球菌病中的诊断价值 【摘要】隐球菌病是由隐球菌感染人体引起的一种侵袭性真菌病，是艾滋病患者及实体器官移植者中常见的感染和致死原因。
10年来，隐球菌病的诊断方法已从真菌培养、墨汁染色，到目前的隐球菌荚膜抗原（cryptococcal capsular antigen，CrAg）检测。
CrAg检测操作简便快速，花费少，敏感性及特异性高，因此在世界范围内得到广泛应用。
世界卫生组织推荐对高危人群进行CrAg筛查，对CrAg阳性患者进行抢先治疗，从而降低病死率。
本文就CrAg检测在隐球菌病中的诊断价值展开综述。
【关键词】隐球菌荚膜抗原；隐球菌病；诊断价值 DOI：10.19871/ki.xfcrbzz.2021.01.013The va l ue of detect i ng cryptococca l ant i gen i n the d i agnos i s of cryptococcos i sChen Li 1, He Xiaoqing 2, Chen Yaokai 2(1. Department of Emergency, Chongqing Public Health MedicalCenter, Chongqing 400036, China; 2. Department of Infectious Diseases, Chongqing Public Health Medical Center, Chongqing 400036, China) 【Abstract】 Cryptococcosis is an invasive fungal disease caused by cryptococcosis,it is a common cause of infection and death among AIDS patients and solid organ transplant recipients.In the past ten years, the diagnostic methods for cryptococcosis have ranged from fungal culture and ink staining to the current detection of cryptococcal capsular antigen (CrAg).CrAg detection is simple and fast, inexpensive, high sensitivity and specificity, so it is widely used worldwide.The World Health Organization recommends CrAg screening for high-risk groups and preemptive treatment of CrAg-positive patients to reduce the mortality rate.This article reviews the value of cryptococcal capsularantigendetecting in the diagnosis of cryptococcosis. 【Key words】 Cryptococcal capsular antigen; Cryptococcosis; Diagnosis 隐球菌是一种溶组织酵母菌，为条件致病菌，主要通过呼吸道传播，人因吸入鸽粪污染的空气而感染。
免疫胶体金技术在临床检验领域的应用
全新技术，摒弃了底物反应中酶的参与，实验过程更加简单，
并且结果具有明显的稳定性。 部分专家在研究中发现，在抗
人免疫球蛋白 Ｇ 筛选中应用斑点免疫金渗滤法技术更加稳
定，为试剂盒制作提供了重要参考依据。
免疫层析法是在多种技术基础上发展而来，融合了新材
到了突破性研究与进展，其中在检验领域中应用最为显著，
可以用于 ＨＣＧ 等检测中。 其中胶体金属于标记技术，能够
用于免疫标记。 根据临床调查研究数据显示，在免疫、分子
生物学等多个需 要 运 用 到 免 疫 印 记 技 术 的 都 已 经 使 用 胶
体金。
免疫胶体金技术有效提升了临床检验领域工作效果，在
经验交流
免疫胶体金技术在临床检验领域的应用
唐巧凤
胶体作为特殊物质实在 ２０ 世纪 ７０ 年代被 Ｔａｙｔｏｒ 等人
引入到免疫学当中，发现了免疫胶体金技术，将其视为一种
新的免疫学方法。 免疫胶体金技术在医学的多个领域均得
病检验中，从重症急性呼吸综合征到新冠状病毒肺炎均应用
了免疫层析法技术，许多研究结论显示检测一致性高。
二、 免疫胶体金技术在定量检测中的应用
免疫胶体金技术主要来源于其胶体颗粒特征，该颗粒具
有高密度与高电子特征，将其与配体结合后，可以运用光传
感器发现其聚集物，甚至在肉眼下就可以发现粉色或者红色
物质。 此外，免疫胶体金技术能够增强定量检测灵敏性。 主
疫胶体金技术的免疫电镜应用效果显著。
第二，免疫胶体金技术在联合检测技术中的应用。 在免
疫胶体金技术应用过程中，不仅可以用于单一的实验检验，
并且能够与其他检验技术联合应用，降低检验成本，提升检
探讨新型隐球菌脑膜炎不同检测方法的诊断价值
探讨新型隐球菌脑膜炎不同检测方法的诊断价值黄赛林;阮子强;向璇【摘要】目的比较新型隐球菌脑膜炎不同检测方法的试验效果,评价各方法学在新型隐球菌脑膜炎诊断中的临床价值.方法采用隐球菌抗原胶体金免疫层析法、印度墨汁染色、隐球菌真菌肉汤培养在隐球菌感染时对脑脊液标本进行同期检测并对结果进行比较,评价各方法学优劣.结果隐球菌胶体金法灵敏度100％,特异性98.33％;墨汁染色灵敏度65.95％,特异性98.33％;隐球菌培养灵敏度63.63％,特异性100％.结论不同检测方法在隐球菌脑膜炎诊断中都具有一定的临床意义,隐球菌抗原胶体金免疫层析法对隐球菌脑膜脑炎患者的快速诊断具有重要的参考价值.【期刊名称】《实验与检验医学》【年(卷),期】2019(037)004【总页数】3页(P610-612)【关键词】隐球菌性脑膜炎;胶体金免疫层析;墨汁染色;真菌肉汤培养【作者】黄赛林;阮子强;向璇【作者单位】广东三九脑科医院,广东广州 510000;广东三九脑科医院,广东广州510000;广东三九脑科医院,广东广州 510000【正文语种】中文【中图分类】R446.5;R446.61新型隐球菌脑膜炎（CNM）是由新型隐球菌感染脑膜和（或）脑实质所致[1]，属于中枢神经系统亚急性或慢性炎症性疾病。
常见首发症状以头痛、头晕、呕吐和发热为主，由于其颅内感染时症状的不典型性及治疗的不规范，误诊率及病死率仍较高[2]。
近年来随着广谱抗生素、激素、免疫抑制剂的广泛或不适当应用，免疫缺陷性疾病及器官移植患者的增加，该病呈增长趋势[3]。
在流行病学上，新型隐球菌属于一种机会性感染真菌，病原体多从呼吸道吸入，形成肺部病灶后经血液循环播散于脑膜。
据文献报道，隐球菌性脑膜炎发生率和死亡率在发达国家达到10%～30%，在发展中国家可达到50%～100%[3]。
因此，临床早期快速准确地诊断对于隐球菌脑膜炎的鉴别和诊断很有必要。
目前墨汁染色对新型隐球菌的实验诊断依然为一种有效的经典诊断方法，但需较多标本量离心处理后收集沉淀，制片墨汁负染后进行镜检，因而标本处理繁琐、耗时，且结果判断主观性较大。
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隐球菌淋巴结炎
可出现于颈部，纵膈， 腋窝等部位 纵膈淋巴结肿大可压迫 器官导致咳嗽及呼吸困 难
Hu Z, et al. Annals of clinical microbiology and antimicrobials 2013, 12:40
隐球菌皮肤病变
Hale Waihona Puke 可导致各种形态的 皮肤病变，如皮肤 结节、溃疡、蜂窝 织炎、传染性软疣 样皮疹
发热、头痛、恶心呕吐， 脑膜刺激征 严重病例抽搐、神志障碍 以及昏迷 脑脊液炎症相对轻微 2/3病例颅脑MRI出现异常 ，常累及基底节区，VR间 隙增宽最常常见，增强后 不强化或是仅有轻度强化
许传军, 胡志亮, 等，中南大学学报: 医学版 2017, 42(10):1184-1190.
AIDS相关肺隐球菌病
病例分析
查脑脊液隐球菌抗原1:40；血隐球菌抗原1:40 诊断：隐球菌性脑膜炎 治疗：两性霉素B（0.7mg/kg/d，三天加量疗法 ）+氟胞嘧啶(100mg/kg/d，分四次口服) 结局：临床症状迅速改善
胡志亮, 等.中华传染病杂志. 2012;30(12):744-747. 胡志亮, 等.中华临床感染病杂志 2014, 7(4):319-323
隐球菌的检测手段：血清学检测
ELISA LA：乳胶凝集试验 LFA：胶体金免疫层析法
血清学检测灵敏度比较
/products/cryptococcal-antigenlateral-flow-assay-lfa/
LFA诊断隐球菌病的敏感性和特异性
标本类型 血清 脑脊液 尿液
隐球菌抗原检测试剂盒 （胶体金免疫层析法）
试剂盒组成
隐球菌抗原检测试纸条50条 样本稀释液 滴定液 阳性对照
稳定性/储存方法
2年有效期 室温储存
隐球菌抗原检测试剂盒 （胶体金免疫层析法）
无需样本预处理
病例分析
血常规：白细胞 2.90×109/L， N 61.3%；血红蛋白 130g/L， PLT 168×109/L。 胸部CT提示右下肺结节。 腰椎穿刺：脑脊液压力 100cmH2O；有核细胞计数 440×106/L,单个核70%；生化 ：总蛋白 1064.5mg/L，葡萄糖 0.7mmol/L，氯 114mmol/L， LDH 101 IU/L，ADA 5.8U/L。 脑脊液墨汁染色阴性，病例细胞 学检查未发现隐球菌。
南 京 市 第 二 医 院 南京市公共卫生医疗中心
隐球菌抗原胶体金检测的临床应用
胡志亮
南京市第二医院 感染二科
隐球菌病原学
酵母样菌 隐球菌属至少有30多个种 致病的绝大多数为新型隐球菌和格特隐球菌 罗伦隐球菌、浅白隐球菌等偶可引起人类感染 我国以新型隐球菌感染为主，格特隐球菌少见
中华内科杂志 2018, 57(5):317-323.
Antinori, S. (2013) ISRN AIDS, 2013, 471363
临床隐球菌病
隐球菌可以感染人体的任何组织和脏器 最常见的部位是中枢神经系统 其次为肺部、皮肤、淋巴结、骨等器官组织亦可 受累 多见于免疫缺陷人群，如AIDS，器官移植，使 用免疫抑制剂，糖尿病等
AIDS相关隐球菌性脑膜炎
参数 敏感性 特异性 敏感性 特异性 敏感性
推测值 0.98 0.98 0.99 0.99 0.85
95%置信区间 0.96–0.99 0.97–0.99 0.98–1.00 0.98–1.00 0.79–0.90
Huang et al. PLoS ONE, 2015, 10(5): e0127117
隐球菌病原学
四个血清型：A，B，C，D型
新型隐球菌（A,D型或A/D杂交型） 格特隐球菌（B，C型）
八个基因型
VNI/AFLP1, VNII/AFLP1A (C.neoformans var. grubii) VNIII/AFLP3 (AD 杂交型) VNIV/AFLP2 (C. neoformans var. neoformans) VGI/AFLP4,VGII/AFLP6, VGIII/AFLP5, VGIV/AFLP7 (C. gattii)
隐球菌的检测手段：涂片
墨汁染色
阿利新蓝染色
墨汁染色图片来源网络搜索 阿利新蓝染色图片，来源：胡志亮等，中华临床感染病杂志 2016, 9(2):190-192.
隐球菌的检测手段：组织病理
PAS染色
阿利新蓝染色
肺组织PAS染色图片来源，胡志亮等，未发表资料 肺组织阿利新蓝染色图片来源： Setianingrum et al. Medical Mycology, 2018, 0, 1–10
DJ Baker ，NEJM, 1997
病例分析
患者，男，52岁 因头晕、头痛、恶心、呕吐两周入院，无发热， 无咳嗽 既往2014年6月发现HIV抗体阳性，启动拉米夫 定+替诺福韦+依非韦伦抗HIV治疗。2014年10 月我院第一次住院临床诊断肺结核，启动莫西沙 星+乙胺丁醇+吡嗪酰胺+对氨基水杨酸异烟肼抗 结核治疗约2年 查体：神清，颈有抵抗感，病理征阴性
隐球菌的检测手段：培养
L-canavanine glycine bromothymol blue选择性培养基可用于鉴 别新生隐球菌（C. neoformans）和格特变种（C. gattii ），蓝 色反应代表为隐球菌格特变种，而无蓝色产生代表为新生隐球 菌
Klein et al. JCM, 2009, 3669–3672
呼吸道症状通常较轻微 以肺结节为主要影像学 表现，常伴有空洞形成 罕见情况下可有肺内播 散，弥漫性间质浸润， 导致呼吸衰竭
胡志亮等.中华临床感染病杂志. 2013;6(1):35-37. 胡志亮等.中华临床感染病杂志. 2013;6(4):237-240. Hu Z, et al. Scand J Infect Dis. 2013;45(5):378-389. Hu Z, et al. PLoS One 2017,12:e0173858.