绿茶中游离氨基酸的测定
邻苯二甲醛柱前衍生反相高效液相色谱法测定茶叶中17种游离氨基酸
茶叶科学 2011，31（3）：211~217 Journal of Tea Science收稿日期：2010-12-13 修订日期：2011-02-28基金项目：现代农业（茶叶）产业技术体系建设专项资金（农科教发[2008]10号）、国家标准化工作项目资助内容 作者简介：杨卫（1984— ），男，安徽淮南人，硕士研究生，主要从事茶叶生物化学与综合利用的研究。
∗通讯作者邻苯二甲醛柱前衍生反相高效液相色谱法测定茶叶中17种游离氨基酸杨卫，鲜殊，李大祥*，宛晓春*安徽农业大学农业部茶及药用植物安全生产重点开放实验室，安徽 合肥 230036摘要：采用邻苯二甲醛作为柱前衍生化试剂，结合反相高效液相色谱，优化了色谱条件，实现对茶汤中17种一级氨基酸的精确定性和定量分析。
17种氨基酸的保留时间和峰面积的RSD 分别在0.02%~0.70%与0.11%~1.15%之间，经方法学考察，该方法具有良好的稳定性和重现性。
关键词：HPLC ；柱前衍生化；邻苯二甲醛（OPA ）；游离氨基酸；茶叶中图分类号：TS272；O657.7+2 文献标识码：A 文章编号：1000-369X （2011）03-211-07RP-HPLC Determination of Seventeen Free Amino Acids in Tea with O -phthalaldehyde Precolumn DerivationYANG Wei, XIAN Shu, LI Da-xiang *, WAN Xiao-chun *Key Laboratory of Tea & Medicinal Plant and Product Safety of Ministry of Agriculture, Anhui Agricultural University, Hefei 230036, ChinaAbstract: In this paper, a reversed-phase high performance liquid chromatography combined with precolumn derivatization with O -phthalaldehyde and fluorescence detection was set up for the qualitatively and quantitatively analysis of seventeen kinds of free amino acids in tea. The RSD of the retention time and peak area of the 17 kinds of free amino acids were 0.02%~0.70% and 0.11%~1.15%, respectively. With validation, this method was proved to be accurate, stable and reproducible for the analysis of free amino acids in tea.Keywords: HPLC, pre-column derivation, O -phthaldialdehyde (OPA), free amino acid, tea茶叶中的游离氨基酸与茶叶品质密切相关[1]，其组成、含量以及在加工过程中的降解产物和转化产物均直接影响茶叶的品质，其中占游离氨基酸总量50%~80%的茶氨酸与茶叶品质的相关系数可达0.787~0.876，为强正相关[2]。
两种方法测定茶叶中游离氨基酸含量的比较研究
两种方法测定茶叶中游离氨基酸含量的比较研究陈义;张秀清;李玉霞;郭红萍【摘要】本研究从标准曲线相关系数、加标回收、精密度等方面对GB/T8314-2002和GB/T8314-2013进行比较。
结果表明GB/T8314-2013比GB/T8314-2002相关系数要高、加标回收更准确,精密度两者相当,测得茶叶中氨基酸要低15%左右。
【期刊名称】《信阳农林学院学报》【年(卷),期】2016(026)001【总页数】4页(P93-95,99)【关键词】茶叶游离氨基酸;分光光度法;茚三酮比色法;标准曲线【作者】陈义;张秀清;李玉霞;郭红萍【作者单位】[1]信阳农林学院茶学系信阳市茶产业基础研究重点实验室,河南信阳464000;[2]光山县净居寺茶场,河南信阳464000;[3]光山县净居寺名胜管理区,河南信阳464000【正文语种】中文【中图分类】TS272.7农业科学茶叶作为一种饮用产品，其滋味和香气直接影响产品质量及产品价格，茶叶中氨基酸是形成茶叶鲜爽滋味的重要物质，同时也是参与香气的形成重要物质之一[1]，与茶叶品质显著正相关，所以其含量的测定准确与否显得尤为重要。
茶叶中氨基酸总量的测定国标一直采用茚三酮比色法，方法的原理是：氨基酸在pH8.0的条件下与茚三酮反应，形成紫色络合物，利用分光光度计在波长570nm 测定其吸光度，氨基酸浓度与吸光度成正比[2-3]。
该标准最早由中国农业科学院茶叶研究所牵头起草制定GB/T8314-1987，先后修订2次，即GB/T8314-2002、GB/T8314-2013，笔者主要针对GB/T8314-2002和GB/T8314-2013的差异从标准曲线相关系数、加标回收、精密度等方面进行分析比较，结果表明GB/T8314-2013比GB/T8314-2002相关系数要高、加标回收更准确，精密度两者相当，测得茶叶中氨基酸要低15%左右。
1.1 实验仪器HH数显恒温水浴锅，FA2104型分析天平(感量0.0001g)，微型植物试样磨碎机，GF-2型鼓风电热恒温干燥箱，SHB-Ⅲ型循环水真空泵，752紫外可见分光光度计(上海菁华科技仪器有限公司)等。
茶叶中游离氨基酸分析方法的研究进展
责任编辑章练红责任校对卢瑶
茶叶中游离氨基酸分析方法的研究进展
井然１’。，冯雷２，陈丽梅ｈ
（１．昆明理工大学生命科学与技术学院生物工程技术研究中心，云南昆明，６５０２２４；２．云南省产品质量监督检验研究院，云南昆明６５之一，也是茶叶的主要化学成分之一，是形成茶叶滋味的重要组成部分，因此对茶叶中游离氨基 酸的分析检测是十分必要的：综述了目前用于茶叶中游离氨基酸分析检测的诸多方法，并对这些方法的优缺点进行了分析，同时对未 来分析方法的发展提出了展望。 关键词游离氨基酸；茶叶；分析检测方法 中图分类号￥５７２ 文献标识码Ａ 文章编号０５１７—６６１ ｌ（２０１０）１７—０９１８６—０２ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ａｎａｌｙｍｉｇ Ｆｒｅｅ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ Ｔｅａ ａｌ（Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｒｅ，Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｓｃｈｏｏｌ，Ｋｕｎｍｉｎｇ Ｕ＿西Ｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｋｕｎｍｉｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ ６５０２２４） Ａｂｓｔｒａｃｔ Ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｉＳ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｂａｓｉｃ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｉｎ ｏｒｇａｎｉｓｍｓ．Ｉｔ ｉＳ ａ１８０ ｏｎｅ ｏｆ ｐｒｉｍａｒｙ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｏｆ ｔｅａ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｅｏｍｐｏ－ ｎｅｎｔ ｏｆ ｔｅａ ｔａｓｔｅ．１１１ｕｓ．ａｎａｌｙｚｉｎｇ ａｎｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ｆｒｅｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｔｅａ ｉｓ ｖｅｒｙ ｎｅｃｅｓｓａｒｙ．Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ａｎａｌｙｚｉｎｇ ａｎｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ
测定茶叶中游离氨基酸总量研究
测定茶叶中游离氨基酸总量研究采用茚三酮比色法测定茶叶中游离氨基酸总量。
确定采用沸水萃取，以0.2mg/ml的谷氨酸标准溶液在吸取系列工作液后不加水，加入0.5ml的PH8.0的磷酸盐缓冲液和0.5ml2%茚三酮溶液，采用数显电热恒温水浴锅沸水浴15min加热，冷却后蒸馏水定容至25ml，在570nm处测定吸光度。
所得线性方程A=4.312X-0.017，相关系数r=0.99955，回收率达到92.2%左右，精确度为0.8%，试验操作简单，重复性和稳定性良好。
茶叶游离氨基酸茚三酮比色法茶叶中游离氨基酸含量是用来描述茶叶鲜爽程度的一个重要品质指标，还是人体所必需的营养物质，同事对人体疾病的康复和预防起着极重要的保健作用。
测定茶叶中游离氨基酸含量对茶叶的开发利用具有一定的指导意义。
以谷氨酸为标准品，采用分光光度计为测定仪器，探索一种适合于茶叶游离氨基酸含量的分析方法。
本试验对该方法的主要影响因素，精密度和回收率等进行研究，确定了茶叶中游离氨基酸总量的测定方法。
1材料与方法1.1仪器和用具数显电热恒温水浴锅，型号电子分析天平：感量为0.0001g，型号紫外可见分光光度计。
可调式电炉。
1.2试剂和溶液所用试剂应为分析纯（AR），水为蒸馏水。
PH8.0磷酸盐缓冲液：1/15mol/L磷酸氢二钠溶液95ml和1/15mol/L磷酸二氢钾溶液5ml，混匀。
2%茚三酮溶液：称取水合茚三酮（纯度不低于99%）2g，加50ml水和80mg氯化亚锡搅拌均匀。
分次加少量水溶解，放在暗处，静置一昼夜，过滤后加水定容至100ml。
1.3试验方法1.3.1标准贮备液及标准溶液的配制准确称取100mg谷氨酸（纯度不低于99%）溶于100ml水，定容作为母液。
（1ml含谷氨酸1mg）。
配制成0.1mg/ml，0.2mg/ml，0.3mg/ml，0.4mg/ml，0.5mg/ml浓度的标准溶液。
采用GB/T8314-2002中茶游离氨基酸的测定方法进行测定。
游离氨基酸的测定方法
游离氨基酸的测定方法
游离氨基酸咋测定呢？其实有不少方法呢！比如说茚三酮比色法。
先准备好样品，把它处理成合适的状态。
然后加入茚三酮试剂，经过一系列反应后，通过比色来确定游离氨基酸的含量。
这过程中可得小心操作，要是弄错了一步，那结果可就不靠谱啦！那安全性咋样呢？只要按照正确的步骤来，一般没啥大问题。
稳定性嘛，只要试剂没问题，操作规范，结果还是挺稳定的。
这方法能用到好多地方呢！像食品检测领域，你想想，要是不知道食品里的游离氨基酸含量，咋能保证食品的质量和营养呢？优势也不少呢！操作相对简单，成本也不高。
咱举个实际案例哈。
有个食品加工厂，用这个方法检测产品中的游离氨基酸含量，及时调整了生产工艺，提高了产品质量。
这效果多棒啊！
游离氨基酸的测定方法真的超实用，能帮我们了解各种物质中的氨基酸情况，为我们的生活和生产带来很多好处。
咱可得好好利用这些方法，让它们发挥更大的作用。
茶叶中茶多酚、氨基酸的测定
测定方法：
高锰酸钾直接滴定法 酒石酸铁比色法
酒石酸铁比色法原理：
酒石酸亚铁能与茶多酚生成蓝紫色络合物，络合物溶 液颜色的深浅与茶多酚的含量成正比。因此可以用比色 方法测定。
仪器：分光光度计 水浴锅，锥形瓶，容量瓶（100mL,25ml) 试剂： （1）酒石酸亚铁溶液：称取 FeSO4· 7H2O 1.000g，含 4个结晶水的 酒石酸钾钠5.000g，加蒸馏水溶解后，用蒸馏水稀释至1000mL （2）PH7.5的磷酸缓冲液
准确称取茶叶磨碎样品3g于500ml烧杯中加入沸水350ml在沸水浴中浸提45min每隔10min摇动11次趁热抽滤残渣用少量热蒸馏水洗涤2233次滤液倒入500ml容量瓶中冷却至室温用蒸馏水定容至刻度摇匀备用
茶叶中茶多酚的测定
茶多酚
茶叶中多酚类物质占茶嫩梢干重的20％～35％，由约30 种以上的酚类物质所组成，通称茶多酚。 茶多酚的性质： 能溶于水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯，微溶于油脂。 对热、酸较稳定，2%的溶液加热至120 ℃并保持30min， 无明显变化。在碱性条件下易氧化变质。
茶多酚的功效：
1）茶多酚能清除活性氧自由基，且能有效消除脂 质过氧化产物丙二醛，具有降血脂的显著功效。 2）茶多酚还具有抑制痢疾、伤寒、霍乱、金黄色 葡萄球菌等有害菌的作用。 3）具有较强的抗放射性作用，以及在抗衰老，抑 制瘤细胞，预防心脑血管疾病等方面都显示出很 好的效应。
是一种有开发前景的天然抗氧化剂。
实验步骤
（l）样品溶液的制备方法：准确称取茶叶磨碎样品3g于 500mL烧杯中，加入沸水350mL，在沸水浴中浸提45min， 每隔10min摇动1次，趁热抽滤，残渣用少量热蒸馏水洗涤 2-3次，滤液倒入500mL容量瓶中，冷却至室温，用蒸馏水 定容至刻度，摇匀，备用。
绿茶中游离氨基酸的测定
绿茶中游离氨基酸的测定
游离氨基酸是指在溶液中单独存在的氨基酸，而不是作为蛋白质的一部分存在。
在绿茶中，游离氨基酸可以通过以下方法进行测定：
1.用碱性氧化剂将绿茶中的蛋白质氧化分解，使其中的氨
基酸释放出来。
2.将释放出的氨基酸通过离子交换树脂或者柱液分离层析
方法进行分离。
3.使用光谱法或者酶标仪等方法测定每种氨基酸的含量。
4.将所有氨基酸的含量加起来，就可以得到绿茶中游离氨
基酸的总含量。
注意，在测定过程中应严格控制实验条件，以确保测定结果的准确性。
HPLC分析测定不同茶叶中的游离氨基酸
HPLC分析测定不同茶叶中的游离氨基酸王富花【摘要】The composition of free amino acids in different tea (green tea, black tea and oolong tea) is ana-lyzed. Each dried pretreated tea(0.25 g) was extracted by 10 mL pure water in a designed temperature(90℃), extraction time 20 min. then filtrated through 0.45μm cellulose membrane, pretreated by SPE column. Take 70μL samples and 10μL O-phthalaldehyde(OPA) derivatization liquid in water bath reaction at a temperature of 25 ℃, 2 minutes later were determined by high performance liquid chromatography (HPLC), chromato-graphic condition was performed on a C18 column, DAD detector, detection wavelength was 338 nm. The mobile phase A was the methanol acetonitrile water solution, and the mobile phase B was the phosphate buffer solution. The results showed that the solid phase extraction cartridges (SPE) column treatment could effectively remove the influence of chromatographic peaks of impurities, and the HPLC method could be effective for the separation and determination of 17 kinds of amino acids in different tea,the content of amino acid in green tea was higher than fermented tea, especially aspartic acid, glutamic acid, and the content of L-Theanine in three kinds of tea was significantly different.%分析检测不同茶叶(绿茶,红茶,乌龙茶)中游离氨基酸的组成.称取0.25 g的茶叶于10 mL 90℃纯净水中浸提20 min后过0.45μm纤维素膜,滤液通过固相萃取(solid phase extraction cartridges,SPE)柱预处理后得到茶汤样品.取70μL的样品与10μL的邻苯二甲醛(OPA)衍生液在25℃水浴中反应2min后通过高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)测定,色谱条件为C18柱,DAD检测器,338 nm检测波长,流动相A为甲醇-乙腈-水溶液,流动相B为磷酸盐缓冲液.试验表明:通过SPE柱能有效去除影响色谱出峰的杂质,HPLC方法能有效地分离测定茶叶中的17种不同氨基酸,绿茶中的氨基酸含量要比发酵茶高,尤其是天冬氨酸、谷氨酸,而茶氨酸在3种茶叶中的含量显著不同.【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2018(039)001【总页数】6页(P141-146)【关键词】氨基酸;高效液相色谱法;固相萃取;茶叶【作者】王富花【作者单位】扬州工业职业技术学院,江苏扬州225127【正文语种】中文茶圣陆羽《茶经》中精论：“茶之为用，味之寒，为饮为最，精行俭德之人，若热渴、凝闷、脑疼、目涩、四肢烦、百节不舒，聊四五啜，与醍醐甘露抗衡也。
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绿茶中游离氨基酸的测定
绿茶是中国的传统饮料，在中国南方，这种茶已有上千年的历史了。
统计数据表明，中国目前是全球绿茶最大的生产和消费国，每年中国绿茶产量达3200多万吨。
在茶叶中，氨基酸是重要的活性成分，其含量决定了茶叶的质量。
因此，测定绿茶中游离氨基酸含量是研究绿茶品质基础上的重要内容。
一般而言，绿茶中游离氨基酸的测定包括两个步骤：一是分离提取游离氨基酸，二是测定提取液的游离氨基酸含量。
首先，实验人员需要准备足量的绿茶样品，然后将样品放入容器中，加入分离剂，搅拌均匀。
在此过程中，实验人员要控制搅拌的时间和温度，以便完全提取游离氨基酸。
一般来说，搅拌温度可以在4°C-40°C之间，搅拌时间一般不超过2小时。
接着，将搅拌完毕后的提取液过滤后，分离出绿茶中的游离氨基酸。
其次，实验人员可以使用多种方法测定提取液的游离氨基酸含量。
例如，可以通过高效液相色谱法(HPLC)、聚类耦合技术（MCT）、核磁共振技术（NMR）等来测定绿茶中游离氨基酸的含量，并可以根据实
验需要选择合适的仪器和试剂。
综上所述，绿茶中游离氨基酸的测定是一个复杂的过程，要求实验人员不仅需要熟悉各种测定方法，还需要控制实验参数，以保证实验结果的准确性。
此外，游离氨基酸在绿茶中的浓度也受到季节变化的影响。
实验人员应根据季节差异，选择合适的采样时间，以获得更准确的测定结
果。
最后，实验人员应特别注意实验室条件，避免试剂污染及其他不良因素对实验结果的影响。
总之，绿茶中游离氨基酸的测定是一个复杂的过程，实验人员在实验前应当认真研究实验原理，选择合适的实验方法，掌握实验参数，注意实验室条件，以便获得准确的实验结果。
以上就是有关绿茶中游离氨基酸的测定的介绍。