血清总胆红素测定标准操作规程
总结总、直接胆红素的检测方法
血清总胆红素和直接（结合）胆红素测定目前测定血清胆红素的方法主要有重氮试剂法（包括改良J-G法、二甲亚砜法、二氯苯重氮盐法和2，5二氯苯重氮四氟硼酸盐法等）、胆红素氧化酶法、钒酸盐氧化法、高效液相色谱法、导数分光光度法、经皮胆红素测定法以及直接分光光度法等。
改良咖啡因（J-G）法：一、实验原理血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应，生成紫色的偶氮胆红素；在同样条件下，未结合胆红素须有加速剂破坏胆红素氢键后才能与重氮试剂反应。
咖啡因、苯甲酸钠作为加速剂，醋酸钠缓冲液可维持反应的PH值同时兼有加速作用。
叠氮钠破坏剩余重氮试剂，终止结合胆红素测定管的偶氮反应。
最后加入碱性酒石酸钠，在碱性条件下，紫色偶氮胆红素转变为蓝色偶氮胆红素，使最大吸光度由530nm转移到598nm，此时，非胆红素的黄色色素及其它红色与棕色色素产生的吸光度可忽略不计，使测定的灵敏度和特异性增加。
最后形成的绿色是由蓝色的碱性偶氮胆红素和咖啡因与对氨基苯磺酸之间形成的黄色色素混合而成。
二、实验方法（一）器材试管，刻度吸管，分光光度计，37℃水浴箱。
（二）试剂1．咖啡因-苯甲酸钠试剂无水醋酸钠41g，苯甲酸钠37.5g，乙二胺四乙酸二钠EDTANa2 0.5g，溶于约500mL 的蒸馏水中，再加入咖啡因25g，搅拌至完全溶解(不可加热)，然后加蒸馏水稀释至1000mL，混匀，过滤后放置棕色试剂瓶中，室温保存可稳定6个月。
2. 5g/L 亚硝酸钠溶液：亚硝酸钠5.0g，加蒸馏水溶解并稀释至100mL，若发现溶液呈淡黄色时，应丢弃重配。
3. 5g/L 对氨基苯磺酸溶液：对氨基苯磺酸（NH2C6H4SO3H·H20）5.0g，加于约800mL 蒸馏水中，加浓盐酸15mL，待完全溶解后，加蒸馏水至1000mL。
4. 重氮试剂临用前，取5g/L 亚硝酸钠溶液（试剂2）0.5mL 与5g/L 对氨基苯磺酸溶液（试剂3）20mL 混合。
5. 5g/L 叠氮钠溶液：叠氮钠0.5g，用蒸馏水溶解并稀释至100mL。
血清胆红素测定实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的本实验旨在通过测定血清中的胆红素含量，了解肝脏和胆囊的健康状况，辅助诊断和监测相关疾病的发展情况，如黄疸、肝炎、肝硬化等。
二、实验原理血清胆红素测定主要包括总胆红素（TBIL）和直接胆红素（DBIL）的测定。
总胆红素是指血液中未与白蛋白结合的胆红素和已与白蛋白结合的胆红素的总和；直接胆红素是指与白蛋白结合的胆红素。
通过测定血清中的胆红素含量，可以了解肝脏和胆囊的功能状态。
三、实验材料1. 试剂：重氮试剂、抗坏血酸、碱性酒石酸钠、钒酸钠、表面活性剂、加速剂、叠氮钠等。
2. 仪器：分光光度计、离心机、移液器、试管等。
3. 样本：待测血清样本。
四、实验方法1. 总胆红素测定- 将血清样本与重氮试剂混合，观察颜色变化。
- 加入抗坏血酸，使非胆红素的黄色色素以及其他红色和棕色色素产生的吸光度降至可以忽略不计的程度。
- 加入碱性酒石酸钠，使最大吸光度从530nm转移到598nm。
- 通过分光光度计测定吸光度，计算总胆红素含量。
2. 直接胆红素测定- 将血清样本与重氮试剂混合，观察颜色变化。
- 在pH3左右的环境下，加入表面活性剂和加速剂，使样品中的总胆红素被氧化剂钒酸钠氧化为胆绿素。
- 通过分光光度计测定氧化前后的吸光度变化，计算直接胆红素含量。
1. 总胆红素测定结果- 待测血清样本总胆红素含量为XX毫克/分升。
2. 直接胆红素测定结果- 待测血清样本直接胆红素含量为XX毫克/分升。
六、实验讨论1. 本实验中，待测血清样本总胆红素含量为XX毫克/分升，高于正常范围（0.2-1.2毫克/分升），提示可能存在肝脏或胆道疾病。
2. 待测血清样本直接胆红素含量为XX毫克/分升，占总胆红素的XX%，提示可能存在肝细胞性黄疸或梗阻性黄疸。
3. 在实验过程中，使用叠氮钠作为防滴剂的质控血清时，可能由于叠氮钠的存在干扰了胆红素与重氮试剂的反应，导致偶氮反应不完全甚至不显色。
因此，在使用质控血清进行实验时，需要注意这种潜在的干扰。
血清总胆红素测定
【思考题】 结合胆红素/总胆红素的比值测定意义？
实验原理重氮试剂1血清中结合胆红素偶氮胆红素2非结合胆红素咖啡因苯甲酸钠醋酸钠加速剂重氮试剂分子内部氢键遭到破坏偶氮胆红素紫红色在540nm波长进行比色实验原理试剂与器材校准液
血清总胆红素测定
浙江中医药大学 生命科学学院 生物化学教研室
【实验目的】
掌握：试剂盒测定血清总胆红素的基本原理 熟悉：试剂盒测定血清总胆红素的操作过程
4、叠氮钠能破坏重氮试剂，终止偶氮反应。不宜采用叠氮 钠作防腐剂中的质控血清。
5、标本对照管的吸光度一般很接近，若遇标本量很少时可 不做标本对照管，可参照其他标本对照管的吸光度。
6、每次加完试剂都应充分混均，给予适宜的温度、时间使 其反应。
7、在使用分光光度计测吸光度前，应使其事先预热，以免 影响所测结果。
【实验原理】
血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反 应，产生偶氮胆红素。非结合胆红素在 催速剂咖啡因等的作用下，其分子内部 氢键遭到破坏后才与重氮试剂反应也产 生偶氮胆红素，即在酸性介质中生成偶 氮色素。
【实验原理】
重氮试剂
1)血清中结合胆红素
偶氮胆红素
2)非结合胆红素+咖啡因-苯甲酸钠-醋酸钠 （加速剂） 重氮试剂
分子内部氢键遭到破坏
偶氮胆红素(紫红色) 在540nm波长进行比色
【试剂与器材】
1. 血清总胆红素测定试剂盒 工作试剂R1：盐酸120mmol/L；咖啡因2.1mmol/L
2，5-二氯苯重氮四氟硼酸盐0.31mmol/L；
校准液：TBil（总胆红素）：68 umol/L，
DBil（结合胆红素）：15 umol/L
血清总胆红素=
× 校准物浓度
总胆红素TBIL测定标准操作程序SOP文件
11危急值：新生儿>300mol/L
12临床意义
胆红素是红细胞正常或非正常降解后在内皮系统形成的有机复合物，检测胆红素有利于监测肝脏疾病以及发现溶血性贫血以及评估黄疸的程度。
血清总胆红素升高见于：
a)胆红素形成过高，如溶血性黄疸。
b)肝细胞处理胆红素的能力下降，如肝细胞黄疸。
c)胆红素在肝外的排泄障碍，逆流入血而引起的黄疸，如阻塞性黄疸。
POINT(3) [ 0 ]
CALIBRATION POINT [ 2 ]
POINT(4) [ 0 ]
SPAN POINT [ 2 ]
WAVELENGTH(PRIMARY) [ 546 ]
DUPLICATE LIMIT(%) [ 5 ]
SECONDARY [ 600 ]
DUPLICATE LIMIT(ABS) [ 10 ]
S.VOLUME(NORMAL) [ 3 ]
SD LIMIT [ 0.1 ]
S.VOLUME(DECREASE) [ 2 ]
SENSITIVITY LIMIT(LOW) [ -99999 ]
S.VOLUME(INCREASE) [ 8 ]
SENSITIVITY LIMIT(HIGH) [ 5847.9 ]
3标本
血清，肝素或EDTA抗凝血浆，处理方法见标本准备。
稳定性：标本要避光保存，并且要立即进行检测。
4试剂
4.1试剂
来源：ROCHE配套试剂（详见试剂说明书）。
贮存条件及稳定性：未打开试剂盒：2－8℃储存至效期末
R1：打开后机上稳定42天
R2：打开后机上稳定14天
准备：R1：直接使用。
R2：干粉试剂，在试剂瓶2中加入10ml蒸馏水。小心混匀后使用。
临床生化项目操作规程
总胆红素(T-Bil)标准操作程序（SOP）实验室名称项目编号制定日期生化室总胆红素Ｏ．Ｔ．Ｃ．1 0 1 2009年06月01日【目的】保证总胆红素检测结果准确，可靠。
【该SOP变动程序】本SOP的改动，可有任一使用本SOP的工作人员提出，并经下述人员批准签字：专业主管，科室主任。
【本SOP适用范围】BT-815A半自动生化仪总胆红素重氮法测定。
【试剂来源】上海荣盛生物技术有限公司。
【标本类型】血清、血浆【实验原理】对氨基苯磺酸＋亚硝酸钠重氮苯磺酸盐胆红素＋重氮苯磺酸盐酸盐重氮复合物（红紫色）【实验仪器】BT-815A半自动生化仪【操作步骤】1、一份R1于一份R2等比例混合。
2、每个病人600微升温浴10分钟备用。
3、取离心后标本30微升加入600微升试剂温浴10分钟，后检测。
【参考值】血清：<5.17mmol/L。
【临床意义】总胆红素的测定对于急性性肝炎，慢性肝炎，肝硬化，胆管炎，胆石症，急性胆囊炎等肝胆疾病和溶血性贫血的诊断具有重要意义。
【注意事项】1、标本为血清或肝素血浆。
标本采集后应避光保存。
丙氨酸氨基转移酶(ALT)标准操作程序（SOP）实验室名称项目编号制定日期生化室丙氨酸氨基转移酶Ｏ．Ｔ．Ｃ．１０３2009年06月01日【目的】保证丙氨酸氨基转移酶检测结果准确，可靠。
【该SOP变动程序】本SOP的改动，可有任一使用本SOP的工作人员提出，并经下述人员批准签字：专业主管，科室主任。
【本SOP适用范围】BT-815A半自动生化仪丙氨酸氨基转移酶测定。
【试剂来源】上海荣盛生物技术有限公司【标本类型】血清、血浆【实验原理】一步法或者两步法、速率法L-丙氨酸+α-酮戊二酸→丙酮酸+ L-谷氨酸（ALT催化）丙酮酸+NADH+H+→L-乳酸+NAD++H2O(LDH催化)【实验仪器】BT-815A半自动生化仪【操作步骤】1.取标本与试剂30/600的比例混匀。
2.上机检测。
【参考值】血清：<40umol/L。
血清总胆红素测定标准操作规程
血清总胆红素测定标准操作规程1检验原理：（钒酸盐法）pH 值接近3时，在钒酸盐和表面活性剂的作用下，胆红素被氧化成胆绿素。
此时，胆红素特有的黄色减少，在波长450nm 处通过测定钒酸作用前后的吸光度的差可以求得样品中总胆红素的浓度。
胆红素−−−−−→−表面活性剂钒酸盐/胆绿素 2.试剂主要组成成分3.样本要求 新鲜无溶血血清、勿使用肝素抗凝血浆。
22～25℃保存8小时，2～8℃保48小时，-20℃保存7天，样本不可反复冻融！4.检验方法：仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程）5.参考范围：6检验结果的解释6.1样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W/V ）的氯化钠溶液稀释样本。
通常稀释2倍，当样本浓度较大时提高稀释倍数。
6.2单位换算：mg/dL=umol/L ×0.05857检验方法的局限性7.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7.2若试剂浑浊或以水空白在450nm 处吸光度大于0.500时不能使用。
8.产品性能指标8.1线性范围：在给定的样本/试剂比例和条件下测定时，本世纪线性范围可达0-300umol/L 。
8.2试剂空白吸光度：在450nm 处，光径1cm 时，空白吸光度A ≤0.500，△A 空白/分钟≤0.002.8.3准确度：相对偏差≤10%。
8.4精密度8.4.1批内精密度CV≤3%8.4.2批间精密度：R≤10%8.5分析灵敏度：在给定的样本/试剂比例和条件下测定时，1umol/L的总胆红素对应的△A不低于1.5×3108.6干扰试验无明显干扰：添加干扰物后的测定值与初始测定值的相对偏差处于±10%以内。
8.7方法比较：本试剂盒与商品化试剂盒测定40个样本测定结果相关性如下：y=0.997x＋1.051；r=0.997。
9.临床意义：胆红素是红细胞正常或非正常降解后在内皮系统形成的有机复合物，检测胆红素有利于监测肝脏疾病以及发现溶血性贫血以及评估黄疸的程度。
总胆红素操作程序
总胆红素操作程序1.目的规范总胆红素（TBIL）检测试验，确保检测结果准确性和重复性。
2．范围本操作规程适用于生化室工作人员、实习人员、进修人员的操作前培训。
3.术语4．测定原理4．1测定方法：钒酸盐法4．2 测定原理：在特定条件下（PH3.0），血清中胆红素与钒酸反应，生成胆绿素，其在450nm 处吸光度的下降与血清中总胆红素含量成正比。
5．标本5．1标本种类：新鲜无溶血血清。
5．2标本采集见生化标本采集程序。
6．试剂6．1试剂来源：和光试剂。
6．1．1组成包装规格：R1 540ml×4 R2 135ml×46．1．2试剂准备试剂为液体双试剂，无需配制,开瓶即可使用。
6．1．3试剂稳定性原装试剂在2～8℃避光保存，稳定期12个月。
试剂开瓶载机2～8℃稳定30天。
新打开试剂不宜与已用过的试剂混合在一起,否则易造成试剂稳定性下降。
7.仪器参数设定AU2700参数设定：和光试剂仪器参数设置具体参见试剂厂家提供的相关仪器的检测参数。
8．校准8．校准：具体参见临床生化校准程序8.1 校准条件：8.1.1仪器光路系统经过光路保养或更换光源等重要部件后。
8.1.2仪器经过大保养后。
8.1.3挪动仪器的安装地点。
8.1.4更换试剂批号。
8.1.5室内质控失控。
8．2 AU2700和光试剂系统的校准：8.2.1 准备：和光配套胆红素校准物.8.2.2 保存和稳定性：原校准品在2～8℃保存至有效期，1ml蒸馏水复溶，复溶后在2～8℃可保存7天。
8.2.3保存位置：低温冰箱-20℃。
8.2.4操作步骤：蓝色样本架的1号位置放蒸馏水；黄色样本架的9号位置放和光配套胆红素定标液→仪器主画面[USER] →[Calibration] →[选择校准项目]→[START]→[YES]。
9．室内质控及失控纠正：见临床生化室内质控程序9．1质控物来源：柏乐液体质控（批号:45612/45613）。
9．2质控物储存条件及准备：-15～-20℃保存至有效期，从低温冰箱取出后室温平衡30分钟。
203血清总胆红素
2
浙江丽水市中心医院 温州医学院附属五院
项目操作规程（SOP）
文件编号 203
减少引起在波长 450 nm 处吸光度的下降，通过测定反应前后吸光度值可求出总 胆红素的浓度。 4 试剂及其他用品 4.1 试剂：钒酸盐氧化法测定总胆红素试剂盒，由日本和光纯药工业株式会社， 货号 997-22301。 4.2 试剂盒保存：保存于 2~350C，不开盖情况下保存至标签的失效期。开盖后放 于仪器的试剂仓库冰箱中至少稳定 30 天。 4.3 试剂盒准备：液态试剂型，即开即用，无特殊准备。 4.4 试剂盒主要成分：氢氧化钠 600mmol/L, 酒石酸钾钠 32 mmol/L，硫酸铜 12 mmol/L，碘化钾 30 mmol/L。含有保护剂。 5 校准品与校准模式 5.1 校准品：由罗氏公司提供的校准液（Cat.No.17006401）,其总蛋白浓度可溯源 至美国国家标准技术研究所（NIST）标准参考材料（SRM）470。 5.2 校准类型和校准点数目：线性模式，3 个校准点。 5.3 校准周期：校准间隔时间为 Full，1d。但在：更换试剂批号或出现质控漂移 时；仪器进行全面保养后；仪器的重要零件更换后；均需进行一次校准。 5.4 校准液重建方法：用 3.00ml 蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min 后即可使用。 6 质控品与室内质控规则 6.1 质控品采用有美国贝克曼公司提供的两个不同水平定值质控液。 6.2 质控液重建方法：用 5.00ml 蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min 后即可使用。 6.3 质控品测定：在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。 6.4 质控规则：采用 Westgard 多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
血清总胆红素测定标准操作规程
1.检测目的
用于定量测定人体血清或血浆中总胆红素的含量
2.检测原理
钒酸氧化法：在PH3.0左右的缓冲液中，钒酸钠氧化总胆红素为胆绿素，使反应液的黄色减少。
测定胆红素氧化前后吸光度的差，可以计算出样品中总胆红素的浓度。
3．适用范围
血清，或用肝素抗凝的血浆
4．试剂及仪器
1.试剂品：
迈瑞公司生产的TBiL试剂盒，各组分如下：
2.校准品
由迈瑞公司提供的校准液，在更换试剂批号或出现质控漂移；仪器进行保养；仪器重要零件更换后进行校准。
3.仪器
迈瑞BS-800型号仪器
5．操作
装载试剂—→进行校准—→进行质控—→输入标本检测项目—→加载标本—→标本测定—→结果复核—→报告
6．注意事项
1. 不能测试严重溶血、脂浊、黄疸的标本, 血浆标本可用肝素抗凝,待测样品室
温不超过24小时，可于2℃-8℃保存72小时，胸腹水经抗凝取上清液。
2. 不能使用过期的试剂，2℃-8℃保存。
3. 定标液应冰冻保存。
7. 结果计算 c ＝ΧC O
式中：c ——测定总胆红素浓度，umol/L ；
A 测定——标本管吸光度；
A 标准——标准管吸光度；
C O ——校准血清总胆红素浓度，umol/L ；
8. 操作性能
1 精密度：
批内CV ≤ 5.0%，批间CV ≤ 6.0%。
2 准确度：
以参考方法定值的血清作为校准品时，本法测定结果与参考方法基本一致。
3 线性范围：2~68
4 umol/L
9. 参考值
5.1~19 umol /L(0.3~1.1mg/dL)
10. 临床意义
胆红素是老化的血红细胞中血红蛋白的代谢产物,血液中总胆红素和直接胆红素的含量测定有利于肝病和黄疸疾病的诊断。
总胆红素增高主要见于各类黄疸肝炎，胆道堵塞，新生儿黄疸。
总胆红素减低见
于孕妇，部分冠心病。
11．安全防护
A 测定
A 标准
1．对任何一份标本（包括质控品、标准品及检测试剂等）都应视其为具有传染性，操作人员在工作时应戴乳胶手套、穿工作服。
2．一旦发生标本容器划破手或身体、液体溅进眼睛等粘膜处，应立即用大量的水冲洗，同时向上级医师或科领导报告，必要时施以丙种球蛋白预防。
12.常见的误差源
1仪器原因：仪器的性能、仪器的校准等。
2试剂原因：试剂过期、定标液过期等。
3标本原因：标本处理、收集不符合要求等。
4人为原因：结果填写错误等。
13．引用文件
本科使用迈瑞公司生产的TBil试剂盒说明书
【操作规程修改规定】
本操作规程自制定之日起开始实施,各实验人员必须严格按照本规程操作,若本仪器,实验方法更新或有新仪器,新方法,新技术应用于临床,则对本操作规程进行修改。