检本16高效薄层色谱法
薄层色谱法实验报告
薄层色谱法实验报告实验目的：1.了解薄层色谱法的基本原理和操作方法；2.掌握样品的前处理方法；3.了解常用的检测方法。
实验原理：薄层色谱法是一种基于不同物质在固定相表面上的吸附和展开程度不同而进行分离和鉴定的方法。
其原理是将待检物样品溶液在预先涂布在玻璃、铝板或塑料薄片上的固定相上均匀展开，然后根据样品分子在固定相上的不同亲和力，通过溶剂的上升和外部应用的电场等力使样品分离，并利用荧光显色、紫外光照射等方法对色谱板进行检测。
实验仪器和试剂：1.薄层色谱仪、显色仪；2.玻璃制薄层色谱板、样品溶液；3.乙酸乙酯、正丁醇、正己烷等有机溶剂。
实验步骤：1.制备薄层色谱板：将玻璃制薄层色谱板在95%乙醇中超声清洗15分钟，然后用热风机烘干，静置冷却，再涂布均匀的硅胶G涂层，烘干后切成所需大小的色谱片。
2.样品前处理：取待检样品溶液，加入一定量的乙酸乙酯，振荡均匀，然后离心分离，取上层液体即为待检样品溶液。
3.上样：用毛细管在薄层色谱板上绘制直径约1cm的小圆孔，使用吸管吸取待检样品溶液，滴在小孔上。
4.色谱：将上样的色谱板放入色谱槽中，加入足够的溶剂，使溶剂面刚好浸没样品点，避免污染色谱板。
5.显色和检测：将色谱板取出，用显色仪或紫外灯照射，记录样品点的迁移距离，确定各组分的相对迁移值。
实验结果和分析：采用薄层色谱法对甲醇、乙醇、异丙醇进行分离。
实验结果显示样品在色谱板上的迁移距离分别为1.2cm、2.5cm和3.8cm，据此计算各组分的相对迁移值分别为0.32、0.66和1.00。
通过与标准品的比对，可以确定各组分的含量和鉴定。
实验结论：。
简述薄层色谱法用于化学药品杂质检查的方法
简述薄层色谱法用于化学药品杂质检查的方法
薄层色谱法是一种常用的化学分析方法，广泛应用于化学药品杂质检查。
薄层色谱法的基本原理是利用不同物质在薄层色谱板上的吸附性质和迁移速度的差异来分离和检测样品中的化学物质。
其方法包括样品的制备、样品在色谱板上的上样、色谱板的开发等步骤。
在化学药品杂质检查中，薄层色谱法常用于检测药品中可能存在的杂质或掺假成分。
具体步骤包括样品的制备，通常是将药品与适量的溶剂混合后进行搅拌和过滤，得到样品溶液；然后将样品溶液倒在预先涂有吸附剂的薄层色谱板上，然后将色谱板放入开发槽中，使溶液中的化学物质按照一定的迁移速度在色谱板上分离；最后，通过显色、目视或者使用光谱仪等设备观察色谱板上化学物质的分离情况并进行定量或定性分析。
薄层色谱法具有操作简单、分离效果好、分析速度快等优点，因此在化学药品杂质检查中得到了广泛应用。
同时，还可以结合其他分析技术，如质谱联用，进一步提高分析的准确性和灵敏度。
模块三 药物检查技术—薄层色谱法(修改)
3.橡皮膏
4.橡皮管
（2）硬板的制备
硬板：吸附剂加粘合剂制成的板 常用的粘合剂：煅石膏（Ｇ）
机械强度差，易脱落，但不易腐蚀源自羧甲基纤维素钠（CMC-Na）
机械强度好，不易脱落，但易腐蚀
a、倾注法： 硅胶G或氧化铝G，直接加水调成糊状
硅胶或氧化铝，加羧甲基纤维素钠水溶液调成糊状
倒在玻璃板上
均匀铺开、振荡、晾干、活化、置干燥器中备用。
（3）同系物中，分子量越大，极性越小，被吸附力越弱。
常见官能团极性顺序：
烷烃<烯烃<醚类<硝基化合物<酯类<酮类
<醛类<硫醇<胺类<醇类<酚类<羧酸类
（二）展开剂（流动相）的选择
选择原则： 被分离成分极性大，展开剂极性大 被分离成分极性小，展开剂极性小
硅胶、氧化铝薄层：展开剂的极性越大，其展开能力越强， 化合物在色谱中移动的速度就越快，表现为Rf 增大。
硅胶和氧化铝含水量越高，吸附活性越弱。 只要在110℃左右加热，这些“自由水” 就能被可逆性 地除去。利用这一原理可以对吸附剂进行活化（去水）和脱 活化（加水）处理，以控制吸附剂的活性。
被分离物质极性与吸附能力的关系 硅胶、氧化铝薄层：被分离物质极性越大，越易被吸附。
一般规律：
（1）官能团极性越大，整个分子极性越大，越易被吸附； （2）形成分子内H键时，被吸附力减弱；
样点直径：2-4mm 点间距离：1.5-2.0cm
2、点样
（3）点样方法： 划线、样品记号点、点样器
动作要轻， 毛细管或点样器不能混用， 斑点大小适当，可多次点样。 注：
平头50ul微量点样器 全自动点样仪
（三）展开
展开缸（色谱缸）
薄层色谱法操作规程
薄层色谱法操作规程目的：建立薄层色谱法的操作规程，以规范操作过程，确保检验结果准确可靠。
适用范围：原料、中药饮片责任人：质量管理部主任、检验员内容：1 简述薄层色谱法系指以适宜的固定相涂布于玻璃板、铝箔片或聚酯薄膜上使成一均匀的薄层，将供试品与相应的对照物点于薄层板的一端，以适宜的溶剂置展开容器内展开，使供试品所含的相应成分分离，采用适宜的显色剂或显色方法显色，将供试品色谱与对照物色谱相比较，或采用薄层扫描仪扫描，以进行鉴别、检查或含量测定的方法。
2 仪器与材料2.1 薄层板按照固定相的种类，薄层板可分为正相薄层板（如硅胶薄层板、聚酰胺薄膜）、反相薄层板（如C18键合相薄层板）等。
硅胶薄层板是目前使用最广的薄层板，如硅胶G、硅胶GF254、硅胶H和硅胶HF254等。
高效薄层板所使用的固定相较普通薄层板平均粒度小，颗粒分布范围窄，因此在相对短的展开距离中可以达到更好的分离效果。
目前使用的薄层板有市售薄层板和自制薄层板两种。
一般市售薄层板分离效果较自制薄层板好。
如需特殊薄层板（如改性板）时，可采用自制薄层板。
2.2 点样器2.2.1 手动点样主要用微升毛细管配合与之相应的手动点样仪等。
2.2.2 自动点样采用半自动点样仪或全自动点样仪，按预设程序自动点样。
2.3 展开容器又称展开缸，为大小适宜的密闭展开容器。
有双槽展开缸及平底展开缸等。
此外，也有自动展开仪器，可将薄层板按预定程序单次或多次展开，提高薄层展开的重现性。
2.4 显色设备包括喷雾显色、浸渍显色以及蒸气熏蒸显色的设备。
2.4.1 喷雾显色多用玻璃喷雾瓶或其它专用的喷雾设备，喷雾形成的雾滴应细小并且均匀。
2.4.2 浸渍显色多在盛有显色剂的展开缸中进行。
2.4.3 蒸气熏蒸显色可在密闭的展开缸、干燥器等设备中进行。
如薄层板需加热，可使用烘箱或专用的薄层加热台。
2.5 检视和记录设备由暗箱及摄像设备组成。
2.5.1 暗箱配备可见光、254nm 和365nm紫外光光源以及相应的滤光片。
薄层色谱层析操作规程
薄层色谱层析操作规程1. 引言薄层色谱（TLC）是一种常用的分离和分析技术，适用于有机物和天然产物的检测、纯化和鉴定。
本操作规程旨在提供一种标准化的TLC操作步骤，以确保结果的准确性和可重复性。
2. 实验材料和仪器设备•薄层色谱板：选择合适的固定相和基底材料的薄层色谱板。
•检测溶剂：根据需要选择合适的溶剂，常用的有乙醚、醋酸乙酯、甲醇、正己烷等。
•样品：准备待测物的溶液或提取液。
•试剂：例如显色剂、定位剂等。
•色谱槽：用于放置色谱板的槽状容器。
•喷雾开发箱：用于显色和可视化样品。
3. 操作步骤3.1 准备工作1.检查薄层色谱板是否完整，如有损坏需更换。
2.在色谱板上使用铅笔标记出样品和参比物的位置。
3.2 样品处理1.准备待测物的溶液或提取液，并将其过滤以去除杂质。
2.如需测定混合物中的成分，可先进行分离提取。
3.3 上样1.使用微量锥或玻璃管在标记位置上均匀地涂抹样品。
2.上样后务必避免接触色谱板其他区域。
3.4 开发1.将色谱板放置在色谱槽中，加入适当的检测溶剂。
注意溶剂的选择应根据待测物的性质和溶解性来确定。
2.等待溶剂上升至足够高度，将色谱板取出并迅速标记并扫描涂点位置。
3.5 显色和观察1.将色谱板放入喷雾开发箱中，并加入适当的显色剂。
2.等待显色剂完全插入后，将色谱板取出并进行观察。
3.6 数据处理1.使用适当的测量工具，如图像分析软件，测量色谱带的迁移距离和Rf值。
2.进行定性和定量分析，根据需要绘制色谱图。
4. 安全注意事项1.使用化学品和有机溶剂时必须戴上防护手套和防护眼镜，以防止溅入眼睛或与皮肤接触。
2.所有操作需在通风良好的实验室中进行，避免吸入有害气体。
3.注意操作时避免产生火源，如禁止吸烟和使用明火。
4.做好废弃物的处理工作，避免对环境造成污染。
5. 结论本操作规程提供了一套标准化的薄层色谱层析操作步骤，涵盖了样品准备、上样、开发、显色和观察、数据处理等关键步骤。
通过遵守操作规程和安全注意事项，可以准确、高效地进行薄层色谱层析实验，并获得可靠的结果。
薄层色谱法测定标准操作规程
薄层色谱法测定标准操作规程目的：建立薄层色谱法测定标准操作规程。
（《中华人民共和国药典》2010版附录）范围：适用于薄层色谱法的测定。
职责：检验员，QC主管。
内容：1 简述：薄层色谱法，是将适宜的固定相涂布于玻璃板上，成一均匀薄层。
等点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别，杂质检查或含量测定的方法。
2 仪器与材料：2.1 薄层板：2.1.1市售薄层板市售薄层板分普通薄层板和高效薄层板，按固定相种类又可分为硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、微晶纤维素、硅藻土、氧化铝、聚酰胺薄膜等薄层板。
2.1.2 自制薄层板在保证色谱质量的前提下，如需对薄层板进行特别处理和化学改性，以适应供试品分离的要求时，也可用实验室自制的薄层板，自制薄层板系指手工（或借助涂布器）将固定相涂布于玻璃板或其他适宜载板上使成为有一定厚度的均匀薄层。
常用的固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、微晶纤维素等，其粒径一般为10~40um。
2.2 点样器：采用手动、半自动或全自动点样器材，手动点样时一般采用微量毛细管。
2.3 展开容器：应使用适合薄层板大小的平底或双槽薄层色谱专用展开缸，并配有严密的盖子。
水平展时使用专用水平展开缸。
2.4 显色与显色装置按各品种项下规定。
可采用喷雾显色、浸渍显色或蒸气熏蒸显色，喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸渍显色可用玻璃容器或适宜的展开缸代替；蒸气熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。
2.5 检视装置为装有可见光或紫外光（254nm及365nm）光源及相应的滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄色谱图用，暗箱内光源应有足够的光照度。
3 操作方法：3.1 薄层板制备：3.1.1 市售薄层板临用前一般应在110℃活化30min，聚酰胺薄膜不需活化。
铝基片薄层板或聚酰胺薄膜均可根据需要剪裁，但须注意剪裁后的薄层板底边的涂层不得有破损，如在储放期间被空气中杂质污染，使用前可用甲醇、二氯甲烷与甲醇的混合溶剂在展开容器中上行展开预洗，取出，晾干，活化后使用。
薄层色谱法
0502薄层色谱法薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上， 在展开容器内用展开剂展开， 使供试品所含 成分分离， 所得色谱图与适宜的对照标准物质按同法所得的色谱图对比， 亦可用薄层色谱扫 描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。
1．仪器与材料 1 (1)薄层板 市售薄层板 市售薄层板按固定相种类分为硅胶薄层板、 聚酰胺薄层板、 氧化铝薄层板 等；按固定相粒径大小分为普通薄层板（10～40μm）和高效薄层板（5～10μm） ；按硅胶板 是否含有荧光剂分为硅胶 G 板和硅胶 GF254 板。
自制薄层板 在保证色谱质量的前提下， 如需对薄层板进行特别处理和化学改性， 以适 应供试品分离的要求时， 也可用实验室自制的薄层板。
最常用的固定相有硅胶 G、 硅胶 GF254、 硅胶 H、硅胶 HF25、微晶纤维素等，其颗粒大小，一般要求粒径为 1O～40μm，加水或羧甲 基纤维素钠水溶液(0.2％～0.5％)、或改性剂溶液适量调成糊状，均匀涂布于玻板上。
使用 涂布器涂布应能使固定相在玻板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。
玻板应光滑、平整， 洗净后不附水珠。
2 (2)点样器 一股采用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器材。
(3)展开容器 上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或双槽展开缸，展开时须 能密闭。
水平展开用专用的水平展开缸槽。
3 (4)显色装置 喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器， 要求用压缩气体使显色剂呈 均匀细雾状喷出； 浸渍显色可用专用玻璃器械或用适宜的展开缸代用； 蒸气熏蒸显色可用双 槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。
(5)检视装置 为装有可见光、254nm 及 365nm 紫外光光源及相应的滤光片的暗箱，可 附加摄像设备供拍摄图像用。
暗箱内光源应有足够的光照度。
4 (6)薄层色谱扫描仪 系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点， 或经激发后能发 射出荧光的斑点， 进行扫描， 将扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定量的分析仪器。
薄层色谱法检验记录
薄层色谱法检验记录薄层色谱法（Thin Layer Chromatography，TLC）是一种常用的分离和物质检验技术。
它基于化学物质在固定相上沿毛细作用和物质吸附与解吸之间的相互作用进行分离。
在本次实验中，我们将使用薄层色谱法进行其中一种药物的质量检验。
首先，我们准备了实验所需的仪器和试剂。
仪器包括薄层色谱平板、色谱槽和展开槽等。
试剂包括样品溶液、参比物溶液和色谱移液剂等。
实验的前期准备工作包括制备样品溶液和参比物溶液。
样品溶液的制备需要将一定量的药物样品溶解在适量的溶剂中，并摇匀使其完全溶解。
参比物溶液的制备同样需要将一定量的参比物溶解在溶剂中。
接下来，我们将薄层色谱平板用移液器均匀地涂抹一层固定相，然后放置在干燥器中风干。
实验中，先将薄层色谱平板上方的标线绘制在适当的位置。
然后，将薄层色谱平板放入色谱槽中，加入足够的色谱移液剂使其达到初始线位置。
等待一段时间，使得色谱平板与色谱移液剂达到平衡。
接下来，我们将样品溶液和参比物溶液用毛细管或微量移液器分别均匀地沿标线滴在薄层色谱平板上。
注意，每次滴液后都需要等待片刻，使溶液完全吸附扩散在固定相上。
当所有溶液都滴涂完毕后，将薄层色谱平板放入展开槽中。
展开槽中的溶液会逐渐向上移动，溶剂会在不同化学物质的作用下沿着薄层色谱平板向上移动。
当溶液前进到一定高度时，立即将薄层色谱平板取出，并用气吹使其迅速干燥。
最后，我们将干燥的薄层色谱平板放在紫外光下进行观察和分析。
化学物质在紫外光下会产生特定的荧光，通过观察色谱带的位置、形状和颜色等特征，我们可以判断样品中所含的化学物质。
在本次实验中，我们通过薄层色谱法成功地对其中一种药物进行了质量检验。
通过比较样品溶液和参比物溶液在薄层色谱平板上的色谱带，我们可以确定样品中是否含有目标化合物，并可以计算出其含量。
同时，我们还通过类似的方法对其他样品进行了检验，并得到了相应的分析结果。
总的来说，薄层色谱法是一种简便、快速、准确的分析方法。
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位臵：
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1
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2
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3
2.0cm
1.5-2.0cm
1, 2 样品 3 标准品来自三、展开展开就是让溶剂借助吸附剂的毛细管作用，载带 被分离组分向前移动过程。 展开方式有：上行展开 倾斜上行展开 下行展开 ( R 小 )
f
展开方法：在密闭的层析缸进行，层析缸内被溶剂 蒸气预饱和(防止边缘效应)
定性分析—2×8cm
定量分析—10×20cm
软板—不加粘合剂，用干吸附剂铺成的薄层板
特点：简单、展开速度快、但不牢固、分离效果差 硬板—吸附剂加粘合剂，用湿涂法铺成的薄层板 活化处理（高温去水） 硅胶G—自含粘和剂
二、点样
将试液滴加到薄层板上
方法：用平整的毛细管或微量注射器
浓度：0.1%~1%，几微升
1, 2 样品 3 标准品
薄层色谱的塔板数、塔板高度、分离度
n H R
d1 W
d1 n W
2
n 16 (
) 16 (
2
R f dm W
W
1
)
2
2
2
H
dm
d2 d1
16 d 1
16 R f d m
R
2(d1 d 2 ) W1 W 2
W1 W 2
R
d W
P288-习题6
d m 15 . 0 cm R f丙 R f缬 R f亮 R st 丙 d丙 dm d缬 dm d亮 dm d丙 d缬 d亮 d缬 d 丙 1 . 2 cm 1 . 2 cm 15 . 0 cm 3 . 0 cm 15 . 0 cm 5 . 4 cm 15 . 0 cm 1 . 2 cm 3 . 0 cm 5 . 4 cm 3 . 0 cm 1 . 80 0 . 40 0 . 36 0 . 20 0 . 08 d 缬 3 . 0 cm d 亮 15 . 4 cm
Rf 原点到斑点中心的距离 原点到溶剂前沿的距离
Rf
di dm
Rf
1 1 k
dm di
Rf与组分性质、吸附剂、展开
剂性质和展开条件等有关。
Rf是定性参数
取值范围是0～1
可用范围是0.2～0.8 最佳范围是0.3～0.5
相对比移值
R st Rf R
i
di d
s
1
2
3
f s
•
•
•
Rst可以大于1，也可以小于1。
第五节 高效薄层色谱法
高效薄层色谱法(HPTLC)的薄板由厂 家生产，使用更细的吸附剂制板，板层 更薄更均匀、致密；点样、展开、测定 实现仪器化操作。具有更高的分离效率 和检出灵敏度。
B A
第六节 薄层扫描定量方法
一、薄层扫描仪
二、扫描方式
本章结束! 谢谢!
仪器分析—第16章
第一节 概 述
薄层色谱法 (TLC) 是将固定相均匀涂布在表面光滑 的平板上形成薄层，而进行分离和分析的色谱方法。
高效薄层色谱法(HPTLC)的薄板由 厂家生产，使用更细的吸附剂制板，板 层更薄更均匀、致密；点样、展开、测 定实现仪器化操作。具有更高的分离效 率和检出灵敏度。
B A
R st 亮
P288-习题7
d i 9 . 0 cm R fi R fs R st di dm ds dm di ds
d s 7 . 5 cm 9 . 0 cm 15 cm 7 . 5 cm 15 cm 9 . 0 cm 7 . 5 cm 1 .2 0 .5 0 .6
二、流动相(展开剂/溶剂)
常用的有： 环己烷<二硫化碳<苯<四氯化碳<二氯甲烷<乙醚< 氯仿<乙酸乙酯<正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇<水
溶剂极性↑，展开能力↑，k↓， Rf↑ ，因此， 调节溶 剂极性，可以控制组分的比移值。
多用混合溶剂
三角形优化法
最佳范围是0.3～0.5
三、吸附剂与展开剂的选择原则
d m 15 cm
P288-习题8
d A 7 . 6 cm Rf dA dm
d m 16 . 28 cm 7 . 6 cm 16 . 28 cm 0 . 47
d 14 . 3 cm d d m R f 14 . 3 cm 0 . 47 6 . 72 cm A
薄层板浸入展开剂深度0.51.0cm；展开至整板3/4
距离，标记前沿。
前沿
•
2.0cm
1
•
2
•
3
四、显色定位
紫外光照射法：
HF254、GF254 、HF365
蒸气显色法：
碘、挥发性酸碱(HCl、HNO3、NH3H2O等)
1
2
喷洒显色法：
浓H2SO3、茚三酮、三氯化铁-铁氰化钾
生物自显影法
五、定性分析
第二节 薄层色谱法的原理
一、薄层色谱法的原理
分离机制：吸附色谱法、分配薄层法、…
固定相：吸附剂 移动相(展开剂)：混合有机溶剂
溶剂借助吸附剂的毛细管作用，载 带被分离组分向前移动(展开) ，展开 过程中，组分不断被吸附、解吸附、 再吸附、再解吸附…，
B A
二、Rf 及分离度
比移值(Rf)：
溶剂前沿
第三节 TLC 的固定相与流动相
一、固定相(吸附剂)
要求：纯度高、粒度小（10~40 um）、均匀 种类： 硅胶
氧化铝：中性、碱性和酸性 纤维素
聚酰胺
硅胶的型号
G—自含粘和剂(石膏)
CMC—自含粘和剂(羧甲基纤维素) H—不含粘和剂 HF254—含荧光剂，254nm光照发绿光 HF365—含荧光剂，365nm光照发光 GF254—含粘和剂\荧光剂
在一块薄层板上，与标准 品的Rf值对照定性。
在没有标准品的情况下， 也可采用Rst定性。
•
1
•
2
•
3
1, 2 样品 3 标准品
六、定量分析
洗脱法：将组分斑点全部取下，用适当 的溶剂进行洗脱，再选用适当的方法(如紫 外分光光度法、荧光分光光度法等)进行定 量测定。 目视比色法：一种半定量分析方法 。 薄层扫描法：用薄层扫描仪对组分斑点 进行扫描，直接测定斑点的含量。
吸附剂的选择：（选择合适的吸附力） 根据被测物极性与吸附剂的活性 被测物极性强—活性小的吸附剂 被测物极性弱—活性大的吸附剂 展开剂的选择： “相似相溶”原则
P288-习题2、5
第四节 TLC 的实验技术
操作可分四个步骤
铺板 →点样 → 展开 →显色定位(定性/定量)
B A
一、铺板—薄层板的制备