EMA和CK在上皮肿瘤微转移的应用
常用免疫组化试剂介绍
常用免疫组化试剂介绍一、用于鉴别诊断(一)上皮源性：1. 细胞角蛋白/cytokeratin.CK：目前，商品化的细胞角蛋白有20多种，不同的分子量代表不同类型的上皮标志。
通常将C K分为两大类型：Ⅰ型〔低分子量〕；Ⅱ型〔高分子量〕。
理论上讲，大多数单层上皮表达低分子量的CK；复层上皮多表达高分子量的CK；移形上皮〔膀胱〕和假复层上皮〔呼吸道的被覆上皮〕既表达低分子量的CK，也表达高分子量的CK。
在癌组织中，低分子量的CK多在腺癌中表达，高分子量的CK多在鳞癌中表达。
目前为止，未发觉任何一种上皮只含有一种CK，某些上皮可含2-10种不同分子量的CK。
因此，目前试图应用单一的CK免疫表型来确定某种特定的上皮性肿瘤是不可能的。
同样，应用CK来区别腺癌、类癌和间皮瘤也是困难的。
因此，CK的免疫组化结果推断是一个较为复杂的问题，在应用这类标记物作为腺癌和鳞癌的鉴别应特别注意。
有必要时，应联合用多种CK加以综合推断。
CK的阳性表达还包含有间变癌、双向分化的滑膜肉瘤、脊索瘤、胚胎癌、间皮瘤、上皮样肉瘤、胸腺瘤等。
CK的阴性表达有：副节瘤单向分化的滑膜肉瘤、软骨〔肉〕瘤、精原细胞瘤、淋巴瘤、脑膜瘤、恶黑、恶纤组、软组织肉瘤〔除特别类型外〕。
在推断CK免疫组化结果时应注意几点：〔1〕 CK的单克隆抗体优于多克隆抗体；〔2〕 CK常出现斑点状的假阳性反响，应注意识别；〔3〕虽然大多数CK多在胞浆表达，但CK17多在胞核表达；〔4〕绝大多数CK抗体需用胰酶消化，可增加阳性表达率和染色强度；〔5〕局部非上皮性肿瘤〔平滑肌肉瘤〕可见有CK表达，在诊断时应注意；〔6〕淋巴结、扁桃体和脾组织中的滤泡外的网织细胞含有CK8和18以及desmin,在推断淋巴结转移癌和肌源性肉瘤转移时应依据组织学综合推断。
2.上皮膜抗原〔epithelial membrane antigen/EMA〕：EMA是上皮细胞分泌的一种乳脂小球膜糖蛋白，广泛存在于人体各种上皮细胞中〔也存在于间皮细胞、浆细胞、组织细胞和T细胞淋巴瘤中〕，其分布与角蛋白相似，但对内脏腺上皮优于细胞角蛋白，尤其是分化差的癌EMA有时可呈强阳性表达。
emt过程中肿瘤细胞形态学变化
emt过程中肿瘤细胞形态学变化摘要：一、EMT 过程简介1.EMT 的定义2.EMT 在肿瘤发展中的作用二、肿瘤细胞形态学变化1.细胞形态的改变2.细胞连接和细胞黏附的变化3.细胞骨架重塑三、EMT 过程中的关键分子1.表皮生长因子受体（EGFR）2.转化生长因子β（TGF-β）3.黏附蛋白（如E-cadherin 和N-cadherin）4.细胞骨架蛋白（如β-actin 和filamin A）四、EMT 与肿瘤侵袭和转移的关系1.EMT 与肿瘤侵袭2.EMT 与肿瘤转移五、靶向EMT 治疗策略1.抑制EMT 过程的关键分子2.增强肿瘤细胞对EMT 抑制药物的敏感性3.利用肿瘤细胞EMT 状态进行精准治疗正文：上皮- 间质转化（EMT）是一种重要的细胞生物学过程，通过该过程，上皮细胞能够获得间充质细胞的特征，从而影响细胞迁移、侵袭和分化。
在肿瘤发生发展过程中，EMT 起到了关键作用。
本文将概述EMT 过程，重点讨论肿瘤细胞形态学变化及其与EMT 过程的关系，并探讨靶向EMT 治疗策略。
在EMT 过程中，肿瘤细胞的形态学发生显著变化。
首先，细胞形态从扁平、紧密排列的上皮细胞转变为圆形、松散排列的间充质细胞。
这种形态学改变使肿瘤细胞能够更好地适应不同的微环境，从而促进肿瘤进展。
其次，细胞连接和细胞黏附分子发生变化，如E-cadherin 的表达降低，N-cadherin 的表达增加。
这些变化使肿瘤细胞能够突破基底膜，侵入周围组织。
此外，细胞骨架重塑也是EMT 过程中的关键环节。
β-actin 和filamin A 等细胞骨架蛋白的表达改变，使细胞骨架结构变得不稳定，从而有利于肿瘤细胞的迁移和侵袭。
EMT 过程中的关键分子包括表皮生长因子受体（EGFR）、转化生长因子β（TGF-β）、黏附蛋白（如E-cadherin 和N-cadherin）以及细胞骨架蛋白（如β-actin 和filamin A）。
肿瘤细胞转移的分子机制研究
肿瘤细胞转移的分子机制研究肿瘤细胞转移是恶性肿瘤的主要特征之一，也是导致癌症患者死亡的主要原因之一。
了解肿瘤细胞转移的分子机制对于癌症的早期诊断、治疗以及预后评估具有重要意义。
本文将介绍肿瘤细胞转移的主要分子机制，并探讨相关的研究进展。
1. 细胞外基质的重塑在肿瘤细胞转移过程中，细胞外基质（ECM）的重塑起着重要的作用。
ECM是由一系列结构和功能相互关联的分子组成的复杂网络，包括胶原纤维、纤维连接蛋白和透明质酸等成分。
肿瘤细胞通过调节ECM的合成、分解和重组，促进肿瘤细胞的迁移和侵袭。
2. 上皮-间质转化（EMT）上皮-间质转化是指上皮细胞转变为具有间质细胞样特征的过程。
在肿瘤细胞转移中，EMT的发生使得肿瘤细胞脱离原始的密集连接，获取到更强的迁移和侵袭能力。
EMT的调控涉及多种关键的分子，如转录因子Snail、Slug和Twist等。
3. 细胞间相互作用细胞间的相互作用对于肿瘤细胞转移的调控至关重要。
细胞间的黏附、信号传导和细胞外囊泡的释放等机制，能够影响肿瘤细胞的迁移和侵袭能力。
细胞间连接蛋白如整合素和选择素等在这一过程中发挥着重要作用。
4. 癌干细胞癌干细胞（CSCs）是具有自我更新和多向分化潜能的一小部分肿瘤细胞。
CSCs在肿瘤细胞转移中起着重要的作用，因为它们具有增殖、抵抗药物和侵袭能力。
研究表明，CSCs的特定分子标记可以用于识别和定位这些细胞，并进一步研究它们在肿瘤转移中的功能和机制。
5. 肿瘤微环境肿瘤微环境是指肿瘤细胞周围的细胞和物质的微环境，包括肿瘤相关巨噬细胞、血管生成和炎症反应等。
肿瘤微环境中的细胞和信号分子可以与肿瘤细胞相互作用，影响肿瘤细胞的转移能力。
研究肿瘤微环境中的分子机制有助于深入了解肿瘤细胞转移的过程。
总结：肿瘤细胞转移的分子机制研究是现代肿瘤学的热点之一。
通过深入研究肿瘤细胞转移的分子机制，我们可以更好地理解肿瘤的发生和发展过程，为癌症的诊断和治疗提供理论依据。
病理学基础知识试题及答案
病理学基础知识试题及答案1.呈浸润性生长的良性肿瘤是（）A 纤维瘤B 血管瘤C 平滑肌瘤D 神经鞘瘤E 脑膜瘤2.浆细胞性恶性淋巴瘤的特异性免疫标记是（）A CD34B CD15C CD56D Vsc387E LCA3.干酪样坏死的本质是（）A 彻底的凝固性坏死B 脂肪坏死C 纤维素样坏死D 干性坏疽E 液化性坏死4.液化性坏死常见于（）A 肝B 脑和胰腺C 胃肠道D 肾E 脾5.二尖瓣狭窄时扩张的左心房内球形血栓是（）A 白色血栓B 红色血栓C 混合血栓D 透明血栓E 以上都不是6.下列疾病属于Ⅰ型超敏反应的是（）A 新生儿溶血性贫血B 结核病C Graves病D 青霉素引起的过敏性休克E 原位免疫复合物性肾小球肾炎7.肿瘤的硬度与下列哪项无关（）A 肿瘤的良、恶性B 肿瘤的种类C 实质与间质的比例D 肿瘤间质血管的比例E 变性、坏死等继发改变8.组织中沉积的钙盐 HE 染色时呈（）A 无色有折光性阴影B 红色团块状C 颗粒性、片块状蓝色物质D 深红色小条、小块状E 红色颗粒状9.肿瘤的颜色与下列哪项因素无关（）A 组织来源B 含血量的多少C 是否有继发改变D 是否含有色素E 肿瘤的良、恶性10.年轻女性最常见的乳腺良性肿瘤是A 单纯性腺病B 纤维腺瘤C 导管扩张症D 导管内乳头状瘤E 纤维囊性病11.肉瘤的典型肉眼形态是（）A 淡黄色、分叶状、质软、包膜完整B 灰白色，质硬，边界不清C 结节状、有包膜，切面灰白色、质硬D 不规则结节状，切面灰红、质软、湿润如鱼肉状E 囊状，囊腔内充满黏液12.决定肿瘤性质的主要依据是（）A 肿瘤的生长方式B 肿瘤的肉眼形态C 患者的发病年龄D 肿瘤的细胞形态和组织结构E 患者的临床表现13.关于肿瘤间质的描述正确的是（）A 由胶原纤维组成B 不含有血管C 形态有异型性D 不具有特异性E 任何肿瘤都有间质14.关于病理性核分裂象的叙述，下列正确的是（）A 见于肿瘤性增生B 见于良性肿瘤C 见于恶性肿瘤D 不是确定肿瘤性质所必需的E 以上都不是15.恶性肿瘤的主要特征是（）A 浸润性生长和转移B 巨细胞形成C 细胞排列紊乱D 核分裂象多见E 血管丰富16.女性，56 岁，乳头糜烂。
肿瘤转移的分子机制解析
肿瘤转移的分子机制解析肿瘤转移是指恶性肿瘤细胞从原发肿瘤转移到其他部位的过程。
对于肿瘤患者而言，肿瘤转移常常是其预后不良的主要原因。
了解肿瘤转移的分子机制对于探索新的治疗策略和提高患者生存率具有重要意义。
本文将对肿瘤转移的分子机制进行解析。
一、转移相关基因的改变在肿瘤转移过程中，一些特定的基因发生改变，进而促使肿瘤细胞具备转移的能力。
这些基因包括转录因子、增殖和凋亡调控因子、细胞粘附分子等。
例如，转录因子Snail和Slug的过度表达可以抑制细胞间黏附，并促使肿瘤细胞脱离原发肿瘤，进而转移到其他部位。
此外，凋亡调控因子Bcl-2的上调也与肿瘤细胞的转移能力增强相关。
通过研究这些转移相关基因的改变，有助于揭示肿瘤转移的分子机制。
二、细胞外基质的参与细胞外基质（ECM）是由蛋白质和多糖组成的复杂网络结构，对于肿瘤转移具有重要作用。
ECM通过提供结构支持、调控细胞迁移和侵袭以及激活信号转导通路等方式参与肿瘤转移。
例如，转移相关基因在ECM上的调控和活化，可以促使肿瘤细胞进一步侵袭并跋涉到其他组织。
此外，ECM中一些特定的蛋白质，如纤维连接蛋白（fibronectin）和类胰岛素生长因子结合蛋白（IGFBP），也会对肿瘤细胞的迁移和入侵产生影响。
三、细胞内信号通路的调控细胞内信号通路在肿瘤转移过程中扮演着重要角色。
一些信号通路的异常活化会促使肿瘤细胞的侵袭和转移。
例如，Wnt/β-catenin信号通路在多种肿瘤的转移中发挥着重要作用。
过度激活的Wnt/β-catenin 信号通路可导致细胞极化丧失和上皮-间质转化，这些变化会进一步促进肿瘤细胞的转移。
此外，炎症相关信号通路，如NF-κB和JAK/STAT等，也与肿瘤转移相关。
四、血管生成与肿瘤转移血管生成是指新生血管的形成，对于肿瘤转移的进展具有至关重要的作用。
血管生成不仅为肿瘤细胞提供充足的氧气和营养物质，也为其提供途径以侵入其他组织。
在肿瘤中，血管生成主要通过血管内皮生长因子（VEGF）家族的成员实现。
什么是EMA-CO方案
什么是EMA-CO方案简介EMA-CO方案是一种用于治疗晚期结直肠癌的化疗方案。
该方案结合了顺铂（Epirubicin）、依托泊苷（Mitomycin C）和长春新碱（Vincristine）三种化疗药物。
通过联合应用这三种药物，EMA-CO方案可以提高治疗效果，延长患者的生存期，并且减轻患者的痛苦。
适应症EMA-CO方案主要适用于结直肠癌晚期患者，尤其是具有肝转移和淋巴结转移的患者。
该方案也常被用于治疗复发性或转移性的结直肠癌。
药物介绍1.顺铂（Epirubicin）：顺铂是一种广泛应用于抗癌化疗的铂类药物。
它能够通过干扰DNA的修复和复制过程，抑制癌细胞的生长和分裂，从而达到治疗肿瘤的效果。
2.依托泊苷（Mitomycin C）：依托泊苷是一种抗生素类化疗药物。
它通过与DNA结合，阻断DNA链的复制，从而干扰癌细胞的生长和分裂。
3.长春新碱（Vincristine）：长春新碱属于天然产物类化疗药物。
它能够干扰癌细胞的有丝分裂过程，阻断纺锤体的形成，从而导致癌细胞的死亡。
方案实施EMA-CO方案的治疗周期通常为3周。
每个周期内，患者会接受一次化疗。
方案的实施过程如下：1.检查和评估：在开始方案之前，医生会对患者进行全面的检查和评估，包括病史、体格检查、肿瘤标志物检测等。
这有助于确定患者是否适合接受EMA-CO方案的治疗。
2.化疗药物的使用：在治疗周期的第1天，患者会被给予顺铂的静脉注射。
接着，依托泊苷也会通过静脉注射给予患者，通常在第1天或第2天进行。
最后，长春新碱会在第1天、第2天或第3天通过静脉注射给予患者。
3.监测和调整：在方案实施期间，医生会定期监测患者的血液指标和身体状况，以确保治疗的安全性和有效性。
根据患者的反应和耐受性，医生可能会调整剂量或暂停治疗。
4.治疗方案的持续时间：EMA-CO方案通常需要多个周期的治疗，具体的周期数取决于患者的疗效和耐受性。
临床疗效EMA-CO方案已经在临床实践中证实了其良好的抗肿瘤效果。
免疫组化在肿瘤病理诊断中的意义
鉴别诊断技巧 1
对淋巴结来源不明的转移性肿瘤
用角蛋白抗体获得阳性支持癌的诊断 用Vimentin抗体获得阳性支持肉瘤的诊断 用甲状腺球蛋白抗体获得阳性支持甲状腺癌的诊断 用S-100蛋白抗体获得阳性支持黑色素瘤的诊断。
5. 白细胞共同抗原（LCA）：淋巴网状细胞均为膜阳性，作第一线抗体。
肿瘤细胞增殖与凋亡标记
1. 肿瘤增殖标记：反应细胞增殖活性，是瘤细胞新生（恶性）状况的客观 指标；
增殖细胞核抗原（PCNA）、Ki-67，Brdu。
2. 细胞凋亡标记： 凋亡抑制基因蛋白抗体：Bcl-2、Bcl-XL、mtp53。 促凋亡基因蛋白抗体：Fas/FasL，wtp53、Bax、Bcl-xs
均可表达，但纤维细胞较明显，在一些上皮性肿瘤也有阳性反应。常 用作间叶源与上皮源肿瘤的第一线鉴别抗体 。
2. 结蛋白（Des）：标记平滑肌、横纹肌肿瘤。
间叶源性肿瘤标记
3. 肌动蛋白（Actin）：标记平滑肌、血管内皮、肌上皮细胞。
4. 肌球蛋白（Myotlobin），肌红蛋白（myosin）：标记横纹肌较好。 5. Ⅷ因子、CD34：对血管内皮细胞肿瘤标记较特异。
2. 有一种恶性纤维组织细胞瘤，由纤维细胞、肌纤维母细胞和组织细胞 混合组成的恶性肿瘤，故应用Vim和组织细胞标记来诊断。
神经、胶质细胞及神经内分泌肿瘤标记
1. 神经原特异性烯醇化酶（NSE）：标记神经原肿瘤。
2. 胶质纤维酸性蛋白（GFAP）：特异性标记脑胶质细胞。
3. 神经内分泌肿瘤 （类癌、垂体瘤、甲状腺髓样癌、皮肤Merkel细胞 癌、原始神经外胚层瘤） ：同时应用NSE、嗜铬蛋白颗粒A（CgA）及
CK19和EMA在Ⅰ～Ⅱ期宫颈鳞癌淋巴结的表达及其相关性
CK19和EMA在Ⅰ～Ⅱ期宫颈鳞癌淋巴结的表达及其相关性吉亚南;宋静慧;苏一乐【摘要】目的:研究CK19(cytokeratin19)和EMA(epithelial membrane antigen)在Ⅰ～Ⅱ期宫颈鳞癌盆腔淋巴结中的表达,探讨与宫颈鳞癌盆腔淋巴结微小转移的相关性.方法:采用免疫组化法检测76例Ⅰ～Ⅱ期宫颈鳞癌患者盆腔淋巴结中CK19和EMA的表达.结果:①免疫组化结果显示:11例经常规HE病理检测阳性的盆腔淋巴结13枚,皆呈强阳性表达,CK19、EMA阳性表达率均为100％.65例经常规HE病理检测阴性的盆腔淋巴结中CK19呈阳性表达23例,阳性淋巴结33枚(33/241),阳性表达率13.7％,EMA呈阳性表达21例,阳性淋巴结31(31/241)枚,阳性表达率为12.9％,两组差异显著(P＜0.05).②宫颈鳞癌盆腔淋巴结微转移检出率与年龄、FIGO分期、病理分级无关(P＞0.05),与有无淋巴结转移有关(P＞0.05).结论:①在淋巴结中CK19、EMA表达,可以作为Ⅰ～Ⅱ期宫颈鳞癌盆腔淋巴结微转移的生物学指标,提示可能存在宫颈鳞癌淋巴结微转移.【期刊名称】《内蒙古医学杂志》【年(卷),期】2012(044)011【总页数】4页(P1284-1287)【关键词】宫颈鳞癌;淋巴结微转移;细胞角蛋白19;上皮膜抗原;免疫组化【作者】吉亚南;宋静慧;苏一乐【作者单位】内蒙古自治区医院妇产科,内蒙古呼和浩特 010017;内蒙古医科大学附属医院妇产科,内蒙古呼和浩特010050;内蒙古自治区医院妇产科,内蒙古呼和浩特 010017【正文语种】中文【中图分类】R737.33宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一。
近几年,宫颈癌的诊断及治疗方面取得一定的进展,但仍有20%～34%的早期宫颈癌的患者最终死于肿瘤的复发和转移,宫颈癌盆腔淋巴结有无转移患者的5年生存率分别为45%和90%[1]。
常规的病理检查中难以发现微小转移灶。
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EMA和CK在上皮肿瘤微转移的应用吉亚南1,宋静慧2(1.内蒙古医学院2003级研究生,内蒙古呼和浩特 010059;2.内蒙古医学院附属医院妇产科,内蒙古呼和浩特 010050)[摘要]目的:探讨上皮膜抗原(EMA)和细胞角蛋白(CK)在上皮肿瘤微转移的应用及研究进展。
方法:阅读国内外有关文献并进行综述。
结果:EM A和CK在上皮肿瘤微转移的研究中起到重要的作用。
结论: EMA和CK是上皮肿瘤较好的标志物,应用于上皮肿瘤微转移的研究中,提高微转移的诊断水平。
[关键词]上皮膜抗原;细胞角蛋白;上皮肿瘤;微转移[中图分类号]R730 261 [文献标识码]A [论文编号]1004-0951(2006)03-0257-03Application of Epithelial M embrance Antigen andCytokeratin in M icrometastasis of Epithelial T umorsJI Ya-nan1,SONG Jing-hui2(1.Postgraduate in G rade2003,Inner M ongolia Medical College,H uhhot010059China;2.Department of Gynaecology and Obstetrics,The Aff iliated Hosp italo f I nner Mongolia Medical College,H uhhot010050China)[Abstract]Objective:To investigate the application of epithelial membrance antigen(EMA)and cytokeratin (CK)in microme tastasis of epithelial tumors and its prog ress of related study.Methods:Reading the literatures home and abroad,then summ arizing them.Results:EMA and CK played important roles in probing m icrometas-tasis of epithelial tumors.Conclusion:EMA and CK are better marker for epithelial tumors.Their applications in probing m icrometastasis of epithelial tumors improve the diagnostic techique.[Key words]Epithelial membrane antigen(EMA);Cytokeratin(CK);Epithelial tumor;M icrometastasis肿瘤的浸润与转移是恶性肿瘤的主要特征,也是肿瘤患者死亡的主要原因,目前判断预后指标如肿块大小、淋巴结状况、血管受侵情况及受体情况等,都不能准确判断是否会出现复发或转移。
转移的肿瘤组织在非原发部位表达肿瘤相关基因和蛋白,并分泌到体液和周围组织中,所以转移肿瘤的标志物往往比原发肿瘤要高。
近年来,随着影像学、病理学、免疫组化技术及分子生物学技术的发展,微转移的诊断水平有了长足的进步,已能在肿瘤患者的外周血、骨髓、淋巴结中检测出常规临床检查无法发现的转移灶-微转移灶。
现就恶性肿瘤的微小转移检测及目前研究进展作一综述。
1 概 述1.1 微小转移的概念是指在各种机体组织、体液及细胞移植物中检测到镜下及亚显微水平的肿瘤残留,是常规临床病理学方法不能检出、隐匿在原发灶以外的组织的、非血液系统恶性肿瘤的转移。
1971年由Huvos提出,其标准是直径<2mm的转移灶;随后Fisher提出其标准<1.3mm的转移灶;1980年Black则认为直径小于20%作为标准比较合适[1];1993年国际抗癌联盟(U ICC)出版的 肿瘤TNM分期补充材料 中指出:当远处转移灶组织增殖生长到1~2m m时,称作微转移。
目前,大多数认同直径<2mm的微小癌灶为微转移[2]。
1.2 上皮膜抗原(Epithelial Membrane Antig en,EMA)EMA在1977由Eeriani等从乳球蛋白中提取,其分子量51~1000KD,存在于上皮细胞中。
EMA 组织分布特点是一般限于上皮细胞的腔缘表面膜,细胞基底面及侧面胞膜无EM A分布。
已证明一些学者EMA多克隆及单克隆抗体用于上皮源性肿瘤与其它肿瘤的研究。
结果表明,乳腺癌、胰腺癌、胆管细胞癌、肺鳞癌、肺腺癌、膀胱癌、宫颈癌、子宫内膜癌、恶性间皮瘤等上皮源性肿瘤为EMA阳性;而基底细胞癌、黑色素瘤、中枢及外周系统肿瘤、各种结缔组织肿瘤中为阴性。
此分布表明,EMA是较好的上皮源性肿瘤标志物。
也可以作为上皮源性肿瘤的诊断及鉴别诊断的依据之一。
1.3 细胞角蛋白(Cytokeratins,CKs)CK起源于上皮细胞,是上皮细胞和上皮来源的恶性肿瘤细胞中间丝的组成成分,几乎占细胞总蛋白85%,包括至少20种相关多肽的多基因家族,根据Moll分类分为:酸性细胞角蛋白( 型,CK10 ~20,其分子量40~56.5KD)和碱性细胞角蛋白( 型,CK1~9,其分子量52~67KD)两个亚家族, CK在骨髓、外周血和淋巴结等组织中均无表达,主要存在于上皮组织及相应来源的恶性肿瘤组织中,是上皮分化的最可靠标记物,对上皮组织的定性具有独特的价值。
其中以CK家族中最小的成员CK19的表达最为特异,从已有的资料看,有较高的灵敏度(90%~100%)和特异性(98%~100%)。
Aihara等[3]应用RT-PCR方法检测胰腺癌和胃癌患者外周血及术中门静脉血中CK19mRNA的表达,发现肿瘤分期越晚,血循环中微转移的阳性率也越高,并证明CK19mRNA是诊断循环性肿瘤细胞很有价值的标记物。
2 检测标本目前研究者根据不同检测方法所选取的标本较多,肿瘤可转移至淋巴结(包括术中所选取新鲜淋巴结活组织和石蜡切片)、骨髓、外周血及其他体液等,较多见的取材为外周血、骨髓、淋巴结。
3 检测方法3.1 免疫学方法免疫学方法通常采用一系列抗上皮细胞膜或骨架成分的单克隆抗体来检测肺癌、乳腺癌、结肠癌等上皮性肿瘤播散至外周组织中的癌细胞。
目前较多用于检测的有角蛋白单抗、抗表面膜抗原等。
王燕霞[4]等采用抗上皮细胞膜单克隆抗体为探针,对52例 期乳腺癌中微小转移进行研究,结果有23%病例伴有微小转移。
在低分化乳腺癌组中微转移为45%,阳性率明显高于高分化组9.3%, P<0.01。
研究者认为免疫组化可提高乳腺癌微小转移检出率对临床治疗有着重要意义;吴进冬[5]等应用抗细胞角蛋白单克隆抗体对45例腋窝淋巴结阴性乳腺癌患者的635个淋巴结进行免疫组化研究,发现20%的患者出现转移;Ishida[6]等对109例胃癌患者术中切除的2446枚淋巴结进行了常规HE染色和以角蛋白为探针的免疫组化研究,结果发现,使用常规H E染色仅能发现230枚,阳性淋巴结9.4%,而免疫组化方法在此基础上又发现197枚淋巴结。
指出:对一个或几个细胞组成的微小转移灶,依靠常规检查方法很难发现转移灶,免疫组化技术,应用单克隆抗体作为上皮细胞的标记物,使淋巴结内上皮细胞较容易发现,使淋巴结微转移灶转移的诊断率得到了提高。
3.2 聚合酶链反应法(Polymerase Chain ReactionPCR)该技术是近十年来发展起来的新方法,通过一对引物的限定,可在体外酶促合成特定的DNA(或cDNA)片段,这一过程经过20~30个循环周期的反应,可使靶序列扩增106~108倍。
从大量背景DNA 或RNA中,特异性扩增微量待测靶核苷酸片段,使检测敏感性得到很大的提高。
应用PCR技术,通过肿瘤特异性标记物基因(或mRNA)的扩增,可以将外周血、骨髓或淋巴结少量肿瘤细胞的基因(或mRNA)片段进行放大、识别。
有两种策略:一是检出肿瘤细胞中因基因突变、染色体异常产生的稳定的异常DNA;二是应用RT-PCR技术对组织或肿瘤中特异的mRNA进行扩增,而它们在被检组织中无表达。
实践证明:PCR分析是检测隐匿性转移的高度敏感和特异的方法。
Datta[7]等应用套式PCR,对34例 ~ 期的乳腺癌患者进行外周血或骨髓微转移灶的检测,结果显示:RT-PCR可以在106个外正常单核细胞中检测出10个乳腺癌细胞;19例 期癌患者中4例外周血检测阳性。
CK主要表达在上皮组织及相应来源的恶性肿瘤组织中,因此CK19m RNA RT-PCR常被用来检测骨髓、外周血和淋巴结的微转移灶。
查小民[8]等应用CK19和EMA通过RT-PCR与常规免疫组化比较,研究乳腺癌的微小转移。
结果显示:26例外周血CK19mRNA阳性4例(15.4%),骨髓阳性10例(38.4%),免疫组化结果显示26例骨髓7例(26.9%)EMA阳性,其中CK19mRNA都阳性,有3例(11.5%)免疫组化结果阴性而CK19mRNA阳性,说明RT-PCR法是一种较敏感的方法,免疫组化也是一种比较可靠的检测方法。
Schoenfeld[9]等应用CK19作为乳腺癌检测标记物,对78例无远处转移症状的乳腺癌患者进行了RT-PCR检测与骨髓免疫组化检测的比较研究,指出乳腺癌微转移灶的检测,CK19mRNA RT-PCR方法敏感度是免疫组化法的10倍。
免疫组化法发现5%的外周血、22%的骨髓中CK19阳性,而应用RT-PCR法阳性率比例分别达25%和35%。
张琴[10]等应用CK19mR-NA RT-PCR方法对31例上皮性肿瘤及87个淋巴结进行检测,结果显示:5例正常淋巴结无CK19 mRNA表达,15例乳腺癌、10例胃癌、11例大肠癌均表达CK19mRNA,82个淋巴结中,组织学检查11个有肿瘤转移,其CK19RT-PCR也为阳性;其余71个无肿瘤浸润淋巴结,经CK19RT-PCR发现16个表达CK19mRNA。
葛明建[11]等应用CK19m RT -PCR方法对159枚区域性淋巴结检测肺癌微小转移灶,指出在被检测的159枚淋巴结中,42枚被病理切片和分子学方法同时证实存在转移,在余下117枚检阴性淋巴结中,CK19RT-PCR还发现25枚存在微小转移;说明与传统病理学检查相比CK19 RT-PCR法可提高淋巴结转移检出率,从而准确评价其转移状况。
4 结 语肿瘤转移是一个多因素、多阶段、多步骤的复杂过程,是肿瘤基础研究的热点,随着近年来分子生物学的发展对肿瘤转移的相关机理因素进一步阐明,对进一步认识肿瘤、克服肿瘤必将提供有力的帮助,必将对肿瘤转移的早期诊断、治疗方案的选择,及预后的判断带来深远的影响。