化学发光免疫标记分析技术(基本原理 )

合集下载

化学发光免疫分析

化学发光免疫分析

糖尿病
Albumin C-peptide Insulin
唐氏筛查
PAPP-A free βHCG HCG+β AFP
心肌标志
骨标志
肝纤维
CK-MB
ß-Crosslaps
LN
Digoxin
25-(OH) Vit. D
HA
Digitoxin
Intact PTH
PIIINP
Myoglobin
Intact PTH
试剂有效期长 有效期可长达1年以上,放射免疫分析由
于放射性同位素的衰变,一般有效期只有一 个月,而酶免的底物贮存性差,都无法与化 学发光相比,有效期长可以降低使用成本, 利于推广应用。
梦想——之以恒、真正为实现纳米科技事业的梦想而奋斗!
3 化学发光免疫分析的优越性
➢ 中国免疫诊断现状
中国
国际(欧美为主)
种类
方法
检测原理
酶联免疫
酶与样本反应,依据颜色变化程度确定结果
免疫 化学发光
诊断
将抗原抗体同样本结合,由磁珠捕捉反应物,加入 发光促进剂加大反应发光速度与强度,进而诊断
根据镧系元素螯合物发光特点,用时间分辨技术测 时间分辨荧光
量荧光,检测波长和时间两个参数进行信号分辨
分子 诊断
PCR 基因芯片
DNA高温变成单链,低温互补配对链合成
激发态ν
的中间体。这种激发态中间体,当其回到稳定的基态时,可同时发射出
光子。利用发光信号测量仪器即可测量光量子产额,该光量子产额与样
品中的待测物质的量成正比。由此可以建立标准曲线并计算样品中待测
能量
h.ν
物质的含量。
基态ν0 梦想——之以恒、真正为实现纳米科技事业的梦想而奋斗!

化学发光的原理

化学发光的原理

化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析(CL IA ) ,是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。

化学发光免疫分析仪包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统。

化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hM) , 利用发光信号测量仪器测量光量子产额。

免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。

化学发光免疫分析仪包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统。

化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hM) , 利用发光信号测量仪器测量光量子产额。

免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。

化学发光免疫分析仪器中核心探测器件为光电倍增管(PMT),由单光子检测并传输至放大器,并加高压电流放大,放大器将模拟电流转化为数字电流,数字电流将发光信号由R232数据线传输给电脑并加以计算,得出临床结果。

化学发光标记免疫分析法化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析(CL IA ) ,是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。

常用于标记的化学发光物质有吖啶酯类化合物——acridin ium ester (A E) ,是有效的发光标记物[ 3 ] , 其通过起动发光试剂(N aOH2H2O 2 ) 作用而发光, 强烈的直接发光在一秒钟内完成,为快速的闪烁发光(见图1)。

吖啶酯作为标记物用于免疫分析, 其化学反应简单、快速、无须催化剂; 检测小分子抗原采用竞争法 ,大分子抗原则采用夹心法 , 非特异性结合少, 本底低; 与大分子的结合不会减小所产生的光量, 从而增加灵敏度。

化学发光免疫分析

化学发光免疫分析

化学发光免疫检测技术临床应用:
1、甲状腺功能类:
T3 、T4、THS、FT3、
FT4、rT3、TG、T-PO 新生儿筛查:T4 sTSH
2、性腺激素类:
HCG、ß-HCG、FSH、
LH、E2、E3、PRL、P、 T、GH等
3、肿瘤检测:
CEA、AFP、Fe、PSA、
CA125、CA153、CA199 CA50、CA211、CA724
肌钙蛋白I的临床意义
• 特异性强、确诊率高
诊断急性心肌梗塞特异性 > 98 % 对极轻微的心肌创伤都能检出 体内周期长,对外地病人延误求诊亦能诊断
•ห้องสมุดไป่ตู้灵敏度低
急性心梗发病后6 h才出现,应与肌红 蛋白一同使用
肌钙蛋白I升高即可确诊为急性 心肌梗塞,及时得到治疗
胸痛
肌钙蛋白I
> 8h
+
急性心梗 随访
4、心血管:CK-MB、BNP、Tn-I、 Myoglobin 5、贫血类:铁蛋白、Vite B12、叶酸 6、药物浓度:地高辛、洋地黄、托普霉素 可马西平、苯巴比妥、等 7、糖尿病及代谢:胰岛素、C-肽、PTH 8、过敏源类:过敏源筛选、总过敏源 9、传染病:肝炎系列、风疹、弓形体 10、其他:皮质醇、还有很多待开发项目。
心血管系统:
如何能
更快 更准确
更全面的
诊断AMI
诊断急性心肌梗塞有一定难度
• 一半有不稳定胸口窒息痛的病人,入 院时心电图并不典型。 时心电图并不能典型归类

病人再发梗塞诊断困难
导致不能及时诊断AMI 延误及时治疗、护理

临床需要
尽早准确诊断AMI方法
T
肌肉组织

化学发光免疫标记分析技术基本原理

化学发光免疫标记分析技术基本原理

化学发光免疫标记分析技术基本原理化学发光免疫标记分析技术主要包括两个步骤:标记物制备和检测过程。

在标记物制备阶段,通常使用特定的荧光染料或荧光标记物来与待检测物质进行反应,并形成稳定的标记物-待检测物质复合物。

而在检测过程中,通过光学系统激发和采集标记物产生的化学发光信号,从而获得待检测物质的信息。

1.标记物制备:在化学发光免疫标记分析技术中,常用的标记物包括酶标记物和荧光标记物。

酶标记物的原理是将特定酶与待检测物质结合,并通过酶反应产生化学发光信号。

例如,常用的酶标记物有辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)等。

而荧光标记物的原理则是将特定荧光染料或荧光物质与待检测物质发生物理或化学反应,从而产生荧光信号。

荧光标记物具有高灵敏度、高分辨率和多颜色检测等优点。

2.检测过程:在化学发光免疫标记分析技术中,通常采用放射性同位素或者化学合成的光感受物质作为化学发光底物。

这些光感受物质在一定条件下与酶标记物或荧光标记物发生反应,产生化学发光信号。

这种化学发光反应通常是一种酶催化反应,通过酶的催化作用将底物转化为高能态的中间产物,进而使中间产物与发光底物反应产生化学发光。

1.样品制备:将待检测的样品进行适当处理和净化,以去除干扰物并保留待测物质。

2.标记物制备:选择适当的酶标记物或荧光标记物,并将其与待检测物质结合,形成稳定的复合物。

3.反应过程:将标记物与样品中的待测物质进行反应,形成标记物-待检测物质复合物。

4.分离与清洁:根据实验需求,通过特定的分离技术分离出标记物-待检测物质复合物,并清洁除去未结合的杂质。

5.光学系统激发和采集信号:将分离出的标记物-待检测物质复合物放置于化学发光仪或荧光显微镜等设备中,通过特定的光源激发标记物产生的化学发光或荧光信号,并通过相应的光学系统采集和记录信号。

6.数据分析和结果解读:通过对采集得到的化学发光或荧光信号进行数据处理和分析,根据标定曲线或标准样品,计算出待检测物质的含量或其它相关信息,并根据实验目的对结果进行解读。

化学发光免疫标记分析技术(基本原理)

化学发光免疫标记分析技术(基本原理)
简化操作
优化技术操作流程,降低对专业人员的依赖,提高检测的便捷性和 普及性。
开发新型标记物
研究开发更多种类的化学发光标记物,拓展该技术的应用范围,满足 更多不同检测需求。
感谢您的观看
THANKS
放射免疫标记技术
利用放射性核素标记抗体或抗原,通 过放射性信号检测,常用的有放射免 疫分析法。
化学发光免疫标记技术
利用化学发光物质标记抗体或抗原, 通过化学发光信号检测,常用的有化 学发光免疫分析法。
免疫标记技术的原理
抗原-抗体反应
信号放大
免疫标记技术的基本原理是抗原 和抗体之间的特异性结合反应。 标记物(抗体或抗原)与待测样 本中的目标抗原或抗体结合,形 成标记的抗原-抗体复合物。
02
化学发光反应原理
化学发光反应的分类
偶合反应
01
通过两个化学反应的偶合,将化学能转变为光能。
氧化还原反应
02
通过电子的得失,将化学能转变为光能。
化学发光复合反应
03
通过化学反应将能量传递给另一物质,使其激发并发出光子。
化学发光反应的机制
激发态的形成
反应物吸收能量后跃迁至激发态。
能量传递与光子的发射
抗体标记
抗体选择
选择与目标抗原特异性结合的抗体,确保抗 体的纯度和特异性。
抗体标记技术
采用荧光染料、酶、同位素等标记抗体,以 便后续检测和信号放大。
标记效率与质量控制
对标记后的抗体进行质量评估和控制,确保 标记效率和稳定性。
免疫反应
1 2
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ加样
将待测样本、标记抗体和抗原加入反应体系中, 进行免疫反应。
激发态的反应物将能量传递给另一物质,使其跃迁至激发态并释放 光子。

化学发光免疫分析技术

化学发光免疫分析技术
T4降低: ⑴见于甲状腺功效减退病人,轻型甲减、亚临床甲减改变较T3 显著; ⑵缺碘性甲状腺肿可见T4降低或在正常低限,而T3正常; ⑶ 肾病综合征、肝功效衰竭、遗传性TBG缺点症、肢端肥大症、重症全 身性疾病状态等;⑷以及应用糖皮质激素、雄激素、生长激素、苯妥 英钠等药品
化学发光免疫分析技术
第31页
化学发光免疫分析技术
第4页
是当前世界公认先进标识免疫测定技术,化学发光免
疫分析技术含有高度准确性和特异性,成为检验方法中最 为主要技术之一。化学发光免疫分析技术作为疾病诊疗主 要伎俩已被广泛用于机体免疫功效、传染性疾病、内分泌 功效、肿瘤标志物、性激素、甲状腺功效等方面体外诊疗 分析技术
第7页
• 分析方法简便快速
• 结果稳定、误差小
• 样品系直接自己发光,不需要任何光源照射,免去了各种可能原因(光源稳定性、光 散射、光波选择器等)给分析带来影响,使分析结果灵敏稳定可靠。
• 安全性好及使用期长
• 免去了使用放射性物质。到当前为止,还未发觉其危害性;试剂稳定,保留期可达一 年。
T3降低: ⑴仅于较重甲状腺功效减退病人,T3和T4均下降,轻型甲减T3 不一定下降; ⑵重症全身性疾病状态或慢性病变可造成T3下降,多见 于慢性肾功效不全、慢性心功效不全、糖尿病、心梗等疾病患者。
化学发光免疫分析技术
第33页
游离甲状腺素(FT4)游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)
• FT3和FT4分别为T3和T4在血清中未与蛋白结合部分,其不 受血清中TBG影响,直接反应甲状腺功效状态,其敏感性 和特异性均高于T3和T4
化学发光免疫分析技术
第15页
㈠ 辣根过氧化物酶标识化学发光免疫分析
该分析系统采取辣根过氧化物酶(HRP)标 识抗体(或抗原),在与反应体系中待测标本 和固相载体发生免疫反应后,形成固相包被 抗体-待测抗原-酶(HRP)标识抗体复合物, 这时加入鲁米诺发光剂、H2O2和化学发光增 强剂使产生化学发光。

化学发光免疫标记分析技术(基本原理)

化学发光免疫标记分析技术(基本原理)

吖啶酯化学发光系统-CH3-HOO-C=0-OH-光子+C02+-R
碱性磷酸酶化学发光系统-金钢烷(发光底物)及其衍生物的增敏化学发光系统-OCH3-AP-0P032-碱性磷 酶及其衍生物的化-·光子477nm
化学发光的检测类型-化学发光按化学反应类型分为:-◆直接化学发光(非酶促化学发光-吖啶酯系统-●-异鲁米诺 统-◆间接化学发光(酶促化学发光-·辣根过氧化物酶一鲁米诺系统(HRP系统-碱性磷酸酶一金刚烷系统AP系统 其它-电化学发光
板式化学发光-,适合流行病调查、疾病预防与控制、-体检中心,以及医院血站等大样本检-测项目的使用(比如HI 、TP、HCV和-乙肝两对半等。-通常采用96孔白色不透明微孔板进行包-被,不方便随到随测和医院急诊;-对 定量检测需要做标准曲线。-◆-国内厂家主要是板式化学发光系统
管式化学发光-采用管式或微粒子发光,测定快速、准确;-可以随到随测,适用于医院急诊;-定量检测的标准曲线存 在试剂条形码中,-可在2-4周内直接使用。-国外厂家全部是管式化学发光系统
间接化学发光-以碱性磷酸酶系统为例-洗涤清除团-间接化学发光:用参与发-◆》回+-光反应的酶来标记抗原或体,免疫反应后,加入-抗体包被-的磁珠-标记抗体-双抗体夹心复合物-发光底物,测定发光体系-的发光强度来进 抗原或-◆可茶-抗体的检测。-AMPPD-AMPD发光-两大反应体系:-辣根过氧化物酶-HRP系统:氧化还 反应,稳定性差-·源德、科美、安图-碱性磷酸酶(AP系统:水解反应,灵敏度较高-●-贝克曼:Access1 Access2,DXI600、DXI800-西门子:mmulite:1000,Immulite2000-达 生物:AULIN200
免疫学检测-◆-免疫学检测是应用免疫学理论设计的一系列测定抗原、-抗体、免疫细胞及其分泌的细胞因子的实验手 及分子-生物学技术在免疫学研究中的应用。它包括:-抗原抗体的检测技术-免疫细胞的检测-细胞因子的检测-免疫 关基因分析-免疫标记技术-免疫PCRIM-PCR技术-杂交瘤技术与T细胞克隆技术

磁微粒化学发光

磁微粒化学发光

一、化学发光免疫分析技术概述化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA)兴起于上世纪70年代中期,发展至今已经成为一种成熟先进的超微量活性物质检测技术,应用范围十分广泛。

该技术近10年发展迅猛,是目前推广应用最快的免疫分析方法,也是目前最先进的标记免疫测定技术,灵敏度和精确度比酶免法、荧光法高几个数量级。

二、化学发光免疫分析技术原理在化学发光免疫分析中包含两个部分,即免疫反应技术和化学发光技术。

其基本原理是免疫反应中的酶作用于发光底物,使之发生化学反应并释放出大量的能量,产生激发态的中间体。

这种激发态中间体回到稳定的基态时,可同时发射出光子。

利用发光信号测量仪器即可测量出光量子产额,该光量子产额与样品中的待测物质的量成正比,由此可以建立标准曲线并计算样品中待测物质的含量。

化学发光免疫分析技术常采用双抗体夹心法、竞争法及间接法等反应模式,如图1-3所示。

图1.双抗体夹心法图2.竞争法图3.间接法三、磁微粒在免疫学检测中的应用磁微粒是指磁性纳米粒子与无机或有机分子结合形成的可均匀分散于一定基液中具有高度稳定性的胶态复合材料。

由于磁微粒具有磁响应性,成本低、能耗少和无污染等特点,人们在磁微粒表面或通过磁微粒表面的功能基团(如氨基、羧基、巯基及环氧乙烷等)将酶、抗体、寡核苷酸等生物活性物质进行固定,可进一步用于酶的固定化、靶向药物载体、细胞分选、免疫检测、蛋白与核酸的分离纯化及杂交检测等领域。

传统的免疫学检测多以酶标板为固相载体,悬浮性磁微粒作为载体具有较高的比表面积,能够更为充分地与样品反应,加之外加磁场的灵活应用,较之酶标板载体具有更高的灵敏度、更快的检测速度和更好的重复性等优点,目前已被广泛应用于生物及医学检测等领域。

四、磁微粒化学发光免疫分析技术介绍磁微粒化学发光免疫分析技术综合了磁微粒载体技术和化学发光免疫检测技术,使测量结果更准确,更稳定。

●磁微粒化学发光--双抗体夹心法:待测抗原同荧光素标记的抗体及酶标抗体结合形成“三明治”结构的复合物。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

板式化学发光

适合流行病调查、疾病预防与控制、 体检中心,以及医院血站等大样本检 测项目的使用(比如HIV、TP、HCV和
乙肝两对半等)。

通常采用96孔白色不透明微孔板进行包 被,不方便随到随测和医院急诊;

对于定量检测需要做标准曲线。
国内厂家主要是板式化学发光系统
管式化学发光


采用管式或微粒子发光,测定快速、准确;
1977年诺贝尔生理学或医学奖得主雅洛 Yalow
雅洛1921年出生于纽约, 1945年获得核物理学博士学位, 1975年当选美国科学院院士。因 为发明了放射性免疫分析法,雅 洛获得1976年的拉斯克基础医学 奖,成为历史上第一位获得该奖 的女性科学家。次年,她因为与 同事合作开发了“针对多肽类激 素的放射性免疫分析法”而成为 诺贝尔生理学或医学奖史上第二 位女性获奖者。
免疫学检测

免疫学检测是应用免疫学理论设计的一系列测定抗原、 抗体、免疫细胞及其分泌的细胞因子的实验手段及分子 生物学技术在免疫学研究中的应用。它包括:

抗原抗体的检测技术 免疫细胞的检测 细胞因子的检测 免疫相关基因分析 免疫标记技术 免疫PCR(IM-PCR)技术 杂交瘤技术与T细胞克隆技术
化学发光按化学反应类型分为:

直接化学发光(非酶促化学发光)

吖啶酯系统 异鲁米诺系统

间接化学发光(酶促化学发光)

辣根过氧化物酶—鲁米诺系统(HRP系统) 碱性磷酸酶—金刚烷系统(AP系统) 电化学发光

其它

直接化学发光
直接化学发光:以化学物 质,如异鲁米诺、吖啶酯 等直接标记抗原或抗体, 免疫反应后,直接引发化 学发光反应进行检测。
R
R
CH3 N 光子 + CO2 +
R
CH3 N + C=O O
OH
O
O
R
碱性磷酸酶化学发光系统
金钢烷(发光底物)及其衍生物的增敏化学发光系统 O O OCH 3 O O OCH 3
AP
OPO32-
OOCH3 * 光子(477nm) O-
碱性磷酸酶及其衍生物的化 学发光系统
O +
O
化学发光的检测类型
两大反应体系:
辣根过氧化物酶(HRP)系统:氧化还原反应,稳定性差
源德、科美、安图
碱性磷酸酶(AP)系统:水解反应,灵敏度较高
贝克曼:Access 1、Access 2,DXI600、DXI800 西门子:Immulite1000 , Immulite 2000 达成生物:AULIN200


发光免疫分析基本操作步骤(一步法)
待测样品 标记抗体或抗原
包被抗体或抗原的磁珠或反应管 反应15-60分钟 洗涤去除未结合的反应物
反应0-5分钟 发光底物 (或发光剂)
仪器检测
鲁米诺化学发光系统
鲁米诺及其衍生物的增敏化学发光系统 O
H2O2+
NH
NH NH2 O
HRP
CO2+Photon (425nm) N2 CO2-
OH-
NH2 增强剂(Enhancer)
OH R B OH R OH R
N OH S
鲁米诺在免疫测定中既可用作标记物,也可用作过氧化物酶的底物
吖啶酯化学发光系统
CH3 N+ 吖 啶 酯 化 学 发 光 系 统 OHH+ CH3 N H2O2 CH3 N + H2O HOO C=O O
C=O O
HO C=O O
提高发光强度,快速达到稳定发光。
管式化学发光大多用磁微粒,板式化学发光使用微孔板载体。
Y
化学发光免疫分析技术的优越性

灵敏度高:CLIA灵敏度可达10-16/-21mol/L(RIA为10-12mol/L)。又如化学发光 底物(如AMPPD)可检测出的碱性磷酸酶的浓度比显色底物要灵敏50万倍。
产品:
吖啶酯标记 : 西门子Siemens Centaur XP CP 雅培Abbott Architect i2000 异鲁米诺标记 :索林DiaSoin Liaison 新产业
间接化学发光
以碱性磷酸酶系统为例
间接化学发光:用参与发 光反应的酶来标记抗原或 抗体,免疫反应后,加入 发光底物,测定发光体系 的发光强度来进行抗原或 抗体的检测。
抗原抗体免疫反应特点

高特异性 抗原抗体的结合实质上只发生在抗原的抗原决定簇与抗体的抗 原结合位点之间。由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系, 所以抗原抗体反应具有高度的特异性。抗原抗体反应的高特异性是 免疫学检测的基础。

高亲和性 抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡,其 反应式为:Ag+Ab→Ag·Ab。高亲和力抗体的抗原结合点与抗原的决 定簇在空间构型上非常适合,两者结合牢固,不易解离。
免疫分析标记技术的发展
60年代
放免
酶免
70年代
发光
90年代
化学发光

化学发光:由于化学反应(通常是氧化)底物从基态跃迁为激 发态,激发态返回基态时,跃迁能量以光子形式释放的现象。
物质激发态
吸收光谱
吸 能
过程基本原理
化学发光免疫分析技术

化学发光免疫分析技术是将化学发光体系与免疫反应相结合,用于检测 微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。 美国临床化学会议规定:凡是通过测量光子计数的方法都是化学发光, 包括通过酶促luminol发光。 化学发光免疫分析1980’s进入体外诊断领域,第一台全自动检测仪1993 年诞生。
0
酶标 荧光 放免 发光
几种标记/检测试剂的有效期比较
化学发光免疫分析技术的优越性

安全性好:彻底消除了放射性危害,环保、安全。到目前为止,还未发现CLIA的 危害性。 光信号持续时间长:辉光型(glow type)的CLIA产生的光信号持续时间可达数小 时甚至一天。简化了实验操作及测量。容易实现连续、动态、重复测定。 分析方法简便快速:绝大多数分析测定均为仅需加入一种试剂(或复合试剂) 的一步法,容易实现自动化。 结果稳定、误差小:样品系直接自己发光,不需要任何光源照射,免除了各种 可能因素(光源稳定性、光散射、光波选择器等)给分析带来的影响,使分析 结果灵敏稳定可靠。
可以随到随测,适用于医院急诊; 定量检测的标准曲线存储在试剂条形码中, 可在2-4周内直接使用。
国外厂家全部是管式化学发光系统
磁微粒分离技术
磁微粒示意图
磁微粒分离技术特点: 较微孔板扩大抗原抗体结合表面积,增加抗原或抗体的结合量, 提高检测灵敏度。 加快反应速度,迅速捕获抗原抗体。
易于结合相、游离相的分离,提高检测准确性。
免疫分析

免疫反应: 抗原进入机体,刺激机体的免疫系统,使之产生免疫应 答,这种反应叫免疫反应。免疫反应应答包括对抗原物质的 感应、反应、效应三个连续的阶段。

免疫分析(immunoassay,IA): 在临床检验中,基于抗原与其配对抗体能够发生特异反 应,用已知的抗原或抗体检测分析体液中的抗体或抗原性物 质。
线性范围
105
104 103 102
酶标
荧光
放免
发光
几种标记/检测技术线性范围的比较
化学发光免疫分析技术的优越性

试剂有效期长:有效期可长达1年以上,放射免疫分析由于放射性同位素的 衰变,一般有效期只有一个月,而酶免的底物贮存性差,都无法与化学发光 相比,有效期长可以降低使用成本,利于推广应用。
有效期(月) 18 15 12 9 6 3

直接标记:吖叮酯标记 间接标记:碱性磷酸酶-金刚烷系统
电化学发光:三联砒啶钌
国际主流免疫诊断公司均采用第二代化学发光标记物: 吖啶酯(雅培、西门子)、碱性磷酸酶-金刚烷(贝克曼、西门子)、三 联砒啶钌(罗氏)。
化学发光的检测方式
化学发光按检测方式分为:

随机处理模式:管式化学发光(磁微粒分离) 批处理模式: 板式化学发光(物理吸附)
电化学发光
电化学发光:一种在电极 表面由电化学引发的特异 性化学发光反应,直接由 三联吡啶钌 [Ru(bpy)3]2+ 标记抗体,反应时标记物 直接发光。
产品:
Roche:Elecsys2010、COBAS e411、COBAS e601
化学发光的发展史

第一代:鲁米诺及其衍生物 第二代:



化学发光免疫分析技术的应用

甲状腺激素 生殖激素 肾上腺/垂体激素 贫血因子 肿瘤标志

糖尿病 心血管系统 病毒标志 骨代谢 过敏性疾病

感染性疾病

治疗药物监测
结论
化学发光免疫技术是理想的体外诊断技术:
高灵敏性、特异性和稳定性 宽线性范围
使用范围广
高通量和高度自动化 无放射性危险
灵敏度(mol/L)
10-18 10-15 10-12 10-9
酶标
荧光
放免
发光
几种标记/检测技术灵敏度的比较
化学发光免疫分析技术的优越性

线性范围宽:发光强度在4~6个数量级之间,与测定物质浓度间呈线性关系。 这与显色的酶免疫分析吸光度(OD值)为2.0的范围相比,优势明显。也优于 放射免疫分析技术。
相关文档
最新文档