炎症因子诱导星形胶质细胞凋亡及机制探讨_刘杰波
探究星形胶质细胞在AD小鼠炎症反应的作用
探究星形胶质细胞在 AD 小鼠炎症反应的作用阿尔茨海默病(AD)是老年人中最常见的痴呆症。
在老年人群中老年痴呆已成为继心血管疾病、恶性肿瘤、中风之后的第四大疾病[1]。
AD的特点是记忆丧失，以及运动能力、推理和判断能力受损[2]。
其病理特征包括神经元和突触丢失、脑内β-淀粉样蛋白斑(β-amyloid plaques，又称老年斑)沉积、神经纤维缠结(neurofibrillary tangles, NFT)以及胶质细胞增生和炎症反应等[3]。
其中老年斑是AD的主要病理特征之一，它主要由Aβ在脑内聚集而形成[4]。
AD的病程进展与Aβ沉积引起的脑内炎症以及神经毒性作用密切相关。
近年来, 星形胶质细胞在AD的病理生理机制中的作用受到越来越多的关注。
星形胶质细胞是中枢神经系统(CNS)中数量最多的神经胶质细胞。
它担负着神经胶质细胞绝大部分的功能，对神经元具有支持、营养、修复和保护的作用。
星形胶质细胞还具有维持葡萄糖、ATP和谷氨酸稳态、调节突触形成的功能，并且是血脑屏障的重要组成部分。
为了应对诸如损伤、感染或神经变性等大脑损伤，星形胶质细胞变成反应性的，而它的反应性与免疫介质的激活和促炎细胞因子的释放相关[5]。
在 AD 中，激活的星形胶质细胞既会促进神经退化，但同时也能够保护神经。
1.星形胶质细胞在AD炎症反应中的作用星形胶质细胞能够分泌多种炎症因子，包括白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子、一氧化氮等，它们大部分对神经细胞有毒性作用，能够使神经细胞凋亡或坏死[6]。
在AD脑中可检测到萎缩性星形胶质细胞和反应性星形胶质细胞。
在AD患者死亡后的脑组织中，观察到了反应性星形胶质细胞，它们出现在老年斑周围，活化的小胶质细胞附近以及神经退行性变的区域，这可能通过释放细胞因子和其他有毒产物而导致炎症过程[7]。
星形胶质细胞受Aβ影响也会释放细胞因子，一氧化氮，白介素和其他潜在的细胞毒性分子，从而加重神经炎症反应。
不同类型星形胶质细胞对神经干细胞定向分化的影响
不同类型星形胶质细胞对神经干细胞定向分化的影响刘媛;龙在云;曾琳;李民;伍亚民;王正国【期刊名称】《中国康复理论与实践》【年(卷),期】2007(013)011【摘要】目的观察不同类型星形胶质细胞作为饲养层细胞对神经干细胞定向分化为神经元的影响.方法通过无血清培养的方法,将原代培养所获得的神经干细胞克隆;经纯化和标记后,分别接种在以原浆型和纤维型星形胶质细胞作为饲养细胞的培养皿中并加入Neural Basal培养基,10 d后行NF-200免疫荧光染色,在显微镜下随机选取20个视野,记数神经元和标记神经干细胞的比例,并对分化的神经元细胞进行胆碱酯酶染色和Fura-3探针标记.结果在原浆型和纤维型星形胶质细胞培养条件下,神经干细胞分化为神经元的比例分别为72%与43%,分化细胞胆碱酯酶染色阳性.分化神经元在药物刺激下,细胞内可发生钙离子活动的变化.结论原浆型星形胶质细胞具有较好地促进神经干细胞向神经元,特别是向有生物学活性的运动神经元分化,可作为神经组织工程中研究中一种新的种子细胞.【总页数】4页(P1026-1028,封3)【作者】刘媛;龙在云;曾琳;李民;伍亚民;王正国【作者单位】第三军医大学大坪医院野战外科研究所三室,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆市,400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所三室,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆市,400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所三室,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆市,400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所三室,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆市,400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所三室,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆市,400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所三室,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆市,400042【正文语种】中文【中图分类】R318.5【相关文献】1.星形胶质细胞诱导神经干细胞定向分化试验研究 [J], 周向阳;邓永文;方芳;伍军;李茗初;高峻玮;柳浩然;方加胜2.不同生长因子对神经干细胞定向分化的影响 [J], 苏肖英;汪海涛;孟茜;郑文华3.原浆型星形胶质细胞调控神经干细胞定向分化的优化比例筛选 [J], 李民;曾琳;刘媛;龙在云;李书林;伍亚民4.原浆型和纤维型星形胶质细胞调控神经干细胞定向分化的比较研究 [J], 曾琳;李民;刘媛;龙在云;李书林;伍亚民5.不同促细胞分裂因子对人神经干细胞定向分化的影响 [J], 姬西团;宋蕾;曹锐峰;潘灏;章翔;费舟;张剑宁;刘卫平;蒋晓帆;林绿标;王西玲;梁景文因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
外周炎症性疼痛刺激诱导丘脑中胶质细胞激活及细胞因子的表达
外周炎症性疼痛刺激诱导丘脑中胶质细胞激活及细胞因子的表达倪衡建;朱鸣镝;郁晓燕;高永静【期刊名称】《解剖学杂志》【年(卷),期】2008(031)005【摘要】目的:研究完全弗氏佐剂(CFA)外周刺激后,大鼠丘脑中线核群和板内核群中星形胶质细胞标记物(GFAP)、小胶质细胞标记物(Iba)以及细胞因子(IL-1β,TNF-α)的表达变化.方法:逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),免疫印迹法,免疫组织化学.结果:在炎症刺激后的4 h、3 d和14 d,丘脑中线核群和板内核群中小胶质细胞的标记物CD14、细胞因子IL-1β,TNF-α的mRNA和蛋白均有增加;星形胶质细胞标记物GFAP在炎症后的3 d和14 d,其mRNA和蛋白有显著增加.结论:外周炎症性刺激能够相继激活丘脑中线核群和板内核群的小胶质细胞和星形胶质细胞,并使炎症前细胞因子表达增多.提示该部位的胶质细胞可能通过细胞因子参与对炎症性疼痛的调节.【总页数】4页(P611-614)【作者】倪衡建;朱鸣镝;郁晓燕;高永静【作者单位】南通大学医学院解剖学教研室,南通,226001;南通大学附属医院骨科,南通,226001;南通大学医学院解剖学教研室,南通,226001;南通大学航海医学研究所,南通,226001【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.外周炎症性疼痛刺激诱发中枢神经系统小胶质细胞增殖活化 [J], 傅开元2.慢性炎症性疼痛小鼠丘脑中单核细胞趋化因子1表达变化 [J], 胡燕;董玉林;张志军;高永静3.受损感觉神经元释放的CSF1诱导小胶质细胞激活及神经病理性疼痛 [J], Guan Z;付玮4.脊髓灰质后角小胶质细胞p38MAPK通路激活与P2X7受体活化在介导硼替佐米诱导的神经病理性疼痛中的关系 [J], 郭艳;王震;田广平;李振中;刘真5.外周炎性痛刺激诱导杏仁核内星形胶质细胞激活及细胞因子的表达 [J], 倪衡建;郁晓燕;高永静因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
两种不同脑损伤后星形胶质细胞反应性变化的比较研究
两种不同脑损伤后星形胶质细胞反应性变化的比较研究杨忠;李红丽;蔡文琴;孙榆【期刊名称】《第三军医大学学报》【年(卷),期】2001(23)9【摘要】目的探讨不同类型脑损伤后星形胶质细胞 (AST)活化的时空分布及形态学变化特征。
方法本实验建立Wistar大鼠短暂性全脑缺血 30min再灌注模型及脑皮质针刺伤模型 ,采用胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)单克隆抗体免疫组化方法及图像分析技术对两种脑损伤后AST的反应进行对比观察。
结果①脑缺血 1d 后可见AST活化 ,5d即达高峰。
脑皮质针刺伤后AST的活化开始于第 5～ 7天 ,第 14天达高峰。
②两种脑损伤后不同部位反应性AST的形态有明显差异。
结论本实验表明不同类型脑损伤后AST的反应不同 ,活化AST在形态上的差异可能与神经营养因子的运输 ,神经的修复与再生等功能相适应。
【总页数】4页(P1074-1077)【关键词】星形胶质细胞;皮质针刺伤;颅脑损伤;胶质纤维酸性蛋白;GFAP;大鼠【作者】杨忠;李红丽;蔡文琴;孙榆【作者单位】第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室【正文语种】中文【中图分类】R651.15【相关文献】1.创伤性脑损伤后PHB2表达变化及其与星形胶质细胞增殖的相关性研究 [J], 徐婷;吴昆;顾星星;马龙;王毅;于湘友2.红藻氨酸致痫后大鼠海马神经元和星形胶质细胞的反应性变化 [J], 刘智良;徐如祥;杨志军;戴宜武;罗成义;杜谋选;姜晓丹3.大鼠脑缺血后反应性星形胶质细胞变化的实验研究 [J], 李红丽;蔡文琴;邓晓林4.不同损伤条件下大鼠脑星形胶质细胞反应性变化的形态学观察 [J], 李红丽;蔡文琴;等5.大鼠不同类型脑损伤后NO表达变化的比较研究 [J], 李红丽;蔡文琴;邓晓林;赵士福因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
星形胶质细胞的活化机制及功能研究
星形胶质细胞的活化机制及功能研究陈青;刘传勇【期刊名称】《泰山医学院学报》【年(卷),期】2006(27)1【摘要】星形胶质细胞与神经元之间存在复杂的相互作用,以维持神经系统内环境的稳定.近年随着膜片钳及分子生物学技术的应用,人们发现星形胶质细胞表面不仅具有电压依赖的Na＋、K＋及Ca2＋通道,而且分布着许多神经递质、神经肽、激素及神经营养因子受体[1],并能合成及分泌多种神经活性物质,在维持神经元内外环境、免疫调节及信号转导等方面具有重要作用,与中枢神经系统（central nervous system,CNS）疾病密切相关,因此星形胶质细胞对神经元生存起重要作用[2～4].在病理条件下,星形胶质细胞从静息状态快速向活化状态转变,其活化具有瀑布效应,活化的星形胶质细胞对神经元起保护或毒性作用,从而发挥“双刃”效应.进一步探讨星形胶质细胞的活化机制及功能,对认识脑的奥秘具有重要意义.【总页数】3页(P69-71)【作者】陈青;刘传勇【作者单位】山东大学医学部生理学教研室,山东,济南,250012;山东大学医学部生理学教研室,山东,济南,250012【正文语种】中文【中图分类】Q254【相关文献】1.GRK5对大鼠星形胶质细胞活化的作用及其机制研究 [J], 张运;王莉莉;赵茜;马士程;贺茂林2.L-NAME对沙土鼠脑缺血再灌流后海马区星形胶质细胞活化的作用机制研究 [J], 张敬军;邱玉芳;张鲁泉;夏作理;刘焯霖3.星形胶质细胞功能异常诱发癫痫机制的研究进展 [J], 雷慧;李海涛4.刺参多糖对星形胶质细胞活化作用机制研究 [J], 李东文5.cGMP对脑缺血再灌流后海马区星形胶质细胞活化的作用机制研究 [J], 张敬军;李天富;夏作理因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
小胶质细胞源性因子对培养星形胶质细胞的活化作用研究
小胶质细胞源性因子对培养星形胶质细胞的活化作用研究杨忠;蔡文琴;马军;李成仁
【期刊名称】《中国病理生理杂志》
【年(卷),期】2001(017)009
【摘要】目的和方法:本实验采用胶质细胞分离纯化培养、胶质原纤维酸性蛋白(glial fibric acdic pritein,GFAP)表达的免疫荧光流式细胞仪检测及[3H]-TdR掺入等方法,观察离体条件下小胶质细胞条件培养液对星形胶质细胞增殖与GFAP表达的影响.结果:小胶质细胞条件培养液能明显促进培养星形胶质细胞的增殖和GFAP 的表达.结论:小胶质细胞源性因子能刺激星形胶质细胞的活化,由此推测在体条件下小胶质细胞源性因子可能是引起反应性胶质化的因素之一.
【总页数】3页(P920-922)
【作者】杨忠;蔡文琴;马军;李成仁
【作者单位】第三军医大学基础部组织胚胎学教研室;第三军医大学基础部组织胚胎学教研室;第三军医大学基础部组织胚胎学教研室;第三军医大学基础部组织胚胎学教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R338.2
【相关文献】
1.星形胶质细胞-小胶质细胞的交互作用及其介导的神经炎症反应研究进展 [J], 韩宏;吴春云;袁云
2.不同浓度姜黄素对体外培养小胶质细胞过度活化的抑制作用 [J], 金玉玲;罗海龙;刘蕾;程春凤;侯丽淳
3.星形胶质细胞源性因子对神经干细胞分化的实验研究 [J], 张志琳;包仕尧;汪立平;鲍欢
4.小胶质细胞和星形胶质细胞相互作用在中枢神经系统疾病中的作用机制研究进展[J], 陈芳玲; 田绍文
5.神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂对大鼠小胶质细胞丝裂原活化蛋白激酶和核转录因子-κB信号通路的作用 [J], 杨雪莲;董强;刘玲;王亮
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针刺干预炎性因子治疗脑瘫研究进展-叶慧伶
107第23卷 第6期 2021 年 6 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 23 No. 6 Jun .，2021针刺干预炎性因子治疗脑瘫研究进展叶慧伶，张学君（福建中医药大学，福建 福州 350122）摘要：脑瘫是儿童神经系统的难治性疾病之一，其病因复杂，发病机制尚不明确，目前越来越多的研究显示，炎性因子参与脑瘫的病理过程，其介导的免疫反应是脑瘫发病机理中的基本原因之一。
白细胞介素6（interleukin-6，IL-6）、白细胞介素10（interleukin-10，IL-10）及肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-alpha，TNF-α）是炎症介质网络的主要分子，在脑瘫的发病过程中发挥重要的炎性作用，三者的水平可以体现体内炎症的程度和变化趋势，可能是调控炎性因子作用于脑瘫病理过程的机制核心。
针刺治疗脑瘫的疗效确切，可通过降低TNF-α和IL-6这些促炎因子的含量抑制免疫炎症反应，促进脑瘫患者脑功能恢复，对脑瘫起到正向的治疗作用。
文章旨在前人研究的基础上，综述炎性因子与脑瘫的关系及针刺干预研究现状，为进一步研究针刺治疗脑瘫的机制提供参考依据。
关键词：脑瘫；针刺；炎性因子；机制；综述中图分类号：R742 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2021) 06- 0107- 05Research Progress on the Acupuncture Intervention of InflammatoryFactors in the Treatment of Cerebral Palsy YE Huiling，ZHANG Xuejun（Fujian University of Traditional Chinese Medicine，Fuzhou 350122，Fujian，China）Abstract：Cerebral palsy is one of the refractory diseases of the children's nervous system，butits etiology is complex and its pathogenesis are unclear. Currently，more and more studies have shown that inflammatory factors are involved in the pathological process of cerebral palsy，and the immune response mediated by them is one of the basic reasons in the pathogenesis of cerebral palsy. For instance，interleukin-6（IL-6），interleukin-10（IL-10）and tumor necrosis factor-α（TNF-α），are the main molecules of the inflammatory mediator network. They have the important inflammatory function in the pathogenesis of cerebral palsy，where the level of these three factors can reflect the degree and trend of inflammation in the body，and also may be the core of the pathological mechanism of cerebral palsy. Besides，acupuncture has a definite effect on the treatment of cerebral palsy. It can suppress the immune inflammatory response by reducing the content of pro-inflammatory factors such as TNF-α and IL-6，thereby promoting the recovery of patients' brain function in cerebral palsy，and playing a positive therapeutic effect on the sickness. Thus，above all，based on the previous studies，the article aims to review the relationship between inflammatory factors and cerebral palsy，and the current situation of acupuncture intervention research，to provide a reference for further research on the mechanism of acupuncture treatment of this disease.Keywords：cerebral palsy；acupuncture；inflammatory factor；mechanism；review 基金项目：国家自然科学基金（81674049）；福建省自然科学基金（2020J01743）；福建省大学生创新创业训练计划（201910393023）作者简介：叶慧伶（1998-），女，福建武夷山人，本科学生，研究方向：穴位功能特性的研究。
京尼平苷对LPS诱导的星形胶质细胞活化及炎性反应的抑制作用
京尼平苷对LPS诱导的星形胶质细胞活化及炎性反应的抑制作用张冷;叶齐;徐之良【摘要】Objective To determine the inhibitory effect of geniposide on the activation and inflammatory response of lipopolysaccha-ride(LPS)induced astrocytes.Methods The LPS induced primary cultured astrocytes as cell model were randomly divided into control group,LPS group,LPS+ resveratrol group and LPS+ different concentrations of geniposide group.GFAP markers and NF-level p65 kappa B(NF-κB)activation of astrocytes were detected by Western Blot.The inflammatory cytokines were detected by ELISA.Results Geniposide could inhibit astrocyte activation induced by pared with LPS group,IL-1β,IL-6 and TNF-αwere decreased by geniposide ,as well as protein level of NF-κB p65 .Conclusion LPS induced astrocyte activation and proinflam-matory cytokines expression could be inhibited by geniposide,this effect may act by inhibiting NF-κB activation.%目的明确京尼平苷对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞活化及炎性反应的抑制作用.方法以LPS诱导原代培养的星形胶质细胞为细胞模型,随机分为对照组、LPS组、LPS+白藜芦醇组和LPS+不同浓度京尼平苷组,采用Western Blot法检测星形胶质细胞活化标记物GFAP 水平及NF-κB p65水平,ELISA法检测致炎细胞因子水平.结果京尼平苷可显著抑制LPS诱导的星形胶质细胞活化,降低TNF-α、IL-1β和IL-6的表达,同时NF-κB p65蛋白的表达也明显降低.结论京尼平苷能通过NF-κB途径抑制LPS诱导的星形胶质细胞活化,并抑制致炎细胞因子水平.【期刊名称】《西北药学杂志》【年(卷),期】2018(033)002【总页数】4页(P200-203)【关键词】京尼平苷;细胞因子;星形胶质细胞;抗炎【作者】张冷;叶齐;徐之良【作者单位】武汉大学人民医院儿科,武汉 430060;福建农林大学生命科学学院,福州 350002;武汉大学人民医院儿科,武汉 430060【正文语种】中文【中图分类】R965星形胶质细胞作为中枢神经系统中含量最丰富的胶质细胞群，对神经元起着保护、支持和营养的作用[1]。
凝血酶诱导培养星形胶质细胞炎症细胞因子的表达
凝血酶诱导培养星形胶质细胞炎症细胞因子的表达吴碧华;江承平;许可;吴文斌;胡长林【期刊名称】《神经疾病与精神卫生》【年(卷),期】2008(8)2【摘要】目的证实凝血酶诱导体外培养的大鼠星形胶质细胞(astrocyte, As)白介素-1β(interleukin-1 beta, IL-1β)和干扰素-γ(Interferon-gamma,IFN-γ)的表达.方法采用体外培养As的方法,对新生Wistar大鼠大脑As进行培养并纯化,用不同浓度的凝血酶干预;酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测培养大鼠脑皮层As上清液中IL-1β、γ-干扰素的含量,免疫细胞化学染色和逆转录多聚酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)检测培养As IL-1β、IFN-γ蛋白和基因的表达.结果凝血酶上调体外培养As上调IL-1β、IFN-γ蛋白及mRNA的表达.结论凝血酶诱导培养As上细胞因子的IL-1β、IFN-γ表达,这些炎症细胞因子有助于As的损伤.【总页数】4页(P132-135)【作者】吴碧华;江承平;许可;吴文斌;胡长林【作者单位】637007,川北医学院附属医院神经内科;637007,川北医学院附属医院神经内科;637007,川北医学院附属医院神经内科;四川省人民医院神经内科;重庆医科大学第二附属医院神经内科【正文语种】中文【中图分类】R282.71【相关文献】1.凝血酶对大鼠星形胶质细胞组织因子活性表达的影响及其机制 [J], 朱发明2.丙泊酚对新生大鼠大脑皮层星形胶质细胞合成凝血酶敏感蛋白1的影响 [J], 张砡;李俣;李伟光;张成岗;叶铁虎3.地塞米松诱导培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞凋亡 [J], 王珍;刘仁刚;周洁萍;刘云华4.前列腺素E2诱导培养的大鼠脑皮质星形胶质细胞CREB及GABA_BR2磷酸化[J], 林芮禾;高璐;刘惠婷;刘英;孙燕;李瑞锡;彭裕文5.疏血通对凝血酶诱导培养的星形胶质细胞损伤的保护作用 [J], 吴碧华;江承平;胡长林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
小胶质细胞及其炎性细胞因子参与阿尔茨海默病因果关系的研究
小胶质细胞及其炎性细胞因子参与阿尔茨海默病因果关系的研究作者：陈艳王光楠金英来源：《中国医药导报》2008年第27期[关键词] 小胶质细胞；炎性细胞因子；阿尔茨海默病；因果关系[中图分类号] R329.2+8 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）09（c）-016-03阿尔茨海默病（Alzheimer's disease, AD）是一种进行性的脑内神经元退变性疾病，包括家族性AD和散发性AD。
临床上主要表现为进行性的记忆减退和认知障碍。
病理上主要表现为脑内神经纤维缠结(neurafibrillarytangle，NFT)和老年斑（senile plaque, SP）的联合发生。
神经元内的NFT是由微管蛋白TAU的过度磷酸化和糖基化形式在细胞内聚集产生的，而在细胞外聚集的SP主要由包含40~42个氨基酸的β淀粉样蛋白（amyloid β-protein, Aβ）组成。
这些病理改变主要集中在顶叶、颞叶、额叶联合区等，如大脑皮质、海马以及前脑。
AD病人脑内大部分Aβ聚积在老年斑处，Aβ是由β淀粉样前体蛋白（amyloid precurso protein, APP）通过一系列酶反应降解APP的一种可溶性产物被释放[1]。
Aβ的释放过程受到了3种酶的控制，即α、β和γ分泌酶[2]，β分泌酶先在Aβ结构域的N端的蛋氨酸和天冬氨酸之间进行裂解释放较长的可溶性APP片段(solubleAPP-β, SAPP-β)，而C端的片段仍与（c-terminalfragment，CTF）膜结合，随后γ-分泌酶裂解CTF-β产生长短不等的Aβ（39~43）氨基酸，其中有病理意义的是Aβ40和Aβ42[3]，脑内Aβ40水平远远高于AB42，但Aβ42不但凝集比Aβ40快，而且触发后者的凝集，是老年斑的主要成分。
AD患者死后的尸检中发现患者大脑皮质的神经炎性斑块病灶的周围常存在激活的小胶质细胞，而且帕金森病患者的黑质区则见到大量激活的表面表达HLA-DR抗原的小胶质细胞[4]，说明小胶质细胞在神经系统病变的发病中发挥重要作用[5]。
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[收稿日期]2002-09-10;[修回日期]2003-04-30[作者简介]刘杰波(1968-),男,博士,主治医师。
主攻方向:小儿神经系统疾病。
[通讯作者]刘杰波,深圳市罗湖区人民医院儿科,邮编:518000。
#论著#炎症因子诱导星形胶质细胞凋亡及机制探讨刘杰波(深圳市罗湖区人民医院儿科,广东深圳518000)[摘要]目的探讨L PS,I L-1B,T N F-A所致星形胶质细胞(AC)凋亡的机制及途径。
方法原代培养的新生SD大鼠前脑AC分为正常对照组、炎症组(L PS+I L-1B+T N F-A)与预处理组(L-N M M A预处理30min后加入L PS+T N F-A+I L-1B)。
培养72h后,M T T测定AC活力;分光光度仪测定细胞培养上清中N O2-/N O3-含量;电镜、流式细胞术检测细胞凋亡;Wester n Blot检测胞浆内细胞色素C的表达;原位杂交检测A C Caspase-3mRNA表达。
结果预处理组细胞活力明显高于炎症组(0.81?0.29vs0.46?0.15),差异有显著性(P<0.01)。
炎症组AC活力与其分泌的一氧化氮(NO)呈负相关(r=-0.604,P<0.05)。
预处理组凋亡率[(15.2?7.9)%]低于炎症组[(29.7?10.4)%],P<0.05。
预处理组胞浆内细胞色素C的含量较炎症组明显减少(14784?2096vs 31049?3784),P<0.01。
炎症组的Caspase-3mRNA表达强于预处理组。
结论¹L PS,I L-1B,T N F-A可导致细胞活力下降。
其细胞活力的下降与其分泌的NO增多有关。
º增多的N O可导致AC凋亡;NO导致的A C凋亡可能与细胞色素C凋亡途径有关。
[中国当代儿科杂志,2003,5(4):339-342] [关键词]星形胶质细胞;凋亡;一氧化氮[中图分类号]Q813[文献标识码]A[文章编号]1008-8830(2003)04-0339-04Mechanism of Cytokine-Induced Apoptosis of Astrocytes in RatsJie-Bo LI U.Dep ar tment of Pediatr ics,L uohu District H osp ital of Shenz hen,S henz hen,G uangdong518000,China (Email:j ieboliu@)Abstract:Objective T o study the mechanism of L PS,I L-1B and T NF-A-induced apoptosis of astro cytes in r ats. Methods T he astrocytes of the neonatal rat were cultur ed in vitr o and randomely assigned into the inflammation group(tr eated w ith L PS,IL-1B and T N F-A),pre-treatment group(L-NM M A was administr ated half an hour before treatmentwith L PS,IL-1B and T N F-A)and normal control group.T he cell viability was assayed by M T T;apoptosis was evaluatedby electr on micr oscope and flow cytometry;nitric ox ide(N O)content was measured by spectrophotometer;cytochrome Cco ntent in cy toplasm was measured by Western Blot and Caspase-3mRN A ex pression was detected by hybridization in situ.Results T he cell v iability in the pr e-tr eatment gr oup was significantly hig her than t hat of the inflammation group (0.81?0.29vs0.46?0.15),P<0.01.T here w as a neg at ive co rrelation between the cell v iability and NO content produced by astr ocytes in the inflammation g roup(r=-0.604,P<0.05).T he apoptosis rate of the pr e-treatment group was lower t han that of the inflammation g roup[(15.2?7.9)%vs(29.7?10.4)%;P<0.05].T he cytochrome C content in cytoplasm of astrocytes of the pre-treatment g roup(14784?2096)decreased compared wit hthat of the inflammation group(31049?3784)(P<0.01).T he expression of Caspase-3mRNA in the inflammatio n group was intensified compared with that of the pr e-treatment group.C onclusions Cytokines may lead to decrease of viability of astrocytes through increasing N O content produced by astrocytes.T he incr ease of N O content can induce astrocyte apoptosis,w hich is related to the r elease of the cytochrome C from mitochondria to cell plasma,and activatingthe ex pression of Caspase-3mRNA.[C hin J Contemp Pediatr,2003,5(4):339-342] Key words:Astrocyte;A poptosi s;N itric ox ide星形胶质细胞(astrocyte,AC)在中枢神经系统中占有非常重要的地位。
它通过对各种神经生长因子和细胞因子的刺激起反应,营养神经元。
同时在神经系统中又起支撑神经元、维持突触联系等作用。
AC的改变常导致脑组织正常结构和功能的改变,可导致神经系统退行性病变的发生。
炎症因子是儿童神经系统中最常见的刺激因素之一,参与儿童神经系统感染性疾病的病理生理过程[1,2]。
在神经系统感染性疾病的脑组织与脑脊液中主要有IL-1B和TNF-A增高[1],它们对AC的损伤是目前研究的热点之一。
本研究采用LPS,IL-1B,T NF-A共同刺激AC,观察其凋亡、凋亡机制及与自分泌NO之间的关系。
1材料与方法1.1主要试剂和仪器兔抗胶质纤维酸性蛋白(GFAP)多克隆抗体,山羊抗兔IgG SABC免疫组化试剂盒,DAB显色试剂盒(以上均为博士德公司提供)。
L-NMMA,LPS (Sig ma公司);IL-1B,TNF-A(PepeoTECH EC公司)。
小鼠抗大鼠细胞色素C单克隆抗体(Neo-M arkers公司)。
兔抗小鼠二抗由博士德公司提供。
一氧化氮试剂盒由晶美生物工程有限公司提供。
酶联免疫检测仪(DG-3022型);全自动酶标仪(Elx800,Bio-Tek Instruments Inc);紫外分光光度计(Backm an U600)。
电泳仪(SCR-300型);垂直电泳槽(DYY-II I28A型);电转移电泳槽(DYY-III型);透射电镜(H ITACH I,H-600型);流式细胞计数仪(美国420型)。
1.2实验方法1.2.1新生大鼠前脑AC培养方法无菌条件下取出生1d Sprague-Daw ley大鼠前脑,D-Hanks液中除去血污与脑膜和血管。
将脑组织在无菌小瓶剪碎,用0.25%胰酶消化后灭活胰酶,200g/min离心10min,吸取上层,加入含20%FCS的培养液(DM EM高糖型培养基,另含HEPES10mmol/L,谷氨酸2mmol/L,胰岛素4U/L,青霉素105U/L,链霉素100mg/L),吹打制成单细胞悬液。
通过200目钢网过滤,调整细胞密度至1@106/ml,然后接种至培养瓶(涂鼠尾胶)或培养板(涂多聚赖氨酸)。
在37e,饱和湿度,5%CO2/95%空气的CO2培养箱中培养。
培养4~5代后进行GFAP的免疫细胞化学鉴定细胞纯度。
1.2.2LPS,IL-1B,TNF-A对神经胶质细胞活力的影响在细胞密度为1@104/ml~1@105/ml的培养板中把培养的细胞分为正常组、炎症组(LPS+TNF-A+IL-1B)及L-NM MA预处理组。
每组内有24个样本。
加入LPS,IL-1B,TNF-A,L-NM MA的量分别为100L g/L,10L g/L,10L g/L和0.5mmol/L。
干预72h后,吸取上清-20e保存留做NO2-/NO3-测定,在培养板中加入无血清培养基,然后进行M TT分析。
吸去上述干预后的96孔板中含血清培养基,加入200L l无血清培养基,同时加入MTT20L l,37e培养4h,吸去上清后加入二甲基亚砜150L l,充分摇匀15min后在发射波长490nm处用酶标仪测定。
细胞活力换算公式:细胞活力=处理孔OD490值/正常组OD490值。
1.2.3NO2-/NO3-的测定72h后正常组和炎症组的细胞培养上清检测NO2-/NO3-,参照试剂盒说明进行。
一氧化氮浓度(L mol/L)=测定管OD 值/标准管OD值@100L mol/L。
1.2.4凋亡细胞电镜观察PBS清洗炎症组干预72h后的AC3次,用细胞刮刮下细胞,加入同体积的2.5%戊二醛预固定15min,2000g/min离心5min,去上清,加入2.5%戊二醛吹散细胞并固定。