中药血清药理学以及实验设计思路
中药血清药理实验方法
★★如果以不同剂量的药物给予动物，取同 体积的血清作为不同剂量药物加入体外反应 系统，则空白血清对照组可只设一组，（等 体积的空白血清）； ★★如果以一种剂量给予动物，以不同体积 的药物血清加入量作为不同剂量组，则空白 对照组应设相应不同加入量的多个对照组。
中药血清药理实验的几个关键技术
4.7.2平行研究
中药血清药理实验的几个关键技术
4.3采血时间
★★标准法 先用少量动物进行预试验，通过不同采血时间进 行比较后确定最佳采血时间。 这种方法得到的结果较为确切，但个体性较强， 同一种药物的不同指标或同一种指标在不同的药物的 达峰时间都不同，所得结果不能通用。
中药血清药理实验的几个关键技术
★★通法 将待测药每天给药2次，连续给药3d，末次给药 后1h采血。
Ⅰ
在实际操作中可以先按通法给药、采血， 如不能得到预期结果，疑为采血时间不当， 再采用标准法确定最佳采血时间。
中药血清药理实验的几个关键技术
4.4 血清预处理
4.4.1什么情况下需要预处理？
★★当空白血清出现显著的阳性反应，严重干扰实 验进行时。 ★★浴槽内的离体器官实验，特别是当浴槽中加入 血清量较多，通氧时形成的大量泡沫，严重妨碍实 验进行时。
中药血清药理实验方法若干问题探讨
谢 谢 大 家
中药血清药理实验的几个关键技术
★★临床日用量倍数法
以临床日用量的5， 10，30倍确定给药剂 量；或以整体模型动物的有效剂量（即为临 床成人剂量的8－18倍量）确定剂量为妥。
中药血清药理实验的几个关键技术 4.2.2 给药次数与时间间隔
★★单次加倍给药法 ★★2次给药法（第1次给药后2h，再以相同剂量重 复1次） ★★3次给药法（连续给药3次，第l间隔20h，第2间 隔4h） ★★7-10d法(1次/d，连用7-10 d） 由于中药及其复方成分复杂,半衰期很难测定,所 以7～10d给药为权宜之计。
(完整版)中药的含药血清药理研究方法
中药含药血清药理研究方法Pharmacological method of the drug-contained serum for Chinese Materia Medica in vitro概述中药血清药理研究方法：是指动物灌胃给予中药及制剂，经吸收进入机体血液循环，在一定时间内采取血液，分离所得血清，必定含有一定量的该药物成分，此时的血药浓度反映了机体的真实血药浓度，以此血清加入到体外细胞培养体系，观察其药理作用的体外实验方法。
中药血清药理学研究方法的意义：1、采取的含药物血清与机体内环境相一致且排除了中药制剂的各种影响因素（如pH，渗透压等），将其加入到体外细胞培养体系，观察其药理作用，具有更好的科学性，可行性；同时，使中药的研究易于深入到细胞分子水平，对于创建中药细胞分子药理学研究具有重要的促进作用。
2、于灌胃给药后不同时间采取的血清，其体外药理实验的效应及其变化，可以反映机体真实的血药浓度及其变化，无疑开创了对于许多成分不明或复方中药制剂药动学研究的一种新方法。
3、如采用中药血清药理学方法进行中药药效学研究时，同时分析测定血清中药物成分的含量，具有极强的针对性，可避免盲目地筛选药物有效成分的繁重工作，使中药药效与中药成分的研究更能协调一致。
从1988年日本学者田代真一正式提出了“血清药理学”这一新概念，至今已有十余年时间。
其研究主要经历了三个阶段：1、可行性探索研究2、方法学研究3、应用研究阶段。
可行性探索研究以含药血清进行体外的药效学试验，早在上世纪五十年代国内即有所探索，自田代真一提出“血清药理学”的概念以后，重新引起了学术界的广泛关注。
国内学者对其进行了广泛的可行性探索研究。
一.抗菌、抗病毒的实验研究杨奎等应用中药血清药理方法进行了中药体外抗菌实验，发现黄芩、藿香正气水、藿香正气液的血清分别具有明显的抑菌作用，抑制率高达70％以上。
该研究发现一些含中药血清相对于正常血清表现为促进细菌繁殖作用，表明一些中药可以降低机体抗御外邪的能力。
中药药理学实验教程课程设计
中药药理学实验教程课程设计一、课程简介本课程旨在让学生了解中药药理学实验的基本原理和操作技能，并通过实验的操作和数据分析，深入掌握中药药理学的基础知识和实践技能，为从事中药研究和开发提供必要的实验技术支持。
二、教学目标1.了解中药药理学的基本概念和药理学实验的基本原理；2.掌握中药药理学实验的实验操作技能；3.能够根据实验结果，进行数据分析和科学实验论文写作。
三、教学内容3.1 实验一：血管舒张作用实验实验目的通过本实验，学生将了解中药对血管舒张的作用以及测量中药的抗高血压能力。
实验原理在细胞培养系统中，可通过测定其对血管的舒张作用，来对中药的血管扩张作用进行评测。
实验步骤1.提取不同种类中药；2.考虑药物体积、浓度，制作不同浓度的药液；3.分别取得鸡冠中冠、香附、黄芪三种药液，测量其对血管舒张的作用；4.测量浓度为0.008g/mL的氯化铵的血管扩张作用；5.将数据进行统计和分析。
实验结果1.得出不同浓度中药的收缩压、舒张压变化；2.得出药效度可比性以及其扩张血管的能力。
3.2 实验二：炎症模型实验实验目的通过本实验，了解中药抗炎作用的评测。
实验原理在哺乳动物细胞培养中，可通过模拟炎症反应，来对中药的抗炎作用进行评测。
实验步骤1.提取不同种类的中药；2.将细胞存活率测量器移液到不同培养皿中；3.将药物添加到不同培养皿中；4.经过一定时间后，将药物注入培养皿中；5.测量存活率和细胞死亡率；6.将数据进行分析。
实验结果1.通过对不同浓度药物的影响研究，测定药物的抗炎作用；2.通过实验结果，进一步对药物途径、治疗和炎症治疗的作用进行研究和总结。
四、实验考核实验之后，按照以下方法进行考核：1.学生在实验过程中，需要遵守实验室规章制度，按照实验要求正确地进行实验操作，并完成实验报告和研究论文等作业。
2.实验后，老师将根据学生的实验操作表现和实验报告，进行考核和评分。
五、总结中药药理学实验教程的课程设计，学生通过实验操作和数据分析，深入掌握中药药理学的基础知识和实践技能，为从事中药研究和开发提供必要的实验技术支持。
有关中药血清药理学的研究2200字
有关中药血清药理学的研究2200字摘要：作者针对中药血清药理学做了一些理论和实践的探讨，内容主要包括中药血清药理学的优点，并对中药血清药理学的实验操作进行了介绍。
作文/关键词：中药；血清；药理学有关中药血清药理学的研究金阳(长春市中心医院药剂科，吉林长春130051)摘要：作者针对中药血清药理学做了一些理论和实践的探讨，内容主要包括中药血清药理学的优点，并对中药血清药理学的实验操作进行了介绍。
关键词：中药；血清；药理学Abstract: Based on traditional Chinese medicine serum pharmacology do some theory and practice, this paper mainly includes the advantages of traditional Chinese medicine serum pharmacology, and this paper introduce serum pharmacology of Chinese medicine of experiments . Key words: Chinese medicine; serum; pharmacology长期以来,中药体外药理实验开展难度大,仅从体外成分数和量的变化角度很难阐明中药与机体的相互关系,加上方剂的化学组成并不能代表其在体内发挥生物效应的化学形式。
基于以上考虑, 80年代田代真一教授先后提出含药血清实验方法的设想和"血清药理学"的概念。
其初衷是利用含药血清代替中药复方或其提取物而供实验研究使用的一种非单体药物药理研究的方法,在体外药理实验中尽可能地模拟和反映人或动物服药后药物与机体相互作用的过程,可以观察到中药经体内胃肠吸收、生物转化后的综合整体药理效应,是指导复杂中药成分研究、药效研究的重要实验方法[1]。
1 中药血清药理学的优点中药血清药理学是在以往体外实验的基础上加以改进而形成的，即以含药血清代替中药粗提物进行实验，因而它最大的优点是：条件可控性强、揭示药物作用机制较为深入、更接近药物在体内环境中产生药效的真实过程等。
中药血清药理学方法学研究—抗菌试验含药血清处理方案的研究
药量一律折合为生药计算。水解酪蛋 白琼脂 （ － 、 ＭＩＡ） 庚大 霉索 Ｉ 药敏纸片（ 片含庚大霉 索 １ ） 为杭州微生物试 剂厂产 品， 每 ０ｇ均 前者批号 ２ ０ ０ １， 者批 号 ９ ０ ２ 临床 Ｈｂ培养 基 由 兰州 ０ ０ ３８ 后 ７３。 生物制品研究所提供 。 １ ２ 菌 株 金 黄 色 葡 萄 球 菌 （ ＭＣ Ｂ ２０ ３ 、 炎 球 菌 ． Ｃ Ｃ（ ） ６ ０ ） 肺 （ ＭＯ （ ）４ ０ ）流感 嗜血杆菌 （ ＭＣ Ｂ）８ ４ ） 大肠 杆菌 Ｃ Ｃ Ｂ６ ６ １， Ｃ Ｃ（ ５ ５ ７ 、
注人无菌负压 采血 管， 凝固后离心分离血 清， 将各组 ４只大 鼠的 血 清混合， 每组大鼠血清分 为２份． 份直 接置 一２ ℃冰 箱保 存 １ ０ 备用． １ 在 ５℃ 水褡 中 ３ ｒｉ 活后【 同ｌ 置 一２ ℃ 冰 另 份 ６ ０ ｎ灭 ａ ， 祥 ０
研究方法有待规 范…。 本文探 讨 ｒ制 备含 药血 清 的处 理 对抗
量组相同浓度 的赋形剂稀释 ． 使各 剂量组 动物所给 受试药应 用
液中所含赋形 剂 的浓度 相 同。试 验 中柴黄 片 与银 翘解 毒 片用
２ ℃冰箱保存备用， ０ 另一份 未灭 活血 清各样 品置 球箱 中冻成 冰 块 后采 用冷冻真空 干燥法 （ ０ ） 干水 份， 一２ ℃保存 备 一７ ℃ 燕 置 ｏ 用， 上含血清纸片均在 当 日内使 用。
食 正 常 。 查 Ｂ ８ ｎｔＬ Ｃ １ ． ￣ ｌＬ ＵＡ ２ ｒ ＵＮ ６ ３ ｍｒｏ ， ａ １０ ６ｔ ／ ／ ｍ ７ ｏ ｄ／
之法服药调治， 疗效多 不满 意。 自从我 们配合 以化毒 降浊坜癌 肠治疗后 ， 治疗 效 果 明显 改观 。该方 以大黄 为 主药泻 浊通腑 ， 蒲公英解 毒祛邪 ． 丹参 活血 化瘀 、 改善微循 环 ． 片、 芪温 阳 附 黄 益气 扶正 。该组方接邪不忘固本， 用大黄也无 伤正之虑。 久 运 用化毒降浊 汤灌厮 治疗 慢性 肾衰是 一 种简康 有效 的治 疗方法， 对于改善病人临床症状 ， 延长生存 时间． 提高生存 质量
关于中药血清药理学方法的再思考
开始有关中药血清药理学研究的报道【Ⅷ。随后在国 家自然科学基金会与国家中医药管理局的资助下， 有关中药血清药理学方面论文逐年上升，目前处于 高峰平台期。由于血清药理学方法得到的实验结论 存在不确定性，故这种畸形发展趋向可能给中药的
研究与开发带来严重的不利后果。 二、血清与血浆差异的多样性
因消耗而减少。⑨完全的凝血过程通常刺激并损伤
验结果的情况下，才考虑采用血清１，。们。
在体外实验中，全血指抗凝的血液，血浆指抗凝
血液离心后去除血细胞的上清液，血清指凝血完成
后未稀释的细胞外液，三者存在明显的差别。一般认
为血清是无纤维蛋白原的血浆，这是不正确的。随着 生物科技进步，特别是蛋白组学与肽组学飞速发展， 现已明确凝血过程涉及多方面的改变，主要包括【７～９】：
失，同时有５个蛋白反而升高；以８０个可溶性蛋白 为指标，热处理血清有１１个蛋白显著高于热处理血
验组与对照组除处理因素不同外，其他条件齐同可 比，保证组间非处理因素（包括可控和非可控的）所 产生的效应基本相同。只有这样，才是有效对照。由 于许多中药（特别是与中医“气”、“血”相关的药物） 可能通过不同作用环节，对凝血、纤溶、补体及激肽 系统产生不同的影响。有些中药成分可能对血小板 与白细胞也具有一定的作用。这些差异就会造成含 药血清与未含药血清的凝血及其相关过程反应不 同。在这种情况下，含药血清的非处理因素引起的效 应与未含药的对照血清往往缺乏齐同可比性。也就 是说，非处理因素效应与处理因素效应的差异混杂 在一起，容易造成实验结论的不确定性。例如实验目 的是利用半体内实验筛选促进血管内皮细胞增殖的 中药。若该药确有促进血管内皮细胞生长作用，但同 时也有一定抗凝作用，则由于凝血酶生成量减少，血 小板释放的生长因子（ＰＤＧＦ，ＶＥＧＦ）降低；如用这种
中药血清药理学研究方法探讨与思考-黄峰
动物给药方案
给药前禁食
饮食可能影响中药复方体内动力学和临床疗 效。如食物对口服小柴胡汤者体内甘草甜素、 甘草次酸和黄芩素等的吸收影响明显。 因此应根据中药复方的功效特点、实验要 求，决定给药前禁食与否，并拟订给药后采血 时间。目前，给药前实验动物多禁食6—12h， 不禁水。
给药途径
一般在制备含药血清时，供体动物的给药途径应该与临床 给药途径一致，以避免由于给药途径的不同带来结果的差异.
存在问题与研究的难点
① 不同种属、不同年龄的动物对药物吸收有一定差 异，从而影响到血清中含药成分及其含量。因给 药剂量、采血时间不同，血清中含药成分及其含 量也不尽相同，故必须充分把握好给药剂量及采 血时间； ②在药理研究方法方面主要还, 存在血浆药理方法 和血清药理方法之争。 ③含药血清在体外反应体系中，血清药物浓度被稀 释问题，特别是中药复方制剂中微量成分及蛋白 结合率较高的成分，给药物检测和药理实验提出 了难题；
中药血清药理学研究方法探讨及 思考
黄峰 中药学 2110948107
中药血清药理学定义
中药血清药理学是指将中药或中药复方经口给动物 灌服一定时间后采集动物血液，分离血清，用含有 药物成分的血清进行体外实验的一种实验技术。
中药血清药理学研究方法
动物模型的选择
• 实验动物选择 选择动物时应尽量选与人类生物特性近似 的物种，制备血清的动物应与获取离体器官、 组织细胞的动物相一致，从而缩小或避免动 物血清之间以及动物血清和人类血清之问在 理化、生物等特性上的差异，提高实验结果 的可靠性。 • 离体组织(细胞)选择 应尽可能减少因动物种属差异而造成的免 疫反应。因此，在体外培养实验中宜采用同 种单一血清，既为细胞提供营养，又为药物 载体，还避免了多种血清的干扰。
中药血清药理学综述
中药血清药理学实验方法摘要：本文通过从中药血清药理方法学中实验动物、给药剂量、给药方案、采血方案、血清灭活与保存、血清添加量等实验条件的确立进行了阐述，从而建立最佳的实验方案进行研究。
并对血清药理学的不足做了简单的介绍，以及对其以后的发展进行了展望。
关键字：中药；血清药理学；给药方案；采血方案；血清处理血清药理学是日本学者Hiroko Iwama[1]在1948年第一届和汉医药学会上首次提出的。
中药血清药理学是指将中药或中药复方经口给动物灌服一定时间后采集动物血液、分离血清，以含药血清代替中药粗提物作为药物源加入离体反应系统中从而研究其药理作用的一种半体内实验方法。
近年来，我国越来越多的中药专家应用此法来研究中药药理作用。
主要针对中药及其复方复杂多样的化学成分特点，用含药血清代替煎剂或粗提物进行体外实验，它克服了中药粗制剂直接进行体外实验的缺点，其结果的可信度明显优于中药粗制剂直接用于体外实验。
血清药理学中医药研究中所表现出的优势[2]：①从方法学上解决了中药复方直接应用于离体实验的难点，使中医药研究能在离体实验中直接与分子生物学技术相结合，从而推动中医药现代化的进程；②从中药复方本身来讲，可克服体外实验不能直接观察到的复方经体内胃肠吸收、生物转化后的综合整体药理效应；③对含药血清的成分进行药效、药动学研究，可以发现中药复方发挥药效作用的物质基础，为探讨中药复方作用规律提供新思路；④可以用来验证一些中医学基础理论。
血清药理学实验方法可以避免了中药直接进行体外用药所产生的影响，直接反映中药及其代谢产物的药理作用，从而相对有效地阐释中医药治病的科学机理，可以为中医药现代化研究研究提供依据。
1、实验动物的选择在目前中药血清药理学研究中，常用大鼠、家兔、豚鼠等动物来制备含药血清。
但动物的种属不同，其血清成分也有所不同，所以要尽量选择和人类生物学特征相近的物种[3]，从而缩小动物血清和人类血清在生理、生化等状态下的差异，减少因种属差异而造成的免疫反应，提高实验结果的可靠性[4]，否则其研究结果不会有太大的意义。
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• 凝血是指凝血酶与纤维蛋白原相作用生成 纤维蛋白, 再与血球结合而使血液发生凝固 的现象。
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血浆 血清 凝血
无凝血直接离心的为血浆； 有凝血再离心的为血清。
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优点
防止中药粗制剂理化性质 反映药物的代谢产物和 对体外试验的干扰 给药后产生的内源性成分
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中药血清药理学
• 中药血清药理学是将中药或 中药复方经口服给动物灌服 一定时间后采集动物血液、 分离血清，用含有药物成分 的血清进行体外实验的一种 半体内实验方法。
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血浆 血清 凝血
• 血浆是指血液中除血球、血小板之外的部 分, 是一种无色透明的液体, 含有水、无机 盐、营养物、激素、尿酸等。
• 优选含药血清的制备方法（采用正交试验 法等）：以药物和观察指标不同，需要首 先对含药血清的时效和量效进行研究，以 便确定给药方案 、采血时间 、血清或血浆 、灭活与否、血清添加量。
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实验设计思路
• 复方黄连注射剂血清药理学研究
•
以大白兔为实验动物，采用肌内注射复方黄
连注射剂，2次/d，连续3d。末次给药后15 、
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中药血清药理学步骤
实 验
给
给
采
含 药 血
血
动 物 的
药 剂
药 方
血 时
清 的 处 理
清 添 加
选 择
量
案
间
与 保 存
量
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实验动物的选择
实
动物种类：大鼠、家兔、豚鼠
验
动
动物数量
物
的
雌雄是否各半
选
择
正常生理状态与病理状态
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给药剂量
给
临
给
给
药
床
药
药
常
剂
用剂Βιβλιοθήκη 剂量量量
量
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给药方案
• 灌胃次数和时间间隔：各种给药方式都是为了使 药物达到稳态血药浓度，从而便于药物作用和机 理的研究。
• 由于中药及其复方化学成分复杂，半衰期很难测 定，所以采用7～10d 给药法也是权宜之计。当 然，若是进行药物血清时效关系的研究，给药方 法又另当别论。
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采血时间
• 理想的采血时间应落在血药浓度的高峰期。 • 李仪奎通过对96个药物达峰时间统计后提出药后
30 min，1、2、3 h后从兔颈静脉取血，分离含
药血清。采用反相高效液相色谱法测定含药血清
中小檗碱含量，用微量稀释法和药敏纸片法测定
复方黄连注射剂含药血清的抑菌能力。结果复方
黄连注射剂含药血清对耐药性金葡菌具有明显的
抑制作用。
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实验设计思路
• 茵陈蒿汤保肝作用的血清药理学研究
• 建立CCl4诱导的大鼠肝细胞损伤细胞模型， SD 大鼠为含药血清供体，以含药血清对损伤肝 细胞增殖(WST-8法)的影响为指标，采用正交试 验法优选含药血清的制备方法，并确定体系中血 清添加量。
最大无毒浓度 TC0 均为5%，即在相应培养基中 血清含量为5%。荆芥、桂枝挥发油含药血清5%
、3.5%、2.5%浓度对10 TCID50的甲型流感病毒 的增殖均有显著抑制作用，且5%、3.5%浓度的
荆芥、桂枝挥发油含药血清对甲型流感病毒具有
直接杀灭作用。
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1~ 2h采血较为合理。 • 最可靠的方法是先通过对少量动物进行预实验，
根据不同的实验要求，将不同时间的采集的含药 血清进行实验比较，再确定采血时间。
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含药血清的处理与保存
• 药物血清处理：灭活与否？ ①丙酮法； ②乙醇法 ；③加温法。 目前采集动物血清后，多用加温法， 经56℃，30min灭活。
• 含药血清的保存: -20 ℃或更低温度环境下保存。
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血清添加量
• 药物血清加入量的逐渐增加，其药理效应曲线是 呈正态分布状。
• 研究含药血清的加入量来评价血清中药物的真实 有效浓度。
• 设立正常血清空白对照组来排除血清本身所含干 扰性物质对实验结果的影响。
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实验设计思路
• 根据实验的要求选择动物，以及必要的药 理造模；
小檗碱、黄芩苷纯品对氧化损伤保护作用的剂量-效
应关系。
•
黄芩的含药血清灭活与否抗氧化作用有很大差
异，两者的时-效曲线上也有明显不同。血清添加量
过大，会有假阳性结果，造模难以成功。本实验中
以5% 浓度血清造模，较为成功。
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实验设计思路
• 荆芥、桂枝挥发油含药血清体外抗病 毒的实验研究
•
荆芥、桂枝挥发油含药血清对MDCK细胞的
便于从细胞分子水平 体外实验条件可控性强、
阐述药物的作用机制
药物效应易于检测
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缺点
• 无确定的最佳给药方案 • 体外培养体系药物浓度与血药浓度不确定 • 药效最佳的采血时间难以确定 • 含药血清灭不灭活，方法不统一 • 无去除血清影响的理想措施
• 成分复杂，影响因素太多，结果重复性差 • 血清药理学方法增加了分析药物成分的难度
•
以动物是否造模、取血时间、取血成分为考
察因素，每个因素设2个水平，选用L4(23)正交表
安排试验。
精品课件
实验设计思路
精品课件
实验设计思路
• 黄连解毒汤抗氧化作用的血清药理学研究
•
采用血清药理学方法，研究黄连、黄芩、黄连
解毒汤含药血清对氧化应激损伤保护作用的时间-效
应关系；并研究黄连、黄芩、黄连解毒汤提取物和