Transwell实验原理与操作步骤
细胞迁移侵袭实验操作步骤(Transwell)
细胞迁移侵袭实验操作步骤(Transwell)实验介绍：细胞迁移和侵袭实验是通过将Transwell小室放入培养板中，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，研究细胞在不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜下的共培养、细胞趋化、细胞迁移和侵袭等多种方面的实验。
实验步骤：1.材料准备：可拍照显微镜、Transwell小室（孔径8μm，没包被胶的），24孔板、BD公司的Matrigel、无血清DMEM、(1%胎牛血清)DMEM和1640培养基、DMEM完全培养基、1640完全培养基（也可加到20%血清）、无菌PBS、棉签、胰酶、4%多聚甲醛固定液或者甲醇、结晶紫染液（0.1%（g/ml）PBS结晶紫）。
2.实验步骤：2.1 基质胶铺板：用XXX的Matrigel稀释1：8，包被Transwell小室底部膜的上室面，置37℃30min使Matrigel聚合成凝胶。
使用前进行基底膜水化。
2.2 制备细胞悬液：细胞撤血清饥饿12-24小时后，消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，用含BSA的无血清培养基重悬。
调整细胞密度至5×105/ml。
2.3 接种细胞：取细胞悬液100µl加入Transwell小室，24孔板下室加入600µl含20%FBS的培养基。
注意避免气泡的产生。
2.4 培养细胞：常规培养12-48小时。
24小时较常见，时间点的选择除了要考虑到细胞侵袭力外，处理因素对细胞数目的影响也不可忽视。
2.5 结果统计：通过给细胞染色，在镜下计数细胞。
胞悬液；将细胞悬液加入上室中央，保持液面水平；将下腔室中加入含有20% FBS的条件培养基；37℃培养箱中孵育20-24小时；取出transwell，用PBS洗涤2次，用4℃的5%戊二醛固定，加入结晶紫或Giemsa染色；用棉球擦去上表面细胞，显微镜下观察。
注意事项包括确保transwell在24孔板中浸泡1小时，消化细胞时用无血清培养基洗涤2次并计数，将细胞悬液加入上室中央保持液面水平，下腔室中加入含有20% FBS的条件培养基，37℃培养箱中孵育20-24小时，用PBS洗涤2次，用4℃的5%戊二醛固定，加入结晶紫或Giemsa染色，用棉球擦去上表面细胞，并小心避免混淆实验组和对照组。
Transwell实验-超详细
Transwell侵袭实验总结第一节概念这里想明确两个概念，一个是Transwell，另一个是肿瘤细胞侵袭模型。
1.Transwell关于Transwell这个词该如何解释，查了很多资料也未见准确的注解，我觉得可以这么理解吧，trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。
更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
下图是一个Transwell装置的纵切面将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
下面参考guxuefeng战友和cosmosci战友的帖子具体来谈谈孔径的选择，当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。
transwell共培养原理
一、Transwell共培养介绍Transwell共培养是一种常用的体外细胞培养技术，通过使用Transwell孔膜插入式细胞培养皿，可以模拟细胞间相互影响的情况，从而更好地研究细胞间信号传导、细胞迁移和细胞间相互作用等生物学过程。
本文将结合Transwell共培养的原理、应用和操作步骤，对该技术进行详细介绍。
二、Transwell共培养的原理Transwell共培养的原理是利用Transwell孔膜插入式细胞培养皿，使得上下室中的细胞可以通过孔膜进行相互作用。
孔膜的直径通常在3-12微米之间，可以根据实验需要选择不同直径的孔膜。
上下室中的细胞可以分别种植在孔膜的两侧，从而实现细胞间的共培养。
三、Transwell共培养的应用1. 模拟体内细胞间相互作用：Transwell共培养可以实现不同类型细胞之间的相互作用，如免疫细胞与肿瘤细胞、上皮细胞与间质细胞等，从而更好地模拟体内情况。
2. 研究细胞迁移和浸润：通过在孔膜上涂覆ECM或采用Transwell迁移实验可以模拟细胞的迁移和浸润过程，对细胞迁移机制进行研究。
3. 评价药物渗透性：可用于评价药物在肠道、肾小球等组织中的渗透性，以预测其在体内的分布和代谢情况。
四、Transwell共培养的操作步骤1. 准备Transwell孔膜：选择合适直径的Transwell孔膜，并在使用前进行灭菌处理。
2. 细胞培养：分别将上下室的细胞分别种植在Transwell孔膜的两侧。
3. 培养条件：放置Transwell共培养皿于细胞培养箱中，保持适宜的pH值和温度，并定期更换培养基。
4. 实验操作：根据实验的目的，可进行细胞迁移实验、信号传导实验等操作。
5. 结果分析：对实验结果进行统计分析，观察上下室细胞的形态及细胞指标的变化。
五、Transwell共培养技术的发展趋势随着生物医学研究的不断深入，Transwell共培养技术也在不断发展。
未来，Transwell共培养技术有望应用于疾病模型的构建、靶向药物筛选等领域。
学会这5步，轻松搞定transwell实验
学会这5步，轻松搞定transwell实验生物学霸丁香通出品轻松采购无忧科研做肿瘤研究的人，很少有不知道 transwell 实验的，它是用来研究肿瘤细胞的迁移侵袭转移情况的一种简便快捷的实验方法，还可以构建两种细胞的共培养体系以及趋化性试验。
今天咱们就来讲讲怎么做肿瘤细胞的侵袭转移实验。
Transwell 侵袭实验，其实原理简单地说就是用一层膜将高营养的培养液和低营养的培养液隔开，细胞放在低营养的培养液里，为了找吃的，细胞会往高营养的培养液里面跑，但是有膜挡着，所以要穿过膜才行。
我们在膜上涂上一层基质胶，模仿细胞外基质，于是细胞就要分泌金属蛋白酶将基质消化了才可以从低营养的培养液跑到高营养的培养液里面，最后我们检测高营养的培养液里细胞量就可以知道细胞的侵袭能力了。
而迁移实验就是不铺胶直接让细胞穿过就行了。
Transwell 简易图以下学霸君来介绍侵袭实验步骤：实验前准备：transwell 小室（一般选用12um），24 孔板，基质胶（corning），细胞实验所需的基本的材料。
基质胶铺板用BD 公司的Matrigel 1：8 稀释（可以直接用无血清的培养基稀释），包被 Transwell 小室底部膜的上室面，置37℃孵箱 1-4h 使Matrigel 聚合成凝胶（时间不宜太长，之前有人说在37 度孵箱过夜，反正元元师兄觉得不太可能）。
注意事项：1. 铺胶之前将枪头以及所用的耗材至于冰箱4 度当中，否则配胶的时候会直接凝固。
2. 铺胶的厚度自己摸索，25ul，40ul，100ul。
3. 注意铺胶过程不要产生气泡，铺胶均匀，否则影响实验结果。
4. 注意无菌操作。
2制作细胞悬液1. 制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12－24h，进一步去除血清的影响。
但这一步并不是必须的。
2. 消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，（用 PBS 洗 1－2 遍，这一步很必要，否则细胞表面覆有血清培养基，细胞没有迁移侵袭的动力），用无血清培养基重悬。
transwell小体原理 -回复
transwell小体原理-回复transwell，也称为转移百分率孔板（Transwell Permeable Supports），是一种常用于研究细胞迁移、侵袭和转移的实验方法。
它通过模拟生理条件下的细胞迁移情况，提供了一种方便、可靠的实验平台。
本文将详细介绍transwell小体的工作原理和使用方法。
第一步：理解transwell小体的基本原理transwell小体由上下两个隔离的室组成，上室为细胞培养室，下室为培养液室。
两者之间分隔着一块孔径合适的膜片。
通常，膜片选择多孔性聚碳酸酯或胶原膜，其孔径大小可根据具体实验需求进行选择。
细胞可以通过膜孔迁移到下室中，从而模拟细胞在体内穿越生理屏障的过程。
第二步：制备transwell小体实验装置1. 准备上下室：选择适当容量的上下室，通常上室较小，下室较大，确保两个室都可以容纳足够的培养液和细胞。
2. 安装膜片：将膜片放入上室中，确保膜片放置平整，没有明显的气泡或污染物。
3. 连接上下室：使用连接管将上室与下室连接起来，并确保连接部分密封良好，以防止液体泄漏。
第三步：培养细胞1. 处理膜片：在实验前，先对膜片进行处理。
对于多孔性膜片，可以先进行预涂或预培养，以增加细胞附着和生长的效率。
2. 细胞培养：将需要进行迁移实验的细胞悬浮液加入上室中，并注意控制细胞密度，避免过高或过低的细胞数目。
3. 培养液添加：在上室中添加适当的培养液，以满足细胞的生长和迁移需求。
同时，在下室中加入相应的培养液，以提供适当的环境和条件。
第四步：进行实验1. 实验前处理：在进行实验前，可以对细胞进行预处理，例如添加化学物质或进行基因操作，以模拟特定的生理或病理状态。
2. 实验操作：将设备放置在恒温培养箱中，以保证适宜的温度和环境条件。
根据实验需要，可以对不同的上下室中的条件进行调控，例如填充不同的培养液、添加特定的化学物质等。
3. 实验时间：根据具体实验要求和细胞特性，确定合适的实验时间。
transwell小室实验原理
Transwell小室实验是一种常用于细胞学研究中的实验方法，主要用于研究细胞迁移、侵袭、成血管和细胞-细胞相互作用等细胞生物学现象。
本文将详细介绍Transwell小室实验的原理及其在细胞学研究中的应用。
一、Transwell小室实验原理Transwell小室实验是通过一种特殊的小室装置进行的，该装置由两个分隔的小室组成，上下两个小室之间通过一片具有微孔的多孔膜相连。
这片多孔膜的孔径可以根据实验需要进行选择，常见的孔径有3um、8um等。
在实验过程中，我们将需要观察的细胞或细胞外基质放置在上小室中，而下小室中则向其添加一定浓度的化学物质或药物。
待实验进行一定时间后，我们可以通过上下小室之间的多孔膜来观察细胞的迁移、侵袭或是其他相关现象。
在Transwell小室实验中，我们可以根据实验需要对多孔膜进行功能修饰，比如涂覆胶原蛋白、基质蛋白等物质，或是加入不同浓度的化学刺激物质，以模拟细胞在不同生理环境下的行为。
这种设置能够更真实地反映细胞在体内的生理活动，进一步帮助我们理解细胞的生理与病理过程。
二、Transwell小室实验在细胞学研究中的应用1.细胞迁移和侵袭研究Transwell小室实验广泛应用于细胞迁移和侵袭研究中。
我们可以将需要研究的细胞悬浮在上小室中，然后在下小室中添加诱导因子，比如趋化因子、血浆成分等，通过多孔膜对细胞进行筛选，并观察细胞在多孔膜上迁移扩散的情况。
这种实验能够模拟体内细胞在不同环境中的迁移和侵袭过程，帮助我们更好地理解细胞在肿瘤转移、炎症反应等生理和病理过程中的行为。
2.成血管研究Transwell小室实验也常用于细胞成血管相关的研究。
我们可以在上小室中培养内皮细胞或其他与血管生成相关的细胞，然后在下小室中添加适当的生长因子或细胞因子，观察细胞在多孔膜上形成管状结构。
这种实验方法有助于我们深入了解血管生成的分子机制，并为相关疾病的治疗提供新的思路。
3.细胞-细胞相互作用研究在细胞-细胞相互作用研究中，Transwell小室实验也具有重要的应用价值。
Transwell实验-超详细
Transwell侵袭实验总结第一节概念这里想明确两个概念，一个是Transwell，另一个是肿瘤细胞侵袭模型。
1.Transwell关于Transwell这个词该如何解释，查了很多资料也未见准确的注解，我觉得可以这么理解吧，trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。
更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
下图是一个Transwell装置的纵切面将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
下面参考guxuefeng战友和cosmosci战友的帖子具体来谈谈孔径的选择，当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。
transwell方法
transwell方法Transwell方法是一种常用的细胞迁移和侵袭性研究技术，也称为Boyden室或Boyden腔。
该技术利用了细胞在特定条件下通过孔隙的能力，可以模拟细胞在体内穿越基底膜的过程。
本文将从Transwell 方法的原理、应用、优缺点等方面进行介绍。
一、Transwell方法的原理Transwell方法是利用Transwell腔的特殊结构，将上下两个室隔离开来，上室放置细胞悬液，下室放置培养基和化合物，通过孔隙模拟细胞穿越基底膜的过程。
Transwell腔通常由两个部分组成，上部为细胞培养室，下部为底部过滤膜室。
过滤膜通常为聚碳酸酯或聚酰胺材料，可以选择不同的孔径大小和孔隙度，以适应不同类型的细胞。
Transwell方法的操作流程如下：1. 准备Transwell腔和底部过滤膜。
2. 在上室中加入细胞悬液。
3. 在下室中加入培养基和化合物。
4. 将Transwell腔放入细胞培养箱中培养。
5. 取出Transwell腔，将上室中的细胞悬液倒掉，用PBS或其他缓冲液洗涤。
6. 取出底部过滤膜，用甲醇或其他固定液固定细胞。
7. 进行免疫染色或其他检测。
二、Transwell方法的应用Transwell方法主要用于细胞迁移和侵袭性研究，可以模拟细胞穿越基底膜的过程，评估细胞侵袭性、迁移能力和转移能力，同时也可以研究细胞与化合物之间的相互作用。
具体应用包括：1. 细胞迁移和侵袭性研究。
可以用于研究肿瘤细胞的侵袭和转移能力，评估药物对细胞迁移和侵袭性的影响。
2. 细胞与化合物相互作用研究。
可以用于筛选化合物的抑制作用，评估化合物对细胞迁移和侵袭性的影响。
3. 细胞-细胞相互作用研究。
可以用于研究细胞-细胞相互作用对细胞迁移和侵袭性的影响，评估细胞间信号转导通路。
4. 细胞与基质相互作用研究。
可以用于研究细胞与基质之间相互作用的过程，评估细胞与基质之间的黏附和迁移能力。
三、Transwell方法的优缺点Transwell方法具有一定的优点和缺点：1. 优点：Transwell方法操作简单，可以模拟细胞穿越基底膜的过程，评估细胞侵袭性、迁移能力和转移能力，同时也可以研究细胞与化合物之间的相互作用。
Transwell实验超详细
Transwell实验超详细Transwell侵袭实验总结第⼀节概念这⾥想明确两个概念，⼀个是Transwell，另⼀个是肿瘤细胞侵袭模型。
1.Transwell关于Transwell这个词该如何解释，查了很多资料也未见准确的注解，我觉得可以这么理解吧，trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有⼩室的意思，可以从字⾯上理解，这是⼀类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是⼀种膜滤器（Membrane filters），也可认为是⼀种有通透性的⽀架（permeable supports）。
更准确地说，Transwell应该是⼀种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell⼩室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为⼀个可放置在孔板⾥的⼩杯⼦，不同⼚家对Transwell会有不同的命名，⽽不同型号也可有不同形状，不同⼤⼩，根据实验需要，可有不同选择。
但⽆论是何种外形，其关键部分都是⼀致的，那就是杯⼦底层的⼀张有通透性的膜，⽽杯⼦其余部分的材料与普通的孔板是⼀样。
这层膜带有微孔，孔径⼤⼩有0.1－12.0µm，根据不同需要可⽤不同材料，⼀般常⽤的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
下图是⼀个Transwell装置的纵切⾯将Transwell⼩室放⼊培养板中，⼩室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从⽽可以研究下层培养液中的成分对细胞⽣长、运动等的影响。
应⽤不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进⾏共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种⽅⾯的研究。
下⾯参考guxuefeng战友和cosmosci战友的帖⼦具体来谈谈孔径的选择，当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞⼤⼩。
transwell侵袭实验原理及步骤
transwell侵袭实验原理及步骤展开全文transwell侵袭实验就是用一层膜将高营养的培养液和低营养的培养液隔开，细胞放在低营养的培养液里，细胞会往高营养的培养液方向移动。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
transwell侵袭实验内容：（1）共培养体系：小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0µm以下孔径。
常用0.4、3.0µm。
我们实验室用的是0.4µm。
将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的影响。
（2）趋化性实验可用5.0、8.0、12.0µm膜，上室细胞可穿过聚碳酸酯膜进入下室，计数进入下室的细胞量可反映下室成分对上室细胞的趋化能力。
①细胞B对细胞A的趋化作用：将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的趋化作用。
②趋化因子对细胞的趋化作用：将细胞种于上室，下室加入某种趋化因子，可研究该趋化因子对细胞的趋化作用。
（3）肿瘤细胞迁移实验常用8.0、12.0µm膜，上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑，计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力。
（4）肿瘤细胞侵袭实验常用8.0、12.0µm膜，原理与肿瘤细胞迁移实验类似。
在聚碳酸酯膜上涂上一层基质胶，模仿细胞外基质，上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或实验设定的药物或者影响因子，细胞会分泌相关酶类消化模拟细胞外基质膜的基质胶，从而从上室迁移到下室，通过计数进入下室的细胞量测定细胞的侵袭能力。
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Transwell实验原理与操作步骤Transwell实验，也被称为细胞侵袭实验，是一种研究细胞迁移和侵袭能力的实验方法。
其基本原理是将小室放入培养板中，小室内称为上室，培养板内称为下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
上室内添加上层培养液，下室内添加下层培养液，并将研究的细胞种在上室内。
由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞生长、运动等。
在进行不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜的实验时，可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
在肿瘤细胞侵袭实验中，需在聚碳酸酯膜上侧铺一层基质胶，用以模仿细胞外基质。
肿瘤细胞必须分泌基质金属蛋白酶（MMPs）将基质消化了才能进入下室（这与体内情况较为相似）。
最后通过计算进入下室的细胞量即可反应细胞的侵袭能力。
有侵袭能力的细胞才可用于Transwell侵袭实验。
建议实验前先用明胶酶谱法检测MMPs的表达，特别是MMP-2的表达。
Transwell实验的具体操作步骤如下：
1.实验前的准备工作：需要提前一天将Matrigel胶（一种人工合成的细胞外
基质）从冰箱中取出，放置在冰盒上融化。
同时，将24孔板、枪头、离心管等实验器材也放置在冰盒中预冷。
2.基质胶铺板：将融化好的Matrigel胶与无血清培养基按照1:8的比例混
合，然后用预冷的枪头将混合液均匀铺设在Transwell小室的上室底部，注意要避免产生气泡。
铺好后将小室放入37℃的培养箱中孵育30分钟，使
Matrigel胶凝固。
3.细胞处理：将需要研究的细胞进行传代或复苏，并用无血清培养基洗涤两
次，然后用胰酶消化并计数。
4.接种细胞：将计数好的细胞用无血清培养基重悬，然后取适量细胞悬液加入
到Transwell小室的上室中，注意要保证每个小室的细胞数量一致。
5.添加培养液：在上室和下室中分别添加适量的含血清培养基，上室的培养基
中可以含有研究药物或其他处理因素。
6.培养细胞：将Transwell小室放入37℃的培养箱中培养24-48小时，具体
时间可以根据研究目的和细胞类型进行调整。
7.固定和染色：培养结束后，将Transwell小室取出，用PBS洗涤两次，然后
用4%的多聚甲醛固定细胞15分钟。
固定结束后用PBS洗涤两次，然后用
0.1%的结晶紫染色15-30分钟。
8.计数细胞：染色结束后用PBS洗涤两次，然后用棉签轻轻擦去上室内的细
胞，然后在显微镜下观察并计数穿过Matrigel胶进入下室的细胞数量。
可以使用ImageJ等软件进行细胞计数。
9.数据分析：将计数结果输入到Excel或其他数据分析软件中，进行统计分析
并绘制图表。
需要注意的是，Transwell实验的操作步骤可能会因为不同的研究目的和细胞类型而略有不同，具体操作步骤可以参考相关文献或实验指南。