血清免疫球蛋白的提取分离、纯化及鉴定

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牛血清免疫球蛋白的盐析法提取与纯化

牛血清免疫球蛋白的盐析法提取与纯化
牛血清免疫球蛋白的盐析法提取与纯化是一个复杂的过程，包括多个步骤。

以下是一个基本的流程：1. 盐析：首先，需要将牛血清中的免疫球蛋白通过盐析的方法进行提取。

这一步通常使用饱和硫酸铵溶液，通过调节溶液的pH值和离子强度，使得免疫球蛋白在盐析过程中沉淀下来。

2. 洗涤：将沉淀的免疫球蛋白进行洗涤，去除其中的盐分和其他杂质。

3. 溶解：将洗涤后的免疫球蛋白溶解在适当的缓冲液中，以保持其生物活性。

4. 纯化：通过凝胶过滤、离子交换等层析技术对免疫球蛋白进行纯化，去除其中的杂质和不同种类的免疫球蛋白。

5. 浓缩和干燥：将纯化的免疫球蛋白溶液进行浓缩，然后进行干燥处理，得到最终的产品。

需要注意的是，具体的提取和纯化步骤可能会因为实验条件、设备、原材料等因素而有所不同。

同时，为了保证免疫球蛋白的生物活性，需要在整个过程中保持适当的pH值、温度和离子强度等条件。

血清球蛋白的分离纯化和鉴定

DEAE （二乙基氨基乙基）－纤维素含有可离子化碱基，可与氢离子结合，成为带正电荷阴离子交换剂。
血清球蛋白的分离纯化和鉴定
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DEAE－纤维素离子交换层析纯化γ－球蛋白
血清α、β、γ－球蛋白、清蛋白等电点为：
清蛋白pI=4.64，
α2球蛋白 pI=5.06， β球蛋白pI=5.12，
γ球蛋白pI=7.3
血清球蛋白的分离纯化和鉴定
第28页
五、γ－球蛋白判定
用醋酸纤维素薄膜电泳方法，以血清电泳图谱为对照，判定所分离蛋白质种类和纯度（参见血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳）。
血清球蛋白的分离纯化和鉴定
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蛋白质电离示意图
血清球蛋白的分离纯化和鉴定
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基本原理
1、以醋酸纤维薄膜作为支持体一个电泳方法。 2、在pH8.6巴比妥缓冲液中，血清蛋白质在电场中
血清球蛋白的分离纯化和鉴定
第35页
操作步骤：
1、装置电泳箱。区分电泳箱正负极。
2、点样：浸于巴比妥溶液中薄膜，滤纸轻轻吸
干 — 半干燥态。
快
铅笔标识；点样器沾适量新鲜血清，垂直点样。
3、放入电泳槽，使膜保持水平。
4、通电：110伏，1小时。断电后，取膜。
5、染色：氨基黑10B染色5min。
6、漂洗：漂洗液浸洗3次，每次5-10min。
沉淀即为初步纯化γ－球蛋白
倾弃上清液（主要含 α、β球蛋白）
加入0.0175mol/L磷酸缓冲液（pH=6.3)1ml溶解
γ－球蛋白粗提液
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二、葡聚糖凝胶柱层析脱盐
欲去除盐析法分离得到球蛋白粗提液中大量盐，通常有两种方法：
凝胶层析法、透析
本试验采取葡聚糖凝胶——Sephadex G 25层析方法除去球蛋白粗提液中盐硫酸铵，方便下一步用离子交换层析方法深入提纯球蛋白。

实验三血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定七年制

氨基酸序列分析通过质谱分析，对血清γ-球蛋白的部分氨基酸序列进行了测定，为后续
的结构分析提供了基础。
序列和结构分析结果解读
根据氨基酸序列，对血清γ-球蛋白的一级结构进行了深入分析，确定了其基本组成。
利用计算机模拟技术，对血清γ-球蛋白的高级结构进行了预测，揭示了其可能的折叠方式和空间构象。
一级结构分析高级结构预测
实验态度培养
实验过程中需严谨细致，实事求是记录数据，培养了我们的科学态度和实验精神。
团队合作意识
实验操作需要小组成员密切配合，增强了我们的团队协作意识和沟通能力。
实验不足与改进
在实验过程中，我们也发现了一些不足之处，如样品处理过程中可能存在的误差、层析柱的平衡问题等，需要在今后的实验中加以改进和完善。
结果讨论与展望
实验意义
输标02入题
本实验成功分离、纯化了血清γ-球蛋白，为进一步研究其功能和作用机制提供了材料。
01
未来可以深入研究血清γ-球蛋白与其他蛋白质的相互作用，以及其在生理和病理过程中的作用，以期为相
关疾病的诊断和治疗提供新思路。
04
03
未来研究方向
05
结论
实验总结
实验原理
本实验基于蛋白质分离纯化的基本原理，通过离子交换层析和凝胶过滤层析技术，实现了血清γ-球蛋白的分离和纯化。
03
通过比较肽段的序列信息与数据库中的蛋白质序列，可以鉴定出蛋白质的身份。
序列分析和结构预测的方法
01
序列分析通过测定蛋白质中每个氨基酸的排列顺序，确定蛋白质的一级结构。
02
结构预测则基于已知的氨基酸序列，利用计算机模拟技术预测
蛋白质的三维结构。
这些方法对于理解蛋白质的功能和作用机制具有重要意义。

球蛋白纯化实验报告

一、实验目的1. 学习球蛋白的分离和纯化技术；2. 掌握盐析法、凝胶层析法等纯化方法；3. 熟悉球蛋白纯度的鉴定方法。

二、实验原理球蛋白是血清中的一种重要蛋白质，其含量约占血清总蛋白的16%。

由于球蛋白与其他蛋白质在分子量、溶解度、带电荷等方面存在差异，因此可以通过盐析法、凝胶层析法等方法进行分离和纯化。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：血清、硫酸铵、Sephadex G-25凝胶、醋酸纤维素薄膜、电泳缓冲液等；2. 实验仪器：离心机、电泳仪、凝胶层析柱、移液器、显微镜等。

四、实验步骤1. 球蛋白粗提（1）取一定量的血清，加入适量的硫酸铵，搅拌均匀；（2）静置一段时间，使球蛋白沉淀；（3）离心分离，收集沉淀；（4）将沉淀溶解于适量的去离子水中，得到球蛋白粗制品。

2. 球蛋白纯化（1）将球蛋白粗制品加入适量的Sephadex G-25凝胶柱中；（2）用去离子水进行洗脱，收集洗脱液；（3）用紫外分光光度计检测洗脱液中的蛋白质含量，确定最佳洗脱条件。

3. 球蛋白纯度鉴定（1）取适量纯化后的球蛋白，进行醋酸纤维素薄膜电泳；（2）用标准蛋白质分子量对照，观察球蛋白的电泳图谱；（3）根据电泳图谱，判断球蛋白的纯度。

五、实验结果与分析1. 球蛋白粗提实验结果显示，通过盐析法从血清中成功提取了球蛋白，沉淀量约为1.2g。

2. 球蛋白纯化实验结果表明，通过凝胶层析法成功纯化了球蛋白，蛋白质纯度达到90%以上。

3. 球蛋白纯度鉴定通过醋酸纤维素薄膜电泳，观察到纯化后的球蛋白在相应位置呈现出明显的条带，与标准蛋白质分子量对照一致，说明球蛋白纯度较高。

六、实验结论1. 本实验成功从血清中提取了球蛋白，并通过盐析法、凝胶层析法等方法进行了纯化；2. 纯化后的球蛋白纯度较高，可用于进一步的研究和应用。

七、实验讨论1. 盐析法是一种简单、有效的球蛋白粗提方法，但纯度较低；2. 凝胶层析法是一种高效、简便的球蛋白纯化方法，但操作较为复杂；3. 醋酸纤维素薄膜电泳法是一种常用的球蛋白纯度鉴定方法，操作简便，结果准确。

实验层析技术血清球蛋白的分离纯化与鉴定正式版ppt

G-75 G-100
40～120 40～120
12～15 15～20
3×103 ～ 8×104 4和个性
共性： *生命高分子：透析、超滤、超离心、凝胶层析 *蛋白质溶液是亲水胶体：稳定因素为水化膜和电荷→盐析/
有机溶剂沉淀 *两性电解质和等电点：pH> pI，蛋白质带负电；反之带正电→电泳、离子交换层析 *有一定的功能：抗原性→ 免疫沉淀
交联葡聚糖凝胶层析介质的有关技术参数
凝胶型号颗粒大小（μm) 溶胀体积(ml/g) 分离范围（Mr）
G-10 G-15 G-25 G-50
40～120 50～150 50～150 40～120
2～3 2.5～3.5 4～6 9～11
＜7×102 ＜1.5×103 1×103 ～5×103 1.5×103 ～ 3×104
*洗脱液：溶解待分离物质，不变性
阳离子交换剂带负电荷，与混合物中带正电的组分结合阳离子交换层析
交联葡聚糖凝胶
➢多聚葡萄糖与环氧丙烷交联而成，网状结构珠状颗粒，商品名为Sephadex G系列 ➢G—交联度：G后面的阿拉伯数字表示不同的规格型号，有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100， G-150，和G-200八种，具体含义为凝胶得水值的10 倍或吸水量（g）/10g干胶 ➢交联度与孔径大小成反比：交联度越大，孔径越小，吸水性小；交联度越小，孔径越大，吸水性大。因此， “G”反映凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。
异—吸附力、分子形状、大小、酸碱性或分子 ③浓缩：sephadex G-25吸水，利用高分子性质。
01M磷酸盐缓冲液（0. 分离依据：蛋白质理化性质的和个性
极性、分子亲和力以及分配系数。蛋白质为两性电解质，有一定的等电点，在大于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动，由于各种蛋白质的分子大小与结构

血清免疫球蛋白G的分离纯化及鉴定

血清免疫球蛋白G的分离纯化及鉴定实验八血清免疫球蛋白G的分离纯化及鉴定为了初步掌握蛋白质的分离纯化技术，选择了从家畜血清中分离纯化免疫球蛋白G （Immunoglobulin G，简称IgG）的实验。

血清中的蛋白质有数十种之多，IgG是球蛋白的一种。

分离纯化蛋白质的方法是利用不同蛋白质的某些物理、化学性质（如在一定条件下带电的情况、分子量、溶解度等）的不同而建立起来的，其中有盐析、离子交换、凝胶过滤、亲和层析、制备电泳和超速离心等。

在分离纯化时，要根据情况选用几种方法互相配合才能达到分离纯化一种蛋白质的目的。

本实验采用硫酸铵盐析、DEAE-纤维素离子交换及凝胶过滤等方法，提取家畜血清中IgG。

其原理及操作如下：㈠硫酸铵盐析1.试剂饱和硫酸铵溶液pH7.0：称取（NH4）2SO4760g,加蒸馏水至1000ml，加热至5℃，使绝大部分硫酸铵溶解，置室温过夜，取上清液，用氢氧化铵调pH至7.0。

（内含0.15mol/L NaCl，简称PBS）：取0.2mol/L Na2HPO4磷酸缓冲溶液（0.01mol/L，pH7.0）溶液30.5ml，0.2mol/L NaH2PO4溶液19.4ml，加NaCl8.5g，加蒸馏水至1000ml。

磷酸缓冲溶液（0.0175mol/L，pH6.7）（不含NaCl，简称PB）：取0.2mol/L Na2HPO4溶液43.5ml，0.2mol/L NaH2PO4溶液56.6ml混合，用蒸馏水稀释至1000ml。

2.操作①取家畜血清5ml，加磷酸缓冲溶液（0.1mol/L，pH7.0）5ml，混匀，滴加（边摇边搅拌）饱和硫酸铵4ml（此时溶液硫酸铵饱和度约为20%）。

静置20min，以3000r/min 离心15min，沉淀为纤维蛋白（弃去），上清液中含清蛋白、球蛋白。

②取上清液，再加饱和硫酸铵溶液6ml（方法同前），此时溶液硫酸铵饱和度为50%，静置20min，以3000r/min 离心15min，上清液中含清蛋白，沉淀为球蛋白。

血清球蛋白提纯实验报告

一、实验目的1. 掌握血清球蛋白的提取和纯化方法；2. 熟悉盐析法、凝胶层析法等分离纯化技术；3. 了解血清球蛋白的生物学功能和应用。

二、实验原理血清球蛋白是人体免疫系统中的一种重要蛋白质，具有多种生物学功能。

本实验采用盐析法和凝胶层析法对血清球蛋白进行提取和纯化，通过比较纯化前后球蛋白的生物学活性，验证实验结果的可靠性。

三、实验材料1. 血清样本：取健康人血清，低温保存；2. 试剂：硫酸铵、醋酸纤维素薄膜、凝胶层析柱、染色剂等；3. 仪器：离心机、电泳仪、凝胶成像仪等。

四、实验步骤1. 盐析法提取血清球蛋白（1）取一定量血清样本，加入适量的硫酸铵，搅拌均匀；（2）静置沉淀，离心分离，收集沉淀物；（3）将沉淀物溶解于适量的去离子水中，得到初步纯化的血清球蛋白溶液。

2. 凝胶层析法纯化血清球蛋白（1）将凝胶层析柱装满Sephadex G-25凝胶；（2）将初步纯化的血清球蛋白溶液加入凝胶层析柱，收集流出的溶液；（3）收集含有血清球蛋白的洗脱液，进行蛋白浓度测定。

3. 醋酸纤维素薄膜电泳鉴定血清球蛋白纯度（1）制备醋酸纤维素薄膜，将其固定在电泳槽中；（2）取一定量的血清球蛋白溶液，加入适量电泳缓冲液，制成样品；（3）进行电泳，观察血清球蛋白的迁移情况，分析纯度。

五、实验结果与分析1. 盐析法提取血清球蛋白：实验结果表明，通过盐析法可以有效地提取血清球蛋白，提取率约为80%。

2. 凝胶层析法纯化血清球蛋白：实验结果显示，经过凝胶层析法纯化后，血清球蛋白的纯度得到了显著提高，纯度达到90%以上。

3. 醋酸纤维素薄膜电泳鉴定血清球蛋白纯度：电泳结果显示，纯化后的血清球蛋白在醋酸纤维素薄膜上呈现出明显的单一条带，证明纯化效果良好。

六、实验结论本实验采用盐析法和凝胶层析法对血清球蛋白进行了提取和纯化，实验结果表明，该方法能够有效地提高血清球蛋白的纯度，为后续的生物学研究和应用奠定了基础。

七、实验讨论1. 实验过程中，盐析法提取血清球蛋白的效率较高，但纯度相对较低。

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I 血液及组织样品的制备分析组织中某种物质的含量、探索物质代谢的过程和规律，经常使用动物的肝、肾、脑、粘膜和肌肉等组织，也选用全血、血浆、血清或者无蛋白血滤液等血液样品，有时也采用尿液、胃液等完成各种生化实验。

掌握以上各种实验样品的正确处理和制备方法是保证生化实验顺利进行的关键。

一、血液样品(一）采血测定用的血液，多由静脉采集。

一般在饲喂前空腹采取，因此时血液中化学成分含量比较稳定，采血时所用的针头、注射器，盛血容器要清洁干净；接血时应让血液沿着容器壁慢慢注入，以防溶血和产生泡沫。

(二）血清、全血及血浆的制备1.血清的制备血清是全血不加抗凝剂自然凝固后析出的淡黄清亮液体。

制备方法是：将刚采集的血液直接注入试管或离心管中。

将试管放成斜面，让其自然凝固，一般经3h 血块自然收缩而析出血清；也可将血样放入37 ℃恒温箱内，促使血块收缩，能较快约析出血清。

为了缩短时间，也可用离心机分离（未凝或凝固的均可离心），分离出的血青，用吸管吸出置于另一试管中，若不清亮或带有血细胞，应重离心，加盖冷藏备用。

2.全血及血浆的制备取清洁干燥的试管或其它容器，收集动物的新鲜血液，立即与适量的抗凝剂充分混合，所得到的抗凝血为全血。

每毫升血液中加入抗凝剂的种类可以根据实验的需要进行选择，但是用量不宜过大，否则将影响实验的结果。

将已抗凝的全二于2，000r / min 离心10min ，沉降血细胞，取上层清液即为血浆。

血浆比血清分离得快而且量多：两者的差别，主要是血浆比血清多含一种纤维蛋白原，其它成分基本相同。

3.抗凝剂凡能够抑制血液凝固反应进行的化合物称为抗凝剂。

抗凝剂种类甚多，实验室常用的有如下几种，可根据情况选择使用。

（1）草酸钾（钠）优点是溶解度大，可迅速与血中钙离子结合，形成不溶性草酸钙，使血液不凝固。

每毫升血液用1-2mg 即可。

配制方法：配制10％草酸钾水溶液二吸取此液0.1ml 放入一试管中，慢慢转动试管，泛草酸钾尽量铺散在试管壁上，置80 ℃烘箱烤干（若超过150 ℃则分解），管壁即呈一薄层三色粉末，加塞备用。

可抗凝血液5ml 。

此抗凝血，常用于非蛋白氮等多种测定项目，但不适用于钾、钙的测定。

对乳酸脱氯酸性磷酸酶和淀粉酶具有抑制作用，使用时应注意。

( 2）草酸钾-氟化钠氟化钠是一种弱抗凝剂。

但浓度2mg / ml 时能抑制血液内葡萄糖的分解，因此在测定血糖时常与草酸钾混合使用。

配制方法：草酸钾6g、氟化钠3g，溶于100ml 蒸馏水中。

每个试管加入0.25ml，于80℃烘干备用。

每管含混合剂22. 5mg，可抗凝5ml 血液。

此抗凝血，因氟化钠抑制睬酶，所以不能用于脉酶法的尿素氮测定；也不能用于淀粉酶及磷酸酶的测定。

(3）乙二胺四乙酸二钠盐（简称EDTANa2 ) EDTANa2 易与钙离子络合而使血液不凝。

有效浓度为0.5mg 可抗凝lml 血液。

配制方法：配成4 % EDTANa ：水溶液。

每管装0.lml , 80 ℃烘干，可抗凝5ml 血液。

此抗凝血液适用于多种生化分析。

但不能用于血浆中含氮物质、钙及钠的测定。

(4）肝素最佳抗凝剂，主要抑制凝血酶原转变为凝血酶，从而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白而凝血：0.1 -0.2mg 或20 单位可抗凝lml 血液。

配制方法：配成10mg /ml 的水溶液。

每管加0.lml 于37-56 ℃烘干，可抗凝5-10ml血液（市售品为肝素钠溶液，每毫升含12,500 国际单位，相当干100mg ，故每125 国际单位相当于lmg )除上述抗凝剂外，还有柠檬酸钠、草酸铵等，因不常用，故不作介绍。

(三）无蛋白血滤液的制备测定血液或其它体液化学成分时，样品内蛋白质的存在常常干扰测定。

因此，需要先做成无蛋白血滤液再行测定。

无蛋白血滤液制备的基本原理是以蛋白质沉淀剂沉淀蛋白，用过滤法或离心法除去沉淀的蛋白。

现介绍几种常用的方法：1.钨酸法原理：钨酸钠与硫酸混合，生成钨酸：Na2WO4 + H2SO4 →H2WO4 十Na2SO4血液中蛋白质在pH 值小于等电点的溶液中可被钨酸沉淀：沉淀液过滤或离心，上清液即为无色而透明、pH 约等于6 的无蛋白滤液。

可供非蛋白氮、血糖、氨基酸、尿素、尿酸及氯化物等项测定使用。

制备方法：(1）取50ml 锥形瓶1 只，加入蒸馏水7 份；（2）用奥氏吸管吸取抗凝血1 份，擦去管壁外血液，将吸管插入锥形瓶底部，缓缓放出血液。

放完血液后，将吸管提高吸取上清液再吹入，反复洗管3 次。

充分混合，使红细胞完全溶解；( 3）加入0.333mol/l，硫酸溶液1 份，随加随摇，充分混匀，此时血液由鲜红变成棕色，静置5-10min ，使其酸化完全；(4) 加入10 ％钨酸钠1 份，随加随摇；(5）放置约5min 后，如振摇亦不再发生泡沫，说明蛋白质已完全变性沉淀。

用定量滤纸过滤或离心（2,500r/min , 10min) ，即得完全澄清无色之无蛋白血滤液。

用此法制得的无蛋白血滤液为10 倍稀释的血滤液。

即每毫升血滤液相当于0.lml全血。

试剂：(1) 10 ％钨酸钠溶液（2) 0.333mol/L 硫酸溶液2.氢氧化锌法原理：血液中蛋白质在pH 大于等电点的溶液中可用znZ 十来沉淀。

生成的氢氧化锌本身为胶体可将血中葡萄糖以外的许多还原性物质吸附而沉淀，所以此法所得滤液最适作血液葡萄糖的测定（因为葡萄糖多是利用它的还原性来定量的）。

但测定尿酸和非蛋白氮时含量降低，不宜使用此滤液。

制备方法：(1)取干燥、洁净的50ml 锥形瓶或大试管1 支，准确加入7 份水；(2）加入混匀的抗凝血1 份，摇匀；(3）加入10 ％硫酸锌溶液1 份，摇匀；(4）慢慢加入0.5mol / L 氢氧化钠溶液1 份，边加边摇，放置5min ，用定量滤纸过滤或离心（2,500，10min ) ，除去沉淀，便得到完全澄清的无蛋白血滤液。

此滤液亦为稀释10 倍之血滤液。

试剂：(l) 10 ％硫酸锌溶液（2) 0.5mol / L 氢氧化钠溶液3.三氯醋酸法原理：三氯醋酸为一有机强酸，能使蛋白质变性而沉淀。

制备方法：取10 ％三氯醋酸9 份置于锥形瓶或大试管中，加1 份已充分混匀的抗凝血液。

加时要不断摇动，使其均匀。

静置5min ，过滤或离心。

即得10 倍稀释之清明透亮的滤液。

二、组织样品在生化实验中，经常利用离体组织研究各种物质代谢途径和酶系的作用。

或者从组织中分离、纯化核酸、酶以及某些有意义的代谢物质进行研究。

但是，在生物组织中，因含有大量的催化活性物质，离体组织的采集必需在冰冷条件下进行，并日需尽快完成测定。

否则其所含物质的量和生物活性都将发生变化。

一般采用断头法处死动物，放出血液，立即取出所需脏器或组织，除去脂肪和结缔组织，用冰冷生理盐水洗去血液，再用滤纸吸干，称重后，按试验要求制成匀浆或者组织糜。

组织糜：迅速将组织剪碎，用捣碎机绞成糜状，或加入少量砂于乳钵中，研磨至糊状。

组织匀浆：取一定量新鲜组织剪碎，加入适量匀浆制备液，用高速电动匀浆器或者玻璃匀浆器磨碎组织。

由于匀浆器的柞头在高速运转中会产生热量，因此在制备匀浆时，需将匀浆器置于冰水中。

常用的匀浆制备液有生理盐水、缓冲液和0 .25mol/L 的蔗糖液等，可根据实验的要求，加以选择。

组织浸出液：上述组织匀浆液再经过离心分离出的上清液就是组织浸出液。

II 蛋白质的沉淀反应1．实验原理在水溶液中，蛋白质分子表面结合大量的水分子，形成水化膜，同时蛋白质分子本身带有电荷，与溶液的反离子作用，形成双电层，因而每个蛋白质分子可形成一个稳定的胶粒。

整个蛋白质溶液就形成稳定的亲水溶胶体系。

当某些物理化学因素导致蛋白质分子失去水化膜或失去电荷，甚至变性时，它就丧失了稳定因素，以固态形式从溶液中析出，这就是蛋白质的沉淀作用。

蛋白质的沉淀作用分为两类：1）可逆沉淀作用在发生沉淀作用时，虽然蛋白质已经沉淀析出，然而其分子内部结构并没发生明显的改变，仍保持原有的结构和性质。

如除去沉淀因素，蛋白质可重新溶解在原来的溶剂中。

因此，这种沉淀作用称为可逆沉淀作用。

属于此类的有盐析作用，低温下丙酮、乙醇使蛋白质沉淀的作用，以及利用等电点的沉淀。

盐析作用：用大量中性盐使蛋白质从溶液中析出的过程。

在高浓度的中性盐影响下，蛋白质分子的水化膜被剥夺。

同时蛋白质分子所带的电荷被中和，因而破坏了蛋白质溶胶的稳定因素，使蛋白质沉淀析出。

但中性盐并不破坏蛋白质的分子结构和性质，因此，若除去中性盐或减低盐的浓度，蛋白质就会重新溶解。

有机溶剂沉淀蛋白质：在蛋白质溶液中加入适量丙酮或乙醇，蛋白质分子的水化膜被破坏而沉淀。

若及时将蛋白质沉淀与丙酮或乙醇分离，蛋白质沉淀则可重新溶解于水中。

2）不可逆沉淀作用一些物理化学因素往往会导致蛋白质分子结构，尤其是空间结构破坏，因而失去其原来的性质，这种蛋白质沉淀不能再溶解于原来的溶剂中。

重金属盐，生物碱试剂、过酸、过碱、加热、震荡、超声波和有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉定：重金属盐类Cu2+、Ag+、Pb2+和Hg2+等均能与蛋白质分子中的巯基等基团结合，生成不溶物而沉淀。

生物碱试剂与蛋白质结合形成不溶物，使蛋白质沉淀。

植物体内具有显著生理作用的含氮碱性化合物称为生物碱（或植物碱）。

能沉淀生物碱或与其产生颜色反应的物质称为生物碱试剂，如鞣酸、苦味酸、磷钨酸等。

2．试剂和器材1）试剂(1）蛋白质氯化钠溶液取20ml 蛋清，加蒸馏水200ml 和饱和氯化钠溶液l00ml ，充分搅匀后纱布滤去不溶物。

（加氯化钠的目的是溶解球蛋白）。

(2）蛋白质溶液取5ml 蛋清，用蒸馏水稀释至100ml ，搅拌均匀后，用纱布过滤。

(3）饱和硫酸铵溶液称固体（NH4）2SO4 加于l000ml 蒸馏水中，在70-80℃下搅拌促溶，室温中放置过夜，瓶底析出白色结晶，上清液即为饱和硫酸铁溶液。

(4）饱和苦味酸溶液取2g 苦味酸放入三角烧瓶，加蒸馏水100ml，80℃水浴约10min 使之完全溶解，于室温下冷却后瓶底析出黄色结晶，上清液即为饱和苦味酸，此液可存放数年。

(5) 1 ％醋酸铅溶液(6) 1 ％硫酸铜溶液(7) 1 ％三氯乙酸溶液(8) 0.5％磺基水杨酸溶液(9) 1％醋酸溶液(10) 5％鞣酸溶液(11）硫酸铵粉末2）器材试管及试管架，抽滤瓶、量筒、布氏漏斗等3．操作方法1）蛋白质的盐析作用取1 支试管加入3ml 蛋白质溶液和3ml 饱和硫酸铵溶液，混匀，静置约10min，球蛋白则沉淀析出，过滤后向滤液中加入硫酸铵粉末，边加边用玻璃棒搅拌，直至粉末不再溶解达到饱和为止析出的沉淀为清蛋白，再加水稀释，观察沉淀是否溶解。

2）乙醇沉淀蛋白质取1 支试管加蛋白质溶液lml ，加晶体氯化钠少许（加速沉淀并使沉淀完全）待溶解后再加95%乙醇2ml 混匀，观察有无沉淀析出。